báo cáo thực hành bệnh ký sinh trùng ở động vật phương pháp xét nghiệm trứng CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG TRONG VẬT CHỦ TRUNG GIAN . giun sán phương pháp phù nổi trường đại học nông ốc bươu vàng lâm đại học huế phương pháp gạn rửa sa lắng
TRƯỜNG ĐH NÔNG LÂM HUẾ Khoa CN - TY BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN: BỆNH KST THÚ Y SINH VIÊN: Trần Đăng Quế LỚP: TY49GF BÀI CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM TRỨNG GIUN SÁN I Phương pháp Fülleborn (phù nổi) Nguyên lý Dựa vào chênh lệch tỷ trọng trứng giun sán số dung dịch có tỷ trọng nặng hơn, để phân ly trứng khỏi phân Mục đích Phát nhiều loại trứng giun tròn trứng sán dây Ưu điểm Tìm tất lồi trứng giun trịn Ngồi tìm thấy trứng sán sinh sản gia cầm (Prostogonimus), Trứng sán ruột gia cầm (Echinostoma) trứng giun đầu gai vịt (Polymorphus) Nhược điểm Phương pháp khó phát trứng giun sán có tỷ trọng cao Tiến hành thí nghiệm - Dùng pince đũa thủy tinh lấy lượng phân gà khoảng 3-5gr vào cốc (Cốc nhựa khoảng 200ml) đổ vào khối lượng nước muối bão hịa gần lượng phân, làm nát phân, tiếp tục cho nước muối bảo hòa vào ngang mức 60ml - Dùng đũa thủy tinh khuấy phân dung dịch sau tồn dung dịch lọc qua rây sắt (Có lưới thép nhựa với kích thước mắt lưới 0,3mm* 0,3mm) vào cốc đong thủy tinh có mỏ - Đổ dung dịch vào lọ tiêu (lọ penicillin) đến cổ bình dừng lại, sau dùng ống hút hút dung dịch cho vào lọ đến vịng lên miệng lọ để lam kính tiếp xúc - Để lam kính lên miệng lọ, sau để yên tĩnh thời gian 3060 phút - Nhấc phiến kính cách dứt khốt, úp lame (lá kính ) lên - Kiểm tra kính hiển vi có vật kính 10 để tìm trứng giun sán Kết xét nghiệm: Mẫu phân âm tính II Phương pháp gạn rửa sa lắng Nguyên lý Phương pháp dựa vào chênh lệch tỷ trọng nước tỷ trọng trứng giun sán để phân ly trứng khỏi phân Trứng giun sán có tỷ trọng nặng lắng xuống Mục đích Tìm trứng lồi giun sán có tỷ trọng lớn tỷ trọng nước Ưu điểm Tìm tất loại trứng sán Nhược điểm Khơng tìm trứng giun trịn Cách tiến hành - Dùng đũa thủy tinh pince lấy 5-10gam phân bò (khoảng hạt táo) cho vào cốc nước - Đổ vào lượng nước gấp 10 lần khối lượng phân - Dùng đũa thủy tinh khuấy nát phân cốc - Toàn dung dịch phân lọc qua rây lọc (rây nhựa với kích thước mắt lưới 0,3mm* 0,3mm) sang cốc tam giác đáy hẹp, đổ nước đầy cốc đến vạch 500ml Để yên tĩnh khoảng 5-10 phút= t1 - Gạn bỏ lớp nước phía giữ lại phần cặn đáy Sau lại tiếp tục dội mạnh nước vào cặn lắng Lặp lại thao tác khoảng 3-5 lần đến cặn trở nên - Cuối giữ lại cặn đổ hộp lồng thủy tinh, nhỏ giọt xanh methylen lắc - Hút giọt dung dịch vào phiến kính, lấy lame để góc 45 độ, hạ từ từ xuống để tránh tạo bọt khí soi kính hiển vi Kết xét nghiệm: Dương tính Trong phân nhiễm sán cỏ BÀI THỰC HÀNH SỐ CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG TRONG VẬT CHỦ TRUNG GIAN Mục tiêu Một số loài vật