Nghiên cứu phương pháp bảo quản ngô hạt bằng chế phẩm sinh học

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - NGUYỄN HỒNG PHƯỢNG NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP BẢO QUẢN NGÔ HẠT BẰNG CHẾ PHẨM SINH HỌC Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG PGS.TS TRỊNH XUÂN NGỌ Tp.Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2010 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TP.HCM TRƯỜNG CAO ĐẲNG KINH TẾ - CÔNG NGHỆ TP.HCM CÔNG TY TNHH PHÁT TRIỂN CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN CẦU Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng PGS.TS Trịnh Xuân Ngọ ………………………………………………………… ………………………………………………………… ………………………………………………………… ………………………………………………………… Cán chấm nhận xét 1: TS Nguyễn Thúy Hương ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… Cán chấm nhận xét 2: TS Lê Thị Thủy Tiên ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày tháng …năm Thành phần đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: …………………………………… …………………………………… …………………………………… …………………………………… …………………………………… TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC Tp Hồ Chí Minh, ngày………tháng…….năm……… NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Hồng Phượng Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 05/06/1982 Nơi sinh: An Giang Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 03108142 I- TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu phương pháp bảo quản ngô hạt chế phẩm sinh học II- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Thực theo mục tiêu nghiên cứu: Xác định hiệu việc sử dụng nấm men Pichia anomala để ức chế phát triển nấm mốc A.flavus trình bảo quản ngô hạt thông qua số lượng P.anomala A.flavus Tạo chế phẩm từ nấm men P.anomala Nội dung nghiên cứu bao gồm: Nghiên cứu khả đối kháng nấm men P.anomala môi trường thạch đĩa Nghiên cứu khả đối kháng nấm men P.anomala mơi trường kín Sử dụng thiết kế thí nghiệm cấu trúc có tâm phương pháp bề mặt đáp ứng để xác định giá trị tối ưu ba yếu tố cho hiệu nấm mốc thấp sau thời gian bảo quản hệ thống kín Sử dụng phần mềm Design expert để phân tích đưa nhiều giải pháp để giải vấn đề Thu nhận sinh khối nấm men Tạo chế phẩm từ nấm men Pichia anomala III- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: tháng 12/2010 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: tháng 07/2008 V- CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG PGS.TS.TRỊNH XUÂN NGỌ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội đồng chuyên ngành thông qua Tháng 12 năm 2009 TRƯỞNG PHÒNG ĐT-SĐH TRƯỞNG KHOA QL CHUYÊN NGÀNH LỜI CẢM ƠN Gửi Bố Mẹ gia đình tình cảm kính u mãi Mãi khắc ghi công lao dạy bảo truyền đạt kiến thức quý Thầy Cô năm qua Gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Phòng Đào Tạo Sau Đại Học Bộ môn Công nghệ Sinh học Trường ĐH Bách Khoa TP.HCM tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực đề tài Thành kính ghi ơn PGS.TS Nguyễn Đức Lượng PGS.TS Trịnh Xuân Ngọ hết lòng hướng dẫn, động viên tơi suốt q trình thực đề tài Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thúy Hương thầy cô truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm dành cho giúp đỡ quý báu trình học tập nghiên cứu môn Công nghệ sinh học Xin gửi lời cảm ơn đến Th.S Bùi Hồng Quân Th.S Nguyễn Minh Khang có trao đổi, góp ý q báu giúp tơi hồn thành tốt luận văn Vô cảm ơn bạn quan tâm, chia động viên suốt q trình thực Học viên Nguyễn Hồng Phượng  TĨM TẮT Việt Nam quốc gia nằm vùng nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm Đây điều kiện thuận lợi cho phát triển quanh năm nông nghiệp điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển sản phẩm