Tác động của nano curcumin lên sự tăng sinh và di cư của nguyên bào sợi nướu người

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ******** NGUYỄN THỊ HOÀNG MAI TÁC ĐỘNG CỦA NANO CURCUMIN LÊN SỰ TĂNG SINH VÀ DI CƯ CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI Ngành: RĂNG - HÀM - MẶT Mã số: 8720501 LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG – HÀM – MẶT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS HUỲNH CÔNG NHẬT NAM TP HỒ CHÍ MINH - NĂM 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Nguyễn Thị Hoàng Mai i MỤC LỤC MỤC LỤC .i DANH MỤC VIẾT TẮT .iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH .vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Viêm loét miệng tái phát [25], [50] 1.2 Tổng quan nguyên bào sợi [17] 1.3 Nguyên bào sợi lành thương 1.3.1 Tổng quan nguyên bào sợi nướu 1.4 Nano curcumin 1.4.1 Tổng quan curcumin .8 1.4.2 Tác dụng curcumin .10 1.4.3 Nano curcumin 10 1.4.4 Đặc tính nano curcumin [26] 13 1.4.5 Ứng dụng nano curcumin 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu .15 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 16 2.3.2 Cỡ mẫu 16 ii 2.3.3 Chuẩn bị trước nghiên cứu 16 2.4 Thực nghiên cứu 21 2.4.1 Nuôi cấy tế bào 21 2.4.2 Đánh giá ảnh hưởng nano curcumin lên khả sống hGF24 2.4.3 Đánh giá ảnh hưởng nano curcumin lên tăng sinh hGF 26 2.4.4 Đánh giá ảnh hưởng nano curcumin lên di cư hGF 27 2.4.5 Thu thập phân tích số liệu 29 2.4.6 Kiểm soát sai lệch nghiên cứu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ .31 3.1 Kết nuôi cấy hGF sơ cấp .31 3.2 Ảnh hưởng nano curcumin lên khả sống hGF .34 3.2.1 Kết sau ủ hGF sau ủ với nano curcumin 34 3.2.2 Kết sau ủ hGF MTT .35 3.3 Ảnh hưởng nano curcumin lên tăng sinh hGF 39 3.3.1 Ở nhóm chứng dương (mơi trường tiêu chuẩn) (Hình 3.15) 39 3.3.2 Ở nhóm chứng âm (mơi trường khơng có huyết thanh) .41 3.3.3 Ở nhóm nano curcumin mg/ml pha môi trường tiêu chuẩn 42 3.3.4 Ở nhóm nano curcumin mg/ml pha mơi trường khơng có huyết 43 3.4 Ảnh hưởng nano curcumin lên di cư hGF 44 3.4.1 Kết thử nghiệm di cư đường rạch 44 3.4.2 Kết thử nghiệm di cư transwell 48 CHƯƠNG BÀN LUẬN 50 4.1 Về tế bào nướu dùng nghiên cứu .50 4.2 Về nano curcumin dùng nghiên cứu 51 4.3 Ảnh hưởng nano curcumin lên khả sống hGF .53 iii 4.4 Ảnh hưởng nano curcumin lên khả tăng sinh hGF 55 4.5 Ảnh hưởng nano curcumin lên khả di cư hGF 56 Ý NGHĨA VÀ ỨNG DỤNG CỦA ĐỀ TÀI 59 KẾT LUẬN 60 HẠN CHẾ VÀ KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 iv DANH MỤC VIẾT TẮT DMEM/F12: Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s Nutrient Mixture F12 DMSO: Dimethyl sulfoxide ECM: extracellular matrix (khuôn ngoại bào) EMT: Epithelial to mesenchymal transition (sự chuyển dạng biểu mô – trung mô) FBS: Fetal bovine serum hGF: Human gingival fibroblast MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid PBS: Phosphate buffered saline RGR: relative cell growth rate (tỉ lệ tăng trưởng tương đối) RER: rough endoplasmic reticulum (mạng lưới nội chất thô) SMC: smooth muscle cell (tế bào trơn) v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tổng hợp tác động curcumin lên giai đoạn lành thương 12 Bảng 1.2: Một số phương pháp chế tạo nano curcumin .13 Bảng 2.1: Danh sách dụng cụ sử dụng 17 Bảng 2.2: Danh sách thiết bị sử