chủ trung gian giun sán ốc nước ngọt, cá nước ngọt, tôm cua, động vật lưỡng cư sử dụng nguồn thức ăn thuốc chữa bệnh cho người loài động vật khác Vì vậy, xét nghiệm lồi vật chủ trung gian nhằm mục đích nhận biết nguy lây nhiễm rút phương pháp phòng số ký sinh trùng sang người động vật từ loài Chuẩn bị - Mẫu vật: Cua đồng, cá nước ngọt, ốc nước (ốc bươu vàng ốc hút), động vật lưỡng cư ếch - Dụng cụ thiết bị: Phiến kính, panh kẹp, kéo, dao mổ, kính hiển vi, đũa thủy tinh - Hóa chất: Dung dịch tiêu (HCl, Pepsin, nước cất), cồn 70o Quy trình thực 3.1 Kiểm tra ốc nước Mục đích: Phát ấu trùng số lồi sán (như Echinostoma spp., Heterophyidae, ) có vật chủ trung gian ốc nước (là nguồn thức ăn người vật ni) Từ đánh giá nguy lây nhiễm mầm bệnh từ ốc Số lượng ốc cần chuẩn bị cho 25 sinh viên/1 nhóm: 50 ốc hai loại (ốc bươu vàng ốc hút), sinh viên xét nghiệm B1: Định loại ốc hình thái B2: Tiến hành tách vỏ ốc dao panh kẹp B3: Sử dụng panh kẹp để tách phần phủ tạng ốc đặt lên phiến kính, nhỏ lên vài giọt nước B4: Nghiền nát phần phủ tạng ốc đũa thủy tinh, gạt bớt phần cặn bã qua bên phiến kính để dễ quan sát (chú ý: Tạo vi trường rộng phiến kính để dễ dàng quan sát xác) B5: Quan sát vi trường kính hiển vi với vật kính 10X – 40X B6: Ấu trùng sán xác định hình ảnh kèm theo (chuẩn bị hình ảnh cho sinh viên đối chiếu) Nếu mẫu dương tính chụp hình vi trường có chứa ấu trùng B7: Sau kiểm tra, mẫu ốc dương tính với ấu trùng sán bảo quản cồn 70 độ Kết : (1) Trong q trình làm thí nghiệm, số liệu ghi chép vào bảng sau: ST T Loài DT RT DM RM DVXC SVX ốc bươu vàng 28,7 20,65 21 18,05 23,5 ốc bươu vàng 29,45 20,35 19,55 14,15 25,5 ốc bươu vàng 28,65 20 19,55 14,15 24,4 ốc bươu vàng 37 25,5 27,7 21,6 34,2 5 ốc bươu vàng 27,35 19,85 19,4 14,9 24,85 ốc bươu vàng 24,65 18,3 16,65 12,8 20,75 Kết Loài Số ấu Ghi kst trùn g/ ốc âm tính âm tính âm tính âm tính âm tính âm tính ốc bươu vàng 38 27,56 23 19.01 36,7 ốc bươu vàng 21,8 15 13,4 10,2 19,5 (2) Hình ảnh: âm tính âm tính 3.2 Kiểm tra cá nước - Tiến hành: B1: Kiểm tra kích thước cân nặng cá, xác định loài cá chụp ảnh B1: Cạo vẩy, bóc bỏ lớp da vùng ranh giới thân đuôi, vùng sau vây B2: Dùng dao sắc lấy 20-30 gam cá B3: Tiêu cách băm nhỏ sử dụng cối xay nhỏ cá theo mẫu cho vào dung dịch tiêu cơ, để lọ 100ml chứa 50ml dung dịch tiêu B4: Trộn kỹ để tủ ấm 37oC – 12 (qua đêm) B5: Cho thêm 50 ml nước lắc B6: Lọc toàn mẫu lưới có kích thước lỗ x mm rửa nước muối sinh lý 0,85% B7: Lắng cặn khoảng - lần đến cặn B8: Quan sát ấu trùng kính lúp soi cặn đựng đĩa petri thu thập ấu trùng micropipet B9: Bảo quản mẫu mẫu dương tính với ấu trùng giun sán Kết báo cáo: (1) Số liệu ghi chép vào bảng STT Loài Dài thân Cân nặng Kết cá chép 12 20,55 âm tính Lồi kst Số ấu Ghi trùng/ cá 3.3 Kiểm tra động vật lưỡng cư Cách tiến hành; B1: Dùng kéo cắt phần đầu ếch sau tách bỏ lớp da để tìm ấu