Xây dựng và thẩm định quy trình hplc định lượng đồng thời geniposid và pinoresinol diglucosid trong viên nén dành dành – đỗ trọng

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TĨM TẮT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH HPLC ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI GENIPOSID VÀ PINORESINOL DIGLUCOSID TRONG VIÊN NÉN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Đức Hạnh TP Hồ Chí Minh, ngày 28 tháng năm 2019 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TĨM TẮT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH HPLC ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI GENIPOSID VÀ PINORESINOL DIGLUCOSID TRONG VIÊN NÉN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Mã số: Chủ nhiệm đề tài Nguyễn Đức Hạnh TP Hồ Chí Minh, ngày 28 tháng năm 2019 MỤC LỤC I ĐẶT VẤN ĐỀ…………………………………………… II NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ……… .2 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU…………………………………………………… IV BÀN LUẬN …………… ……………………………………………… 17 V KẾT LUẬN…………… …………………………………………… 18 VI TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………… …19 ĐẶT VẤN ĐỀ Đỗ trọng (Eucommia ulmoides Oliv., Eucommiaceae) dược liệu quý các tác dụng sinh học quan trọng hỗ trợ điều trị tăng huyết áp, chữa đau nhức lưng, đau nhức khớp gối, động thai [1] Pinoresinol diglucosid là thành phần chính có tác dụng sinh học của dược liệu vỏ thân Đỗ trọng [2] Dành dành (Gardenia jasminoides Ellis., Rubiaceae), loài trồng phát triển tốt tỉnh miền Bắc nước ta, bật màu xanh bóng hoa thơm trắng ngần Đặc biệt, Dành dành với thành phần hóa học đặc trưng là các iridoid glycosid (trong đó hoạt chất có hàm lượng cao geniposid và gardenosid) sử dụng từ lâu đời phương thuốc quý việc điều trị bệnh viêm gan, hạ huyết áp, đái tháo đường, lợi tiểu [1] Dành dành với tác dụng lợi tiểu tác động đến thận nhằm tăng lượng muối và nước thải khỏi thể qua đường tiểu góp phần vào hiệu điều trị tăng huyết áp của dược liệu Đỡ trọng Vì vậy, việc nghiên cứu cơng thức bào chế tiêu chuẩn hóa viên nén phối hợp hai thành phần cao khô Đỗ trọng cao khô Dành dành cần thiết Hiện nay, DĐVN V quy định tiêu định lượng hoạt chất geniposid dược liệu Dành dành và pinoresinol diglucosid dược liệu Đỗ trọng [3] Tuy nhiên, chưa có công trình nghiên cứu cơng bố quy trình định lượng đồng thời geniposid pinoresinol diglucosid chế phẩm thành phần Dành dành – Đỡ trọng Vì vậy, việc xây dựng quy trình định lượng đồng thời geniposid pinoresinol diglucosid viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng phương pháp HPLC cần thiết, góp phần kiểm soát chất lượng thành phẩm trước đưa thị trường NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Chất đối chiếu: Geniposid (GP) hàm lượng 99,26% pinoresinol diglucosid (PDG) hàm lượng 97,65% Ban Nghiên cứu Khoa học – Thư viện, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh cung cấp Trang thiết bị: Hệ thống UHPLC Dionex Ultimate 3000, đầu dò DAD – 3000 RS, cột sắc ký Gemini NX C18 (250 x 4,6 mm; μm), cân phân tích A&D GH-202, bể siêu âm S60H – Elma Mẫu nghiên cứu: Viên nén