Đang tải... (xem toàn văn)
Thư viện DNA là tập hợp ngẫu nhiên các đoạn DNA (có tính đại diện đặc thù cho hệ gen của một sinh vật) được chèn vào các vector nhân dòng.1. Genomic library có thể được n[r]
(1)CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG (SH3014)
1
(2)CHƯƠNG II: CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI
(10 TIẾT)
Chức ứng dụng enzyme giới hạn
Giới thiệu vector nhân dòng kỹ thuật nhân dòng gen
Các phương pháp lai phân tử
Phương pháp PCR, ứng dụng
Kỹ thuật xác định trình tự DNA
Kỹ thuật tạo thư viện genome cDNA
(3)Khái niệm thư viện DNA
•Thư viện DNA, giống thư viện truyền thống sử dụng để thu thập lưu trữ thơng tin
•Trong thư viện DNA thống tin dự trữ phân tử DNA
Thư viện DNA tập hợp ngẫu nhiên đoạn DNA (có tính đại diện đặc thù cho hệ gen sinh vật) chèn vào vector nhân dòng
(4)Có hai loại thư viện mẫu là:
Thư viện genome (Genomic library): chứa toàn đoạn DNA có nhân tổ chức hay thể Genomic library được nhân dịng plasmid genome của thực khuẩn thể
(5)Các bước tạo thư viện mẫu nhân dòng
1 Tạo đoạn DNA ngẫu nhiên từ hệ gen hay cDNA
2 Chèn đoạn DNA vào vector nhân dịng thích hợp
3 Nhân đoạn DNA tạo hệ thống tế bào chủ (chứa vector nhân dòng tương ứng)
(6)(7)(8)• Mỗi đoạn DNA cài vector biến nạp tế bào vi khuẩn Sách (Book)
(9)Tạo đoạn DNA có kích thước phù hợp cho nhân dịng
Kích thước đoạn DNA tùy thuộc vào mục đích sử dụng thư viện
• Để lập đồ, xác định gen hay tách dịng gen từ hệ gen có kích thước lớncần đoạn DNA lớn sử dụng vectơ phage, cosmid, BAC hay YAC
• Để xác định trình tự, lập đồ chi tiết…
cần đoạn DNA có kích thước nhỏ, sử dụng vectơ nhân dòng plasmid
(10)Tạo đoạn DNA có kích thước phù hợp cho nhân dịng
• Làm gãy nhiễm sắc thể
• Cắt RE
• Ở genom người dựng RE có vùng nhận biết gồm
Nu (NotI, SfiI) tạo đoạn cắt có chiều dài
lớn
• Thơng thường dùng RE có vùng nhận biết gồm
Nu (AluI, HaeIII)