Luận văn Đánh giá khả năng phân huỷ propanil của dòng vi khuẩn phân lập từ đất đã sử dụng thuốc diệt cỏ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đậu Thị Hồng Ngọc ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY PROPANIL CỦA DÒNG VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ ĐẤT ĐÃ SỬ DỤNG THUỐC DIỆT CỎ LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đậu Thị Hồng Ngọc ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY PROPANIL CỦA DÒNG VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ ĐẤT ĐÃ SỬ DỤNG THUỐC DIỆT CỎ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Hướng dẫn 1: TS Hà Danh Đức Hướng dẫn 2: TS Nguyễn Thị Diệu Thúy Hà Nội - 2020 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan luận văn đề tài “đánh giá khả phân hủy propanil dòng vi khuẩn phân lập từ đất sử dụng thuốc diệt cỏ” cơng trình nghiên cứu tơi với hướng dẫn TS Hà Danh Đức TS Nguyễn Thị Diệu Thúy nội dung trình bày luận văn hoàn toàn trung thực Những số liệu, bảng biểu phục vụ cho việc phân tích dẫn dắt đề tài thu thập từ nguồn tài liệu khác ghi mục tài liệu tham khảo thích bên bảng biểu Ngoài ra, tài liệu diễn giải để làm rõ thêm luận điểm phân tích trích dẫn phần phụ lục thích nguồn gốc liệu Mọi chép không hợp lệ, quy phạm quy chế đào tạo hay gian trá tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Hà Nội, ngày 25 tháng 09 năm 2020 Tác giả Đậu Thị Hồng Ngọc Lời cảm ơn Tôi xin tỏ lòng biết ơn gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Hà Danh Đức TS Nguyễn Thị Diệu Thúy trực tiếp hướng dẫn tơi tận tình trình lựa chọn thực đề tài nghiên cứu Thầy tận tình bảo hướng dẫn tơi tìm hướng nghiên cứu, cách tiếp cận thực tế, tìm kiếm tài liệu, tìm hiểu giải vấn đề, nhờ tơi hồn thành luận văn cao học Tơi xin cảm ơn Học Viện Khoa Học Công nghệ, phịng Đào tạo thầy giáo, giáo cán thuộc Khoa Công nghệ Sinh học Học Viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn Lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam nhiệt tình giảng dạy giúp đỡ tơi q trình học tập trường Ngoài ra, để nghiên cứu thực đề tài tơi cịn nhận nhiều quan tâm, góp ý, hỗ trợ quý báu từ cô Nguyễn Thị Oanh anh chị trường Đại học Đồng Tháp Trung tâm phân tích Hóa học, Đại học Đồng Tháp Trong luận, hẳn tránh khỏi hạn chế thiếu sót Tơi mong muốn nhận nhiều đóng góp quý báu đến từ quý thầy cô, ban cố vấn để đề tài hồn thiện có ý nghĩa thiết thực áp dụng thực tiễn sống Tôi xin chân thành cảm ơn ! Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Viết tắt 2,4-D AAA Tiếng Anh Tiếng Việt 2,4-dichlorophenoxyacetic Axit 2,4acid dichlorophenoxyacetic Aryl acylamidase enzym Aryl acylamidase APHA C CFU g HPLC L LB LD50 mg mL mM MM N PCR ppm rRNA μg American Public Health Association, Carbon Colony forming unit Gram High-performance liquid chromatography Litter Luria-Bertani Hiệp Hội Y tế Công Công Hoa Kỳ Cacbon Đơn vị hình thành khuẩn lạc Gam Sắc ký lỏng hiệu cao Lethal Death 50% Miligram Mililitter Milimolar Mineral medium Nitrogen Polymerase Chain Reaction Part per million Ribosome Ribonucleic Acid Microgram Liều gây chết trung bình Mili gam Mili lít Mili mon Mơi trường khống lỏng Ni tơ Phản ứng khuếch đại gen Lít Mơi trường ni cấy vi sinh vật Đơn vị đo mật độ RNA ribosome Danh mụ Bảng 1.1 Tính chất vật lý propanil… .8 Bảng 1.2 Các loại thuốc trừ cỏ có hoạt chất propanil lưu hành nước ta 10 Bảng 2.1 Thành phần PCR 25 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt PCR 25 Bảng 2.3 Thơng tin kích thước sản phẩm PCR, nhiệt độ gắn mồi 26 YBảng 3.1 Sự giảm nồng độ propanil (mM) phân hủy dòng vi khuẩnphân lập được: DT, DT1, DT2 DT3 môi trường khống khơng bổ sung thêm nguồn C N 36 Bảng 3.2 Sự giảm nồng độ propanil so phân hủy A baumannii DT nồng độ 0,1, 0,2 0,3 0,4 mM mơi trường khống khơng bổ sung thêm nguồn C N 42 Bảng 3.3 Sự phân hủy propanil 3,4-dichloroaniline (3,4-DCA) A baumannii DT mơi trường khống khơng bổ sung thêm nguồn C N………………………………………………………………………….