Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm và khả năng mẫn cảm kháng sinh của vi khuẩn escherichia coli và salmonella trên thịt lợn bán tại hà nội và bắc ninh

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THÀNH HIẾU NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ KHẢ NĂNG MẪN CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA TRÊN THỊT LỢN BÁN TẠI HÀ NỘI VÀ BẮC NINH Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học : TS Đặng Thị Thanh Sơn PGS.TS Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Thành Hiếu i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới tập thể giáo viên hướng dẫn khoa học TS Đặng Thị Thanh Sơn, Bộ môn Vệ sinh Thú y, Viện Thú y PGS.TS Phạm Hồng Ngân, Bộ môn Thú y cộng đồng- Học viện Nơng nghiệp Việt Nam ln tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y cộng đồng, Khoa Thú y - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện thú y, tập thể cán nhân viên công tác Bộ môn Vệ sinh thú y- Viện thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Thành Hiếu ii MỤC LỤC Lời cam đoan I Lời cảm ơn II Mục lục III Danh mục chữ viết tẳt VI Danh mục bảng VII Danh mục hình VIII Trích yếu luận văn IX Thesis abstract XI Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm 2.1.1 Ngộ độc thực phẩm bệnh truyền qua thực phẩm 2.1.2 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm 2.1.3 Tình hình ngộ độc thực phẩm vi sinh vật gây giới Việt Nam 2.1.4 Một số nghiên cứu ô nhiễm thực phẩm vi khuẩn E coli Salmonella gây giới Việt Nam .8 2.2 Nguyên nhân nhiễm khuẩn vào thịt 10 2.2.1 Đường xâm nhập vi khuẩn vào thịt 10 2.2.2 Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt .10 2.3 Hiểu biết chung vi khuẩn Escherichia coli .11 2.3.1 Đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hóa sức đề kháng 11 2.3.2 Cấu trúc kháng nguyên 12 2.3.3 Đặc tính gây bệnh 14 2.3.4 Ý nghĩa việc xác định tổng số E coli thịt 15 2.4 Hiểu biết chung vi khuẩn Samonella 15 2.4.1 Đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hóa sức đề kháng 15 2.4.2 Cấu trúc kháng nguyên 17 iii 2.4.3 Yếu tố bám dính 18 2.4.4 Khả sản sinh độc tố .19 2.4.5 Ý nghĩa việc xác định có mặt Salmonella thịt 20 2.5 Khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella 20 2.5.1 Tính kháng thuốc vi khuẩn 20 2.5.2 Cơ chế gây tượng kháng thuốc vi khuẩn 21 2.5.3 Sự kháng thuốc vi khuẩn E coli 22 2.5.4 Sự kháng thuốc vi khuẩn Salmonella .24 2.5.5 Phương pháp xác định độ mẫn cảm vi khuẩn gây bệnh số thuốc kháng sinh 25 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 27 3.1 Địa điểm nghiên cứu 27 3.2 Thời gian nghiên cứu .27 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 27 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 27 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 27 3.4 Nội dung nghiên cứu 28 3.5 Phương pháp nghiên cứu .29 3.5.1 Phương pháp thu thập mẫu 29 3.5.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli theo TCVN 7924-2 : 2008 (ISO 16649-2 : 2001) .29 3.5.3 Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella theo TCVN 4829 : 2005 (ISO 6579 : 2002) 30 3.5.4 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng E coli Salmonella phân lập .31 3.5.5 Phương pháp xử lý số liệu 33 Phần Kết thảo luận 34 4.1 Kế t quả xác đinh ̣ tỷ lê ̣ nhiễm E coli và Salmonella thiṭ lơ ̣n ta ̣i hà nội bắc ninh 34 4.1.1 Thực trạng ô nhiễm vi khuẩn E coli thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 34 4.1.2 Kết phát vi khuẩn Salmonella ô nhiễm thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 37 iv 4.