nông nghiệp Sự phát triển nấm mốc làm hư hỏng rau quả, ngũ cốc trước sau thu hoạch; làm giảm giá trị dinh dưỡng, sản sinh bào tử gây dị ứng tạo độc tố mycotoxin thực phẩm thức ăn chăn nuôi ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe người, vật nuôi làm giảm giá trị kinh tế Các loài nấm mốc gây hư hỏng phổ biến loại hạt Aspergillus, Pennicillium, Fusarium,… Trong đó, A.flavus lồi vi sinh vật gây hư hỏng quan trọng tạo mycotoxin đáng ý Bảo quản phương pháp sinh học phương pháp thay có tiềm làm giảm khả phát triển nấm mốc vi sinh vật đối kháng trình bảo quản hạt dùng làm thức ăn chăn nuôi Đồng thời, tránh việc sử dụng hóa chất độc hại nơng sản thực phẩm Trong nghiên cứu xác định khả đối kháng nấm men P.anomala nấm mốc A.flavus môi trường thạch đĩa Đã xác định khả đối kháng nấm men P.anomala nấm mốc A.flavus mơi trường kín Đã xác định khả đối kháng nấm men P.anomala nấm mốc A.flavus hệ thống mini silo Thiết kế thí nghiệm theo phương pháp đáp ứng bề mặt (RSM)phương án cấu trúc có tâm (CCD) thực tìm giá trị tối ưu ba yếu tố để mật độ nấm mốc đạt cực tiểu (cfu/g) sau thời gian tuần bảo quản Giá trị ba yếu tố mật độ nấm men ban đầu 2,08x107 (cfu/g), nấm mốc 102 (cfu/g) độ ẩm 27,98% Và giá trị tối ưu ba yếu tố để mật độ nấm mốc đạt cực đại 1010 (cfu/g) sau thời gian tuần bảo quản với mật độ nấm men ban đầu (108 cfu/g), nấm mốc 102 (cfu/g), độ ẩm 28% Đã sử dụng phần mềm Design expert tiến hành phân tích chuyên sâu đưa nhiều giải pháp lựa chọn để giải vấn đề Đã thu nhận 20g sinh khối nấm men khô 8,73x109( cfu/g), độ ẩm (8 – 10)/250mL dịch ni cấy Tỉ lệ nấm men sống sót 100% sau thời gian sấy Key words: Pichia anomala, A.flavus, RSM-CCD ABSTRACT Vietnam is a tropical country and the climate is tropical monsoonal, hot and humid These climate conditions are favourable for year-round agriculture but also create ideal environments for molds to develop and produce mycotoxins in agricultural products The growth mold postharvest storage of grain, fruits and vegetables Preharest and postharvest fungal pathogens annually cause qualitative, quantitative and economic values losses of fruit, vegetables and cereal grains and production of mycotoxins, allergenic spores Mycotoxins pose a serious health risk to both humans and animals The common spoilage fungi on grains are Aspergillus, Pennicillium, Fusarium,… One of them is A.flavus that the most important spoilage fungi and production mycotoxin Through biopreservation is a alternative method which has potentiality reduce mold growth by add microorganisms enhance the stability of the cereals in the airtight storage In this study, we are determinate antagonistic of Pichia anomala toward A.flavus on agar plates, semi silo and on corn grain in the airtight storage Three factors are using the response surface methodology (RSM)-Central Composite Designs (CCD) These optimal levels were found out initial yeast 2,08x107(cfu/g), mold 102 (cfu/g) and moisture content of grain (27,98%) to minimize reduce mold spore (2 cfu/g) in minisilo after two weeks airtight storage And initial yeast 108(cfu/g), mold 102 (cfu/g) and moisture content of grain (28%) to maximize yeast (1010 cfu/g) in minisilo after two weeks airtight storage Using Design expert®software to analysis, show solutions and selects to resolving Fomulation dry and result 20g dry fomulation with 8,73x109( cfu/g), 8-10% moisture and 100% survival cells from 250ml fermentation culture Key words: Pichia anomala, A.flavus, RSM-CCD DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AFPA Aspergillus flavus parasiticus agar AF Aflatoxin A.flavus Aspergillus flavus A.parasiticus Aspergillus parasiticus AW Active