dụng 18 Bảng 2.3: Công thức pha dung dịch PBS có kháng sinh 20 Bảng 2.4: Công thức pha nano curcumin 25 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Trên kính hiển vi quang học, nguyên bào sợi không hoạt động (mũi tên), nguyên bào sợi hoạt động (đầu mũi tên) [48] .5 Hình 1.2: Cấu trúc hoá học (A) curcumin, B) demethoxycurcumin, (C) bisdemethoxy-curcumin [30] Hình 2.1 Quan sát hình thái nano curcumin kính hiển vi điện tử quét .16 Hình 2.2: Một số dụng cụ thường sử dụng 18 Hình 2.3: Một số thiết bị thường sử dụng 19 Hình 2.4: Quy trình thực nghiên cứu 21 Hình 2.5: Buồng đếm tế bào 23 Hình 3.1: Mô nướu ngày thứ 31 Hình 3.2: Mô nướu ngày thứ .32 Hình 3.3: Mô nướu ngày thứ .32 Hình 3.4: Tế bào ngày thứ 10 .33 Hình 3.5: Tế bào ngày thứ 20 .33 Hình 3.6: Cấy chuyền P1 33 Hình 3.7: Tế bào cấy chuyền hệ thứ 34 Hình 3.8: Tế bào nhuộm HE 34 Hình 3.9: Hình dạng hGF sau ủ mơi trường tiêu chuẩn DMSO 20% 24 36 Hình 3.10: Hình dạng hGF sau ủ nano curcumin 24 37 Hình 3.11: Tinh thể formazan nhóm chứng âm (môi trường tiêu chuẩn) 37 Hình 3.12: Tinh thể formazan nhóm chứng dương (DMSO) 38 Hình 3.13: Tinh thể formazan 38 vii Hình 3.14: Phần trăm tế bào sống sau thử nghiệm MTT nồng độ nano curcumin khác 39 Hình 3.15: Kết tăng sinh môi trường tiêu chuẩn 40 Hình 3.16: Số lượng tế bào tăng sinh qua ngày nhóm 41 Hình 3.17: Kết tăng sinh tế bào mơi trường khơng có huyết .42 Hình 3.18: Kết tăng sinh tế bào nano curcumin 2mg/ml pha môi trường tiêu chuẩn 43 Hình 3.19: Kết tăng sinh tế bào nano curcumin 2mg/ml pha môi trường khơng có huyết 44 Hình 3.20: Kết nuôi hGF đĩa giếng 45 Hình 3.21: Đường rạch mô tổn thương 45 Hình 3.22: Kết thử nghiệm đường rạch 47 Hình 3.23: Diện tích vùng vết thương cịn lại chuẩn hố theo mốc 47 Hình 3.24: Số lượng tế bào di cư qua màng transwell sau 16 48 Hình 3.25: Kết nhuộm màng transwell 49 MỞ ĐẦU Với tình trạng kháng thuốc lạm dụng thuốc nay, dược liệu có nguồn gốc thiên nhiên cân nhắc sử dụng việc chăm sóc sức khoẻ nói chung sức khoẻ miệng nói riêng [2] Ở châu Á, thuốc dân gian phổ biến sử dụng nghệ (hoạt chất curcumin) để giúp làm lành vết thương miệng vết loét chấn thương mô mềm [60] Một số nghiên cứu lâm sàng cho thấy hiệu curcumin điều trị vấn đề niêm mạc miệng mát xa đau nghệ giúp giảm đau sưng, bôi chỗ giảm viêm nướu viêm nha chu, nước súc miệng có chứa nghệ làm giảm viêm nha chu [14] Tuy nhiên curcumin lại có nhược điểm khó hồ tan khả hấp thu Các nghiên cứu dược động học cho thấy 40 – 85 % liều curcumin uống qua đường tiêu hố khơng hấp thu [60] Để đạt hiệu curcumin cần dùng với liều cao, nhiên việc gây tác dụng phụ [33] Do nhà khoa học điều chế curcumin dạng nano-curcumin để tăng cường khả hoà tan, hấp thụ, bám dính mơ tốt hiệu việc chữa lành vết thương da [20] Công nghệ nano đời gợi ý nhiều cách để tăng phân phối sinh học curcumin hình thức curcumin dạng hạt nano, gọi “nano curcumin” Nano curcumin có kích thước nhỏ (nanomet) giúp tăng hiệu suất dung nạp, tan tốt nước, hấp thụ nhanh qua màng tế bào, khả dụng sinh học lên tới 80 – 95% Hiện nay, có nhiều nghiên cứu nano curcumin có tác dụng lên nhiều loại tế bào Hosseini (2019) công bố nano curcumin có tác dụng gây độc tế bào tương đối cao tế bào ung thư vú MCF - 7, ngăn chặn biểu cyclinD1, gen quan trọng phát triển di ung thư vú [24]; Anitha (2011) chứng minh nano curcumin không gây độc nguyên bào sợi chuột L929 [7] Một nghiên cứu thực Merrell (2009) mơ hình chuột mắc bệnh tiểu đường chứng minh hoạt động chống viêm nano curcumin, minh họa khả chữa lành vết thương nano curcumin [44] Quá trình lành thương miệng bị ảnh hưởng nhiều yếu tố khác nhau, vết thương niêm mạc miệng cần có nhiều thời gian để sửa chữa phục hồi Nguyên bào sợi nướu người loại tế bào chiếm ưu lớp đệm niêm mạc nướu loại Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 60 KẾT LUẬN Về q trình ni cấy sơ cấp tế bào hGF Tế bào hGF bắt đầu xuất rìa mảnh mơ ngày thứ 4, xuất nhiều tế bào ngày thứ 8, sau 19 – 20 ngày tế bào hợp dịng Nghiên cứu in vitro có nhóm chứng nhằm đánh giá ảnh hưởng nano curcumin hGF cho phép rút số kết luận sau: Về khả sống hGF nồng độ dung dịch nano curcumin Ở nồng độ nano curcumin mg/ml, mg/ml mg/ml % phần trăm RGR lớn 70% Mức độ độc tính xác định không gây độc tế bào theo tiêu chuẩn ISO 10993-5:2009 Về khả tăng sinh hGF dung dịch nano curcumin nồng độ không gây độc Số lượng tế bào giảm dần dung dịch nano curcumin mg/ml pha môi trường khơng có huyết dung dịch nano curcumin mg/ml pha môi trường tiêu chuẩn thời điểm nghiên cứu, điều chứng tỏ hGF không tăng sinh ủ dung dịch nano curcumin dài hạn Ở nồng độ mg/ml, kết tăng sinh cho thấy nano curcumin không gây độc kích thích tăng sinh 24 đầu, sau tế bào giảm dần theo thời gian Về khả di cư hGF dung dịch nano curcumin nồng độ không gây độc Các tế bào diễn di cư vào vùng trống sau 24 thí nghiệm lành thương in vitro khơng có ý nghĩa thống kê sử dụng dung dịch nano curcumin mg/ml pha môi trường tiêu chuẩn dung dịch nano curcumin mg/ml pha mơi trường khơng có huyết Các tế bào diễn di cư hạn chế qua màng insert transwell sau 16 thí nghiệm di cư transwell sử dụng dung dịch nano curcumin mg/ml pha môi trường tiêu chuẩn dung dịch nano curcumin mg/ml pha môi trường huyết Điều chứng tỏ nano curcumin kích thích tế bào di cư cách hạn chế Nano curcumin mg/ml không phù hợp để sử dụng điều trị thời gian dài (sau 24 giờ) vì gây độc cho tế bào Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 61 HẠN CHẾ VÀ KIẾN NGHỊ Do bị hạn chế thời gian nghiên cứu, khó khăn việc ni cấy, bảo quản tế bào, số lượng có hạn tế bào hGF, đề tài nghiên cứu chúng tơi có số hạn chế sau: Thời gian ủ hGF nano curcumin tương đối dài (24 giờ) so với thực tế lâm sàng nên cần có thêm nghiên cứu đánh giá so sánh sát với sử dụng lâm sàng Đánh giá tác dụng nano curcumin lên nguyên bào sợi nướu người với thời gian ngắn hơn, khoảng – phút/lần, ngày lần, thời gian tương đương với việc súc miệng sử dụng gel bôi hàng ngày Đánh giá sâu điều kiện in vivo khả làm lành thương Khảo sát nano curcumin nồng độ thấp nhằm xác định nồng độ phù hợp sử dụng lâm sàng Sản phẩm nano curcumin sử dụng nghiên cứu giai đoạn hoàn thiện cải tiến cơng thức, cần có nghiên cứu tiếp tục để đánh giá hiệu nano curcumin cách khách quan Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phan Kim Ngọc (2007), Công nghệ sinh học người động vật, Nhà xuất giáo dục Tiếng Anh Aggarwal B.B., Gupta S.C., and Sung B (2013), “Curcumin: An orally bioavailable blocker of TNF and other pro-inflammatory biomarkers”, British Journal of Pharmacology, 169, 1672–1692 Akbik D., Ghadiri M., Chrzanowski