….44 Bảng 3.4 Sự giảm nồng độ propanil phân hủy A baumannii DT nồng độ khác mơi trường khống bổ sung thêm nguồn succinate ammonium sulfate .47 Bảng 3.5 Ảnh hưởng số lượng vi khuẩn A baumannii DT chủng ban đầu đến tốc độ phân hủy propanil Sự phân hủy thực mơi trường có nồng độ propanil 0,1 mM 54 Bảng 3.6 Thành phần hóa học mẫu nước lấy từ sông Tiền kênh rạch từ vườn ăn trái 55 Bảng 3.7 Sự phân hủy propanil (0,1 mM) mẫu nước thu từ sông Tiền (A) kêch rạch (B) 57 Bảng 3.8 Thành phần hóa học mẫu đất để tiến hành thí nghiệm (đơn vị quy khối lượng đất khô) 59 Bảng 3.9 Sự phân hủy propanil đất nồng độ 0,1 mM/kg đất 60 Danh mục hình YHình 1.1 Các giai đoạn bao gồm hóa chất tạo thành q trình tổng hợp propanil………………………………………………………………… Hình 1.2 Cấu tạo hóa học propanil……………………… …………….8 Hình 2.1 Khay nhựa dùng để ủ mẫu đất trước phân lập vi khuẩn .23 YHình 3.1 Sự phân hủy propanil chúng sử dụng nguồn C N dòng vi khuẩn DT, DT1, DT2 DT3……………… ……35 Hình 3.2 Phổ điện di vùng 16S rDNA dòng vi khuẩn phân lập .32 Hình 3.3 Ảnh vi khuẩn A baumannii KT kỉnh hiển vi điện tử (8500× 20000×) (chụp phịng thí nghiệm chun sâu, trường Đại học Cần Thơ) ……………………………………………………………………………….38 Hình 3.4 Sự giảm nồng độ propanil thị thơng qua xuất đỉnh có thời gian xuất 3,9 phút chạy HPLC……………………… 39 Hình 3.5 Cây phát sinh chủng loại dựa trình tự gen 16S rDNA cho thấy vị trí A baumannii DT (in đậm) chi Acinetobacter………… …….40 Hình 3.6 Ảnh hưởng nồng độ propanil đến phân hủy vi khuẩn A baumannii DT môi trường không bổ sung thêm nguồn C N Mẫu đối chứng có nồng độ 0,1 mM khơng chủng vi khuẩn …………………43 Hình 3.7 Sự phân hủy propanil 3,4-dichloroaniline (0,1 mM) mơi trường khống khơng bổ sung thêm nguồn C N ………….…………… 45 Hình 3.8 Các bình tam giác dùng để phân hủy propanil nồng độ 0,0 mM (1) đối chứng), 0,1 mM (2), 0,4 mM (3), 0,6 mM (4) 1,0 mM (5) sau 20 ủ mơi trường khống có bổ sung thêm nguồn C N……… …46 Hình 3.9 Sự phân hủy propanil A baumannii DT nồng độ khác mơi trường có bổ sung thêm nguồn C (succinate) N (ammonium sulfate) Mẫu đối chứng có nồng độ 0,1 mM không chủng vi khuẩn……………………………………………………………… …… 49 Hình 3.10 Sự sinh trường vi khuẩn (A) phân hủy propanil (B) A baumannii DT môi trường lỏng độ pH khác Vi khuẩn nuôi cấy môi trường chứa 0,1 mM, bổ sung thêm nguồn C N ủ 10 giờ…………………………………………………………… …… 50 Hình 3.11 Ảnh hưởng độ mặn đến số lượng (A) phân hủy propanil (B) vi khuẩn A baumannii DT (B) nồng độ 0,1 mM propanil 10 giờ……………………………………………………………………………52 Hình 3.12 Ảnh hưởng số lượng vi khuẩn A baumannii DT chủng ban đầu đến tốc độ phân hủy propanil …………………………………… 53 Hình 3.13 Sự phân hủy propanil (0,1 mM) mẫu nước thu từ sông Tiền (A) kêch rạch (B) …………………………………………… 58 Hình 3.14 Sự phân hủy propanil đất nồng độ 0,1 mM/kg đất… …62 70 Berg H., 2001, Pesticide use in rice and rice-fish farms in the Mekong Delta, Vietnam Crop Protection, 20(10) , pp 897-905 Roberts D.M., Heilmair R., Buckley N.A., Dawson A.H., Fahim M., Eddleston M., Eyer P., 2009, Clinical outcomes and kinetics