Nghiên cứu quy trình sản xuất thử nghiệm huyết thanh có kháng thể kháng sán lá lớn ở gan sử dụng trong ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN LÂM ĐỨC VŨ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM HUYẾT THANH CÓ KHÁNG THỂ KHÁNG SÁN LÁ LỚN Ở GAN SỬ DỤNG TRONG NGOẠI KIỂM CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN LÂM ĐỨC VŨ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM HÚT THANH CĨ KHÁNG THỂ KHÁNG SÁN LÁ LỚN Ở GAN SỬ DỤNG TRONG NGOẠI KIỂM CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Ngành: Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS VŨ QUANG HUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan là cơng trình nghiên cứu của riêng tơi Các số liệu, kết luận văn này là trung thực và chưa được công bố bất kỳ công trình nào khác Tác Giả Nguyễn Lâm Đức Vũ MỤC LỤC TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương về xét nghiệm miễn dịch huyết học 1.2 Đại cương về Sán lá lớn ở gan Fasciola hepatica và Fasciola gigantica 11 1.3 Hệ thống quản lý chất lượng xét nghiệm 13 1.4 Chương trình ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm 15 1.5 Mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm 21 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.2 Thiết kế nghiên cứu 26 2.3 Dân số mục tiêu 26 2.4 Dân số chọn mẫu 26 2.5 Cỡ mẫu 27 2.6 Kỹ thuật chọn mẫu 27 2.7 Tiêu chuẩn chọn mẫu 28 2.8 Phương pháp thu thập mẫu 28 2.9 Sơ đồ nghiên cứu 29 2.10 Thiết bị - Dụng cụ 30 2.11 Hoá chất sử dụng 30 2.12 Kỹ thuật xét nghiệm phân tích KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lớn ở gan 30 2.13 Quy trình sản xuất mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm 51 2.14 Kiểm soát sai lệch 59 KẾT QUẢ 61 3.1 Xác định kháng thể IgG đặc hiệu kháng kháng nguyên sán lớn ở gan có mẫu huyết ngoại kiểm 61 3.2 Sản xuất đánh giá chất lượng của mẫu huyết ngoại kiểm có KT IgG kháng KN sán lá lớn ở gan 65 3.3 Kết xây dựng quy trình sản xuất thử nghiệm huyết có KT kháng sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm 82 BÀN LUẬN 84 4.1 Kháng thể IgG đặc hiệu kháng kháng nguyên sán lớn ở gan huyết ngoại kiểm 84 4.2 Đánh giá chất lượng của mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN của sán lớn ở gan 88 4.3 Quy trình sản xuất thử nghiệm huyết có KT IgG đặc hiệu kháng sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm 90 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ tiếng Việt ATSH An toàn sinh học CS Cộng sự HT Huyết KDa Kilodalton KN Kháng nguyên KST Ký sinh trùng KT Kháng thể MD Miễn dịch SLLOG Sán lớn ở gan Từ tiếng Anh ECLIA Electrochemiluminescence Immunoassay CMIA Chemiluminescent microparticle immunoassay ELISA Enzyme linked immunosorbent assay EQA External Quality Assessment EQAS External Quality Assessment schemes IVD In vitro diagnostic OD Optical density RIA Radioimmunoassay DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Các epitopes kháng nguyên Hình 1.2 Cấu trúc phân tử IgG Hình 1.3 Cấu trúc phân tử IgM Hình 1.4 Cấu trúc phân tử IgA Hình 1.5 Tỷ lệ nhiễm SLLOG theo vùng tại Việt Nam 11 Hình 1.6 Sán lớn ở gan 12 Hình 1.7 Chu trình phát triển của sán lớn 13 Hình 1.8 Hệ thống quản lý chất lượng 14 Hình 1.9 Thiết bị đơng khơ mẫu EYELA FDU-2100 25 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 29 Hình 3.1 Kết kỹ thuật western blot xác định tính đặc hiệu của mẫu huyết 64 Hình 3.2 Sơ đồ sản xuất mẫu 66 Hình 3.3 Mẫu huyết đông khô ĐK 67 Hình 3.4 Mẫu huyết đơng lạnh ĐL 69 Hình 3.5 Kết theo dõi độ ổn định mẫu ĐL1 77 Hình 3.6 Kết theo dõi độ ổn định mẫu ĐK 78 Hình 3.7 Kết theo dõi độ ổn định của mẫu ĐK 80 Hình 3.8 Kết theo dõi độ ổn định của mẫu ĐL 81 Hình 3.9 Kết theo dõi độ ổn định mẫu ĐL và ĐK 82 DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thiết bị - Dụng cụ 30 Bảng 2.2 Hoá chất - Sinh Phẩm 30 Bảng 2.3 Hoá chất xét nghiệm Western blot 32 Bảng 2.4 Hoá chất xét nghiệm ELISA 43 Bảng 3.1 Kết sàng lọc bệnh truyền nhiễm mẫu huyết thu thập 61 Bảng 3.2 Kết