W et al (2014), “Curcumin as a wound healing agent”, Life Sciences, 116, 1–7 Ali A and Banerjea A.C (2016), “Curcumin inhibits HIV-1 by promoting Tat protein degradation”, Sci Rep, (1), 27539 Alibolandi M., Mohammadi M., Taghdisi S.M et al (2017), “Synthesis and preparation of biodegradable hybrid dextran hydrogel incorporated with biodegradable curcumin nanomicelles for full thickness wound healing”, Int J Pharm, 532 (1), 466–477 American Type Culture Collection (2011), MTT Cell Proliferation Assay Instruction Guide, Anitha A., Deepagan V.G., Divya Rani V.V et al (2011), “Preparation, characterization, in vitro drug release and biological studies of curcumin loaded dextran sulphate–chitosan nanoparticles”, Carbohydr Polym, 84 (3), 1158–1164 Apdik H., Doğan A., Demirci S et al (2015), “Dose-dependent Effect of Boric Acid on Myogenic Differentiation of Human Adipose-derived Stem Cells (hADSCs)”, Biol Trace Elem Res, 165 (2), 123–130 Bainbridge P (2013), “Wound healing and the role of fibroblasts”, J Wound Care, 22 (8), 407–412 10 Basnet P and Skalko-Basnet N (2011), “Curcumin: An Anti-Inflammatory Molecule from a Curry Spice on the Path to Cancer Treatment”, Molecules, 16 (6), 4567–4598 11 Bhawana, Basniwal R.K., Buttar H.S et al (2011), “Curcumin Nanoparticles: Preparation, Characterization, and Antimicrobial Study”, J Agric Food Chem, 59 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 63 (5), 2056–2061 12 Bisht S., Feldmann G., Soni S et al (2007), “Polymeric nanoparticle- encapsulated curcumin (‘nanocurcumin’): a novel strategy for human cancer therapy”, J Nanobiotechnology, (1), 13 Cao F., Ding B., Sun M et al (2011), “Lung-targeted delivery system of curcumin loaded gelatin microspheres”, Drug Deliv, 18 (8), 545–554 14 Cıkrıkcı S., Mozioglu E., and Yılmaz H (2008), “Biological activity of curcuminoids isolated from Curcuma longa.”, Rec Nat Prod, 2, 19–24 15 Depan D (2015), Biodegradable Polymeric Nanocomposites: Advances in Biomedical Applications, CRC Press 16 Dias S.B.F., Fonseca M.V.A., dos Santos N.C.C et al (2015), “Effect of GaAIAs low-level laser therapy on the healing of human palate mucosa after connective tissue graft harvesting: randomized clinical trial”, Lasers Med Sci, 30 (6), 1695– 1702 17 Fernandes I.R., Russo F.B., Pignatari G.C et al (2016), “Fibroblast sources: Where can we get them?”, Cytotechnology, 68 (2), 223–228 18 Garodia P., Ichikawa H., Malani N et al (2007), “From Ancient Medicine to Modern Medicine: Ayurvedic Concepts of Health and Their Role in Inflammation and Cancer”, J Soc Integr Oncol, 05 (01), 25 19 Giat L Van, Sinh Đ.T., and Toan T.P (2014), “High Concentration Nanocurcumin Fabrication By Wet Milling Method Curcumin With Glassball”, Int J Sci Technol Res, (8), 8–11 20 Gong C., Wu Q., Wang Y et al (2013), “A biodegradable hydrogel system containing curcumin encapsulated in micelles for cutaneous wound healing”, Biomaterials, 34 (27), 6377–6387 21 Gopal J., Muthu M., and Chun S.