Bước đầu nghiên cứu đặc đểim sinh học của nấm phialophora parasitica phân lập từ bột gỗ cây dó bầu đã hình thành trầm hương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Z Y NGUYỄN LÊ XUÂN LONG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM Phialophora parasitica PHÂN LẬP TỪ BỘT GỖ CÂY DÓ BẦU Đà HÌNH THÀNH TRẦM HƯƠNG Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 604280 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 12 năm 2007 CÔNG TRÌNH ĐƯC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học : PGS.TSKH NGÔ KẾ SƯƠNG Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi roõ họ tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc só bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày Tháng Năm 2007 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH ĐỘC LẬP - TỰ DO - HẠNH PHÚC Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 12 năm 2007 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Học tên học viên : NGUYỄN LÊ XUÂN LONG Phái :Nam Ngày tháng năm sinh : 20 - 12 - 1981 Nơi sinh : Khánh Hòa Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học MSHV : 03105626 I - ĐỀ TÀI : BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM Phialophora parasitica PHÂN LẬP TỪ BỘT CÂY DÓ BẦU Đà TẠO TRẦM HƯƠNG II - NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: ¾ Nuôi cấy mẫu môi trường chọn lọc dùng cho vi nấm ¾ Phân lập quan sát hình dạng, màu sắc loại nấm mọc ¾ Xác định nấm nghi ngờ Phialophora parasitica ¾ Định danh nấm Phialophora parasitica ¾ Nghiên cứu đặc điểm sinh học khảo sát điều kiện tối ưu nấm Phialophora parasitica III – NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 12/2006 IV – NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 12/2007 V – HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : PGS.TSKH NGÔ KẾ SƯƠNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM NGÀNH BỘ MÔN QUẢN LÍ CHUYÊN NGÀNH PGS.TSKH Ngô Kế Sương Nội dung đề cương luận văn thạc só Hội đồng Chuyên ngành thông qua PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH CHỦ NHIỆM NGÀNH LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu Trường Đại Học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh, đặc biệt giai đoạn thực đề tài tốt nghiệp, nhận giúp đỡ tận tình từ phía nhà Trường, Bộ môn, quý Thầy, Cô tất bạn lớp Cao học CNSH 05 Xin chân thành biết ơn Bộ môn Công Nghệ Sinh học tạo điều kiện thuận lợi cho học tập thực đề tài nghiên cứu Xin chân thành biết ơn Thầy Ngô Kế Sương, Thầy Nguyễn Đức Lượng, Cô Nguyễn Thuý Hương tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên suốt trình thực luận văn Cảm ơn giúp đỡ, góp ý chân thành tất bạn lớp cao học CHSH 05 năm học tập nghiên cứu Mặc dù trình thực hiện, cố gắng hoàn thành luận văn cách tốt chắn không tránh khỏi thiếu sót, xin chân thành ghi nhận đóng góp quý báu tất quý thầy cô bạn Học Viên : Nguyễn Lê Xuân Long TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ Đề tài “Bước đầu nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Phialophora parasitica phân lập từ bột dó bầu hình thành trầm hương” tiến hành phòng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ sinh học, Trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh, từ tháng 12 năm 2006 đến tháng 12 năm 2007 Các thí nghiệm bố trí cách ngẫu nhiên lặp lại lần Kết cho thấy: ¾ Trong chế phẩm kích thích tạo trầm hương nhân tạo có nhiều loại nấm phát triển nuôi cấy môi trường thạch Phialophora parasitica phát triển môi trường có kháng sinh Cycloheximide (0,5g/l) Chloramphenicol (0,05g/l) ¾ Phialophora parasitica phân lập nuôi cấy môi trường Mycobiotic Agar Trên môi trường này, loại