Nghiên cứu quy trình tạo mẫu ngoại kiểm phết máu ngoại biên

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - TRỊNH THỊ NGỌC ÁI NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TẠO MẪU NGOẠI KIỂM PHẾT MÁU NGOẠI BIÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - TRỊNH THỊ NGỌC ÁI NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TẠO MẪU NGOẠI KIỂM PHẾT MÁU NGOẠI BIÊN Ngành: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS BS VŨ QUANG HUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu hồn tồn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả TRỊNH THỊ NGỌC ÁI i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Mục lục i Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt vi Danh mục hình vẽ vii Danh mục đồ thị viii Danh mục bảng viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Hình thái dịng tế bào phết máu ngoại biên 1.1 Hồng cầu 1.1.1 Hồng cầu bình thường 1.1.2 Hồng cầu bất thường kích thước 1.1.3 Hồng cầu bất thường hình dạng 1.1.4 Hồng cầu bất thường màu sắc 1.1.5 Các thể bất thường hồng cầu 1.2 Tiểu cầu 1.2.1 Tiểu cầu bình thường 1.2.2 Tiểu cầu bất thường số lượng 1.2.3 Tiểu cầu bất thường kích thước 10 1.3 Bạch cầu 10 1.3.1 Bạch cầu hạt trung tính 11 1.3.2 Bạch cầu hạt toan 12 1.3.3 Bạch cầu hạt kiềm 13 1.3.4 Bạch cầu lympho 13 1.3.5 Bạch cầu mono 15 ii Kỹ thuật nhuộm đánh giá phết máu ngoại biên 2.1 Kỹ thuật nhuộm phết máu ngoại biên 15 2.1.1 Nguyên tắc 15 2.1.2 Quy trình nhuộm 16 2.2 Đánh giá kết phết máu ngoại biên 16 2.2.1 Khảo sát với vật kính 10x 16 2.2.2 Khảo sát với vật kính 40x 18 2.2.3 Khảo sát với vật kính 100x 18 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm 3.1 Định nghĩa 19 3.2 Các phương pháp thực ngoại kiểm 19 3.2.1 Thử nghiệm độ thành thạo (proficiency testing) 19 3.2.2 Kiểm tra lại hay phân tích lại (rechecking/ retesting) 19 3.2.3 Đánh giá chỗ (onsite evaluation) 20 Tiêu chuẩn sản xuất mẫu ngoại kiểm 4.1 Mẫu chuẩn 20 4.2 Đánh giá tính đồng 20 4.3 Đánh giá độ ổn định 21 4.4 Nghiên cứu tính đồng 21 4.4.1 Khái niệm tính đồng 21 4.4.2 Thiết kế thực nghiệm 21 4.5 Nghiên cứu độ ổn định 21 4.5.1 Khái niệm tính ổn định 21 4.5.2 Các dạng ổn định 21 4.5.3 Thiết kế thực nghiệm 22 Tình hình cung cấp ngoại kiểm ngồi nước 5.1 Các chương tình ngoại kiểm giới 22 iii 5.2 Các chương trình ngoại kiểm nước 23 5.3 Chương trình ngoại kiểm phết máu ngoại biên 24 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng 1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu 26 1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 26 1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 Phương pháp nghiên cứu 2.1 Thiết kế nghiên cứu 26 2.2 Cỡ mẫu 27 2.3 Phương pháp chọn mẫu 27 2.4 Xử lý số liệu 27 2.4.1 Đánh giá độ đồng 28 2.4.2 Đánh giá độ ổn định 28 Nội dung nghiên cứu 3.1 Thu thập nguyên liệu 30 3.2 Đánh giá nguyên liệu đầu vào 30 3.2.1 Phát tế bào biến đổi hình thái khu vực khảo sát 30 3.2.2 Thực đọc kết quả, đánh giá chất lượng nguyên liệu 30 3.3 Nghiên cứu quy trình tạo mẫu 31 3.3.1 Dàn phết máu ngoại biên 32 3.3.2 Cố định phết máu ngoại biên 33 3.3.3 Nhuộm phết máu ngoại biên 34 3.3.4 Dán lamelle 37 3.4 Đánh giá độ đồng 37 3.5 