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E.coli, Salmonella phân lập 41 4.2.1 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập .41 4.2.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập 46 Phần Kết luận kiến nghị 51 5.1 Kết luận 51 5.1.1 Kết kiểm tra trạng ô nhiễm E coli Salmonella 51 5.1.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella phân lập 51 5.2 Kiến nghị .51 Tài liệu tham khảo .52 Phụ lục 58 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẲT Chữ viết tắt BGA BHI DANMAP E coli EHEC Nghĩa tiếng Việt Brilliant Green Agar Brain Heart Infusion The Danish Integrated Antimicrobial Resistance Monitoring and Research Programme Escherichia coli Enterohaemorrhagic E coli EIEC EMB EPEC ETEC FAO FDA Gr (-) Gr (+) IMViC LT MKTTn MPN MR PBW RV SS ST TCVS TCVN TSI VP WHO XLD XLT4 Enteroinvasive E coli Eosin - Methylene Blue Enteropathogenic E coli Enterotoxigenic E coli Food and Agriculture Organization Food & Drug Administration Gram âm Gram dương Indole, Methyl Red, Voges Proskauer Citrat Heat labile enterotoxin Muller Kauffman Tetrathionate Most Probable Number Methyl red Pepton Buffer Water Rappaport - Vassiliadis Soya Pepton Salmonella- Shigella Heat stable enterotoxin Tiêu chuẩn vệ sinh Tiêu chuẩn Việt Nam Triple sugar iron Voges proskauer World Health Organization Xylolysin deoxychocolat Xyloze - Lyzine - Tergitol vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng đánh giá đường kính vịng vơ khuẩn số kháng sinh dùng nghiên cứu .32 Bảng 4.1 Kết phát đếm số vi khuẩn E coli mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ Hà Nội Bắc Ninh 34 Bảng 4.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh hố số chủng E coli phân lập .36 Bảng 4.3 Kết phát vi khuẩn Salmonella mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ Hà Nội Bắc Ninh 38 Bảng 4.4 Kết kiểm tra số đặc tính sinh học chủng Salmonella phân lập 41 Bảng 4.5 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập từ thịt lợn lấy Hà Nội Bắc Ninh 42 Bảng 4.6 Kết kiểm tra khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập từ thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 48 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Tỷ lệ % số mẫu nhiễm với vi khuẩn E coli số mẫu không đạt theo TCVN 7046:2009 Hà Nội Bắc Ninh 35 Hình 4.2 Khuẩn lạc vi khuẩn E coli có màu xanh tím đặc trưng đĩa thạch Brilliance E.coli/Coliform Selective medium .37 Hình 4.3 Phản ứng Indol vi khuẩn E.coli 37 Hình 4.4 Tỷ lệ mẫu thịt lợn nhiễm Salmonella 39 Hình 4.5 So sánh kết phân lập vi khuẩn E coli Salmonella từ thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 40 Hình 4.6 Vi khuẩn Salmonella spp phát triển môi trường MSRV XLT4 .40 Hình 4.7 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập Hà Nội Bắc Ninh 43 Hình 4.8 Kết thử kháng sinh đồ vi khuẩn E coli đĩa thạch Muller Hilton 45 Hình 4.9 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 49 Hình 4.10 Thực đo đường kính vịng vơ khuẩn đĩa thạch Muller Hilton phịng thí nghiệm .50 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Thành Hiếu Tên luận văn:“Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli Salmonella thịt lợn bán Hà Nội Bắc Ninh’’ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 8640101 Cơ sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Xác định trạng ô nhiễm vi khuẩn E coli Salmonella từ mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ địa bàn tỉnh Bắc Ninh Hà Nội - Cập nhật số liệu