thành phần cao khô Dành dành và cao khô Đỗ trọng chứa 173 mg Cao khô Dành dành, 67 mg Cao khô Đỗ trọng và tá dược vừa đủ viên nhóm nghiên cứu bào chế Hóa chất dung môi: Acetonitril và nước cất lần đạt tiêu chuẩn sắc ký lỏng PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Khảo sát điều kiện sắc ký định lượng đồng thời geniposid pinoresinol diglucosid viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng Bảng 1: Các chương trình pha động định lượng đồng thời GP và PDG khảo sát Chương trình Thời gian tỷ lệ ACN - H2O pha động I – phút (10:90); – 17 phút (18:82); 17 – 17,1 phút (50:50); 17,1 – 22 phút (50:50); 22 – 22,1 phút (10:90); 22,1 – 28 phút (10:90) II – phút (10:90); – 24 phút (18:82); 24 – 24,1 phút (50:50); 24,1 – 29 phút (50:50); 29 – 29,1 phút (10:90); 29,1 – 35 phút (10:90) III – phút (10:90); – 29 phút (16:84); 29 – 29,1 phút (50:50); 29,1 – 34 phút (50:50); 34 – 34,1 phút (10:90); 34,1 – 40 phút Chương trình Thời gian tỷ lệ ACN - H2O pha động (10:90) – 10 phút (10:90); 10 – 31 phút (15:85); 31 – 31,1 phút (50:50); IV 31,1 – 36 phút (50:50); 36 – 36,1 phút (10:90); 36,1 – 42 phút (10:90) Dựa vào cấu trúc hóa học của GP PDG tham khảo số tài liệu [3-4], kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo với đầu dò DAD lựa chọn với điều kiện sắc ký ban đầu sau: cột sắc ký Gemini NX – 110A C18 (250 x 4,6 mm; µm), đầu dò DAD với bước sóng phát 228 nm, thể tích tiêm 10 µl, tốc độ dịng 0,8 ml/phút, nhiệt độ cột 30oC, pha động ACN H2O, chương trình rửa giải gradient Tiến hành khảo sát số chương trình pha động (Bảng 1) Qua khảo sát thực nghiệm, chọn điều kiện sắc ký thích hợp cho pic GP và PDG đạt độ tinh khiết (theo phổ UV-Vis), tách hoàn toàn khỏi pic tạp (nếu có) hệ số bất đối của pic GP và PDG nằm khoảng 0,8 – 1,5 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu Khảo sát dung môi chiết GP và PDG: Chiết cùng lượng bột thuốc với các dung môi khác methanol, methanol 70%, 50%, 30% (tỷ lệ cao và dung môi chiết cố định) siêu âm 15 phút, chuẩn bị mẫu thử riêng biệt cho dung môi Tiến hành sắc ký các dịch chiết Chọn dung môi chiết GP PDG theo các tiêu chí sau: diện tích chiều cao pic GP và PDG lớn nhất, hệ số bất đối nằm khoảng 0,8 – 1,5; độ phân giải lớn 1,5; pic GP, PDG tinh khiết (theo phổ UV-Vis) nồng độ methanol cao Khảo sát tỷ lệ bột thuốc và dung môi chiết GP và PDG: Khảo sát tỷ lệ bột thuốc dung môi chiết lựa chọn theo các tỷ lệ 18:1, 12:1 và 6:1 Chuẩn bị mẫu thử riêng biệt cho tỷ lệ và chiết phương pháp siêu âm 15 phút Tiến hành sắc ký dịch chiết Chọn tỷ lệ bột thuốc dung môi chiết theo tiêu chí sau: Hàm lượng GP và PDG dịch chiết cao nhất, chiều cao pic GP và PDG lớn 10 lần nhiễu đường nền Khảo sát thời gian chiết: Từ tỷ lệ bột thuốc và dung môi chiết lựa chọn, tiến hành chiết siêu âm các thời điểm 5, 10, và 15 phút Chuẩn bị mẫu thử riêng biệt cho thời điểm Tiến hành sắc ký các dịch chiết Chọn thời gian chiết cho nồng độ GP, PDG dịch chiết cao Thẩm định quy trình định lượng đồng thời GP PDG viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng Quy trình định lượng đồng thời GP và PDG viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng thẩm định theo hướng dẫn của ICH [5] về tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, tính tuyến tính và miền giá trị, độ chính xác, độ đúng, giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) và độ bền Chuẩn bị mẫu Mẫu đối chiếu GP gốc: Hòa tan lượng chất đối chiếu GP methanol 50% để dung dịch có nồng độ khoảng 2000 ppm Mẫu đối chiếu PDG gốc: Hòa tan lượng chất đối chiếu PDG methanol 50% để dung dịch có nồng độ khoảng 2000 ppm Mẫu đối chiếu: Pha loãng mẫu đối chiếu GP gốc và mẫu đối chiếu PDG gốc với methanol 50% để thu mẫu đối chiếu có nồng độ GP và PDG lần lượt là 500 ppm và 22,5 ppm Mẫu thử: Được chuẩn bị dựa vào các điều kiện khảo sát quy trình xử lý mẫu Mẫu trắng: dung môi chiết KẾT QUẢ Khảo sát điều kiện sắc ký Hình minh họa sắc ký đồ mẫu thử với các chương trình pha động khảo sát Kết khảo sát cho thấy, với chương trình I, II, III: pic GP và PDG chưa tách hoàn toàn khỏi pic tạp, đó với chương trình IV: pic GP và PDG đạt độ tinh khiết (peak purity match = 1000), hệ số bất đối pic GP và PDG lần lượt là 1,1, và 0,9; độ phân giải pic GP và PDG với các pic liền trước liền sau > 1,5 Như vậy, chương trình pha động IV lựa chọn Khảo sát điều kiện xử lý mẫu Khảo sát dung môi chiết GP PDG Kết khảo sát dung môi chiết cho thấy dung môi methanol, methanol 70%, 50%, 30% đều chiết GP PDG, nhiên diện tích và chiều cao pic GP PDG chiết tăng dần theo thứ tự methanol < methanol 70% < methanol 50 %  methanol 30%; Pic GP và PDG đều tinh khiết, đạt hệ số bất đối tách hoàn toàn pic tạp Như vậy, methanol 50% chọn làm dung môi chiết GP PDG chế phẩm Hình 1: Sắc ký đồ mẫu thử với các chương trình pha động khảo sát Khảo sát tỷ lệ bột thuốc và dung mơi chiết GP và PDG Hình Bảng minh họa kết khảo sát tỷ lệ bột thuốc dung môi chiết GP và PDG Tỷ lệ bột thuốc và dung môi chiết (mg/ml) Hàm lượng GP (mg/viên) Hàm lượng PDG (mg/viên) 18:1 24,76 1,06 12:1 24,79 1,06 6:1 24,76 1,07 Hình 2: Hàm lượng GP và PDG chiết với tỷ lệ bột thuốc dung môi chiết khác Hàm lượng (mg/viên) 25.0 20.0 15.0 GP 10.0 PDG 5.0 0.0 18:1 12:1 6:1 Tỷ lệ bột thuốc dung môi (mg/ml) Nhận xét: Cả tỷ lệ bột thuốc và dung môi đều chiết hoàn toàn GP và PDG (khi tiến hành sắc ký dịch chiết lần khơng phát GP và PDG) Với tỷ lệ bột thuốc dung môi là 18:1, nồng độ GP mẫu cao (750 ppm) và lượng tạp chất vào cột lớn nên làm cột bị quá tải, dễ bị hiệu lực nếu không có chế độ rửa cột phù hợp thời gian dài Với tỷ lệ 6:1, diện tích và chiều cao pic PDG thấp nên tín hiệu pic dễ bị ảnh hưởng pic tạp Với tỷ lệ 12:1, nồng độ GP và PDG mẫu lần lượt là 500 ppm và 22,5 ppm, diện tích pic PDG khoảng 6,5 (mAU*phút) và chiều cao khoảng 20 mAU, tỷ lệ này thích hợp cho trình định lượng đồng thời GP và PDG viên Như vậy, tỷ lệ bột thuốc và dung môi chiết 12:1 lựa chọn Bảng 2: Thông số sắc ký của GP và PDG tương ứng với tỷ lệ bột thuốc dung môi chiết khác (n=3) Tỷ ̣̉ lệ bột tR thuốc dung môi S Độ H As Rs1 Rs2 Nbk (phút) (mAU*phút) (mAU) 18:1 21,196 167,006 479,973 1,1 5,3 3,9 25200 1000 12:1 21,235 111,424 326,913 1,1 5,5 4,2 26463 1000 6:1 