-C (2016), “Water soluble nanocurcumin extracted from turmeric challenging the microflora from human oral cavity”, Food Chem, 211, 903–909 22 Gupta V., Aseh A., Ríos C.N et al (2009), “Fabrication and characterization of silk fibroin-derived curcumin nanoparticles for cancer therapy.”, Int J Nanomedicine, 4, 115–122 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 64 23 Hesari A., Rezaei M., Rezaei M et al (2019), “Effect of curcumin on glioblastoma cells”, J Cell Physiol, 234 (7), 10281–10288 24 Hosseini S., Chamani J., Hadipanah M.R et al (2019), “Nano-curcumin’s suppression of breast cancer cells (MCF7) through the inhibition of cyclinD1 expression”, Breast Cancer Targets Ther, Volume 11, 137–142 25 Jurge S., Kuffer R., Scully C et al (2006), “Mucosal disease series Number VI Recurrent aphthous stomatitis”, Oral Dis, 12 (1), 1–21 26 Khanh L.L (2018), Fabrication Of Gelatin Loaded Curcumin/Silver Microspheres: Characterization And Antibacterial Efficacy, Vietnam National Universities 27 Kocaadam B and Şanlier N (2017), “Curcumin, an active component of turmeric ( Curcuma longa ), and its effects on health”, Crit Rev Food Sci Nutr, 57 (13), 2889–2895 28 Kramer N., Walzl A., Unger C et al (2013), “In vitro cell migration and invasion assays”, Mutat Res Mutat Res, 752 (1), 10–24 29 Lao C.D., Ruffin M.T., Normolle D et al (2006), “Dose escalation of a curcuminoid formulation”, BMC Complement Altern Med, (1), 10 30 Lestari M.L.A.D and Indrayanto G (2014), “Chapter Three – Curcumin”, Profiles of Drug Substances, Excipients and Related Methodology tr.113–204, 113–204 31 Li B and Wang J.H.-C (2011), “Fibroblasts and myofibroblasts in wound healing: Force generation and measurement”, J Tissue Viability, 20 (4), 108–120 32 Li J., Jiang Y., Wen J et al (2009), “A rapid and simple HPLC method for the determination of curcumin in rat plasma: assay development, validation and application to a pharmacokinetic study of curcumin liposome”, Biomed Chromatogr, 23 (11), 1201–1207 33 Li L., Braiteh F.S., and Kurzrock R (2005), “Liposome-encapsulated curcumin: In vitro and in vivo effects on proliferation, apoptosis, signaling, and angiogenesis”, Cancer, 104 (6), 1322–1331 34 Li R., Qiao X., Li Q et al (2011), “Metabolic and pharmacokinetic studies of curcumin, demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin in mice tumor after Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 65 intragastric administration of nanoparticle formulations by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry”, J Chromatogr B, 879 (26), 2751–2758 35 Liang C.-C., Park A.Y., and Guan J.-L (2007), “In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro”, Nat Protoc, (2), 329–333 36 Liu A., Lou H., Zhao L et al (2006), “Validated LC/MS/MS assay for curcumin and tetrahydrocurcumin in rat plasma and application to pharmacokinetic study of phospholipid complex of curcumin”, J Pharm Biomed Anal, 40 (3), 720–727 37 Liu J., Chen S., Lv L et al (2013), “Recent progress in studying curcumin and its nano-preparations for cancer therapy.”, Curr Pharm Des, 19 (11), 1974–93 38 Loan Khanh L., Thanh Truc N., Tan Dat N et al (2019), “Gelatin-stabilized composites of silver nanoparticles and curcumin: characterization, antibacterial and antioxidant study”, Sci Technol Adv Mater, 20 (1), 276–290 39 Loo C.