Khảo sát phản ứng tổng hợp polymer đóng dấu phân tử salbutamol (salbutamol mip) định hướng ứng dụng làm pha tĩnh trong kỹ thuật chiết tách pha rắn tách salbutamol (salbutamol mispe)

Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG KHẢO SÁT PHẢN ỨNG TỔNG HỢP POLYMER ĐÓNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL (SALBUTAMOL-MIP) ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG LÀM PHA TĨNH TRONG KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH PHA RẮN TÁCH SALBUTAMOL (SALBUTAMOL-MISPE) Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS Phan Văn Hồ Nam Tp Hồ Chí Minh, 03/2019 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG KHẢO SÁT PHẢN ỨNG TỔNG HỢP POLYMER ĐÓNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL (SALBUTAMOL-MIP) ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG LÀM PHA TĨNH TRONG KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH PHA RẮN TÁCH SALBUTAMOL (SALBUTAMOL-MISPE) Mã số: Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, 03/2019 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Chủ nhiệm đề tài: TS Phan Văn Hồ Nam Thành viên tham gia đề tài: Nguyễn Thanh Trà PGS TS Võ Thị Bạch Huệ Đơn vị thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm, khoa Dược, Đại học Y Dược TP.HCM Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ii MỤC LỤC DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC SƠ ĐỒ vii MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT MỤC TIÊU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU – HÓA CHẤT – TRANG THIẾT BỊ Đối tượng nghiên cứu Dung mơi-hóa chất Trang thiết bị PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Biện luận công thức tổng hợp polymer Quy trình tổng hợp salbutamol-MIP phương pháp kết tủa Khảo sát yếu tố tổng hợp Salbutamol-MIP Khảo sát lưu giữ salbutamol Salbutamol-MIP NIP 11 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 14 CHƯƠNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG QUÁ TRÌNH TỔNG HỢP HẠT POLYMER ĐĨNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL 14 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iii Khảo sát dung môi tổng hợp polymer 14 Khảo sát nhiệt độ polymer hóa 15 Khảo sát dụng cụ tổng hợp Salbutamol-MIP 15 Khảo sát tỷ lệ dung môi : hỗn hợp monomer cross – linker 16 Khảo sát tỷ lệ AIBN : hỗn hợp monomer cross – linker 17 CHƯƠNG KHẢO SÁT SỰ LƯU GIỮ SALBUTAMOL CỦA MỘT SỐ POLYMER ĐÓNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL 19 Hiệu suất tổng hợp Salbutamol-MIP 19 Khảo sát dung môi rửa polymer sau tổng hợp 20 Khảo sát lưu giữ salbutamol số polymer đóng dấu phân tử salbutamol 22 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 28 KẾT LUẬN 28 ĐỀ NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ tiếng Anh MIP Molecularly imprinted polymer Polymer đóng dấu phân tử NIP Non imprinted polymer Polymer khơng đóng dấu phân tử SPE Solid phase extraction Chiết pha rắn MISPE Molecularly imprinted solidphase extraction Chiết pha rắn sử dụng polymer đóng dấu phân tử làm pha rắn MAA Acid methacrylic Acid methacrylic AA Acid acrylic Acid acrylic VP Vinyl pyrrolidone Vinyl pyrrolidon AIBN Azobisisobutyronitrile Azobisisobutyronitril EGDMA Ethylene glycol dimethacrylate Ethylene glycol dimethacrylat Từ tiếng Việt Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tóm tắt thuận lợi khó khăn MIP việc ứng dụng vào lĩnh vực phân tích [6] Bảng Tóm tắt cơng trình nghiên cứu salbutamol-MIP Bảng Thành phần công thức đề nghị sử dụng ban đầu Bảng Công thức đề nghị ban đầu để tổng hợp polymer Bảng Thành phần công thức salbutamol-MIP 11 Bảng Bảng tính tan thành phần trước phản ứng dung môi .14 Bảng Thời gian xuất tủa, thời gian polymer hóa nhiệt độ khác .15 Bảng Thời gian lượng hạt tạo thành với cách tổng hợp khác 15 Bảng Hiệu suất tổng hợp polymer đóng dấu phân tử salbutamol 19 Bảng 10 Thể tích dung mơi cần thiết để rửa polymer tổng hợp .20 Bảng 11 Kiểm tra khả rửa .21 Bảng 12 Lượng dung môi cần thiết để rửa hết salbutamol khỏi cột 22 Bảng 13 Lượng salbutamol dịch thừa (1), dịch rửa (2), dịch rửa giải (3) 24 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Q trình đóng dấu phân tử sử dụng liên kết khơng cộng hóa trị Hình Quá trình tạo hạt polymer Hình