nấm khác phát triển hạn chế, Phialophora parasitica Fusarium phát triển tốt ¾ Sau phân lập, Phialophora parasitica phát triển tốt môi trường Malt extract agar for moulds ¾ Phialophora parasitica có bào tử dạng hình trứng, cuống sinh bào tử có dạng thể bình, thắt cổ chai rõ rệt, giống với đặc điểm cấu tạo đặc trưng giống Phialophora Phialophora parasitica sinh sản cách tạo bào tử, gặp điều kiện môi trường thuận lợi, bào tử bám sâu vào môi trường phát triển lan rộng khắp bề mặt môi trường Phialophora parasitica phát triển tốt điều kiện tự nhiên thông thường, nhiệt độ 25 – 300C ABSTRACT The thesis, “Initially study the Phialophora parasitica fungus's bioscience features which has isolated from agarwood” was implemented at Biotechnology laboratory, The Polytechnic University, from Dec 2006 to Dec 2007 All these experiments were arranged CRD test with times reconstitution The results show that: ¾ There are many fungi in the product, which stimulates Aqualaria creates artificial agarwood, have developed on agar media well But Phialophora parasitica have only developed on agar media with Cycloheximide (0,5g/l) Chloramphenicol (0,05g/l) ¾ Phialophora parasitica has isolated by mycobiotic agar media On this media, Phialophora parasitica and Fusarium deveope well but others fungi don’t ¾ After isolating Phialophora parasitica from the product, it developes on malt extract agar for moulds well ¾ Colonies of Phialophora grow moderately slowly and attain a diameter of 2-3 cm following an incubation of days at 250C The texture is wooly to velvety and may be heaped and granular in some strains From the front, the color is initially white and later becomes dark grey-green, brown or black From the reverse, it is iron grey to black MUÏC LUÏC CHƯƠNG I MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 1.2 Ý NGHĨA THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.3 MỤC TIÊU VÀ MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI .6 1.3.1 MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI 1.3.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.4 PHAÏM VI NGHIÊN CỨU 1.5 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .8 2.1 Tổng quan dó bầu .8 2.1.1 Vò trí phân loại dó 2.1.2 Lịch sử xuất dó bầu 2.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh thái sinh học dó bầu .10 2.1.3.1 Đặc điểm hình thái 10 2.1.3.2 Đặc điểm sinh thái 13 2.1.3.3 Đặc điểm sinh học dó bầu .14 2.1.4 Sự phân bố dó .16 2.1.5 Kỹ thuật gieo, trồng chăm sóc dó bầu 18 2.1.5.1 Kỹ thuật gieo ươm chăm sóc .18 2.1.5.2 Kyõ thuật trồng chăm sóc 19 2.1.6 Quá trình hình thành kỹ thuật kích thích tạo trầm hương nhân tạo dó bầu 21 2.1.6.1 Sự hình thành trầm hương tự nhiên 21 2.1.6.2 Cơ sở lý luận việc kích thích dó tạo trầm hương nhân tạo .23 2.1.6.3 Kỹ thuật kích thích dó bầu tạo trầm hương nhân tạo 24 2.1.6.4 Một số thành tựu việc nghiên cứu kích thích tạo trầm hương nhân tạo dó baàu 25 2.2 Tổng quan kỹ thuật nuôi cấy, phân lập nghiên cứu vi sinh vật 28 2.2.1 2.2.1.1 Chuẩn bị tăng sinh pha loãng mẫu 29 2.2.1.2 Cấy mẫu ủ mẫu 29 2.2.1.3 Phát chọn lọc khuẩn lạc đặc trưng 31 2.2.1.4 Kiểm tra tính khiết giống vi sinh vật 32 2.2.1.5 Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật .34 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu hình thái vi sinh vaät 36 2.2.2.1 Tiêu giọt ép 37 2.2.2.2 Tiêu tạm thời có nhuộm màu 38 2.2.3 2.3 Kỹ thuật nuôi cấy, phân laäp vi sinh vaät .28 Phương pháp định danh vi sinh vật 39 Toång quan nấm Phialophora parasitica .40 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 3.1 Nguyên vật liệu 43 3.1.1 Mẫu bột dó hình thành trầm hương 43 3.1.2 