-Y., Rohanizadeh R., Young P.M et al (2016), “Combination of Silver Nanoparticles and Curcumin Nanoparticles for Enhanced Anti-biofilm Activities”, J Agric Food Chem, 64 (12), 2513–2522 40 Ma J., Fang B., Zeng F et al (2014), “Curcumin inhibits cell growth and invasion through up-regulation of miR-7 in pancreatic cancer cells”, Toxicol Lett, 231 (1), 82–91 41 Ma Z., Shayeganpour A., Brocks D.R et al (2007), “High-performance liquid chromatography analysis of curcumin in rat plasma: application to pharmacokinetics of polymeric micellar formulation of curcumin”, Biomed Chromatogr, 21 (5), 546–552 42 Marczylo T.H., Verschoyle R.D., Cooke D.N et al (2007), “Comparison of systemic availability of curcumin with that of curcumin formulated with phosphatidylcholine”, Cancer Chemother Pharmacol, 60 (2), 171–177 43 McCulloch C.A and Bordin S (1991), “Role of fibroblast subpopulations in periodontal physiology and pathology.”, J Periodontal Res, 26 (3 Pt 1), 144–54 44 Merrell J.G., McLaughlin S.W., Tie L et al (2009), “Curcumin-loaded poly(εcaprolactone) nanofibres: Diabetic wound dressing with anti-oxidant and antiinflammatory properties”, Clin Exp Pharmacol Physiol, 36 (12), 1149–1156 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 66 45 Moscato S., Mattii L., D’Alessandro D et al (2008), “Interaction of human gingival fibroblasts with PVA/gelatine sponges”, Micron, 39 (5), 569–579 46 Motterlini R., Foresti R., Bassi R et al (2000), “Curcumin, an antioxidant and anti-inflammatory agent, induces heme oxygenase-1 and protects endothelial cells against oxidative stress.”, Free Radic Biol Med, 28 (8), 1303–12 47 Nam H.C.N., Everts V., Leethanakul C et al (2016), “Rinsing with saline promotes human gingival fibroblast wound healing in vitro”, PLoS One, 11 (7), e0159843 48 Nanci A and Cate A.R Ten (2008), “Cytoskeleton, Cell Junctions, Fibroblasts, and Extracellular Matrix”, Ten Cate’s Oral Histology: Development, Structure, and Function 8, tr.48–69, 48–69 49 Pawar Y.B., Shete G., Popat D et al (2012), “Phase behavior and oral bioavailability of amorphous Curcumin”, Eur J Pharm Sci, 47 (1), 56–64 50 Preeti L., Magesh K., Rajkumar K et al (2011), “Recurrent aphthous stomatitis”, J Oral Maxillofac Pathol, 15 (3), 252–256 51 Rajasekar A and Devasena T (2015), “Facile Synthesis of Curcumin Nanocrystals and Validation of Its Antioxidant Activity Against Circulatory Toxicity in Wistar Rats.”, J Nanosci Nanotechnol, 15 (6), 4119–4125 52 Riahi R., Yang Y., Zhang D.D et al (2012), “Advances in Wound-Healing Assays for Probing Collective Cell Migration”, J Lab Autom, 17 (1), 59–65 53 Ritz C., Baty F., Streibig J.C et al (2015), “Dose-Response Analysis Using R”, PLoS One, 10 (12), 1–13 54 Samarasinghe K., Wenk C., Silva K.F.S.T et al (2003), “Turmeric (Curcuma longa) Root Powder and Mannanoligosaccharides as Alternatives to Antibiotics in Broiler Chicken Diets”, Asian-Australasian J Anim Sci, 16 (10), 1495–1500 55 Sethi P., Dua V.K., Mohanty S et al (2009), “Development and Validation of a Reversed Phase HPLC Method for Simultaneous Determination of Curcumin and Piperine in Human Plasma for Application in Clinical Pharmacological Studies”, J Liq Chromatogr Relat Technol, 32 (20), 2961–2974 56 Shaikh J., Ankola D.D., Beniwal V et al (2009), “Nanoparticle encapsulation improves oral bioavailability of curcumin by at least 9-fold when compared to Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 67 curcumin administered with piperine