KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (CND và BC) góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 166 28

MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu kháng sinh 1.1.2 Định nghĩa kháng sinh 1.1.3 ân loại kháng sinh 1.1.4 hế tác dụng kháng sinh 1.1.5 ứng dụng kháng sinh .4 1.2 Đại cương xạ khuẩn 1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.2.2 Đặc điểm xạ khuẩn chi Streptomyces .6 1.3 Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh 1.4 Tuyển chọn , cải tạo bảo quản giống xạ khuẩn 1.4.1 họn lọc ngẫu nhiên 1.4.2 Đột biến cải tạo giống 1.4.3 quản giống .9 1.5 Lên men tổng hợp kháng sinh 10 1.5.1 Đại cương .10 1.5.2 Các phương pháp lên men 10 1.6 Chiết tách tinh chế kháng sinh từ dịch lên men 12 1.6.1 Vai trò chiết tách tinh chế kháng sinh 12 1.6.2 Các phương pháp chiết tách 12 1.7 Bước đầu nghiên cứu cấu trúc kháng sinh 13 1.7.1 phổ tử ngoại – khả kiến ( UV-VIS) 13 1.7.2 Quang phổ hồng ngoại (IR) 13 1.7.3 phổ khối ( MS) .13 1.8 Một số nghiên cứu liên quan .13 1.8.1 Phát nguồn kháng sinh tự nhiên phong phú nhờ nghiên cứu những13 chất hóa học sinh Streptomyces sp ong bắp cày ……….13 1.8.2 Tối ưu hóa mơi trường lên men chủng Streptomyces Orientalis 4912 sinh vancomycin …… ………………… ……………………………… …………14 CHƯƠNG II : ĐỐI TƯƠNG VA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nuyên liệu thiết bị 15 2.1.1 Chủng xạ khuẩn 15 2.1.2 Ví sinh vật kiểm định 15 2.1.3 Các môi trường 15 2.1.4 Dung môi .17 2.1.5 ột số dụng cụ , máy móc .18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.2.1 họn lọc, cải tạo giống 19 2.2.2 Lên men, chiết tách kháng sinh 19 2.2.3 xác định số tính chất kháng sinh thu .19 2.3 Phương pháp thực nghiệm 19 2.3.1 Nuôi cấy giữ giống xạ khuẩn 19 2.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng sinh phương pháp khuếch tán 20 2.3.3 ng lọc ngẫu nhiên 21 2.3.4 Đột biến ánh sáng UV .21 2.3.5 Phương pháp đột biến hoá học 23 2.3.6 Lên men chìm tổng hợp kháng sinh 23 2.3.7 Chiết kháng sinh từ dịch lên men dung môi hữu 24 2.3.8 Tách thành phần kháng sinh sắc ký lớp mỏng 24 2.3.9 Thu kháng sinh thô phương pháp cất quay 25 2.3.10 Tinh chế kháng sinh thô sắc ký cột 26 2.3.11 xác định kháng sinh tinh khiết thu 26 CHƯƠNG III : KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VA NHÂN XÉT 27 3.1 Kết sàng lọc ngẫu nhiên .27 3.2 Kết đột biến cải tạo giống lần 28 3.3 Kết đột biến cải tạo giống lần 29 3.4 Kết đột biến hóa học 30 3.5 Kết chọn môi trường lên men 31 3.6 Kết lên men chìm sinh tổng hợp kháng sinh 32 3.7 Kết sắc ký lớp mỏng chọn hệ dung môi 33 3.8 Kết tinh chế kháng sinh sắc ký cột 33 3.9 Kết đo nhiệt độ nóng chảy, đo phổ kháng sinh tinh khiết 37 KẾT LUẬN VA KIẾN NGHỊ 39 LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo PGS -TS Cao Văn Thu - Bộ môn Vi sinh – Sinh học ngườ i đã tinh từ nhữ ng bướ c ̀ hướ ng dâñ Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, cán , ky thuật viên giảng dạy , tâṇ đầu tiên cho đến tơi hoaǹ thành khóa luận cơng tá c taị Bô ̣ môn Vi sinh - Sinh hoc̣ , Bộ môn Công Nghiệp Dược, Viêṇ vê ̣ sinh dic̣ h tễ Trung ương, Bộ mơn Hóa vật liệu - khoa Hóa trường Đại học Khoa học tự nhiên Hà Nội đã giúp thời gian làm thực nghiệm Nhân dip̣ nà y cũ ng xin gử i lờ i cả m ơn đế n Ban giá