Mẫu chế phẩm kích thích dó tạo trầm hương nhân tạo có chứa nấm Phialophora parasitica .43 3.1.3 3.1.3.1 Môi trường thông thường 44 3.1.3.2 Môi trường đặc trưng 48 3.1.4 3.2 Các loại môi trường dùng nghiên cứu 43 Dung dịch dùng để quan sát nấm kính hiển vi 51 Phương pháp nghiên cứu 51 3.2.1 Noäi dung nghiên cứu 51 3.2.2 Các điều kiện tiến hành nghiên cứu 52 3.2.3 Bố trí thí nghiệm 52 3.2.3.1 Thí nghiệm 1: Nuôi cấy mẫu môi trường nuôi cấy nấm mốc 52 3.2.3.2 Thí nghiệm 2: Xác định loại nấm nghi ngờ Phialophora parasitica 54 3.2.3.3 Thí nghiệm 3: Định danh nấm Phialophora parasitica .54 3.2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát môi trường tối ưu nấm Phialohora parasitica .56 3.2.3.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Phialophora parasitica .57 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 58 4.1 Thí nghiệm 1: Ủ mẫu môi trường nuôi cấy nấm mốc 58 4.2 Thí nghiệm 2: Xác định loại nấm nghi ngờ Phialophora parasitica 61 4.3 Thí nghiệm 3: Định danh nấm Phialophora parasitica 68 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát môi trường tối ưu cho nấm Phialophora parasitica phân lập 72 4.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Phialophora parasitica .75 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 76 5.1 KẾT LUẬN 76 5.2 ĐỀ NGHỊ 76 TAØI LIỆU THAM KHẢO 77 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Lá dó Hình 2.2: Cây dó bầu 10 Hình 2.3: Lá dó baàu 10 Hình 2.4: Hoa dó bầu 11 Hình 2.5: Quả dó bầu 11 Hình 2.6: Hạt dó 12 Hình 2.7: Trầm hương thân dó bầu 22 Hình 2.8: Trầm hương khai thaùc 23 Hình 2.9: Tinh dầu trầm hương 23 Hình 2.10: Bệnh nấm người Phialophora parasitica gây 40 Hình 2.11: Cuống sinh bào tử Phialophora 42 Hình 3.1: Cấu tạo cuống sinh bào tử bào tử giống Phialophora 57 Hình 4.1.1: Mẫu chế phẩm nuôi cấy nghiệm thức 60 Hình 4.1.2: Mẫu chế phẩm nuôi cấy nghiệm thức 60 Hình 4.1.3: Mẫu bột trầm hương nuôi cấy nghiệm thức 61 Hình 4.1.4: Mẫu bột trầm hương nuôi cấy nghiệm thức 12 61 Hình 4.2.1: Nấm nghi ngờ Phialophora có màu ôliu thẫm sau hai tuần nuôi cấy 63 Hình 4.2.2: Nấm nghi ngờ Phialophora có màu xám ôliu sau tháng nuôi cấy 64 Hình 4.2.3: Nấm nghi ngờ Phialophora parasitica sau ngày nuôi cấy 66 Hình 4.2.4: Nấm nghi ngờ Phialophora parasitica sau 10 ngày nuôi cấy 66 Hình 4.2.5: Nấm nghi ngờ Phialophora parasitica sau 14 ngày nuôi cấy 67 - 66 - Hình 4.2.6: Nấm nghi ngờ Phialophora parasitica sau 20 ngày ni cấy Hình 4.2.7: Nấm nghi ngờ Phialophora parasitica sau 30 ngày ni cấy HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 67 - Điều thuận lợi phạm vi nghiên cứu thu hẹp bước đầu tìm loại nấm nghi ngờ để tiến hành thí nghiệm Trong nghiệm thức nuôi cấy thấy xuất Asprillus Trong nghiệm thức khác thấy có phát triển loại nấm khác Penicillium citrinum Ban đầu Asperillus phát triển mạnh, nhiều Asperillus niger Asperillus oryzea, Asperillus phoenicis Đặc biệt, nghiệm thức có xuất vi khuẩn Bacillus, nhiên hạn chế Ở nghiệm thức này, nấm mốc không phát triển được, dù để thời gian dài xuất nấm mốc Ở nghiệm thức 7, có lẽ có mặt hai chất kháng sinh chloramphenicol cycloheximide ức chế số nấm khác đồng thời tạo điều kiện cho Phialophora parasitica phát triển Điều phù hợp với thông tin có môi trường thích hợp cho Phialophora Fusarium phát triển Trên môi trường này, số loại nấm phát triển Trong mẫu nuôi cấy, có mẫu từ chế phẩm kích thích dó tạo trầm hương có phát triển Philaophora parasitica, mẫu nuôi cấy từ bột trầm hương xuất Phialophora parasitica Điều giải thích hai cách Thứ nhất, vị trí lấy mẫu dó, trầm hương chưa hình thành Thứ hai, dó không cịnï tồn nấm Phialophora parasitica