as absorption enhancer”, Eur J Pharm Sci, 37 (3–4), 223–230 57 Shanmugam M.K., Arfuso F., Sng J.C et al (2019), “Epigenetic Effects of Curcumin in Cancer Prevention”, Epigenetics of Cancer Prevention Elsevier, tr.107–128, 107–128 58 Sharma R.A., Gescher A.J., and Steward W.P (2005), “Curcumin: The story so far”, Eur J Cancer, 41 (13), 1955–1968 59 Son H Le, Trang N.H., Sinh D.T et al (2013), “Effect of nanocurcumin particles prepared by top-down method on CCl4-induced hepatic fibrosis mice”, Int J Pharm Sci Res, (12), 4542–4548 60 Sood S and Nagpal M (2013), “Role of curcumin in systemic and oral health: An overview”, J Nat Sci Biol Med, (1), 61 Sun D., Zhuang X., Xiang X et al (2010), “A Novel Nanoparticle Drug Delivery System: The Anti-inflammatory Activity of Curcumin Is Enhanced When Encapsulated in Exosomes”, Mol Ther, 18 (9), 1606–1614 62 The Royal Society (2004), “Nanoscience and nanotechnologies : opportunities and uncertainties”, 155 p 63 Tonnesen H.H., Másson M., and Loftsson T (2002), “Studies of curcumin and curcuminoids XXVII Cyclodextrin complexation: Solubility, chemical and photochemical stability”, Int J Pharm, 244 (1–2), 127–135 64 Tran H.N., Nguyen M.T., Trinh V.N et al (2016), “Platelet-rich Fibrin Influences on Proliferation and Migration of Human Gingival Fibroblasts”, Int J Experimetal Dent Sci, (2), 83–88 65 Tran T.T.-D., Tran K.A., and Tran P.H.-L (2015), “Modulation of particle size and molecular interactions by sonoprecipitation method for enhancing dissolution rate of poorly water-soluble drug”, Ultrason Sonochem, 24, 256–263 66 Tran T.T.-D., Tran P.H.-L., Nguyen M.N.U et al (2014), “Amorphous isradipine nanosuspension by the sonoprecipitation method”, Int J Pharm, 474 (1–2), 146– 150 67 Trang N and Son H (2017), “Gastroprotective Effect of Nanocurcumin Particles against Indomethacin-induced Gastric Ulcer in Mice”, J Adv Biol Biotechnol, 15 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 68 (3), 1–8 68 Tsai Y.-M., Jan W.-C., Chien C.-F et al (2011), “Optimised nano-formulation on the bioavailability of hydrophobic polyphenol, curcumin, in freely-moving rats”, Food Chem, 127 (3), 918–925 69 Vareed S.K., Kakarala M., Ruffin M.T et al (2008), “Pharmacokinetics of Curcumin Conjugate Metabolites in Healthy Human Subjects”, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 17 (6), 1411–1417 70 Venkatesha S.H., Berman B.M., and Moudgil K.D (2011), “Herbal medicinal products target defined biochemical and molecular mediators of inflammatory autoimmune arthritis”, Bioorg Med Chem, 19 (1), 21–29 71 Vitaglione P., Barone Lumaga R., Ferracane R et al (2012), “Curcumin Bioavailability from Enriched Bread: The Effect of Microencapsulated Ingredients”, J Agric Food Chem, 60 (13), 3357–3366 72 Wang X., Jiang Y., Wang Y.-W et al (2008), “Enhancing anti-inflammation activity of curcumin through O/W nanoemulsions”, Food Chem, 108 (2), 419– 424 73 Wanichpakorn S and Kedjarune-Laggat U (2010), “Primary cell culture from human oral tissue: Gingival keratinocytes, gingival fibroblasts and periodontal ligament fibroblasts”, Songklanakarin J Sci Technol, 32, 327–331 74 WHO (2003), Evaluation of Certain Food Additives and Contaminants: Sixty-first Report of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, World Health Organization, Rome 75 Wu W., Shen J., Banerjee P et al (2011), “Water-dispersible multifunctional hybrid nanogels for combined curcumin and photothermal therapy”, Biomaterials, 32 (2), 598–609 76 Yang K.