m hiêụ cô giá o trườ ng Đaị hoc̣ thờ i gian hoc̣ Dươ Hà Nôị đã c̣ daỵ dỗ và taọ moị điề u kiêṇ cù ng toà n thể cá c thầ y thuâ lơ cho ṇ ị tâ taị trườ ng p̣ Và cuối cùng lời cảm ơn tơi gửi tới gia đình bạn be đa động viên, giúp suố t thờ i gian thưc̣ hiê khó a luâṇ ṇ Do hạn chế thời gian, điều kiện trang thiết bị phương tiện nghiên cứu, khóa luâ nà y cò n có nhiề u thiế u só t Tôi rấ t mong ṇ nhâṇ đươ sư ̣ gó p ý củ a cać thầy cô , bạn be c̣ để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thaǹ h cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng năm Sinh viên DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid 2’- deoxyribonucleic ARN Acid ribonucleic ATCC American Type Culture Collection DM Dung môi ĐB Đột biến ĐBHH Đột biến hóa học Gr(+) Gram dương Gr(-) Gram âm HTKS Hoạt tính kháng sinh ISP International Streptomyces Project (Chương trình Streptomyces quốc tế) IR Infrared ( hồng ngoại ) KS Kháng sinh MT Môi trường MTdt Mơi trường dịch thể MTth Mơi trường thích hợp MC Mẫu chứng SLNN Sàng lọc ngẫu nhiên SKLM Sắc ký lớp mỏng VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật UV Ultra violet ( tử ngoại) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Môi trường nuôi cấy VSV kiểm định Bảng 2.2: Các môi trường nuôi cấy xạ khuẩn Bảng 2.3: Các dung môi đa sử dụng Bảng 3.1: Kết thử HTKS sàng lọc ngẫu nhiên Bảng 3.2: Kết thử hoạt tính KS đột biến lần Bảng 3.3: Kết thử HTKS đột biến lần Bảng 3.4: Kết thử HTKS đột biến hóa học Bảng 3.5: Kết chọn mơi trường lên men chìm Bảng 3.6: Kết chọn chủng lên men Bảng 3.7: Kết sắc ký lớp mỏng chọn hệ dung môi Bảng 3.8: kết thử hoạt tính kháng sinh sau sắc kí lần Bảng 3.9: Kết chạy sắc ký cột lần Bảng 3.10: kết IR Bảng 3.11: Kết dự đốn từ phổ MS DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sơ đồ chế tác dụng kháng sinh Hình 1.2: Khuẩn lạc xạ khuẩn Hình 1.3: Sơ phân loại xạ khuẩn Hình 1.4: Các khuẩn ty xạ khuẩn Hình 1.5: Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh Hình 1.6: Đường cong sinh trưởng phát triển xạ khuẩn Hình P.1: Hình thử HTKS phương pháp khối thạch Hình P.3: Hình thử HTKS phương pháp giếng thạch Hình P.3: Hình thử HTKS phương pháp khoanh giấy lọc Hính P.4: Hình phát vết sắc ký phương pháp hình VSV Hính P.5: Kết đo phổ UV kháng sinh tinh khiết thu Hình P.6: Kết đo phổ IR kháng sinh tinh khiết thu Hình P.7: Kết đo phổ khối kháng sinh tinh khiết thu ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước khí hậu nhiệt đới , tỷ lệ bệnh nhiễm trùng cấu bệnh cịn cao , kháng sinh quan trọng kháng sinh công cụ đắc lực bác sy , dược sy phòng chữa bệnh, bệnh nhiễm khuẩn, nhiễm nấm , kháng sinh cịn dùng chăn ni , trơng trọt công nghiệp thực phẩm Tuy nhiên thị trường dược phẩm nước ta , hầu hết kháng sinh nhập dạng thành phẩm bán thành phẩm , ngành công nghiệp sản xuất kháng sinh chưa thực hình thành Bên cạnh đó, Việt Nam nước có tỷ lệ kháng kháng sinh cao giới tổ chức y tế giới ( WHO ) Do đó, đẩy mạnh nghiên cứu , sản xuất kháng sinh có hiệu điều trị cao , độc tính thấp bị kháng thuốc yêu cầu tất yếu phát triển y tê Môi trường tự nhiên đa dạng nước ta điều kiện thuận lới cho sinh sôi , phát triển hệ vi sinh vật , đáng ỳ xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp kháng sinh , đặc