Khi tiến hành lặp lại nghiệm thức từ đến (các môi trường kháng sinh) có bổ sung thêm Streptomycin Penicillin, kết thu phát triển Phialophora Điều giải thích rằng, Streptomycin Penicillin không ức chế nấm sinh trưởng HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 68 - cycloheximide chloramphenicol Như vậy, cycloheximide chloramphenicol cần thiết cho việc phân lâp Phialophora Từ nấm phân lập tiến hành quan sát màu sắc sợi nấm phát triển, hình dạng bào tử, cuống sinh bào tử,… kính hiển vi Và cuối khoanh vùng loại nấm nghi ngờ Phialophora parasitica Trong tất loại nấm phân lập được, quan sát kính hiển vi bào tử chúng có dạng hình tròn, hình cầu hình lưỡi liềm thuộc giống Asperillus Fusarium,… Tuy nhiên, có loại nấm có bào tử dạng hình trứng, bào tử to bào tử loại nấm khác dính với tạo thành cục nhờn, cuống sinh bào tử có dạng thể bình, thắt cổ chai Có thể Phialophora parasitica Sau ngày nuôi cấy, Phialophora parasitica có màu ôliu nhạt, chuyển sang màu ôliu đậm, để lâu chuyển thành màu xám ôliu, phát triển tốt sau 10 ngày nuôi cấy 4.3 Thí nghiệm 3: Định danh nấm Phialophora parasitica Sau phân lập nấm nghi ngờ Phialophora parasitica, tiến hành làm Sau đó, dùng dung dịch quan sát nấm để quan sát kính hiển vi, đồng thời làm tiêu môi trường thạch để quan sát Kết quan sát thể qua hình sau: HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 69 - Hình 4.3.1: Cuống sinh bào tử nấm nghi ngờ Phialophora parasitica Hình 4.3.2: Bào tử nấm nghi ngờ Phialophora parasitica HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 70 - Hình 4.3.3a Hình 4.3.3b Hình 4.3.3: Cuống sinh bào tử bào tử nấm nghi ngờ Phialophora parasitica HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 71 - Hình 4.3.3: Bào tử cuống sinh bào tử giống Phialophora HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 72 - Từ kết đạt được, bước đầu nhận dạng nấm phân lập Phialophora parasitica thuộc giống Phialophora Qua kết quan sát trên, cho rằng, nấm nghi ngờ ban đầu Phialophora parasitica Chúng có bào tử dạng hình trứng rõ rệt, bào tử tạo thành cục nhớn, không tách rời riêng lẻ bào tử, cuống sinh bào tử có dạng thắt cổ chai [1], [11], [12] 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát môi trường tối ưu cho nấm Phialophora parasitica phân lập Ở thí nghiệm 1, môi trường phân lập Phialophora parasitica môi trường Mycobiotic agar Tuy nhiên môi trường này, Phialophora parasitica phát triển chậm Sau cấy chuyền Phialophora parasitica phát triển tốt môi trường: Sabouraund’s dextrose agar, Yeast extract agar Malt extract agar for moulds Trong đó, môi trường Malt extract agar for moulds thích hợp cho Phialophora parasitica phát triển Trên môi trường này, Phialophora parasitica phát triển nhanh khả bị nhiễm loại vi sinh vật khác hơn, đa số thí nghiệm nuôi cấy lặp lại môi trường thu giống Cách tiến hành thí nghiệm: Trong môi trường Malt extract agar for moulds, thành phần môi trường ảnh hưởng đến phát triển Phialophora parasitica Malt extract glucose Bảng 1: Bảng biến thiên Malt extract (g/l) Glucose (g/l) Mức + 25g 25g Mức trung bình 20g 20g Mức - 15g 15g HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 73 - Bảng 2: Quy hoạch thực nghiệm Thí nghiệm Malt extract (g/l) Glucose (g/l) - - - + + - + + 0 Cách pha môi trường: Trước tiên, pha dung dịch stock, sau tiến hành pha môi trường theo bảng quy hoạch thực nghiệm Stock glucose 10%: pha 100g glucose 900ml nước cất Ứng với mức hút 250ml, mức ta hút 150ml, mức trung bình - hút 200ml Stock malt extract 10%: pha 100g malt extract 900ml nước cất Ứng với mức hút 250ml, mức - hút 150ml, mức trung bình - hút 200ml Từ dung dịch