Quá trình rửa hạt polymer Hình Thí nghiệm tạo hạt ống nghiệm, đun cách thủy 10 Hình Thí nghiệm tạo hạt erlen, đun trực tiếp 10 Hình Thí nghiệm tạo hạt bình cầu, đun cách thủy .11 Hình Hạt polymer tạo erlen đun trực tiếp (1) hạt polymer tạo bình cầu đun cách thủy (2) 70 oC (độ phóng đại 100 lần) .16 Hình Hạt polymer tạo dung môi với tỷ lệ monomer : dung môi 1:50 .17 Hình Hạt polymer tạo dung mơi với tỷ lệ monomer : dung mơi 1:100 17 Hình 10 Hạt polymer tạo dung môi với tỷ lệ monomer : dung mơi 1:200 17 Hình 11 Hạt polymer tạo dùng lượng AIBN 0,5% (A), 1,5% (B), 3% (C) .18 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ % salbutamol thu hồi sau tái hấp thu % salbutamol lưu giữ cột SPE tổng hợp từ công thức I(AA); II(MAA); III(VP); IV(VP-AA) 25 Biểu đồ % lưu giữ salbutamol của cột SPE nhồi polymer tổng hợp từ công thức VI (MAA-chlor) với hai lần tái hấp thu, lần phát phương pháp khác (UV huỳnh quang) 26 Biểu đồ % lưu giữ salbutamol cột IV (MAA-chlor) với lần thực hiện, sử dụng hệ dung môi aceton methanol – acid acetic (8 :2) dung môi rửa rửa giải .27 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT Salbutamol chất chủ vận beta (β – agonist) có tác dụng dãn trơn phế quản dùng y khoa để điều trị số bệnh liên quan đến co thắt đường hô hấp tắc nghẽn đường dẫn khí hồi phục được, viêm phế quản mạn tính, hen nặng, hen ác tính… Việc sử dụng salbutamol phải định bác sĩ loại thuốc có nhiều tác dụng phụ nghiêm trọng run rẩy, đau đầu, bồn chồn, lo lắng, khô miệng, Nhưng việc sử dụng loại thuốc điều trị, salbutamol sử dụng chăn nuôi chất tạo nạc, giúp gia súc tạo nhiều nạc mỡ, màu thịt gia súc sau giết mổ tươi tắn hơn, bắt mắt người mua Tuy nhiên, người sử dụng thịt bị nhiễm salbutamol từ ngày qua ngày khác, salbutamol có khả tích lũy lại gan, thận, mỡ võng mạc gây suy giảm chức gan [5] Từ thực trạng đó, ngày 20 tháng 06 năm 2002 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Việt Nam ban hành danh mục 18 kháng sinh, hóa chất cấm chăn ni (quyết định số 54/2002/QĐ – BNN) có salbutamol để bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng Sau đó, tháng 5/2015, Bộ Y tế bổ sung vào luật Dược sửa đổi, đưa nguyên liệu Salbutamol vào danh sách thuốc kiểm soát đặc biệt, để quản lí chặt chẽ từ khâu nhập khẩu, phân phối sử dụng Những phương pháp sử dụng để định lượng salbutamol thịt heo sử dụng điển HPLC-MS/MS đắt cần phải có chất chuẩn đồng vị (theo TCCS : H.HD.QT.110 Ref: USDA CLGAGON1.0 Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia) [1, 7] Hiện nay, polymer đóng dấu phân tử (Molecularly imprinted polymer - MIP) tập trung nghiên cứu nhiều có tương lai hứa hẹn, khắc phục khuyết điểm vật liệu trước MIP có tính chọn lọc cao, bền vật lý, ổn định hóa học, ngồi MIP dễ tổng hợp, giá thành rẻ so với phương pháp cũ Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 31 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ UV dung dịch sau phản ứng tổng hợp MIP methanol Phụ lục Phổ UV dung dịch sau phản ứng tổng hợp MIP chloroform Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 32 Phụ lục Phổ UV dịch rửa methanol MIP Phụ lục Phổ UV dịch rửa chloroform MIP Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 33 Phụ lục Phổ UV dịch rửa methanol – acid acetic (8:2) MIP Phụ lục Phổ UV dung dịch salbutamol sulfat 200 ppm methanol Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 34 Phụ lục Phổ UV dung dịch rửa MIP với methanol có salbutamol sulfat Phụ lục Phổ UV dung dịch salbutamol sulfat 200 ppm methanol – acid acetic (8:2) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 35 Phụ lục Phổ UV dung dịch rửa MIP với methanol – acid acetic (8:2) có salbutamol sulfat Phụ lục 10 Phổ UV dung dịch salbutamol 50 ppm methanol Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 36 Phụ lục 11 Phổ UV dung dịch rửa MIP với methanol có salbutamol Phụ lục 12 Phổ UV dung dịch salbutamol 50 ppm methanol – acid acetic (8:2) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 37 Phụ lục 13 Phổ UV dung dịch rửa MIP với methanol – acid acetic (8:2) có salbutamol Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 38 Đường chuẩn salbutamol sulfat methanol – phương pháp hấp thu UV 278 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 