water BCA Biocontrol agent MEA Malt extract agar P.anomala Pichia anomala P.roqueforti Pennicilium roqueforti RBC agar Rose Bengal Chloramphenicol agar     MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT ĐỀ TÀI MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG BIỂU DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ TChương MỞ ĐẦU U 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 2  1.2   NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 4  U Chương NỘI DUNG 5  2.1 HỆ NẤM MỐC THƯỜNG GẶP TRONG QUÁ TRÌNH BẢO QUẢN 6  2.2 VI SINH VẬT GÂY HƯ HỎNG TRÊN HẠT 7  2.3 TÌNH HÌNH NHIỄM MỐC TRÊN NƠNG SẢN Ở VIỆT NAM 8  2.4.CÁC PHƯƠNG PHÁP BẢO QUẢN HẠT 10  2.4.1 Bảo quản phương pháp sấy khô 10  2.4.2 Phương pháp bảo quản kín 10  2.4.3 Phương pháp bảo quản sinh học 11  2.5 NẤM MEN TRONG ĐIỀU KHIỂN SINH HỌC 12  2.6 TỔNG QUAN VỀ PICHIA ANOMALA 12  2.7 PICHIA ANOMALA TÁC NHÂN ĐIỀU KHIỂN SINH HỌC 14  2.8 NHỮNG CƠ CHẾ HOẠT ĐỘNG KHÁNG NẤM CỦA PICHIA ANOMALA 15  2.8.1 Sự cạnh tranh không gian dinh dưỡng 15  2.8.2 Độc tố giết (Killer toxin) 16  2.8.3 Sản sinh enzyme ly giải vách tế bào 17  2.8.4 Sản sinh chất chuyển hóa 18  2.8.5 Sự an toàn sử dụng nấm men P.anomala điều khiển sinh học 19  2.9 NHỮNG SẢN PHẨM THƯƠNG MẠI TỪ NẤM MEN ĐIỀU KHIỂN SINH HỌC 20  2.10 CHẾ PHẨM SINH HỌC TRONG ĐIỀU KHIỂN SINH HỌC (BCA) 20  2.10.1 Sấy lạnh 22        2.10.2 Sấy phun 22  2.10.3 Sấy tầng sôi (Fluidised bed) 22  CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 24  3.1 THỜI GIAN TIẾN HÀNH ĐỀ TÀI 25  3.2 ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN ĐỀ TÀI 25  3.3 PHẠM VI THỰC HIỆN 25  3.4 VẬT LIỆU, THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 25  3.4.1 Vật liệu 25  3.4.2 Thiết bị 25  3.4.3 Hóa chất 26  3.5 PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG THỰC HIỆN 26  3.5.1 Các phương pháp sử dụng nghiên cứu 27  3.5.1.1 Xác định đặc điểm sinh lý, sinh hoá P.anomala A.flavus 27  3.5.1.2 Phương pháp xử lý hạt ngô 30  3.5.1.3 Phương pháp xác định độ ẩm 30  3.5.1.4 Nuôi cấy nấm mốc, nấm men; đếm số lượng bào tử, tế bào 31  3.5.2 Nội dung thực 32  3.5.2.1 Thí nghiệm khả kháng nấm P.anomala môi trường đĩa thạch 32  3.5.2.2 Thiết kế hệ thống thí nghiệm mini silo mẫu ngô làm 32  3.5.2.3 Xác định số lượng tế bào nấm men bào tử nấm mốc sau thời gian bảo quản 33  3.5.2.4 Lên men thu nhận sinh khối tạo chế phẩm 34  3.5.2.5 Bố trí thí nghiệm quy hoạch thực nghiệm 37  3.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU 40 U Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41  4.1 KẾT QUẢ THỬ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÀNG CỦA P.ANOMALA ĐỐI VỚI A.FLAVUS TRÊN MÔI TRƯỜNG THẠCH ĐĨA 42  4.2 KẾT QUẢ THỬ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA P.ANOMALA ĐỐI VỚI A.FLAVUS TRÊN MƠI TRƯỜNG KÍN (CĨ RỊ RỈ KHƠNG KHÍ) 43        4.3 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG NẤM MEN VÀ NẤM MỐC TRÊN MÔI TRƯỜNG BRC AGAR 44  4.4.KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ SUY ĐOÁN MA TRẬN THIẾT KẾ TH1I NGHIỆM 47  4.5 KẾT QUẢ THU NHẬN CHẾ PHẨM 61  Chương KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 64  5.1 KẾT LUẬN 65  5.2 KIẾN NGHỊ 66  TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC     Trang 63     Trang 64 Chương KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ     Trang 65 5.1 KẾT LUẬN Kết nghiên cứu đạt mục tiêu đề với kết nôi dung sau: - Đã xác định nấm men P.anomala có khả đối kháng chống lại nấm mốc A.flavus môi trường thạch đĩa - Đã xác định khả đối kháng nấm men P.anomala nấm mốc A.flavus mơi trường kín - Đã xác định khả đối kháng nấm men P.anomala nấm mốc A.flavus hệ thống mini silo kín (rị rỉ khơng