tỷ lệ kháng kháng sinh hai lồi vi khuẩn Góp phần xây dựng liệu kiểm soát vi khuẩn kháng thuốc Việt Nam Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thu thập mẫu theo TCVN 4833 - 1:2002, TCVN 4833 - 2:2002 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli theo ISO 16649-2 : 2001 Salmonella theo ISO 6579 :2002 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng E coli Salmonellatheo phương pháp Kirby - Bauer Số liệu thu thập xử lý phần mềm Excel 2007 Kết nghiên cứu Kết kiểm tra tình trạng nhiễm E coli Salmonella Kiểm tra 80 mẫu thịt lợn lấy địa bàn Hà Nội Bắc Ninh có 97,5% số mẫu thịt lợn lấy Hà Nội Bắc Ninh phân lập vi khuẩn E coli 95% số mẫu thịt lợn không đạt tiêu chuẩn vệ sinh theo TCVN 7046:2002 (≤102 CFU/g) Có 57,5% (23/40) số mẫu thịt lợn lấy Bắc Ninh 75% (30/40) Hà Nội phân lập vi khuẩn Salmonella Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella phân lập Các chủng E coli phân lập từ mẫu thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh mẫn cảm với loại kháng sinh Cefotaxime, Ceftazidime Colistin Vi khuẩn E coli phân lập kháng với loại kháng sinh cao Tetracyclinesau Sulfornamide Ampicillin,Trimethoprim ix Tỷ lệ % 100 90 80 70 60 S Bắc Ninh 50 S Hà Nội I Bắc Ninh 40 I Hà Nội 30 R Bắc Ninh R Hà Nội 20 10 Hình 4.9 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 49 Cho đến nay, có nhiều vụ ngộ độc bệnh đường tiêu hóa vi khuẩn Salmonella ghi nhận, nhiều loại kháng sinh khơng cịn tác dụng điều trị Vì vậy, việc thực thử tính mẫn cảm kháng sinh trước lựa chọn loại kháng sinh mẫn cảm phù hợp dùng để điều trị cần thiết, nhằm điều trị bệnh đạt hiệu cao Thay dựa vào kinh nghiệm, phác đồ có sẵn để lựa chọn loại kháng sinh điều trị, dẫn đến tượng kháng thuốc vi khuẩn với kháng sinh Hình 4.10 Thực đo đường kính vịng vơ khuẩn đĩa thạch Muller Hilton phịng thí nghiệm Việc đảm bảo điều kiện vệ sinh nơi giết mổ nơi buôn bán thực phẩm cần kiểm soát chặt chẽ nhằm hạn chế tối đa tượng ô nhiễm vi khuẩn vào thân thịt, đặc biệt chủng vi khuẩn đa kháng thuốc 50 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 5.1.1 Kết kiểm tra trạng ô nhiễm E coli Salmonella - Kết xét nghiệm 80 mẫu thịt lợn thu thập chợ nhỏ lẻ địa bàn Hà Nội Bắc Ninh cho thấy: có 97,5% mẫu nhiễm vi khuẩn E coli 95% mẫu thịt lợn khơng đạt tiêu chuẩn vệ sinh theo TCVN 7046:2002 (≤102CFU/g) - Tỷ lệ mẫu thịt lợn ô nhiễm vi khuẩn Salmonella Bắc Ninhlà 57,5% (23/40) Hà Nội 75% (30/40) 5.1.2 Kết kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli Samonella phân lập - Các chủng E coli phân lập từ mẫu thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh mẫn cảm với loại kháng sinh Cefotaxime, Ceftazidime, Colistin kháng mạnh với loại kháng sinh Tetracycline,Sulfornamide, Ampicillin - Vi khuẩn Salmonella phân lập từ mẫu thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh mẫn cảm với loại kháng sinh Cefotaxime, Ceftazidime, Colistin sulfate kháng mạnh với loại kháng sinh Sulfornamide, Tetracycline, Ampicillin 5.2 KIẾN NGHỊ - Cần tăng cường kiểm tra, giám sát hoạt động giết mổ, vận chuyển nơi bán thực phẩm thịt lợn thịt gà chợ - Cần giám sát chặt chẽ việc sử dụng kháng sinh điều trị bệnh bổ sung vào thức ăn chăn nuôi - Cần tiếp tục xây dựng nghiên cứu nhằm phân tích kiểu gene kháng kháng sinh chủng Salmonella E coli phân lập từ mẫu thịt lợn bán chợ 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt : Báo cáo giám sát Quốc hội (2017) Hơn 5000 người bị ngộ độc thực phẩm năm Truy cập ngày 13 tháng năm 2018 tại: https://nhandan.com.vn/xahoi /item/33069202-hon-5-000-nguoi-bi-ngo-doc-thuc-pham-moi-nam.html Bộ Y tế (2006) Quyết định 39/2006/QĐ-BYT Bộ Y tế ngày 13/12/2006 V/v Ban hành quy chế điều tra ngộ độc thực phẩm Bộ Y tế (2017) Hơn 4000 người bị ngộ độc thực phẩm năm 2016 Truy cập ngày 23 tháng năm 2018 http://www.phapluatplus.vn/hon-4000-nguoi-bi-ngo-docthuc-pham-nam-2016-d34008.html Bùi Thị Lê Minh, Lưu Hữu Mãnh Nguyễn Nhựt Xuân Dung, 2016 Tình hình nhiễm Escherichia coli sinh beta-lactamase phổ rộng gà bệnh tỉnh Vĩnh Long Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ ( 2) tr 6-10 Cam Thị Thu Hà Phạm Hồng Ngân (2016) Một số yếu tố nguy ảnh hưởng tới tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp Ở thịt lợn bán số chợ thuộc huyện Gia Lâm, Thành Phố Hà Nội Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam (14) tr 1271-1276 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Bình Minh Đỗ Ngọc Thuý (2000) Kết phân lập E coli Salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh hố học chủng vi khuẩn phân lập biện pháp phòng trị Kết nghiên cứu Khoa học kỹ thuật Thú y 1996-2000 NXB Nông nghiệp Hà Nội Cục quản lý chất lượng an toàn thực phẩm (2012) E coli bùng phát Hockaido Truy cập ngày 16 tháng năm 2018 http://vfa.gov.vn/tin-tuc/ecoli-bung-phattai-hokkaido.html Cu ̣c quản lý chấ t lượng vệ sinh an toàn thư ̣c phẩm (2002) An toàn thư ̣c phẩm sức khỏe đời số ng và phát triển kinh tế xã hô ̣i NXB Y ho ̣c, Hà Nô ̣i Đặng Khánh Vân Bùi Thị Tho (1995) Tính mẫn cảm tính kháng thuốc E.coli phân lập từ bệnh lợn phân trắng Trung tâm gia súc Mỹ Văn, Hải Hưng NXB Nông nghiệp, Hà Nội tr 110-114 10 Đinh Bích Thuý Nguyễn Thị Thạo (1995) Nghiên cứu tình hình sử dụng kháng sinh tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn gây bệnh chăn ni thú y Tạp chí KHKT thú y III (3) tr 36-38 52 11 Hoàng Hoài Phương, Nguyễn Thị Kê, Phạm Hùng Vân, Nguyễn Đỗ Phúc, Nguyễn Thị Anh Đào, Trần Thị Ngọc Phương (2008) Khảo sát gen kháng kháng sinh số vi khuẩn gây bệnh phân lập từ thực phẩm Tạp chí Y học TP HCM, 12(4) 12 Lê Minh Sơn (1996) Kiểm nghiệm vi khuẩn Salmonella, khảo sát tình hình nhiễm khuẩn thịt lợn đơng lạnh xuất tiêu thụ nội địa số tỉnh miền Trung Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, ĐHNN Hà Nội 13 Lê Thị Thùy Trang Hồ Thị Việt Thu (2017) Khảo sát lưu hành đề kháng kháng sinh chủng vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh vịt tỉnh Hậu Giang Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ (50) tr 44-50 14 Lưu Quốc Toản Nguyễn Việt Hùng Bùi Mai Hương (2013) Đánh giá nguy thịt lợn nhiễm Salmonella Hà Nội Tạp chí Y học dự phịng XXIII tr 140 15 Nguyễn Minh Hồng, Nguyễn Thành Vinh, James lan Campell, Stephen Baker, Nguyễn Cảnh Tự Phan Thị Phượng Trang (2015) Tình hình lưu hành tỷ lệ kháng kháng sinh Salmonella spp phân lập từ heo rừng, cầy hương vịt tỉnh Đăk Lăk Tạp chí phát triển Khoa học & Cơng nghệ 18 (5).tr 85-94 16 Nguyễn Ngọc Tuân, Lê Hữu Ngọc Huỳnh Văn Điểm (2006) Tình hình nhiễm Salmonella phân thịt heo, bò số tỉnh miền Tây Nam Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp,(1 tr 90-95 17 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (1997) Giáo trình Vi sinh vật Thú y NXB Nông nghiệp, Hà Nội 18 Nguyễn Quang Tuyên Đồn Thị Băng Tâm (1994) Vai trị vi khuẩn rối loạn tiêu hoá bê, nghé Bắc Thái Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y (1) tr 24-31 19 Nguyễn Quang Tuyên La Xuân Thăng (2008) Kết xác định ô nhiễm số vi khuẩn thịt lợn khu vực thành phố n Bái Tạp chí Chăn ni tr 39-43 20 