biệt chi xạ khuẩn Streptomyces tất kháng sinh biết đến có khoảng 60% nhuồn gốc từ xạ khuẩn 55% số thuộc chi Streptomyces Nắm bắt xu hướng , lựa chọn dề tài “ Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 166.28” đề làm khóa luận tốt nghiệp với mục tiêu sau:  Nghiên cứu cải tạo giống đề nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh chủng Streptomyces 166.28  Nghiên cứu điều kiện lên men , chiết tách, tinh chế kháng sinh tốt  Nghiên cứu vài đặc tính kháng sinh thu CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Lich sử nghiên cứu kháng sinh Người đạt móng cho khoa học nghiên cứu chất kháng sinh Alexander Fleming – nhà sinh vật học người Anh, đa phát tác dụng kháng sinh vào tháng 10-1928 [17] Sau thập kỷ, nhờ nỗ lực hợp tác nhà vi sinh học sinh hóa học Anh, My, penicillin đa nghiên cứu, sản xuất với số lượng lớn trở thành “ loại thuốc thần kỳ” Năm 1945, A.Fleming , E.Chain H.W.Florey đa nhận giải thưởng Nobel đa khám phá giá trị to lớn penicillin mở kỷ nguyên y học – kỷ nguyên kháng sinh.[17] Những năm 1940-1959 coi thời kỳ hoàng kim việc nghiên cứu kháng sinh với hàng loạt chất kháng sinh liên tiếp phát : gramixidin, tiroxidin Rene’Jules Dubos phát năm 1939, Streptomycin Waksman phát năm 1941, Erythomycin Gurre phát năm 1952 … Cùng với việc phát chất kháng sinh , công nghệ lên men sản xuất chất kháng sinh đời dần hoàn thiện [8] 1.1.2 Định nghĩa kháng sinh Kháng sinh hợp chất cón nguồn gốc tự nhiên tổng hợp, có tác dụng ức chế hay tiêu diệt chọn lọc vi sinh vật nhiễm sinh ( với tế bào ung thư ) nồng độ thấp mà tác dụng tác dụng yếu lên người , động vật thực vật đường cung cấp chung [9,15] 1.1.3 Phân loại kháng sinh Kháng sinh phân loại theo nhiều cách, theo nguồn gốc, theo cấu trúc hoá học, theo chế tác dụng, theo đích tác dụng [15] Tuy nhiên, phân loại theo cấu trúc hoá học chủ yếu, chia kháng sinh thành nhóm chất sau đây: - Các kháng sinh có cấu trúc β-lactam (penicillin, cephalosporin) - Các kháng sinh chứa nhân thơm (chloramphenicol) - Các kháng sinh có cấu trúc aminoglycosid (streptomycin, gentamicin) - Các kháng sinh có cấu trúc vòng (tetracyclin) - Các kháng sinh polypeptid (polymyxin, bacitracin) - Các kháng sinh macrolid (erythromycin, spiramycin) - Các kháng sinh polyen (nystatin, amphotericin B) - Các kháng sinh nhóm antracyclin chống ung thư (daunorubicin) - Các kháng sinh nhóm actinomycin chống ung thư (dactinomycin D) - Các kháng sinh khác : rifampicin … [9,16] 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh Các kháng sinh tác dụng chủ yếu qua việc ức chế phản ứng tổng hợp khác tế bào vi sinh vật gây bệnh cách gắn vào vị trí xác hay phân tử đích tế bào vi sinh vật, làm biến đổi phản ứng Mỗi nhóm kháng sinh tác dụng lên đích khác [15]Có kiểu chủ yếu: - Tác dụng lên việc tổng hợp thành tế bào - Tác dụng lên màng nguyên sinh chất - Tác dụng lên tổng hợp ADN - Tác dụng lên tổng hợp protein - Tác dụng lên trao đổi hô hấp - Tác dụng lên trao đổi chất trung gian.