khí) - Giá trị tiên đốn mật độ nấm mốc nấm men sau thời gian bảo quản tuần: • Trong phạm vi nghiên cứu, độ ẩm 27,98%, mật độ nấm men ban đầu log (7,32) ~ 2,08x107(cfu/g), nấm mốc ban đầu log (2) ~ 102(cfu/g) sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm mốc lại thấp log (0,23) ~ 2(cfu/g) hiệu ức chế phát triển nấm mốc 98 % • Trong pham vi nghiên cứu, độ ẩm 28%, mật độ nấm men ban đầu ~ 108(cfu/g), nấm mốc ban đầu ~ 104(cfu/g) sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm men đạt 9,77 ~ 5,88x109(cfu/g) - Đã sử dụng phần mềm Design expert tiến hành phân tích chuyên sâu kết thực nghiệm để đưa nhiều giải pháp lưa chọn để giải vấn đề: • Trường hợp nấm mốc đầu vào cực đại, độ ẩm nấm men phạm vi nghiên cứu: nấm men ban đầu log (8) ~ 108c(cfu/g), nấm mốc log (3,15) ~ 1,4x103 (cfu/g), độ ẩm 28% sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm mốc cịn lại log (1,02) ~ 11(cfu/g) • Trường hợp nấm mốc đầu vào cực đại, độ ẩm cực đại nấm men phạm vi nghiên cứu: nấm men ban đầu log (6,66) ~ 4,57x106(cfu/g), nấm mốc log (4) ~ 104 (cfu/g), độ ẩm 28% sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm mốc lại log (1,45) ~ 28(cfu/g)     Trang 66 • Trường hợp nấm mốc đầu vào cực đại, độ ẩm cực đại nấm men cực tiểu: nấm men ban đầu log (6,2) ~ 1,58x106(cfu/g), nấm mốc log (4) ~ 104 (cfu/g), độ ẩm 28% sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm mốc lại log (1,56) ~ 28(cfu/g) - Trường hợp nấm mốc đầu vào cực đại, độ ẩm cực đại nấm men cực tiểu: nấm men ban đầu log (6,61) ~ 4,07x106(cfu/g), nấm mốc log (4) ~ 104 (cfu/g), độ ẩm 28% sau thời gian bảo quản tuần mật độ nấm mốc cňn lại log (1,457) ~ 29(cfu/g), nấm men đạt log (7,776) ~ 5,97x107 - Đã thu nhận 20g sinh khối nấm men khô 8,73x109( cfu/g), độ ẩm (8 – 10)/250mL dịch nuôi cấy Tỉ lệ nấm men sống sót 100% sau thời gian sấy 5.2 KIẾN NGHỊ P.anomala có khả làm giảm phát triển nấm mốc bào tử hạt Nhưng chúng tơi khơng biết có làm giảm khả sản sinh mycotoxin trực tiếp hay gián tiếp có mặt diện nấm men hay khơng Cũng chế phẩm nấm men có hiệu hạt khơng làm Vì vậy, nghiên cứu đề nghị: - Nghiên cứu hiệu P.anomala sản sinh mycotoxin loài nấm mốc khác - Nghiên cứu hiệu nấm men P.anomala hệ thống hạt không làm - Nghiên cứu môi trường tối ưu thu nhận sinh khối nấm men P.anomala - Khả sống sót tế bào nấm men chế phẩm sau thời gian bảo quản điều kiện bảo quản chế phẩm     Trang 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Anh [1] Ashima Vohra & Satyanarayana.T (2001) Phytase production by the yeast, Pichia anomala © 2001 Kluwer Academic Publishers Printed in the Netherlands Biotechnology Letters 23: 551–554, 2001 [2] Ashima Vohra, Satyanarayana.T (2001) Statistical optimization of the medium components by response surface methodology to enhance phytase production by Pichia anomala Process Biochemistry 37 (2002) 999–1004 [3] AshimaVohra and Satyanarayana.T (2002) Purification and characterization of a thermostable and acid-stable phytase from Pichia anomala © 2002 Kluwer Academic Publishers Printed in the Netherlands World Journal of Microbiology & Biotechnology 18: 687–691, 2002 [4] Antonio Sampaio Baptista1, Jorge Horii1 and Sonia Maria de Stefano Piedade (2005) Cells of Yeasts Adhered in Corn Grains and the Storage Perspective for Use as Probiotic Brazilian Archives of Biotechnology and technology – an international journal Vol.48, n : pp 251-257, March 2005 [5] Arja Laitila (2007) Microbes in the tailoring of barley malt properties Academic dissertation in Microbiology VTT Publications 645 [6] Arja Laitila, Tuija Sarlin, Erja Kotaviita,Timo Huttunen, Silja Home, Annika Wilhelmson (2007) Yeasts isolated from industrial maltings