Nguyễn Thanh Long (2017) Trong năm 2017, phát 123.914 sở vi phạm ATTP Truy cập ngày 3/6/2018 http://kinhtevadubao.vn/chi-tiet/222-10085trong-nam-2017-phat-hien-123_914-co-so-vi-pham-vsattp.html 21 Nguyễn Thị Ngà (2011) Nghiên cứu tính kháng kháng sinh chủng Salmonella E coli gây bệnh phân lập từ lợn số trang trại lị mổ khu vực phía Bắc Luận văn Thạc sĩ Nông nghiệp, trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội tr 47- 56 53 22 Nguyễn Thị Nguyệt, Phẩm Minh Thu, Phan Thu Dịng Trương Thị Xn Liên (2005) Tìm hiểu tình hình nhiễm khuẩn kháng sinh thịt gà số điểm giết mổ TP Hồ Chí Minh Viện Pasteut TP.HCM http://www.pasteur-hcm.org.vn 23 Nguyễn Viết Không Phạm Thị Ngọc (2012) Ô nhiễm Salmonella điểm giết mổ gia cầm qui mô nhỏ huyện ngoại thành Hà Nội Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn tr 60-67 24 Nguyễn Vĩnh Phước (1970) Vi sinh vật thú y tập NXB Đại học trung học chuyên nghiệp, Hà Nội tr 110-131 25 Nguyễn Vĩnh Phước (1976) Các phương pháp bảo quản thú sản thực phẩm Vi sinh vật thú y, tập NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội tr 232 - 248 26 Nguyễn Vĩnh Phước (1977) Giống Salmonella - Vi sinh vật thú y, tập NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 27 Nguyễn Vĩnh Phước (1978) Giáo trình Bệnh truyền nhiễm gia súc NXB Nông nghiệp, Hà Nội 28 Nguyễn Xuân Thành, Vũ Hoàn, Nguyễn Thị Minh Hoàng Hải (2005) Giáo trình thực tập vi sinh vật NXB Nơng nghiệp, Hà Nội tr 163-169 29 Phạm Hồng Ngân (2011) Vệ sinh vận chuyển Bài giảng vệ sinh thú y Trường Đại học nông nghiệp Hà Nội, Hà Nội tr 73-78 30 Phạm Khắc Hiếu, Bùi Thị Tho cs (1995), Kết kiểm tra tính kháng thuốc E coli 20 năm qua, Kỷ yếu kết nghiên cứu khoa học, khoa chăn nuôi thú y, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội, tr 195 – 196 31 Phạm Khắc Hiếu Bùi Thị Tho (1999) Một số kết nghiên cứu tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thú y Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật Khoa Chăn nuôi - Thú y (1996-1998) Nxb Nông nghiệp, Hà Nội tr 134 -138 32 Phạm Thị Thúy Nga (1997) Nghiên cứu số tiêu vệ sinh thú y điểm giết mổ tình hình nhiễm khuẩn thịt Bn Ma Thuột - Đắc Lắc Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ĐHNN Hà Nội 33 Quốc hội nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam (2010) Luật an toàn thực phẩm Luật số: 55/2010/QH12, ngày 01/07/2010 34 TCVN 4829 : 2005 (ISO 6579 : 2002) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát Salmonella đĩa thạch 54 35 TCVN 4833 - 1:2002 Thịt sản phẩm thịt-lấy mẫu chuẩ bị mẫu thử; Phần I 36 TCVN 4833 - 2:2002 Thịt sản phẩm thịt-lấy mẫu chuẩ bị mẫu thử; Phần II 37 TCVN 7046:2009 Tiêu chuẩn Việt Nam thịt tươi 38 TCVN 7924-2 : 2008 (ISO 16649-2 : 2001) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Phương pháp định lượng Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza Phần 2: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc 44 oC sử dụng 5-bromo-4-clo-3-indolyl- βD-glucuronid; 39 Thông xã Việt Nam (2017) Tổng quan kinh tế xã hội nước tháng đầu năm 2017, truy cập ngày 16/5/2018 https://bnews.vn/tong-quan-kinh-te-xa-hoitrong-nuoc-7-thang-dau-nam-2017/53770.html 40 Tô Liên Thu (1999) Nghiên cứu ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm có nguồn gốc động vật thịt trường Hà Nội Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội 41 Tơ Liên Thu (2004) Tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella E coli phân lập từ thịt lợn thịt gà vùng đồng Bắc Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y