21,255 55,812 168,531 1,1 5,5 4,2 28271 1000 18:1 30,875 9,736 26,030 0,9 6,9 46400 999 12:1 30,918 6,520 20,130 0,9 7,5 61975 999 6:1 30,932 3,286 10,226 0,9 7,6 63769 999 khiết chiết (mg/ml) GP PDG tinh Khảo sát thời gian chiết siêu âm Hình và Bảng minh họa kết khảo sát thời gian chiết GP và PDG bột thuốc Nhận xét: Hàm lượng PDG chiết với thời gian chiết phút, 10 phút và 15 phút là tương đương Tuy nhiên, hàm lượng GP chiết tăng dần theo thứ tự phút < 10 phút  15 phút Như vậy, thời gian chiết siêu âm 10 phút lựa chọn Như vậy, GP và PDG viên chiết với tỷ lệ bột thuốc methanol 50% là 12:1, chiết lần phương pháp siêu âm 10 phút Điều kiện sắc ký thích hợp để định lượng đồng thời GP và PDG viên cột sắc ký Gemini NX – 110A C18 (250 x 4,6 mm; µm); đầu dò DAD với bước sóng phát 228 nm; thể tích tiêm 10 µl; pha động ACN – H2O với chương trình gradient thay đổi theo trình tự sau: – 10 phút (10:90), 10 – 31 phút (15:85), 31 – 31,1 phút (50:50), 31,1 – 36 phút (50:50), 36 – 36,1 phút (10:90), 36,1 – 42 phút (10:90); tốc độ dòng 0,8 ml/phút; nhiệt độ cột 30oC, thời gian sắc ký 42 phút Thời gian chiết siêu âm Hàm lượng PDG Hàm lượng GP (mg/viên) (phút) (mg/viên) 23,98 1,05 10 24,73 1,06 15 24,79 1,06 Hàm lượng (mg/viên) 25.0 20.0 15.0 GP 10.0 PDG 5.0 0.0 10 Thời gian chiết siêu âm (phút) 15 Hình 3: Hàm lượng GP và PDG chiết với thời gian chiết khác Bảng 3: Thông số sắc ký của GP và PDG tương ứng với thời gian chiết khác (n=3) S Độ Thời gian tR H chiết (phút) (mAU*phút) phút 21,256 107,884 315,727 1,1 5,5 4,1 26417 1000 10 phút 21,194 111,242 320,855 1,1 5,5 4,0 25474 1000 As Rs1 Rs2 Nbk (mAU) tinh khiết GP PDG 15 phút 21,235 111,424 326,913 1,1 5,5 4,2 26463 1000 phút 30,909 6,466 19,016 0,9 7,2 57356 999 10 phút 30,860 6,516 19,640 0,9 7,3 58760 999 15 phút 30,918 6,520 20,130 0,9 7,5 61975 999 Thẩm định quy trình định lượng đồng thời GP PDG viên nén thành phần Dành dành - Đỗ trọng Tính phù hợp hệ thống Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống trình bày Bảng Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống cho thấy RSD của thời gian lưu, diện tích chiều cao pic GP và PDG của mẫu đối chiếu và mẫu thử đều nhỏ 2,0%; Độ phân giải pic GP và PDG với pic liền trước liền sau mẫu thử lớn 1,5 và hệ số bất đối pic GP và PDG nằm khoảng 0,8 – 1,5 Như vậy, quy trình định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm đạt tính phù hợp hệ thống Bảng 4: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu đối chiếu mẫu thử (n=6) Mẫu Đối chiếu Giá tR S trị thống (phút) (mAU*phút) kê H As Rs1 Rs2 Nbk 1,2 20,0 29006 1,2 5,3 4,1 28706 (mAU) TB 21,131 110,674 335,867 RSD 0,18% 0,15% 0,99% TB 21,126 111,649 341,935 RSD 0,19% 0,13% 0,38% GP Thử Đối TB 30,763 6,752 21,472 chiếu RSD 0,06% 0,17% 0,66% TB 30,746 6,560 20,644 RSD 0,13% 0,35% 1,29% 0,9 66794 PDG 0,9 7,5 64788 Thử Tính chọn lọc Hình minh họa kết khảo sát tính chọn lọc của quy trình định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm Kết khảo sát tính chọn lọc cho thấy sắc ký đồ mẫu trắng không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của pic GP và