can suppress Fusarium growth and formation of gushing factors Society for     Trang 68 IndustrialMicrobiology 2007 J Ind Microbiol Biotechnol (2007) 34:701 – 713 [7] Jenny Borling (2010) Feed improvement by energy efficient storage using Pichia anomala inoculated ensiled cereal grain Master thesis 2010:1 Faculty of Natural Resources and Agriculture Sciences Swedish University of Agricultural Sciences [8] Christensen Clyde, M.Kaufmann Henry (1969) Grain Storage, Mineapolis, University of Minesota Press [9] Druvefors, Jonsson Boysen U, N., M.E & Schnürer, J (2002) Efficacy of the biocontrol yeast Pichia anomala during long-term storage of moist feed grain under different oxygen and carbon dioxide regimens FEMS Yeast Research 2, 389-394 [10] Elisabeth Fredlund (2004) Central Carbon Metabolism in the Biocontrol Yeast Pichia anomala, Influence of Oxygen Limitation Doctoral thesis Swedish University of Agricultural Sciences Uppsala [11] Elisabeth Fredlund, Ulrika Druvefors, Marianne Boysen.E, Karl-Johan Lingsten, Johan Schnurer (2002) Physiological characteristics of the biocontrol yeast Pichia anomala J121 FEMS Yeast Research (2002) 395402 [12] Elisabeth Fredlund, Ulrika Druvefors, Marianne E Boysen, Karl-Johan Lingsten, Johan Schnurer (2004) Influence of ethyl acetate production and ploidy on the anti-mould activity of Pichia anomala FEMS Microbiology Letters 238 (2004) 133 –137 [13] Elisabeth Fredlund, Christiane Beerlage, Petter Melin, Johan Schnăurer and Volkmar Passoth (2006) Oxygen and carbon source-regulated expression of PDC and ADH genes in the respiratory yeast Pichia anomala Yeast 2006; 23: 137 –1149 [14] Elisabeth Fredlund, Lars M Blank, Johan Schnuărer,Uwe Sauer, and Volkmar Passoth (2004) Oxygen- and Glucose-Dependent Regulation of Central Carbon Metabolism in Pichia anomala Applied and Environmental     Trang 69 Microbiology, Oct 2004, p 5905–5911 Copyright©2004, American Society for Microbiology All Rights Reserved [15] Fredlund.E, Broberg.A, Boysen.M.E, Kenne.L, Schnürer.J (2004) Metabolite profiles of the biocontrol yeast Pichia anomala J121 grown under oxygen limitation Appl Microbiol Biotechnol (2004) 64: 403 –409 [16] Fatih Izgu, Demet Altınbay, Tolga Acun (2006) Killer toxin of Pichia anomala NCYC 432; purification, characterization and its exo-β-1,3glucanase activity Enzyme and Microbial Technology 39 (2006) 669–676 [17] Francesca Comitini, Jessica Ingeniis De, Laura Pepe, Ilaria Mannazzu, Maurizio Ciani (2004) Pichia anomala and Kluyveromyces wickerhamii killer toxins as new tools against Dekkera/Brettanomyces spoilage yeasts [18] Hocking, A.D (2003) Microbiological facts and fictions in grain storage In: Proceedings of the Australian Postharvest Technical Conference Wright EJ, Webb MC, Highley E, eds Canberra: CSIRO: 55-58 [19] Olstorpe, M (2008) Feed grain improvement through biopreservation and bioprocessing Doctoral thesis, Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala [20] Olstorpe, Schnürer., Passoth & M.J, (2008) Microbial changes during storage of moist crimped cereal grain under Swedish farm conditions (Submitted) [21] Lacey, J & Magan, N 1991 In Cereal grain - Mycotoxins, fungi and quality in drying and storage (Ed, Chelkowski, J.) Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, The Netherlands, pp 77-118 [22] Petersson, Jonsson.S, Schnürer & N, J (1999) Pichia anomala as a biocontrol agent during storage of high-moisture feed grain under airtight conditions Postharvest Biology and Technology 15, 175-184 [23] Petersson, S (1998) Yeast/Mold interaction during airtight storage of highmoisture feed grain Doctoral thesis, Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala     Trang 70 [24] Yan-ni YIN, Lei-yan YAN, Jin-hua JIANG, Zhong-hua MA (2008) Biological control of aflatoxin contamination of crops Yin et al J Zhejiang Univ Sci B 2008 9(10):787-79214 [25] Ström, K (2005) Fungal inhibitory lactic acid bacteria- Characterization and application of Lactobacillus plantarum MiLAB 393 Doctoral thesis, Swedish University of Agricultural Scinces, Uppsala [26] Sjögren, J (2005) Bioassay-guided Isolation and Characterisation of Antifungal Metabolites, PhD thesis, Swedish Agricultural University [27] Salminen, S., Gobrbach, S., Lee, Y.-K & Benno, Y 2004 Human Studies on Probiotics: [28] Nesci.A and Etcheverry.M (2002) Aspergillus section Flavi populations from field maize in Argentina Letters in Applied Microbiology 2002, 34, 343 – 348 [29] Hamed Abbas K.(2005) Aflatoxin and Food Safety © 2005 by Taylor & Francis Group, LLC [30] Helena Lind, Hans Jonsson, Johan Schnqrer (2005) Antifungal effect of dairy propionibacteria - contribution of organic acids International Journal of Food Microbiology 98 (2005) 157– 165 [31] Jean-Charles Cailliez, Cristina Cantelli, Nathalie, Stefania Conti, Mara Gerloni, Giulia Morace & Luciano Polonell (1994) Killer toxin secretion through the cell wall of the yeast Pichia anomala Mycopathologia 126: 173-177, 1994 [32] Katrin Ström (2005) Fungal Inhibitory Lactic Acid Bacteria - Characterization and Application of Lactobacillus plantarum MiLAB 393 Doctoral thesis Swedish University of Agricultural Sciences [33] Lassois.L, L de Lapeyre de Bellaire, Jijakli.M.H (2008) Biological control of crown rot of bananas with Pichia anomala strain K and Candida oleophila strain O Biological Control 45 (2008) 410–418 [34] Luciano Polonelli 1, Stefania Conti 1, Lauresa Campani, Mara Gerloni1, Giulia Morace & Carlo Chezzi (1990) Differential toxinogenesis in the genus Pichia detected by an anti-yeast killer toxin monoclonal antibody     Trang 71 [35] Marie Lillbro (2005) Biocontrol of Penicillium roqueforti on grain – a comparison of mode of action of several yeast species Master thesis for the Agriculture Programme, animal science, SLU [36] Matilda Olstorpe (2008) Feed Grain Improvement through Biopreservation and Bioprocessing Doctoral Thesis Swedish University of Agricultural Sciences [37] Malin Larsson (2009) Towards the development of a starter culture for improvement of grain storage through biopreservation Thesis for Master of Science degree in Engineering Biology at Linköping Institute of Technology, Linkửping University [38] Marianne E Boysen, Stina Bjoărneholm 1, Johan Schnuă rer (2000) Effect of the biocontrol yeast Pichia anomala on interactions between Penicillium roqueforti, Penicillium carneum, and Penicillium paneum in moist grain under restricted air supply Postharvest Biology and Technology 19 (2000) 173–179 [39] Nguyen Quang Thieu (2008) Mycotoxins in Vietnamese Pig Feeds Contamination, Excretion in Pig Urine and Reduction of Aflatoxins by Adsorbents Doctoral Thesis Swedish University of Agricultural Sciences [40] Parvinder Kaur, Satyanarayana.T (2005) Production of cell-bound phytase by Pichia anomala in an economical cane molasses medium: Optimization using statistical tools Process Biochemistry 40 (2005) 3095–3102 [41] Petersson, S & Schnürer, J (1995) Biocontrol of mould growth in highmoisture wheat stored under airtight conditions by Pichia anomala, Pichia guilliermondii and Saccharomyces cerevisiae Applied and Environmental Microbiology 61, 1027-1032 [42] Peter J Cotty (1994) Comparison of four the isolation of Aspergillus flavus group fungi 1994 Kluwer Academic Publishers Printed in the Netherlands