XI (4).tr 29-36 42 Tô Liên Thu (2006) Nghiên cứu trạng ô nhiễm số vi khuẩn thịt lợn, gà Hà nội áp dụng biện pháp hạn chế phát triển chúng, Luận án tiến sỹ nông nghiệp, Hà Nội 43 Tổng cục thống kê (2012) Thống kê ngộ độc thực phẩm Việt Nam Truy cập ngày 23/6/2018 http://vesinhantoanthucpham.com.vn/thong-ke-ngo-doc-thucpham-tai-viet-nam/ 44 Trần Thị Hương Giang Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2012) Xác định tỷ lệ nhiễm độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ thịt (lợn, bò, gà) số huyện ngoại thành Hà Nội Tạp chí khoa học phát triển 2012 10 (2) tr 295 - 30 45 Trần Thị Xuân Mai, Võ Thị Thanh Phương, Trần Thị Hoàng Yến Nguyễn Văn Bé (2011) Phát nhanh Salmonella spp., Salmonella enterica diện thực phẩm kỹ thuật PCR đa mồi (Multiplex PCR) Tạp chí Khoa học 20b tr 198 - 208 46 Trần Xuân Đông (2002) Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ gia súc, số tiêu vệ sinh thú y cở sở giết mổ địa bàn thành phố Hạ Long thị xã tỉnh Quảng Ninh Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, ĐHNN Hà Nội 55 47 Trương Hà Thái, Phạm Hồng Ngân, Chu Thị Thanh Hương Cam Thị Thu Hà (2017) Khả kháng kháng sinh E coli Salmonella phân lập từ trứng gia cầm bán số chợ địa bàn thành phố Hà Nội Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 15 (6) tr 770-775 48 Vũ Khắc Hùng, Lê Văn Tạo Ephylipcinec (2005) Xác định loại độc tố thường gặp vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bị tiêu chảy phương pháp PCR Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y XII (2) Hội Thú Y Việt Nam II Tài liệu tiếng Anh: 49 Angkititrakul S., C Chomvarin, T Chaita, K Kanistanon and S Waethewutajarn (2005) Epidemiology of antimicrobial resistance in Salmonella isolate from pork, chicken meat and humans in Thailand Southeast Asian J Trop Med Public Health 36(6) pp 1510-1515 50 Beutin L and H Krarch (1997) Viruslence markers of shigar - like toxin producting E coli strains orginating from health domestic animals of different species Journal of clinical microbiology, (33) pp 631-635 51 Blood D.C and J.A Henderson (1975) Disease caused by Escherichia coli Veterinary medicine Baillere tindall London Pp 346 - 355 52 Brody J.E (2001) Studies Find Resistant Bacteria The New York Times October 18 2001, I screen cited 2004 May 6, Available from URL: : http://www.organicconsumers.org/toxic/badmeat 102201.cfin 53 Carattoli A (2003) Plasmid-mediated antimicrobial resistance in Salmonella enterica Current issues in molecular biology Vol (4) pp 113-122 54 CDC (2010) Division of Bacterial and Mycotic Diseases Enterohemorrhagic Escherichia coli 55 Codex (1997) Alimentarius Commisson Food Hygiene basis texts Rome FAO/WHO pp 18-20 56 Danmap (2017) Danmap 2016-Use of antimicrobial agents and occurrence of antimicrobial resistance in bacteria from food animals, food and humans in Denmark pp 65 57 David A., O’neil, Towersl and M Cooke (1988) An outbreak of Salmonella typhymurium DT 104 food poisoning associated with earing beef World congerssfood born infection and toxicaton, 98 (1) pp 159-162 58 DeWaal C.S and N Robert (2005a) European Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C pp 30-44 56 59 DeWaal C.S and N Robert (2005b) South East Asian Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C pp 14-16 60 FDA Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins Handbook Staphylococcus aureus 61 Hao V.T.T., G Moutafis, T Istivan, T.L Thuoc and P.J Coloe (2007) Detection of Salmonella spp in retail