6.25 0,0533 12,5 0,0986 25 0,1744 50 0,3264 100 0,6585 200 1,3427 1.6 y = 0.0066x + 0.0066 R² = 0.9996 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 50 100 150 200 250 Phụ lục 14 Đường chuẩn salbutamol sulfat methanol – 278 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 39 Đường chuẩn salbutamol sulfat methanol acid acetic (8:2) –phương pháp hấp thu UV 278 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 200 1,5772 100 0,7498 50 0,3757 25 0,1984 12,5 0,0896 6,25 0,0489 1.8 y = 0.0079x - 0.0135 R² = 0.9993 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 50 100 150 200 250 Phụ lục 15 Đường chuẩn salbutamol sulfat methanol – acid acetic (8:2) 278 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 40 Đường chuẩn salbutamol methanol – phương pháp hấp thu UV 278 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 200 1,7975 100 0,8954 50 0,4396 25 0,2216 12,5 0,0899 y = 0.0091x - 0.0138 R² = 0.9999 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 50 100 150 200 250 Phụ lục 16 Đường chuẩn salbutamol methanol – 278 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 41 Đường chuẩn salbutamol methanol – acid acetic (8:2) – phương pháp hấp thu UV 278 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 6,25 0,0632 12,5 0,1309 25 0,2464 50 0,4933 100 0,9933 1.2 y = 0.0099x + 0.002 R² = 0.9999 0.8 0.6 0.4 0.2 0 20 40 60 80 100 120 Phụ lục 17 Đường chuẩn salbutamol methanol – acid acetic (8:2) – 278 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 42 Phụ lục 18 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm dịch rửa methanol qua cột MIP (bước sóng kích thích 230) Phụ lục 19 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm salbutamol ppm methanol (bước sóng kích thích 230) Phụ lục 20 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm dịch rửa salbutamol methanol (bước sóng kích thích 230) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 43 Đường chuẩn salbutamol methanol – phương pháp phát xạ huỳnh quang bước sóng kích thích 230 nm – bước sóng phát xạ 305 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 6264 3347 0,5 1690 0,25 910,6 0,125 492,6 0,0625 232,7 7000 y = 3105.5x + 118.2 R² = 0.9990 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 0.5 1.5 2.5 Phụ lục 21 Đường chuẩn salbutamol methanol – phương pháp phát xạ huỳnh quang bước sóng kích thích 230 nm – bước sóng phát xạ 305 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 44 Phụ lục 22 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm dịch rửa methanol – acid acetic (8:2) qua cột MIP (bước sóng kích thích 275 nm) Phụ lục 23 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm dịch rửa salbutamol methanol – acid acetic (8:2) (bước sóng kích thích 275 nm) Phụ lục 24 Phổ phát xạ từ 200 nm đến 500 nm salbutamol ppm methanol – acid acetic (8:2) (bước sóng kích thích 275 nm) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 Đường chuẩn salbutamol methanol – acid acetic (8:2) – phương pháp phát xạ huỳnh quang bước sóng kích thích 230 nm – bước sóng phát xạ 305 nm Nồng độ (ppm) Độ hấp thu 1563 833,8 0,5 451,8 0,25 270,5 0,125 165,6 0,0625 114,7 1800 y = 746.11x + 76.934 R² = 0.9998 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 0.5 1.5 2.5 Phụ lục 25 Đường chuẩn salbutamol methanol – acid acetic (8:2) phương pháp phát xạ huỳnh quangbước sóng kích thích 275nm – bước sóng phát xạ 305 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... cứu polymer đóng dấu phân tử salbutamol Do đó, đề tài: "KHẢO SÁT PHẢN ỨNG TỔNG HỢP POLYMER ĐÓNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL (SALBUTAMOL- MIP) ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG LÀM PHA TĨNH TRONG KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH... CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG KHẢO SÁT PHẢN ỨNG TỔNG HỢP POLYMER ĐÓNG DẤU PHÂN TỬ SALBUTAMOL (SALBUTAMOL- MIP) ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG LÀM PHA TĨNH TRONG KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH PHA. .. cột tương tự polymer đóng dấu phân tử MIP nhiên công thức tổng hợp thành phần phân tử mẫu Khảo sát yếu tố tổng hợp Salbutamol- MIP Khảo sát dung môi tổng hợp polymer Dung mơi tổng hợp phải hồn