Mycopathologia 125:157-162 1994 [43] Petter Melin & Sebastian Håkansson & Johan Schnürer (2007) Optimisation and comparison of liquid and dry formulations of the biocontrol yeast Pichia anomala J121 Appl Microbiol Biotechnol (2007) 73:1008–1016     Trang 72 [44] Rodrigues.P, Soares.C, Kozakiewicz.Z, Paterson.R.R.M, Lima.N, and Venâncio.A (2007) Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre for Biological Engineering, Universidade Minho, Campus de Gualtar, 4710-057 Braga, Portugal [45] Rodrigues.P, Soares.C, Kozakiewicz.Z, Paterson., R.R.M Lima.N, and A.Venâncio (2007) Identification and characterization of Aspergillus flavus and aflatoxins Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology ©FORMATEX 2007 [46] Rafaat M Elsanhoty (2008) Screening of some lactobacillus strains for their antifungal activities against aflatoxinproducing aspergilli in vitro and maize Journal of Food, Agriculture & Environment Vol.6 (3&4 ) : - 0 [47] Rachid Lahlali, Sébastien Massart, M Najib Serrhini , M Haïssam Jijakli (2008) A Box-Behnken design for predicting the combined effects of relative humidity and temperature on antagonistic yeast population density at the surface of apples International Journal of Food Microbiology 122 (2008) 100–108 [48] Saleh A Kabli (2008) Effect of some bioagents on growth and toxin production of Aspergillus flavus Link WFL Publisher Science and Technology Journal of Food, Agriculture & Environment Vol.7 (1) : 2 0 [49] Stella Mokiou (2004) Ecophysiological approaches to production and formulation of the biocontrol yeast Pichia anamola PhD Thesis Cranfield University Institute of Bioscience and Technology [50] Thougaard, Varlund.H, Madsen & V, R.M (2001) Grundläggande Mikrobiologi Lund: Studentlitteratur Merry, R J & Davies, D R (1999) Propionibacteria and their role in the biological ontrol of aerobic spoilage in silage Lait 79, 149-164 [51] Tran-Dinh.N Ỉ I Kennedy Ỉ T Bui Ỉ D Carter (2009) Survey of Vietnamese Peanuts, Corn and Soil for the Presence of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus Mycopathologia 168:257–268     Trang 73 [52] Ulrika Ädel Druvefors (2004) Yeast Biocontrol of Grain Spoilage Moulds Mode of Action of Pichia anomala Doctoral thesis Swedish University of Agricultural Sciences [53] Ulrika Aă del Druvefors, Volkmar Passoth, and Johan Schnuărer (2005) Nutrient Effects on Biocontrol of Penicillium roqueforti by Pichia anomala J121during Airtight Storage of Wheat Applied and Enviromental Microbiology, Apr 2005, p 1865–1869 [54] Ulrika Druvefors, Nils Jonsson, Marianne E.Boys en, Johan Schnurer (2002) Efficacy of the biocontrol yeast Pichia anomala during long-term storage of moist feed grain under different oxygen and carbon dioxide regimens FEMS Yeast Research (2002) 389-394 [55] Volkmar Passoth, Anna Eriksson, Mats Sandgren, Jerry Ståhlberg, Kathleen Piens and Johan Schnürer (2009) Airtight storage of moist wheat grain improves bioethanol yields Biotechnology for Biofuels 2009, 2:16 doi:10.1186/1754-6834-2-16 http://www.biotechnologyforbiofuels.com/content/2/1/16 [56] Wafa Masoud, Lene Jespersen (2006) Pectin degrading enzymes in yeasts involved in fermentation of Coffea arabica in East Africa International Journal of Food Microbiology 110 (2006) 291–296 [57] Wouter J Middelhoven, Ilona M de Jong & Marleen de Winter (1989) Yeasts and fungi occurring in ensiled whole-crop maize and other ensiled vegetable crops Antonie van Leeuwenhoek 57: 153-158, 1990._9 1990 Kluwer Academic Publishers Printed in the Netherlands [58] Weinberga.Z.G, Yan.Y, Chen.Y, Finkelman.S, Ashbell.G, Navarro.S (2007) The effect of moisture level on high-moisture maize (Zea mays L.) under hermetic storage conditions - in vitro studies Journal of Stored Products Research 44 (2008) 136–144 [59] Wang Ỉ Z X Chi Ỉ L Yue Ỉ J Li (2007) Purification and Characterization of Killer Toxin from a Marine Yeast Pichia anomala YF07b Against the Pathogenic Yeast in Crab Curr Microbiol (2007) 55:396 - 401     Trang 74 [60] Wouter J Middelhoven, Ilona M de Jong & Marleen de Winter.