trùng giun sán thịt ếch B2: Thu thập ấu trùng thịt ếch B3: Bảo quản ấu trùng sau thu cồn 70o Kết cần báo cáo: Kết quả: Âm tính BÀI 3: CÁC PHƯƠNG PHÁP MỔ KHÁM TÌM GIUN SÁN Mục đích Đây phương pháp xác giúp ta tìm loài giun sán giai đoạn phát triển khác nhau, ký sinh vị trí khác thể ký chủ Biết cách thu lượm bảo quản phân loại giun sán trưởng thành Cho biết xác số lượng giun sán ký sinh ký chủ Quan sát biến đổi bệnh lý giun sán gây với ký chủ I Phương pháp mổ khám toàn diện K.I.Skrjabin Mục đích Tìm lồi giun sán ký sinh khí quan Nội dung Qua bước: Bước 1: Kiểm tra bên ngồi xác chết để tìm ký sinh trùng Dùng kính lúp soi vùng da mỏng, điểm nghi ngờ có ký sinh trùng lỗ tự nhiên Bước 2: Mổ khám xoang tìm ký sinh trùng Bước 3: Lột da tìm ký sinh trùng da Bước 4: Mổ khám phân lập khí quan riêng rẽ Bước 5: Dùng phương pháp thích hợp để xử lý khí quan Có cách: Cách 1: Đối với chất chứa khí quan hình ống (Dạ dày, ruột non, ruột già…) Lấy toàn chất chứa xét nghiệm phương pháp gạn rửa sa lắng Lưu ý: Không sử dụng đũa thuỷ tinh khuấy mạnh phương pháp gạn rửa sa lắng phân gia súc để tránh tình trạng làm tổn thương đến ký sinh trùng (Trường hợp đốt sán dây bị đứt…) Chỉ dùng lực dòng nước Cách 2: Đối với niêm mạc, khí quan hình ống, dùng phương pháp Nạo vét ép soi Dùng vật cứng (phiến kính, chi dao mổ) nạo niêm mạc ép lên hai phiến kính soi lên kính hiển vi với độ phóng đại 7x10 7x15 Cách 3: Đối với khí quan thực thể gan, thận, tim, phổi, dùng phương pháp Cắt lát ép soi Dùng kéo cong cắt thành lát mỏng ép phiến kính lớn Kết quả: Dương tính II Phương pháp mổ khám khơng tồn diện Mục đích: Tìm lồi giun sán từ nhiều khí quan thể Phương pháp thường áp dụng cơng tác kiểm sốt giết mổ Phương pháp thu giữ bảo quản mẫu vật Thực bước sau: - Nhẹ nhàng tách giun sán khỏi khí quan (Có thể dùng pince) - Để giun sán chết tự nhiên nước lã - Bảo quản giun sán dung dịch thích hợp - Đối với sán sán dây, giun đầu gai, bảo quản dung dịch cồn 70° - Đối với giun tròn, bảo quản dung dịch Barbagallo MẪU NHÃN CỐ ĐỊNH Phân loại: Cách phân loại loài giun sán khác tuỳ thuộc vào loài Đối với lớp sán sán dây, ép phiến kính nhuộm phương pháp nhuộm Carmin giun tròn giun đầu gai, làm suốt dung dịch Glyxerin + Ac Lactic tỷ lể 1:1 ... nhau, ký sinh vị trí khác thể ký chủ Biết cách thu lượm bảo quản phân loại giun sán trưởng thành Cho biết xác số lượng giun sán ký sinh ký chủ Quan sát biến đổi bệnh lý giun sán gây với ký. .. thuốc chữa bệnh cho người loài động vật khác Vì vậy, xét nghiệm lồi vật chủ trung gian nhằm mục đích nhận biết nguy lây nhiễm rút phương pháp phòng số ký sinh trùng sang người động vật từ loài... phân nhiễm sán cỏ BÀI THỰC HÀNH SỐ CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG TRONG VẬT CHỦ TRUNG GIAN Mục tiêu Một số loài vật chủ trung gian giun sán ốc nước ngọt, cá nước ngọt, tôm cua, động vật lưỡng cư sử dụng