Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm nucleic acid để phát hiện sớm sự hiện diện virus HBV ở người hiến máu tình nguyện

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -o0o - NGUYỄN VĂN THÀNH ỨNG DỤNG KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM NUCLEIC ACID ĐỂ PHÁT HIỆN SỚM SỰ HIỆN DIỆN VI RÚT HBV Ở NGƢỜI HIẾN MÁU TÌNH NGUYỆN Chun ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 07/2018 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Bách Khoa – ĐHQG-HCM Cán hướng dẫn khoa học : Cán chấm nhận xét : Cán chấm nhận xét : Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày tháng năm Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập-Tự do-Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Văn Thành MSHV: 7140867 Ngày, tháng, năm sinh: 15/08/1981 Nơi sinh: Long An Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 I Tên đề tài “Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm nucleic acid (NAT) để phát sớm diện virus HBV người hiến máu tình nguyện” II Nhiệm vụ nội dung Xác định tỷ lệ HBV dương tính phương pháp xét nghiệm huyết học người hiến máu tình nguyện Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy Xác định tỷ lệ HBV dương tính phương pháp sinh học phân tử (kỹ thuật xét nghiệm NAT) người hiến máu có kết xét nghiệm HBV âm tính với phương pháp huyết học Đánh giá hiệu kết hợp song song: phương pháp huyết học phương pháp sinh học tử (xét nghiệm NAT) sàng lọc vi rút HBV lây nhiễm qua đường truyền máu III Ngày giao nhiệm vụ: 07/2017 IV Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 07/2018 V Cán hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thúy Hƣơng TS.Lê Hoàng Oanh TP HCM, ngày tháng CÁN BỘ HƢỚNG DẪN CÁN BỘ HƢỚNG DẪN TRƢỞNG KHOA i năm CHỦ NHIỆM BỘ MÔN LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến: Ban giám hiệu trường Đại học Bách Khoa TP.HCM; Khoa Kỹ thuật Hóa học; Bộ mơn Cơng nghệ sinh học Phòng đào tạo sau đại học tạo điều kiện thuận lợi cho học tập trường hồn thành luận văn Cơ PGS.TS Nguyễn Thúy Hương tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập trường hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn người thầy giỏi chuyên môn giàu lịng nhân ái, người thầy khơng cho học tập kiến thức chuyên môn mà cịn cho tơi học Cơ nhiều đức tính tốt đẹp đạo đức nghề nghiệp, đạo đức sống làm việc chuẩn mực nhà giáo Một lần xin cảm ơn Cơ tất cả, tương lai hệ mai sau, xin cảm ơn người thầy tâm huyết yêu nghề hướng dẫn dìu dắt tơi vượt qua khó khăn để hồn thành nhiệm vụ TS.Lê Hồng Oanh, người lãnh đạo, người thầy dạy dỗ dìu dắt tơi suốt năm tháng làm việc bệnh viện Chợ Rẫy tận tâm hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Ban giám đốc Bệnh viện Chợ Rẫy, Ban giám đốc Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy, đơn vị xét nghiệm sàng lọc máu, phận tiếp nhận máu tất anh chị đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn đến ba mẹ, anh, chị, em người thân gia đình ln bên cạnh tơi, động viên tơi suốt thời gian học tập thực luận văn Xin trân trọng biết ơn tất NGUYỄN VĂN THÀNH ii TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài luận văn: “Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm nucleic acid (NAT) để phát sớm diện virus HBVở ngƣời hiến máu tình nguyện Trung tâm Truyền máu Chợ Rẫy” Học viên thực hiện: Nguyễn Văn Thành Cán hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thúy Hương TS Lê Hoàng Oanh Thời gian thực hiện: 15/07/2017 đến 15/07/2018 Nội dung đề tài Xác định tỷ lệ HBV dương tính phương pháp xét nghiệm huyết học người hiến máu tình nguyện Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy Xác định tỷ lệ HBV dương tính phương pháp sinh học phân tử (kỹ thuật xét nghiệm NAT) người hiến máu có kết xét nghiệm HBV âm tính với phương pháp huyết học Đánh giá hiệu kết hợp song song: phương pháp huyết học phương pháp sinh học tử (xét nghiệm NAT) sàng lọc vi rút HBV lây nhiễm qua đường truyền máu Kế đề tài Tỷ lệ dương tính HBV phương pháp huyết học Phát 130 mẫu máu dương tính với HBV Tỷ lệ dương tính HBV-DNA, kỹ thuật xét nghiệm NAT mẫu âm tính với phương pháp huyết học Phát 17 mẫu