stock, tiến hành pha môi trường theo bảng quy hoạch thực nghiệm Kết thí nghiệm: Vì khảo sát yếu tố nên kết thu xử lý phương pháp quy hoạch thực nghiệm Từ kết nuôi cấy thu được, nhận thấy môi trường môi trường phát triển Phialophora parasitica tốt nhất, chậm môi trường Như vậy, kết luận phát triển Phialophora parasitica, yếu tố glucose có ảnh hưởng lớn yếu tố malt extract HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 74 - Hình 4.4.1: Phialophora parasitica nuôi cấy môi trường Hình 4.4.2: Phialophora parasitica nuôi cấy môi trường HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 75 - Hình 4.4.2: Phialophora parasitica nuôi cấy môi trường Như để Phialophora parasitica phát triển tốt nên tăng hàm lượng glucose môi trường nuôi cấy Tuy nhiên, việc tăng hàm lượng glucose nên thực giới hạn cho phép, tăng nhiều ảnh hưởng không tốt đến phát triển Phialophora parasitica đồng thời làm tăng chi phí nghiên cứu Lượng glucose tốt có lẽ 20g/l thành phần tối ưu môi trường với Glucose 20g 4.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Phialophora parasitica Phialophora parasitica phát triển tốt nhiệt độ 25 – 300C, pH mức trung tính Chúng sinh sản cách tạo bào tử Khi bào tử gặp điều kiện thuận lợi, bào tử phát triển thành hệ sợi nấm ăn sâu vào môi trường nuôi cấy Thời gian từ bào tử gặp điều kiện môi trường thuận lợi đến lúc phát triển thành thục ngày Lúc đầu, hệ sợi nấm phát triển lan rộng môi trường nuôi cấy Đến thành thục, chúng bắt đầu sinh bào tử Độ tuổi HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 76 - Phialophora parasitica biểu màu sắc chúng trình phát triển Ban đầu chúng có màu xanh ôliu, chuyển sang màu xám nâu Khi chúng chuyển sang màu ôliu đen, chúng bắt đầu sinh bào tử Bào tử chúng có dạng hình trứng, màu nâu, thành tế bào dày, kích thước 2.5-3.5 x 2-3 μm, hình thành chủ yếu điều kiện thiếu ánh sáng HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 77 - CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Môi trường để phân lập Phialophora parasitica tốt môi trường Mycobiotic agar Cycloheximide (0,5g/l) Chloramphenicol (0,05g/l) cần thiết cho tách loại, phân lập Phialophora parasitica từ vi sinh vật khác Môi trường dùng để nuôi cấy Phialophora parasitica tốt môi trường Malt extract agar for moulds Các điều kiện nuôi cấy thực điều kiện tự nhiên bình thường Phialophora parasitica có bào tử dạng hình trứng, bào tử tạo thành cục nhờn, sinh bào tử bình, thắt cổ chai rõ rệt 5.2 ĐỀ NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu đặc điểm sinh học Phialophora parasitica cách chi tiết đầy đủ Xây dựng khóa phân loại cho Phialophora parasitica để việc định danh thuận lợi dễ dàng Tiến hành nghiên cứu khả kích thích tạo trầm hương dó bầu Phialophora parasitica Đáng giá khả kích thích tạo trầm chất lượng trầm tạo thành so với trầm hương tự nhiên HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 78 - TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu nước Kiều Hữu Ảnh – 1999 - Giáo trình vi sinh vật học coâng nghiệp - NXB khoa học & kỹ thuật Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty - Vi sinh vật học - Tái lần thứ tư - Nhà xuất giáo dục Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Liên Hoa, Lê Hoàng Yến, Nguyễn Văn Bắc - 03/06/2006 - Giáo trình nấm sợi N.X.