[16] 3.7 Kết sắc ký lớp mỏng chọn hệ dung mơi  Mục đích : Chọn hệ dung mơi có khả tách thành phần dịch chiết tốt để chạy cột , tinh chể KS Xác định thành phần dịch chiết DMHC  Triển khai sắc ký lớp mỏng hệ dung môi  Hệ 1: Chloroform: Methanol: Amoniac 25% ( 2:2:1 )  Hệ 2: Butanol: Ethanol: Dimethylformamid ( 3:1:1 )  Hệ 3: Butylacetat: Ethanol: Triethylamin ( 1:2:1 )  Hệ 4: Ethylacetat:propanol:dichloromethane ( 2:2:1 ) Bảng 3.7 : Kết sắc ký lớp mỏng chọn hệ dung môi Hệ dung môi Hệ Hệ Hệ Hệ Rf 0,91 0,75 0,84 0,88 Nhận xét: Thấy hệ vết kéo theo bề ngang , hệ vết trịn, hệ vết kéo , hệ vết hình trịn , Hệ có khả tách tốt , sở chọn hệ dung môi chạy cột để tách kháng sinh 3.8 Kết tinh chế kháng sinh sắc ký cột  Mục đích : Tính chế , loại tạp nhằm thu lấy kháng sinh tinh khiết  Dịch lọc dịch lên men gộp lại khoảng 6,5 lít, đem chiết n – butanol pH thu 850 ml dung môi hữu Lượng dung môi mang cất quay máy cất quay chân không Buchi Waterbath, thu 0,4953 (g) bột kháng sinh thô  Cho lượng bột chạy qua cột Silicagel với hệ dung mội khai triển hệ Lấy 15 phân đoạn , phân đoạn 5ml vào ống nghiệm Thử HTKS phân đoạn phương pháp khoanh giấy lọc ( với VSV kiểm định B.cereus) kết thu cụ thể thể bảng 11 Bảng 3.8: kết thử hoạt tính kháng sinh sau sắc kí lần Phân đoạn 10 11 12 13 14 15 Rf 0,83 0,83 0,84 0,84 0,84 0,84 0,84 0,84 0,83 0,83 0,92 0,91 0,92 0,91 - D (mm) 23,37 24,47 24,74 24,75 24,96 25,37 25,49 23,85 22,03 20,89 16,63 15,48 17,76 14,82 11,88 s 0,31 0,39 0,13 0,35 0,27 0,39 0,48 0,44 0,49 0,28 0,55 0,42 0,29 0,40 0,35 Nhân xét : Các phân đoạn tiến hánh chạy SKLM với cùng hệ DM để xác định thánh phần KS với kết bảng nhận thấy sau chạy sắc ký cột hỗn hợp có thánh phần Nhận thấy phân đoạn phân đoạn đến phân đoạn 10 , vết sắc ký phân đoạn ký có dạng vệt dài hình đuốc Chứng tỏ hệ không tách thành phần phân đoạn  Gộp dịch từ phân đoạn đến 10, cô chân không đến kết tinh, thu 0,2165 (g) bột, chạy cột sắc ký lần với hệ dung môi ethylacetat: methanol ( 15:1) Lấy 31 phân đoạn, phân đoạn 2,5 ml vào ống nghiệm Thử HTKS phân đoạn phương pháp khoanh giấy lọc Bảng 3.9 : Kết chạy sắc ký cột lần Phân đoạn Rf1 Rf2 D (mm) s 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 - 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 - 0,00 0,00 21,56 22,33 22,56 23,68 24,27 24,82 24,35 23,19 22,37 21,54 17,43 19,32 20,45 21,51 22,76 23,69 23,12 22,65 24,67 22,85 20,58 16,26 21,49 23,14 22,19 20,62 15,93 0,00 0,00 0,00 0,00 0,18 0,32 0,27 0,53 0,36 0,62 0,25 0,49 0,53 0,67 0,62 0,29 0,83 0,52 0,26 0,31 0,19 0,66 0,47 0,42 0,31 0,27 0,17 0,53 0,64 0,59 0,52 0,00 0,00 Nhận xét : Dựa theo số liệu thử HTKS số liệu phân đoạn SKLM trình bày bảng thấy hệ sắc ký tách thành thành phần rõ Và chia thành nhóm sau :  Nhóm 1: từ phân đoạn đến 12 (có thành phần KS1)  Nhóm 2: từ phân đoạn 13 đến 24 (có thành phần KS1 KS2 hay phần xen phủ)  Nhóm 3: từ phân đoạn 25 đến 39 (có thành phần KS2) Gộp phân đoạn nhóm, đem chân khơng, kết tinh được: _ KS1: m1 = 0,0265 (g) Đây thành phần KS có màu nâu đỏ Hiệu suất tinh chế kháng sinh đạt 12,24% _ KS2: m2 = 0,0113 (g) Hiệu suất tinh chế kháng sinh 5,21% _ Hiệu suất tinh chế kháng sinh = hiệu suất KS1 + hiệu suất KS2 12,24% + 5,21% = 17,45% _ Phần xen phủ: mxf = 0,1175 (g) 3.9 Kết đo nhiệt độ nóng chảy, đo phổ kháng sinh tinh khiết  Nhiệt độ nóng chảy kháng sinh đo : 215,5°C  Phổ tử ngoại cho đỉnh hấp thụ : 209,5nm ; 334nm; 443nm Từ dự đốn cấu trúc kháng có nối đơi liên hợp , dị tố kết hợp đặc điểm  Phổ hồng ngoại cho thấy bước songs hấp thụ cực đại cùng