máu dương tính với HBV-DNA Việc sử dụng kết hợp sàng lọc Kỹ thuật huyết học kỹ thuật xét nghiệm NAT mang lại ý nghĩa to lớn việc rút ngắn giai đoạn cửa sổ, giúp phát sớm diện vi rút HBV máu với tải lượng thấp mà phương pháp huyết học không phát Việc thực xét nghiệm NAT HBV người hiến máu tình nguyện góp phần nâng cao chất lượng đơn vị máu khẳng định tính giá trị xét nghiệm việc đảm bảo an toàn truyền máu cho bệnh nhân iii SUMMARY APPLYING NUCLEIC ACID TESTING (NAT) TO DETECT EARLY HBV IN BLOOD DONORS AT CHO RAY BLOOD TRANSFUSION CENTER I OBJECTIVES To study the positive rate of HBV tested by serology testing To study the positive rate of HBV-DNA tested by nucleic acid testing with negative samples tested by serology testing Comparison and evaluation the results between serology and nucleic acid testing II RESULTS The positive rate of HBV tested by serology testing There are 130 postive samples detected with HBV Positive rate of HBV tested by nucleic acid testing with negative samples by serology testing There are 17 postive samples detected with HBV-DNA, Combination screening Serology and NAT testing techniques are significant in shortening the window period, helping to detect the presence of HBV in the blood at very high rates Low serology methods that not detect The implementation of HBV serologic tests in voluntary blood donors has contributed to improving the quality of blood units and confirming the validity of this test in ensuring the safety of blood transfusions for patients iv LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu riêng tơi Các tài liệu trích dẫn, số liệu đề tài hoàn toàn trung thực tuân theo yêu cầu đề tài nghiên cứu Đề tài chưa cơng bố cơng trình khác Người cam đoan NGUYỄN VĂN THÀNH v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TỪ VIẾT TẮT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT ALT Alanin amino Tranferase CMIA Chemiluminescent Miễn dịch vi hạt hóa phát microparticle immunoassay quang DNA Deoxyribonucleic acid EDTA Etylen Diamin Tetra Acetate ELISA Enzyme Linked Immuno Miễn dịch gắn men Sorbent Assay ECLIA Electrochemiluminescence Immunoassay EIA Enzyme Immuno Assay HBV Hepatitis B Virus Vi rút gây viêm gan siêu vi Anti HBs Anti Hepatitis B surface Kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt vi rút gây viêm gan B Anti HBc Anti Hepatitis B core Kháng thể kháng kháng nguyên lõi vi rút gây viêm gan B HCV Hepatitis C virus Vi rút gây viêm gan siêu vi C HIV Human Immunodeficiency Vi rút gây suy giảm miễn dịch Virus mắc phải người NAT Nucleic Acid Testing RNA Ribonucleic acid RPHA Reversed Passive Hemagglutination Assay vi RIA Radio Immuno Assay MEIA Microparticles Enzyme Immuno Assay US FDA WHO United State of Food and Drug Cơ quan quản lý thực phẩm Administration dược phẩm Hoa Kỳ World Health Organization Tổ chức y tế giới vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu tạo HBV 10 Hình 2.2 Chu trình sống HBV 12 Hình 2.3 Kỹ thuật ELISA 17 Hình 2.4 Phản ứng điện hóa phát quang bề mặt điện cực 21 Hình 2.5 Nguyên lý sandwich kỹ thuật miễn dịch điện hóa phát quang 22 Hình 3.1 Trình tự xét nghiệm NAT 36 Hình 3.2 Máy phối trộn mẫu Hamilton STAR 37 Hình 3.3 Máy tách chiết tinh nucleic acid 37 Hình 3.4 Quy trình tách chiết nucleic acid hạt từ 38 Hình 3.5 Máy khuếch đại phát nucleic acid 39 Hình 4.1 Kết đo HBV phương pháp huyết học 50 Hình 4.2 Kết đo kỹ thuật HBV-DNA 54 viii ... ? ?Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm Nucleic acid (NAT) để phát sớm diện virus HBV người hiến máu tình nguyện Trung tâm Truyền máu Chợ Rẫy” 1.2 Mục tiêu đề tài Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm Nucleic acid. .. tài ? ?Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm nucleic acid (NAT) để phát sớm diện virus HBV người hiến máu tình nguyện? ?? II Nhiệm vụ nội dung Xác định tỷ lệ HBV dương tính phương pháp xét nghiệm huyết học người. .. VĂN Đề tài luận văn: ? ?Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm nucleic acid (NAT) để phát sớm diện virus HBV? ?? ngƣời hiến máu tình nguyện Trung tâm Truyền máu Chợ Rẫy” Học viên thực hiện: Nguyễn Văn Thành