ÊGÔRÔV hiệu đính, người dịch Nguyễn Lân Dũng – 1983 - Thực Tập Vi Sinh Vật Học - NXB Đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền, Nguyễn AÙnh Tuyết – 2003 - Thí nghiệm công nghệ sinh học, Tập - NXB Đại học Quốc gia TP HCM Nguyễn Đức Lượng – 2003 - Coâng nghệ vi sinh vật - NXB Đại học Quốc gia TP HCM Nguyeãn Đức Lượng – 2000 - Công Nghệ Vi Sinh Vật - NXB Đại học Quốc gia TP HCM Lê Xuân Phương – 2004 - Giáo trình thực tập vi sinh vật - Trường ĐHBK Đà Nẵng Trần Thanh Thủy – 1999 - Hướng Dẫn Thực Hành Vi Sinh Vật Học NXB Giáo Dục TP HCM 10 TS Roger Shivas, TS Dean Beasley, TS John Thomas, TS Andrew Geering TS Ian Riley Australia - Giáo trình “Phương pháp quản lý mẫu bệnh thực vật” HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 79 - II Tài liệu nước 11 Moreau C – 1963 – Revue Mycology 28, trang 260 – 276 12 Nico L.J – 1967 – Revue Mycology 32, trang 28 – 40 13 H.L Barnett Ph.D – 1955 – Illustrated of general of imperfect fungi – second edition – West Vigirnia University 14 Cameron Hackney, Merle D Pierson and George J Banwart – 1997 – Basic food microbiology – third edition 15 James M Jay – Modern food microbiology – fifth edition – Chapman & Hall III Tài liệu từ Internet 16 http://tramhuongvietnam.com/ 17 http://www.vietlinh.com.vn/ 18 http://www.dalat.gov.vn/cdrom/yte/tramkynam.htm 19 http://www.khoahoc.net/baivo/chuhuutin/caytramhuong.htm 20 http://www.lamdong.gov.vn/forum/topic.asp?TOPIC_ID=64 21 http://www.mekonginfo.org/mrc_en/article.nsf/0/7578cd159b6900cb47 256ce6000c09fa?OpenDocument 22 http://oshin-hoa.blogspot.com/2006/09/k-nam-v-trm-hng.html 23 http://www.baokhanhhoa.com.vn 24 http://www.caythuocquy.info.vn/modules.php?name=News&opcase=de tailsnews&mid=1781&mcid=245&menuid 25 http://longdinh.com/home.asp?act=chitiet&ID=2616&catID=4 26 http://vietbao.vn/Khoa-hoc/Ky-nam-co-khac-tramhuong/40136399/188/ 27 http://vietbao.vn/vi/An-ninh-Phap-luat/Dao-duoc-hon-1-ta-ky-namduoc-hon-chuc-ty-dong-roi-biet-tich/70007769/218/ HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só - 80 - 28 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vinam01a.htm 29 http://www.dsmz.de/microorganisms/media_list.php 30 http://aem.asm.org/cgi/reprint/61/8/2911.pdf 31 http://www.doctorfungus.org/thefungi/Phialophora.htm 32 http://de.wikipedia.org/wiki/Phialophora_parasitica 33 http://www.cn.cabri.org/HyperCat/fun/gsfun3037.html 34 http://www.usbio.net/Category.aspx?catName=Media-Microbiological 35 http://www.mycology.adelaide.edu.au/Laboratory_Methods/Microscop y_Techniques_and_Stains/ 36 http://www.biology-online.org/ 37 http://medical-dictionary.thefreedictionary.com/Phialophora 38 http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=267328 39 http://www.nature.com/bmt/journal/v20/n9/abs/1700969a 40 http://www.fao.org/aims/ag_intro.htm?termid=24675 - 21k 41 http://www.dsmz.de/microorganisms/html/fungus.genus/phialophora.ht ml 42 http://www.bio.net/bionet/mm/mycology/1996-April/003821.html 43 http://www.im.microbios.org/11setember00/10%20Schroder.PDF 44 http://www.biology.ed.ac.uk/research/groups/jdeacon/microbes/takeall htm 45 http://www.mold.ph/phialophora.htm 46 http://www.f1000biology.com 47 http://www.biomedcentral.com 48 http://www.vnulib.edu.vn/ 49 http://www.sinhhocvietnam.com 50 http://www.atcc.org/ HV: Nguyễn Lê Xuân Long Luận văn Thạc só ... dó bầu trình hình thành trầm hương không thử nghiệm khả kích thích tạo trầm loài vi sinh vật phân lập dó bầu Đề tài tập trung phân lập nấm Phialophora parasitica từ bột gỗ dó bầu hình thành trầm. .. tạo trầm hương ™ Phân lập nấm Phialophora parasitica từ bột dó bầu hình thành trầm hương ™ Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Phialophora parasitica ™ Ứng dụng vào thực tiễn để cấy vào dó bầu kích... TIÊU NGHIÊN CỨU • Phân lập nấm Phialophora parasitica từ dó bầu hình thành trầm hương • Nghiên cứu đặc điểm sinh học 1.4 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Đề tài không sâu tìm hiểu chế tác động chủng vi sinh