PDG mẫu đối chiếu Sắc ký đồ mẫu thử xuất pic có thời gian lưu tương đương với pic GP và PDG sắc ký đồ mẫu đối chiếu Trên sắc ký đồ mẫu thử, pic GP và PDG tách hoàn toàn pic tạp Khi thêm chất đối chiếu GP và PDG vào mẫu thử diện tích chiều cao pic GP và PDG tăng Phổ UV thời gian lưu GP và PDG của mẫu thử và mẫu đối chiếu giống Pic GP và PDG sắc ký đồ mẫu đối chiếu mẫu thử đều tinh khiết (theo phổ UV) Như vậy, quy trình định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm đạt tính chọn lọc Hình 4: Kết khảo sát tính chọn lọc phương pháp định lượng đồng thời GP và PDG Tính tuyến tính, miền giá trị, độ chính xác, độ đúng, giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Kết khảo sát tính tuyến tính, miền giá trị, độ xác, độ đúng, giới hạn phát giới hạn định lượng trình bày Bảng Bảng 5: Kết khảo sát tính tuyến tính, miền giá trị, độ chính xác, độ đúng, LOD LOQ GP PDG ŷ = 0,2248x (125 – 1250 ppm) ŷ = 0,3070x (10 – 100 ppm) R = 0,9999 R = 0,9992 Miền giá trị (ppm) 400 – 600 17,6 – 26,4 Giới hạn phát (LOD) 0,06 ppm 0,11 ppm Giới hạn định lượng (LOQ) 0,21 ppm 0,28 ppm Phương trình hồi qui Hệ số tương quan (R) Độ lặp lại (n = 6) Độ xác Hàm lượng GP (mg/viên) 25,19 Mẫu thử RSD Hàm lượng PDG (mg/viên) 1,07% 1,09 Độ xác trung gian (n = 12) RSD Hàm lượng GP (mg/viên) 0,48% 25,16 GP RSD Hàm lượng PDG (mg/viên) RSD 0,73% 1,08 1,07% PDG Độ đúng (n=9) Mẫu thử thêm chất đối chiếu Tỷ lệ phục hồi (%) RSD Tỷ lệ phục hồi (%) RSD 98,26 – 99,88 0,56% 94,69 – 96,86 0,74% Kết thẩm định cho thấy quy trình định lượng đồng thời GP PDG có khoảng tún tính miền giá trị rộng với giá trị của hệ số tương quan cao, LOD LOQ thấp, độ xác cao với RSD nhỏ 2%, độ đúng cao với tỷ lệ thu hồi của GP nằm khoảng 98,0% – 102,0% RSD của tỷ lệ thu hồi nhỏ 2,0%, đó, tỷ lệ thu hồi của PDG nằm khoảng 90,0% – 107,0% [6] với RSD của tỷ lệ thu hồi nhỏ 2,0% Kết xác định hàm lượng trung bình của GP PDG viên lần lượt 25,19 mg 1,09 mg Độ bền Độ bền của quy trình định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm thẩm định với thay đổi sau: nhiệt độ cột 25oC 35oC, pha động ACN và nước với tỷ lệ sau (pha động 2): – 10 phút (10:90), 10 – 31 phút (17:83), 31 – 31,1 phút (50:50), 31,1 – 36 phút (50:50), 36 – 36,1 phút (10:90), 36,1 – 42 phút (10:90) Kết thẩm định độ bền trình bày Hình Bảng Hình 5: Sắc ký đồ mẫu thử khảo sát độ bền Bảng 6: Thông số sắc ký của GP GDP thẩm định độ bền (n=3) Giá trị Thay tR S H thống đổi (phút) (mAU*phút) (mAU) TB 21,786 112,705 337,790 độ RSD 0,28% 0,31% 0,26% cột TB 31,550 6,609 20,858 RSD 0,24% 0,91% 0,67% Nhiệt kê As Rs1 Rs2 Nbk 1,2 2,2 4,3 29298 0,9 8,3 GP o 25 C PDG 66946 TB 19,899 112,893 348,832 độ RSD 0,06% 0,40% 0,72% cột TB 29,294 6,591 20,571 RSD 0,01% 0,42% 0,99% TB 20,611 112,752 383,132 RSD 0,01% 0,37% 0,57% TB 28,156 6,953 26,120 RSD 0,02% 1,59% 0,65% Nhiệt 1,2 4,9 0,8 6,6 1,2 9,1 0,9 5,8 3,4 25970 GP 59520 o 35 C PDG 3,3 33511 GP Pha động 80228 PDG Nhận xét: Khi thay đổi nhiệt độ cột ± 5oC và pha động với lực rửa giải mạnh (giảm tỷ lệ nước 2%) so với điều kiện ban đầu các thơng số sắc ký đáp ứng yêu cầu quy định tính