-Y., Lin L.-C., Tseng T.-Y et al (2007), “Oral bioavailability of curcumin in rat and the herbal analysis from Curcuma longa by LC–MS/MS”, J Chromatogr B, 853 (1–2), 183–189 77 Yoon H., Zhang X., Kang M et al (2018), “Cytotoxicity Evaluation of Turmeric Extract Incorporated Oil-in-Water Nanoemulsion”, Int J Mol Sci, 19 (1), 280 78 Young N.A., Bruss M.S., Gardner M et al (2014), “Oral Administration of Nano- Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 69 Emulsion Curcumin in Mice Suppresses Inflammatory-Induced NFκB Signaling and Macrophage Migration”, PLoS One, (11), e111559 79 Yu H and Huang Q (2010), “Enhanced in vitro anti-cancer activity of curcumin encapsulated in hydrophobically modified starch”, Food Chem, 119 (2), 669–674 80 “ISO 10993-5 (2009) Biological evaluation of medical devices Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity”, Int Stand, 3, 1–42 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết thử nghiệm độc tính in vitro nano curcumin OD trung bình %RGR Kết luận Chứng Chứng âm dươnng mg/ml mg/ml mg/ml mg/ml mg/ml 0,46 0,088 0,414 0,372 0,346 0,302 0,328 100% 9,818% 88,84% 78,67% 72,52% 69,86% 68,08% Không Không Không độc độc độc Độc Độc Không Độc độc Phụ lục 2: Kết số tế bào đếm ngày khảo sát tăng sinh CM10 CUR2CM10 CUR2M- M- (tế bào/giếng) (tế bào/giếng) (tế bào/giếng) (tế bào/giếng) Ngày 783,33 ± 66,14 783,33 ± 100,00 433,33 ± 90,14 633,33 ± 25,00 Ngày 966,67 ± 132,29 666,67 ± 180,28 350,00 ± 198,43 633,33 ± 180,28 Ngày 1.166,67 ± 180,28 200,00 ± 75,00 183,33 ± 66,14 316,67 ± 108,97 Ngày 1.900,00 ± 482,18 383,33 ± 175,00 100,00 ± 0,00 316,67 ± 25,00 Ngày 1.133,33 ± 125,00 683,33 ± 152,07 150,00 ± 75,00 250,00 ± 86,60 Ngày 11 1.166,67 ± 288,31 166,67 ± 108,97 116,67 ± 66,14 133,33 ± 66,14 Phụ lục 3: Kết diện tích vùng vơ bào thí nghiệm rạch tạo vết thương CM10 24 M0 CUR2CM10 24 giờ 24 CUR2M0 24 Diện tích vùng 688037 505105 584733.2 557678.6 734364 670663 516851 596476.6 vô bào % vùng 100% 73.41% 100% 95.37% 100% 91,33% 100% vô bào Phụ lục 4: Kết số tế bào hGF di cư qua màng transwell Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 115.4% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Nhóm Trung bình (tế bào/mm2) CM10 25,01 4,01 CUR2CM10 3,52 1,77 CUR2M- 2,29 1,36 M- 0,77 1,45 Độ lệch chuẩn Phụ lục 5: Mã code R dùng phần xử lý số liệu Phân tích độc tính MTT #Bảng tổng hợp phần trăm tb sống nồng độ bangmtt % group_by(nongdo) %>% summarise("mean" = mean(phantram), "sd" = sd(phantram)) kable(bangmtt, col.names = c("Nồng độ", "Trung bình", "Độ lệch chuẩn"), digits = ) # Phân tích thống kê, kiểm định Kruskal-Wallis kruskal.test(phantram ~ nongdo, data = datamtt) # Phân tích hậu định Dunn Kruskal-Wallis test library(FSA) PT = dunnTest(phantram ~ nongdo, data=datamtt, method="bonferroni") PT PT = PT$res PT library(rcompanion) cldList(comparison = PT$Comparison, p.value = PT$P.adj, threshold = 0.05) # Đường cong phần trăm tế bào sống theo nồng độ (dose response curve) library(drc) datamtt.drc % filter(nongdo != 99 ) model.m1