(1990) Yeasts and fungi occurring in ensiled whole-crop maize and other ensiled vegetable crops Antonie van Leeuwenhoek 57: 153-158, 1990 [61] Weinberg, Muck Z.G., R.E (1996) New trends and opportunities in the development and use of inoculants for silage FEMS Microbiology Reviews 19, 53-68 [62] Woods D R & Bevan E A (1968) Studies on the Nature of the Killer Factor Produced by Saccharomyces cerevisiae J gen Microbiol (1968), 51, 115-126 Tài liệu tiếng Việt Nguyên Thùy Châu (1996) Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc sinh độc tố (Mycotoxin) ngô, gạo Việt Nam biện pháp phịng trừ Luận án phó tiến sĩ khoa học Bộ giáo dục đào tạo, Trường đại học Khoa học tự nhiên tr 11 Đặng Vũ Hồng Miên (2005) Nghiên cứu xác định hệ nấm mốc số thức ăn gia súc miền Nam, tiềm sinh độc tố loài nấm mốc biện pháp phòng chống nấm mốc Báo cáo tổng kết tập Cơ quan chủ trì: Cơng ty giám định khử trùng FCC Cơ sở quản lý Sở KHCN TP.HCM Nguyễn Cảnh (1993) Quy hoạch thực nghiệm Bùi Hồng Quân (2008) Tối ưu sản lượng lipase Pichia anomala thiết kế thí nghiệm theo ma trận Plackett –Burman RSM-CCD, nghiên cứu đặc điểm lipase thu Luận văn Thạc sĩ Bộ Giáo Dục đào tạo Đại Học Bách Khoa TP.Hồ Chí Minh Trần Thị Thu Trà (2007) Công nghệ bảo quản chế biến lương thực NXB đại học quốc gia TP.HCM     Trang 75 PHỤ LỤC Môi trường nuôi cấy YPD - 2% Glucose - 2% Peptone - 1% Yeast extract MEA-soft agar - 1% Agar - 0.05 Malt extract MEA – malt extract agar - 2% Malt - 0.1% Peptone - 2% Glucose - 2% Agar Peptone water - 2% Peptone - 0.01% Tween 80 Buffer 6.5 (potassium phosphate) - 0.33% K2HP04 - 0.42% KH2P04 RBC agar - Rose bengal agar   - 0.5% peptone - 1% glucose - 0.1% KH2PO4 - 0.05% MgSO4.7H2O - 0.005% Rose bengal - 2% agar   LÝ LỊCH TRÍCH NGANG NGUYỄN HỒNG PHƯỢNG 459/7 Lý Thái Tổ, Phường.9, Quận.10, TP.Hồ Chí Minh E-mail: phuongbt08@yahoo.com Phone: 098.980.7761 THƠNG TIN CÁ NHÂN Ngày sinh: 05.06.1982 Giới tính: Nữ Nơi sinh: Quốc tịch: An Giang Việt Nam QUÁ TRÌNH HỌC TẬP 09/2008 – 2010: ĐH Bách Khoa TP.HCM Học Thạc sĩ CN sinh học 09/2001 – 12/2005: ĐH Mở TP.HCM CN.Công nghệ sinh học KINH NGHIỆM LÀM VIỆC 2009 – 2010: ĐH.Bách Khoa TP.HCM Nhiệm vụ: Thực luận văn Thạc sĩ Đề tài:” Nghiên cứu phương pháp bảo quản ngô hạt chế phẩm sinh học” Hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng PGS.TS Trịnh Xuân Ngọ 2006 – 2009: YILIN VIETNAM, CO.,LTD Nhiệm vụ: Nhân viên Nghiên cứu phát triển sản phẩm (thực phẩm) 02/2005 – 08/2005: TRUNG TÂM KIỂM TRA VỆ SINH THÚ Y TW II Nhiệm vụ: Thực luận văn tốt nghiệp đại học Đề tài tốt nghiệp: “Xác định tồn dư kháng sinh sản phẩm thịt phương pháp vi sinh vật” Hướng dẫn khoa học: BS Trần Mai Anh Đào ... ? ?Nghiên cứu phương pháp bảo quản ngơ hạt chế phẩm sinh học? ?? Mục đích: - Nghiên cứu phương pháp bảo quản ngô hạt từ chế phẩm P.anomala nhằm ngăn chặn phát triển nấm mốc A.flavus q trình bảo quản. .. 2002) Phương pháp bảo quản sinh học phương pháp bổ sung giống vi sinh vật vào hạt, làm gia tăng ổn định phương pháp bảo quản kín có hiệu ức chế vi sinh vật gây hư hỏng 2.4.3 Phương pháp bảo quản sinh. .. tìm phương pháp bảo quản thay thế, phương pháp tốn lượng có lợi cho mơi trường (Olstorpe, 2008) 2.4.2 Phương pháp bảo quản kín Bảo quản kín phương pháp thay phương pháp làm khô hạt Phương pháp