raw food samples from Vietnam and characterization of their antibiotic resistance Applied and Environmental Microbiology 73 (21) pp 6885-6890 62 Kim H.B., H Beak, Y.H Jang, J SukChan, A Kima and N.H Choe (2011) Prevalence and antimicrobial resistance of Salmonella spp And Escherichia coli isolated from pigs at slaughterhouses in Korea African Journal of Microbiology Research 5(7) pp 823-830 63 Nowak B.T., V Müffling, S Chaunchom and J Hartung (2007) “Salmonella contamination in pigs at slaughter and on the farm: A field study using an antibody ELISA test and a PCR technique” International Journal of Food Microbiology., 115.pp 259-267 64 Phan T.T., L.T Khai, N Ogasawara, N.T Tam, A.T Okatani, M Akiba and H Hayashidani (2005) Contamination of Salmonella in retail meats and shrimps in the Mekong Delta Vietnam J Food Prot., 68 (5) pp.1077-80 65 Pulsrikarn C., P Chaichana, S Pornruangwong, Y Morita, S Yamamoto and Boonnmar (2012) Serotype, Antimicrobial Susceptibility, and Genotype of Salmonella Isolates from Swine and Pork in Sa Kaew Province, Thailand Thai J Vet Med 2012 42 (1) pp 21-27 66 Reid C.M (1991) Escherichia coli - Microbiological methods for the meat industry, New Zealand Public 67 Thai T.H., T Hirai, N.T Lan and R Yamaguchi (2012) Antibiotic resistance profiles of Salmonella serovars isolated from retail pork and chicken meat in North Vietnam International Journal of Food Microbiology 156 (2) pp 147-151 68 Wayne P (2014) Clinical and Laboratory Standards Institute: Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: Twenty-fourth informational supplement, M100-S24 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) Vol 34(1) pp 50-57 69 Wise R., Hart and O Cars (1999) Antimicrobial resistance is a major threat to public health Bristish medical jounal 317 57 PHỤ LỤC Phụ lục Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli TCVN 7924-2 : 2008 (ISO 16649-2 : 2001) 25 g thịt + 225 ml nước sinh lý ml ml (+) ml ml (+) ml Thử nghiệm IMViC ml E.coli/Coliform Selective (+) ml nước sinh lý Brilliant Green 58 Phụ lục Sơ đồ phân lập vi khuẩn SalmonellaTCVN 4829:2005 (ISO 6579:2002) 25 g mẫu + 225 ml BPW Tăng sinh Tăng sinh chọn lọc Phân lập nhận diện ủ 37°C/18-24h MSRV Muller Kauffmann ủ 41,5°C/24-48h ủ 42°C/18-24h Rambach XLT4 ủ 37°C/24h ủ 37°C/18-24h Khẳng định Thử nghiệm H2S, urea, Indol 59 Phụ lục Yêu cầu vệ sinh tiêu vi sinh vật thịt theo TCVN 7046: 2002 Tên vi sinh vật Giới hạn tối đa (cfu/g) Tổng số vi khuẩn hiếu khí 106 Staphylococcus aureus 102 Coliforms 102 Escherichia coli 102 Clostridium perfrigens 10 Salmonella Không phát 25g mẫu 60 Phụ lục Phản ứng sinh hóa vi khuẩn E coli + - Phản ứng Voges Proskauer vi khuẩn E coli + - Phản ứng Simmons Citrate Vi khuẩn E coli 61 Phụ lục Vi khuẩn Salmonellatrên môi trường thạch Rambach Phụ lục Vi khuẩn Salmonella TSI 62 Phụ lục Thịt lợn bày bán số chợ Hà Nội Bắc Ninh 63 ... vi khuẩn gây bệnh người Xuất phát từ tình hình thực tế tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli Salmonella thịt lợn bán Hà Nội Bắc Ninh? ??’... LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Thành Hiếu Tên luận văn:? ?Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm khả mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli Salmonella thịt lợn bán Hà Nội Bắc Ninh? ??’ Chuyên ngành: Thú y... E coli và Salmonella thiṭ lơ ̣n ta ̣i hà nội bắc ninh 34 4.1.1 Thực trạng ô nhiễm vi khuẩn E coli thịt lợn Hà Nội Bắc Ninh 34 4.1.2 Kết phát vi khuẩn Salmonella ô nhiễm thịt lợn Hà