of propanil following acute self-poisoning: a prospective case series, BMC Clin Pharmacol, 16(9), pp 10 USADI, 2014, USAID Mekong ARCC Climate Change Impact and Adaptation Study for the Lower Mekong Basin on Fisheries Prepared for the United States Agency for International Development by ICEM International Centre for Environmental Management Bangkok: USAID Mekong ARCC Project 11 Stadlinger N., Berg H., Van den Brink P.J., Tam N.T and Gunnarsson J.S., 2019, Comparison of predicted aquatic risks of pesticides used under different rice-farming strategies in the Mekong Delta, Vietnam, Environ Sci Pollut Res In 12 Primel E.G., Zanella R., Kurz M.H.S., Goncalves F.F., Martins M.L., Machado S.L.O and Marchesan E., 2007, Risk assessment of surface water contamination by herbicide residues: monitoring of propanil degradation in irrigated rice field waters using HPLC-UVand confirmation by GC-MS, J Braz Chem Soc, 18, pp 585-589 13 Perera A., Burleigh J.R and Davis C.B., 1999, Movement and retention of propanil N-(3,4-dichlorophenyl)propanamide in a paddy-riverine wetland system in Sri lanka, Agric Ecosyst Environ, 72(3), pp 255-263 14 Galhano V., Gomes-Laranjo J., Fernández-Valiente E., Videira R and Peixoto F., 2011, Impact of herbicides on non-target organisms in sustainable irrigated rice production systems: state of knowledge and 71 future prospects In: Kortekamp A (ed) Herbicides and environment, InTech Rijeka, pp 45-72 15 Deuel Jr L.E., Brown K.W., Turner F.C., Westfall D.G and Price J.D., 1977, Persistence of propanil, DCA and TCAB in soil and water under flooded rice culture, J Environ Qual, 6, pp 127-132 16 Richards S.M., McClure G.Y., Lavy T.L., Mattice J.D., Keller R.J and Gandy J., 2001, Propanil (3,4-dichloropropionanilide) particulate concentrations within and near the residences of families living adjacent to aerially sprayed rice fields, Arch Environ Contam Toxicol, 41(1) , pp 112-116 17 Cakici O and Akat E., 2013, Propanil-induced histopathological changes in the liver and kidney of mice, Anal Quant Cytopathol Histpathol, 35(3) , pp 163-170 18 Konstantinou I.K., Sakkas V.A and Albanis T.A., 2001, Photocatalytic degradation of the herbicides propanil and molinate over aqueous TiO suspensions: identification of intermediates and the reaction pathway, Applied Catalysis B: Environmental, 34, pp 227-239 19 González-Sánchez C., Martínez-Aguirrea A., Pérez-Garcíaa B., 2014, Use of residual agricultural plastics and cellulose fibers for obtaining sustainable eco-composites prevents waste generation, Journal of Cleaner Production, 83, pp 228-237 20 Albert-García J.R., Icardo M.C., Calatayud J.M., 2006, Analytical strategy photodegradation/chemiluminescence/continuous - flow multicommutation methodology for the determination of the herbicide Propanil, Talanta, 69, pp 608-614 21 Dahchour A., Bitton G., Coste C M., Bastide J., 1986 Degradation of 72 the herbicide propanil in distilled water, Bull Environ Contam Toxicol., 36(4) , pp 556–562 22 Zhang J., Sun J.Q., Yuan Q.Y., Li C., Yan X., Hong Q and Li S.P., 2011, Characterization of the propanil biodegradation pathway in Sphingomonas sp Y57 and cloning of the propanil hydrolase gene prpH, J Hazard Mater, 196, pp 412-419 23 Herrera-González V.E., Ruiz-Ordaz N., Galíndez-Mayer J, 2013, Biodegradation of the herbicide propanil, and its 3,4-dichloroaniline byproduct in a continuously operated biofilm reactor, World J Microbiol Biotechnol, 29(3), pp 467-474 