sàng lọc KT IgG kháng KN SLLOG mẫu huyết 63 Bảng 3.3 Kết xác định tính đặc hiệu của mẫu huyết nguyên liệu 64 Bảng 3.4 Kết tiền phân tích của mẫu ĐK 67 Bảng 3.5 Kết tiền phân tích của mẫu ĐL 68 Bảng 3.6 Kết tiền phân tích của mẫu ĐL và ĐK 70 Bảng 3.7 Bảng kết tiền phân tích mẫu âm tính ĐL 71 Bảng 3.8 Kết đánh giá tính đồng nhất của mẫu ĐK 73 Bảng 3.9 Kết dánh giá tính đồng nhất cảu mẫu ĐL 74 Bảng 3.10 Kết đánh giá tính đồng nhất của mẫu ĐK và ĐL 75 Bảng 3.11 Kết giá trị OD theo thời gian của mẫu ĐL 78 Bảng 3.12 Kết giá trị OD theo thời gian của mẫu ĐK 79 Bảng 3.13 Kết giá trị OD theo thời gian của mẫu ĐK 80 Bảng 3.14 Kết giá trị OD theo thời gian của mẫu ĐL 81 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm yêu cầu thiếu đảm bảo chất lượng kết xét nghiệm theo tiêu chuẩn ISO 15189:2012[28], đồng thời là tiêu chí đánh giá mức chất lượng phòng xét nghiệm y học theo định số 2429/QĐ-BYT của Bộ Y Tế[1] Ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm giúp cho phòng xét nghiệm phát vấn đề khơng phù hợp dẫn đến sai sót hay làm giảm xác kết xét nghiệm, từ giúp cho nhà quản lý đề giải pháp can thiệp, xử lý khắc phục kịp thời bước cải tiến nâng cao chất lượng xét nghiệm Tham gia ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm, cho thấy thái độ trách nhiệm về vấn đề chất lượng được nhà quản lý đặt lên hàng đầu lấy chất lượng làm sở để liên thông kết xét nghiệm phòng xét nghệm với [31] Ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm cung cấp chứng khách quan về độ tin cậy tính xác kết xét nghiệm cho tất khách hàng sử dụng dịch vụ xét nghiệm[2] Chương trình ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm sán lớn ở gan được thiết kế nhằm nâng cao chất lượng của xét nghiệm sàng lọc, chẩn đoán bệnh sán lớn ở gan, đồng thời cở sở để kiểm soát và đánh giá chất lượng của phòng xét nghiệm tham gia thông qua so sánh kết liên phòng Tham gia ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm sán lớn ở gan trở thành nhu cầu thực tế khơng thể thiếu đối với phịng xét nghiệm[3] Tuy nhiên tại Việt Nam cho tới thời điểm tại chưa có bài báo hay cơng trình nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm dùng chương trình ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm huyết học sán lớn ở gan được công bố Vì việc "nghiên cứu quy trình sản xuất thử nghiệm huyết có kháng thể IgG kháng sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm " là rất cần thiết CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Bộ mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm, sản xuất tại Trung Tâm Kiểm Chuẩn Chất Lượng Xét Nghiệm Y Học Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh, có đạt tính đồng nhất, độ ổn định và đáp ứng được các yêu cầu ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm hay không? MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Mục tiêu cụ thể 1.Dùng kỹ thuật Western blot xác định KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lá lớn ở gan có mẫu huyết thu thập để sản xuất mẫu huyết ngoại kiểm Đánh giá chất lượng của mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lá lớn ở gan dựa vào tiêu chí đánh giá tính đồng nhất và độ ổn định Xây dựng quy trình sản xuất thử nghiệm mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN sán lá lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm ... LÂM ĐỨC VŨ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM HUYẾT THANH CÓ KHÁNG THỂ KHÁNG SÁN LÁ LỚN Ở GAN SỬ DỤNG TRONG NGOẠI KIỂM CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Ngành: Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã... dựng quy trình sản xuất thử nghiệm huyết có KT kháng sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm 82 BÀN LUẬN 84 4.1 Kháng thể IgG đặc hiệu kháng kháng nguyên sán lớn ở gan huyết ngoại kiểm. .. chất lượng của mẫu huyết có KT IgG đặc hiệu kháng KN của sán lớn ở gan 88 4.3 Quy trình sản xuất thử nghiệm huyết có KT IgG đặc hiệu kháng sán lớn ở gan sử dụng ngoại kiểm