nhóm chức dự đốn tương ứng trình bày bảng 13 Bảng 3.10 : kết IR Đỉnh hấp phụ -1 (cm ) Nhóm chức đặc trưng 3437 Amin >NH 2961 2926 - C - H nhóm - CH3 2857 1741 > C = O vòng cyclopenthanon 1651 >C=C< 1584 liên kết muối amoni –NH3 + 1464 - CH2 - 1379 nhóm - CH3 bất đối xứng 1296 nhóm - NO2- 1095 - C - O - C ether béo 635 ≡ CH > C - X với X Cl, Br  Phổ khối : Cho kết dự đoán khối lượng phân tử kháng sinh 1291,80160 đvC Trong phân tử kháng sinh có chứa nguyên tố bảng 14 ( Phổ khối đo Viện Hàn Lâm khoa học công nghệ Việt Nam ) Bảng 3.11 : Kết dự đoán từ phổ MS Các nguyên Khối lượng Số nguyên tử nhỏ Số nguyên tử cao tố xác nhất C 12.000000 80 H 1.007825 120 N 14.003074 O 15.994915 16 S 31.972071 Na 22.989770 KẾT LUẬN VA KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN: Qúa trình nghiên cứu chúng tơi đa hoàn thành mục tiêu ban đầu khóa luận tốt nghiệp rút số kết luận sau :  Tiến hành ĐB cải tạo giống theo phương pháp khác đa giúp tăng HTKS KS sinh tổng hợp chủng xạ khuẩn Streptomyces 166.28 Mơi trường lên men chìm tốt MT2dt  Kháng sinh thô thu sau chiết từ dịch lọc dịch lên men dung môi n-Butanol pH , tách tốt hệ sắc ký cột với hệ dung môi (Butylacetat : Ethanol : Triethylamin ( 1: 2: 1) ) Để thu kháng sinh tinh khiết cần tiếp tục chạy sắc ký lần với hệ dung môi ( Ethylacetat : Methanol (15 : 1) )  Có thành phần kháng sinh thô thu Hiệu suất tinh chế kháng sinh thu 17,45% : Hiệu suất tinh chế kháng sinh (KS1) 12,24% Hiệu suất tinh chế kháng sinh (KS2) 5,21%  Kháng sinh thứ ( KS1) tinh khiết thu có số đặc điểm sau:  Kháng sinh có nâu đỏ  Có phổ tác dụng rộng, vi khuẩn Gram (+) Gram(-)  Trong dung môi methanol, kháng sinh hấp thụ ánh sáng tử ngoại cho đỉnh hấp thụ λ1 = 209.5nm, λ2 = 334nm λ3 = 443 nm  Biện giải phổ hồng ngoại, sơ dự đốn kháng sinh có nhóm chức: amin, ceton, nitro, ether, có liên kết đơi, liên kết ba có halogen  Nhiệt độ nóng chảy kháng sinh T nc = 215,5 C  Kháng sinh có phân tử lượng 1291,80160 đvC 40 ĐỀ XUẤT : Từ kết đa thu được, đề xuất tiếp tục phát triển đề tài nghiên cứu sâu theo hướng sau:  - Tiếp tục đột biến chủng Streptomyces 166.28 (bằng UV, hóa chất, phương pháp đột biến bậc thang,ky thuật gen …) để tạo chủng có khả siêu sinh tổng hợp kháng sinh  Nghiên cứu cụ thể ảnh hưởng yếu tố thuộc môi trường lên men để tăng hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh ; điều kiện để tăng hiệu suất kháng sinh hỗn hợp  Tiếp tục nghiên cứu điều kiện chiết tách để thu kháng sinh tinh khiết có hiệu suất cao hơn, dung mơi an toàn 13  Tiến hành biện giải phổ cộng hưởng từ hạt nhân ( H-NMR C-NMR) kết hợp với phổ khác để xác định cấu trúc kháng sinh tổng hợp  Giải trình tự gen để nhận biết phân loại chủng Streptomyces 166.28 41 TAI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Trần Tử An (2007), Hóa phân tích, NXB Y học, tập 2 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, trang PL129-PL131 Bộ Y tế (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm , NXB Y học Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men kháng sinh, NXB Khoa học ky thuật Nguyễn Lân Dũng (2001), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, tr 39-67 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1997), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục , trang 38-40 Lê Huy Dương (2011), Nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh Streptomyces 156.11, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ , Đại học Dược Hà Nội Bùi Thị Hà (2008), Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nâm gây bệnh tre thái nguyên , luận văn thạc sĩ học, Đại học sư phạm Thái Nguyên Từ Minh Koóng, Đàm Thanh Xuân (2006), Ky thuật sản xuất dược phẩm II, NXB Y học, tập 10 Nuyễn Phương Nhuận , Nguyễn Văn Hiệu, Lê Gia Hy ( 2009 ), Nghiên cứu tối ưu môi trường lên men chủng Streptomyces Ỏientalis 4912 sinh vancomycin , Tạp chí khoa học cơng nghệ , tập 47, số , trang 25-34 11 Hồ Viết Quý (2002), Chiết tách , phân chia, xác định chất dung môi hữu cơ, NXB Khoa học ky thuật , Hà Nội, taapj1, trang 9-27 12 Khuất Hữu Thanh (2005), sở di truyền phân tử ky thuật gen , NXB Khoa học ky thuật , Hà Nội , trang 185-191 42 13 Nguyễn văn (2009), Cộng nghệ sinh học dược, NXB Giáo dục , Hà Nội, trang 14-57 14 Trần Thị Thanh (2001), Công nghệ vi sinh, NXB Giáo dục, Hà Nội , trang 9-49 15 Cao Văn Thu, Kiều Khắc Đôn, Nguyễn Liên Hương , Nuyễn Lệ Phi (2008), Vi sinh vật học, NXB giáo dục , Hà Nội 16 Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2007), Dược lý học, NXB Y học, tập Tài liệu tham khảo tiếng Anh 17 David A Hopwood (2007), Streptomyces in nature and medicin, Oxford university press, United States of America 18 Donald L.Pavia, Gary M Lampman, George S.Kriz (1996), Introduction to Spectrocopy, Thomson Learning, Washington, USA 19 Kino T, Hatanaka H, Hashimoto M, Nishiyama M, Goto T, Okuhara M, Kohsaka M, Aoki H, Imanaka H (1987), FK-506, “A novel immunosuppressant isolated from a Streptomyces I Fermentation, isolation, and physico-chemical and biological characteristics”, The Journal of antibiotics, vol XL , pages 1249 – 1255 20 Kekuda, T.R.P., K.S Shobha and R Onkarappa, (2010) Fascinating diversity and potent biological activities of Actinomycete metabolites, J Pharm Res., page 250-256 21 Poulsen M, Oh DC, Clardy J, Currie CR (2011), Chemical analyses of waspassociated Streptomyces bacteria reveal a prolific potential for natural products discovery, Department of Bacteriolodi, University of Wisconsin-Madison, Madison, Wisconsin, United States of America [pubmed] 43 Hình P.1: Hình thử HTKS phương pháp khối thạch Hình P.2: Hình thử HTKS phương pháp giếng thạch 44 Hình P.3 : Hình thử HTKS phương pháp khoanh giấy lọc Hính P.4 : Hình phát vết sắc ký phương pháp hình VSV 45 Hính P.5: Kết đo phổ UV kháng sinh tinh khiết thu 46 Hình P.6: Kết đo phổ IR kháng sinh tinh khiết thu 47 Hình P.7: Kết đo phổ khối kháng sinh tinh khiết thu ... “ Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 166. 28? ?? đề làm khóa luận tốt nghiệp với mục tiêu sau:  Nghiên cứu cải tạo giống đề nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh. .. để thực nghiên cứu 31 3.5 Kết chọn mơi trường lên men  Mục đích : Chọn môi trường lên men để Streptomyces 166. 28 sinh tổng hợp kháng sinh tốt  Tiến hành lên men chìm Streptomyces 166. 28 chủng... chủng Streptomyces 166. 28  Nghiên cứu điều kiện lên men , chiết tách, tinh chế kháng sinh tốt  Nghiên cứu vài đặc tính kháng sinh thu CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Lich sử nghiên