24 Kanawi E., Van Scoy A.R., Budd R and Tjeerdema R.S., 2016, Environmental fate and ecotoxicology of propanil: a review, Toxicol Environ Chem, 98, pp 1-16 25 Warren S and Wyatt P., 2008, Organic synthesis : the disconnection approach (2nd ed.), Oxford: Wiley-Blackwell, pp 25 26 Good N.E 1961 Inhibitors of the Hill reaction Plant Physiology 36, pp 788-810 27 Moreland D.E and Hill K.L 1963 Inhibition of photochemical activity of isolated chloroplasts by acylanilides Weeds, 11, pp 55-60 28 Lohstroh P., 2019, Propanil (N-(3,4-dichlorophenyl)propanamide) risk characterization document occupational and bystander exposures Human Health Assessment Branch Department of Pesticide Regulation California Environmental Protection Agency Final Propanil RCD 29 Nguyễn Trần Oánh, Nguyễn Văn Viên Bùi Trọng Thủy, 2007, Giáo trình sử dụng thuốc bảo vệ thực vật, Trường đại học nông nghiệp Hà Nội 73 30 Adamski J.C and Pugh A.L., 1996, Occurrence of pesticides in ground water of the Ozark Plateaus province, Water Res Bull, 32, pp 97-105 31 Kimbrough R.A and Litke D.W., 1996, Pesticides in streams draining agricultural and urban areas in Colorado, Environ Sci Technol, 30, pp 908-916 32 Carazo-Rojas E., Pérez-Rojas G., Pérez-Villanueva M., Chinchilla-Soto C., Chin-Pampillo J.S., Aguilar-Mora P., Alpízar-Marín M., Masís-Mora M., Rodríguez-Rodríguez C.E and Vryzas Z., 2018, Pesticide monitoring and ecotoxicological risk assessment in surface water bodies and sediments of a tropical agro-ecosystem, Environmental pollution (Barking, Essex : 1987), 241, pp 800-809 33 Johnson R.D., Manske D.D., New D.H., Podrebarac D.S., 1984, Pesticides, metal, and other chemical residues in adult total diet samples, J Assoc off Anal Chem, 67, pp 154-166 34 Gartrell M.J., Craun J.C., Podrebarac D.S and Gunderson E.L., 1986, Pesticides, selected elements, and other chemicals in adult total diet samples, J Assoc Off Anal Chem, 69(1), pp 146-159 35 EFSA (European Food Safety Authority), 2018, Conclusion on the peer review of the pesticide risk assessment of the active substance propanil, EFSA Journal, 16(12) , pp 5-418 36 Mitsou K., Koulianou A., Lambropoulou D., Pappas P., Albanis T and Lekka M., 2006, Growth rate effects, responses of antioxidant enzymes and metabolic fate of the herbicide propanil in the aquatic plant Lemna minor, Chemosphere, 62, pp 275-284 74 37 Lewis R.J Sr., 2004, Sax's Dangerous Properties of Industrial Materials 11th Edition Wiley-Interscience, Wiley & Sons, Inc Hoboken, NJ Calcicola, Pestic Biochem Physiol, 23(2), pp 157-162 38 USEPA, 2005, Office of Pesticide Programs; Pesticide Ecotoxicity Database (2000) on N-(3,4-ichlorophenyl) propanamide (709-98-8), EPA 39 Habte M and Alexander M., 1980, Nitrogen fixation by photosynthetic bacteria in lowland rice culture, Appl Environ Microbiol, 39(2): 342-347 40 Pandey A.K., 1985, Effects of propanil on growth and cell constituents of Nostoc 41 Gómez de Barreda Ferraz D., Sabater C and Carrasco J.M., 2004, Effects of propanil, tebufenozide and mefenacet on growth of four freshwater species of phytoplankton: a microplate bioassay, Chemosphere, 56(4), pp 315‐320 42 Crecchio, C., Curci, M., Pizzigallo M.D.R., Ricciuti P and Ruggiero P., 2001, Molecular approaches to investigate herbicides induced bacterial community changes in soil microcosms, Biol Fert Soils, 33, pp 460-466 43 Ayranci E and Hoda N., 2004, Adsorption of bentazon and propanil from aqueous solutions at the high