Đánh giá độ ổn định 38 iv 3.6 Bảo quản, lưu trữ mẫu 40 3.7 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 40 Đạo đức nghiên cứu 4.1 Vấn đề y đức 41 4.2 Tính ứng dụng nghiên cứu 41 Chương KẾT QUẢ Nghiên cứu quy trình tạo mẫu phết máu ngoại biên 1.1 Thu thập nguyên liệu 42 1.2 Đánh giá nguyên liệu đầu vào 42 1.2.1 Phát tế bào biến đổi hình thái khu vực khảo sát 42 1.2.2 Thực đọc kết quả, đánh giá chất lượng nguyên liệu 44 1.3 Nghiên cứu quy trình tạo mẫu 46 1.3.1 Cố định phết máu ngoại biên 46 1.3.2 Nhuộm phết máu ngoại biên 50 Kết đánh giá độ đồng độ ổn định mẫu 2.1 Đánh giá độ đồng 56 2.1.1 Mẫu EH01 56 2.1.2 Mẫu EH02 59 2.2 Đánh giá độ ổn định 59 2.2.1 Mẫu EH01 60 2.2.2 Mẫu EH02 64 Chương BÀN LUẬN Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm phết máu ngoại biên 65 Đánh giá độ đồng ổn định mẫu phết máu ngoại biên 72 2.1 Đánh giá độ đồng 72 2.2 Đánh giá độ ổn định 74 v KẾT LUẬN 75 KIẾN NGHỊ 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt: BC Bạch cầu HC Hồng cầu PMNB Phết máu ngoại biên QT Quang trường TB Trung bình TC Tiểu cầu TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam Tiếng Anh: BASO Basophil (Bạch cầu hạt kiềm) EDTA Ethylene diamine tetra acetic acid EOS Eosinophil (Bạch cầu hạt toan) EQA External Quality Assessment (Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm) HBV Hepatitis B virus (Vi rút gây viêm gan B) HBsAg Hepatitis B surface Antigen (Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B) HCV Hepatitis C virus (Vi rút gây viêm gan C) HIV Human Immuno-deficiency Virus (Virus gây suy giảm miễn dịch người) ISO International Organization for Standardization (Tổ chức tiêu chuẩn hoá quốc tế) LYM Lymphocyte (Bạch cầu lympho) MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu) vii MONO Monocyte (Bạch cầu mono) MCV Mean Corpuscular Volume (Thể tích trung bình hồng cầu) NEU Neutrophil (Bạch cầu hạt trung tính) NRBC Nucleated Red Blood Cell (Hồng cầu nhân) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM EH02074 EH02005 10 EH02027 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Phụ lục 15: Kết đánh giá độ ổn định mẫu EH02 STT Mẫu Lần Thời điểm T0 EH02-021 EH02-036 EH02-017 Thời điểm tuần EH02-021 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Lần Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM EH02-036 EH02-017 Thời điểm tuần EH02-021 EH02-036 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM EH02-017 Thời điểm tuần EH02-021 EH02-036 EH02-017 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược Tp.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... nguyên liệu 30 3.3 Nghiên cứu quy trình tạo mẫu 31 3.3.1 Dàn phết máu ngoại biên 32 3.3.2 Cố định phết máu ngoại biên 33 3.3.3 Nhuộm phết máu ngoại biên 34 3.3.4... NGHIÊN CỨU Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm phết máu ngoại biên Đánh giá độ đồng ổn định mẫu phết máu ngoại biên CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU HÌNH THÁI CÁC DỊNG TẾ BÀO TRÊN PHẾT... EH02 64 Chương BÀN LUẬN Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm phết máu ngoại biên 65 Đánh giá độ đồng ổn định mẫu phết máu ngoại biên 72 2.1 Đánh giá độ đồng