phù hợp hệ thống không bị ảnh hưởng Như vậy, quy trình định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm phương pháp HPLC-DAD đạt tính phù hợp hệ thống (kể thay đổi nhiệt độ cột 5oC giảm tỷ lệ nước 2% chương trình rửa giải gradient), có tính chọn lọc, khoảng tún tính rộng, giới hạn phát giới hạn định lượng thấp, đạt độ chính xác và độ đúng Quy trình áp dụng để định lượng đồng thời GP và PDG chế phẩm BÀN LUẬN GP methanol 50% có cực đại hấp thụ 240 nm PDG methanol 50% có cực đại hấp thụ 228 nm và 278 nm, đó độ hấp thụ của PDG 228 nm gấp 1,5 lần so với độ hấp thụ của PDG 277 nm Do hàm lượng PDG viên thấp nhiều so với GP và PDG hấp thụ yếu vùng 200 – 400 nm nên bước sóng 228 nm (cực đại hấp thụ của PDG) lựa chọn để định lượng đồng thời GP và PDG viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng Chế phẩm chứa hai thành phần cao khô Đỗ trọng Dành dành có nhiều thành phần phức tạp nên chương trình rửa giải gradient lựa chọn tiến hành khảo sát tỷ lệ dung môi ACN và nước theo thời gian rửa giải Methanol 50% là dung mơi thích hợp để chiết GP và PDG chế phẩm Cả tỷ lệ bột thuốc và dung môi đều chiết hoàn toàn GP PDG Tuy nhiên, pic GP có chiều cao diện tích lớn nhiều so với pic PDG (SPDG  7% SGP) Vì vậy, tỷ lệ bột thuốc dung môi 12:1 lựa chọn để dung hòa tín hiệu pic GP và pic PDG KẾT LUẬN Quy trình định lượng đồng thời geniposid và pinoresinol diglucosid viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng phương pháp HPLC-DAD xây dựng và thẩm định, sử dụng chương trình rửa giải gradient với dung môi pha động là nước và acetonitril Quy trình này có thể áp dụng để định lượng đồng thời geniposid và pinoresinol diglucosid chế phẩm, góp phần vào công tác tiêu chuẩn hóa thành phẩm trước đưa thị trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, tập 1, tr 596-600, 800-807 Xirui He, Jinhui Wang, Maoxing Li, Dingjun Hao, Yan Yang, Chunling Zhang, Rui He, Rui Tao (2014), “Eucommia ulmoides Oliv.: Ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine”, Journal of Ethnopharmacology, 151, 78–92 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học Hà Nội, Hà Nội, tr 1132-1133 Pharmacopedia of The people’s Republic of China (2015), pp 182-183, 207-208 ICH Harmonised tripartite guideline (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology, pp – 13 Ludwig Huber (2007), Validation and Qualification in Analytical Laboratories, 2nd edition, pp 144-146  ... TĨM TẮT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH HPLC ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI GENIPOSID VÀ PINORESINOL DIGLUCOSID TRONG VIÊN NÉN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Mã số: Chủ nhiệm... bố quy trình định lượng đồng thời geniposid pinoresinol diglucosid chế phẩm thành phần Dành dành – Đỡ trọng Vì vậy, việc xây dựng quy trình định lượng đồng thời geniposid pinoresinol diglucosid. .. định quy trình định lượng đồng thời GP PDG viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng Quy trình định lượng đồng thời GP và PDG viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng thẩm định theo hướng