area activated carbon-cloth, Chemosphere, 57, pp 755-762 44 Correa I.E and Steen W.C., 1995, Degradation of propanil by bacterial isolates and mixed populations from a pristine lake, Chemosphere, 30, pp 103-116 45 Roehrs R., Miguel R., Machado R.Z., Biodegradation of Herbicide Propanil and Its Subproduct 3,4-Dichloroaniline in Water, Clean – Soil, Air, Water 2012, 40 (9), pp 958–964 75 46 Carvalho G., Marques R., Lopes A.R., Faria C., Noronha J.P., Oehmen A., Nunes O.C and Reis M.A., 2010, Biological treatment of propanil and 3,4-dichloroaniline: kinetic and microbiological characterization, Water Res, 44, pp 4980-4991 47 Hou Y., Li S., Dong W., Yuan Y., Wang Y., Shen W., et al (2015) Community structure of a propanil-degrading consortium and the metabolic pathway of Microbacterium sp strain T4-7, Int Biodeter Biodegr 105, pp 80–89 48 Lanzilotta R.P and Pramer D., 1970, Herbicide transformation I Studies with whole cells of Fusarium solani, Appl Microbiol, 19, pp 301-306 49 Pelsy F., Leroux P and Heslot H., 1987, Properties of an Aspergillus nidulans propanil hydrolase, Pestic Biochem Physiol, 27, pp 182-188 50 Reichel H., Sisler H.D and Kaufman D.D., 1991, Inducers, substrates, and inhibitors of a propanil-degrading amidase of Fusarium oxysporum, Pestic Biochem Physiol, 39, pp 240-250 51 Zhang J., Chen S.A., Zheng J.W., Cai S., Hang B.J., He J and Li S.P., 2012, Catellibacterium nanjingense sp nov., a propanil-degrading bacterium isolated from activated sludge, and emended description of the genus Catellibacterium, Int J Syst Evol Microbiol, 62, pp 495-499 52 Pettigrew C.A., Paynter M.J.B and Camper N.D., 1985, Anaerobic microbial degradation of the herbicide propanil, Soil Biol Biochem, 17, pp 815-818 53 Chisako H and Kearney P.C., 1970, Metabolism of propanil in soils, J Agric Food Chem, 18, pp 854-858 76 54 Burge W.D., 1972, Microbial populations hydrolyzing propanil and accumulation of 3,4-dichloroaniline and 3,3',4,4'-tetrachloroazobenzene in soils, Soil Biol Biochem, 4, pp 379-386 55 Zeyer J and Kearney P.C., 1982, Microbial metabolism of propanil and 3,4-dichloroaniline, Pestic Biochem Physiol, 17, pp 224-231 56 Hà Danh Đức, 2016, Đánh giá hình thành biofilm khả phân hủy chloroaniline biofilm vi khuẩn Acinetobacter baumannii GFJ1, Tạp chí Khoa học Công nghệ, Đại học Đà Nẵng, 7(104), pp 81-84 57 Nguyen Thi Oanh, Ha Danh Duc, Tran Dat Huy, Nguyen Gia Hien, Nguyen Thi Huynh Nhu, 2018, Degradation of 2,4- Dichlorophenoxyacetic acid by Pseudomonas fluorescens strain HH, Academia journal of biology, 40(3) 58 Hà Danh Đức, 2018, Anaerobic degradation of 2,4- dichlorophenoxyacetic acid by Thauera sp DKT, Biodegradation, 29(5), pp 499-510 59 Nguyễn Thị Thu Hà, 2014, Nghiên cứu quang hóa xúc tác TiO2 phân hủy thuốc trừ cỏ môi trường nước, Luận văn Thạc sĩ Hóa Học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên Hà Nội, Hà Nội 60 Hà Danh Đức, 2015, Sự phân hủy chloroaniline vi khuẩn Acinetobecter baumannii GFJ1 môi trường nhiễm mặn Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Đại học Đà Nẵng, 1(98), pp 89-92 61 APHA, 1998, Standard methods for the examination of water and wastewater, 20th ed, American Public Health Association, Washington, DC 77 62 Ditzler C., Scheffe K and Monger H.C., 2017, USDA Handbook 18, Government Printing Office, Washington, D.C 63 Zhang L., Hu Q., Hang P., Zhou X and Jiang J., 2019, Characterization of an arylamidase from a newly isolated propanil-transforming strain of Ochrobactrum sp PP-2, Ecotoxicol Environ Saf, 167, pp 122-129 64 Zhang L., Zhou X.Y., Su X.J., Hu Q and Jiang J.D., 2019, Spirosoma sordidisoli sp nov., a propanil-degrading bacterium isolated from a herbicide-contaminated soil, Antonie Van Leeuwenhoek, 112(10), pp 1523-1532 65 Milan M., Vidotto F., Piano S., Negre M and Ferrero A., 2012, Dissipation of propanil and 3,4 dichloroaniline in three different rice management systems, J Environ Qual, 41(5), pp 1487-1496 66 Ha D.D., Nguyen T.O., 2020, Application of Methylopila sp DKT for bensulfuron-methyl degradation and peanut growth promotion Curr Microbiol, 77(8): 1466-1475 67 Hall TA., 1999 BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Window 95/98/NT Nucl Acids Symp.Ser.41:95-98 78 PHẦN PHỤ LỤC Hình Vi khuẩn A baumannii DT hình thành khuẩn lạc đĩa agar >MN658561.1 Acinetobacter baumannii strain DT 16S ribosomal RNA gene, partial sequence CATGCAGTCGAGCGGGGGAAGGTAGCTTGCTACYGGACCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCTTAGGAA TCTGCCTATTAGTGGGGGACAACATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCA GGGGATCTTCGGACCTTGCGCTAATAGATGAGCCTAAGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTA CCAAGGCGACGATCTGTAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACT CCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGA AGAAGGCCTTATGGTTGTAAAGCACTTTAAGCGAGGAGGAGGCTACTYTAGTTAATACCTAGRGATAGT GGACGTTACTCGCAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACMMGAGRGGGKTGG CGAGCRTTAAATCCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGSCGGCTTATTAAGTCGGATGTGAAATCC CCGAGCTTAACTTGGGAATTGCATTCGATACTGGTGAGCTAGAGTATGGGAGAGGATGGTAGAATTCCAG GTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCCGATGGCGAAGGCAGCCATCTGGCCTAATACT 79 GACGCTGAGGTACGAAAGCMTGGGGAGCAAACAGGGATTAGATASCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGAT GTCTACTAGCCGTTGGGGCCTTTGAGGCTTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAGTAGACCGCCTGGGGAG TACGGTCGCAAGACTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAT TCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATACTAGAAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTT CGGGAATCTAGATACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGC AACGAGCGCAACCCTTTTCCTTACTTGCCAGCATTTCGGATGGGAACTTTAAGGATACTGCCAGTGACAA ACTGGAGGAAGGCGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAAT GGTCGGTACAAAGGGTTGCTACACAGCGATGTGATGCTAATCTCAAAAAGCCGATCGTAGTCCGGATTGG AGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGT TCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGAAGTAGCTAGCCTAACTG CAAAGAGGGCGGTACCACGG Hình Trình tự 16S rRNA vi khuẩn A baumannii DT 300000 f(x) = 306534.55x R² = Đỉnh (height) 240000 180000 120000 60000 0 0.2 0.4 0.6 0.8 mM Hình Đường chuẩn nồng độ propanil dựa vào kết HPLC 80 81 Hình Thí nghiệm tiến hành Laminar điều kiện vô trùng 82 83 Hình Các hình khác ... CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH DÒNG VI KHUẨN PHÂN HỦY PROPANIL 3.1.1 Phân lập dịng vi khuẩn phân hủy propanil Sau q trình phân lập, thu bốn dịng vi khuẩn có khả phân hủy propanil mà... VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH DÒNG VI KHUẨN PHÂN HỦY PROPANIL 36 3.1.1 Phân lập dòng vi khuẩn phân hủy propanil 37 3.1.2 Định danh dòng vi khuẩn phân hủy propanil. .. khuẩn phân lập từ đất sử dụng thuốc diệt cỏ? ?? tiến hành nhằm chọn dịng vi khuẩn có khả phân hủy propanil tốt, góp phần vào vi? ??c giảm thiểu ô nhiễm môi trường Mục tiêu nghiên cứu Phân lập chủng vi khuẩn