Đang tải... (xem toàn văn)
Baèng phöông phaùp coâ laäp tim eách theo kieåu Straub, ñöa dung dòch Ringer vaøo taâm thaát, ngöôøi ta coù theå khaûo saùt moät soá hoaït tính cuûa döôïc chaát, caùc hormon vaø dung d[r]
(1)Bài ẢNH HƯỞNG CỦA THỂ DỊCH VAØ MỘT SỐ CHẤT
LÊN HOẠT ĐỘNG CỦA TIM ẾCH TÁCH RỜI
I ĐẠI CƯƠNG
Trong thể, hoạt động sinh lý tim điều hoà hệ thần kinh trung ương (thông qua xung) thể dịch (các hormon)
Tim động vật bậc cao có tính chất sinh lý đặc biệt mô tim tế bào tim Nhờ vậy, chúng có khả hoạt động tự động cách nhịp nhàng bị tách rời khỏi thể, tức lập chúng khỏi điều hịa hệ thần kinh hệ thể dịch
Thậm chí tim bị tách rời nuôi sống môi trường đầy đủ dung dịch sinh lý thích hợp (đối với tim ếch Ringer, thỏ Tyrode), oxy, nhiệt… yếu tố thay cho vai trị máu chúng lại có cảm ứng nhạy so với thể số yếu tố kích thích
Hình 4.1 Hệ thống nút tự động tim người
Tính tự động tim nói có nhờ tổ chức hạch (nút) đặc biệt Ở tim ếch, hạch Remark, Ludwig Bidder Ở tim người, tổ chức hạch xoang, hạch nhĩ thất, bó His lưới Purkinje
Tâm nhó trái Nút xoang SA
(Sinoatrial node) Nút Nhó thất AV
(Atrioventricular node) Tâm thất phải
Boù His
(2)Hoạt tính hạch khác tính điều hồ hoạt động tim, dù có tính tự động chúng chịu điều hòa sản phẩm thần kinh - tiết
Bằng phương pháp cô lập tim ếch theo kiểu Straub, đưa dung dịch Ringer vào tâm thất, người ta khảo sát số hoạt tính dược chất, hormon dung dịch ion khác lên hoạt động tim tách rời đưa chất vào tâm thất tim tách rời (mỗi đưa chất vào phải rửa tim dung dịch sinh lý cho chất sử dụng trước đọng xoang tim)
Các chất giao cảm adrenalin, noradrenalin số chất điện
giải có hóa trị khác Ca2+… có tác dụng làm tăng cường hoạt động
tim giống tác dụng thần kinh giao cảm Ngược lại, với chất thuộc loại phó giao cảm acetylcholin, digitaline, ion có hóa trị
K+…lại có hoạt tính ức chế hoạt động tim giống tác dụng thần
kinh phó giao cảm
II CHUẨN BỊ a Dụng cụ - thiết bò
- Dụng cụ giải phẫu: kim hủy tủy, kéo lớn, kéo nhỏ, pince cong, cặp mỏm tim, kim khâu (cong) phẫu thuật, thường, khay giải phẫu…
- Trụ ghi, đèn cồn, giấy cảm nhiệt, giá ghi - Các pipette Pasteur hay ống nhỏ giọt
- Ống Straub (Một dụng cụ thủy tinh ống có cấu trúc riêng biệt cho
thí nghiệm thông tim Ống dài khoảng 5cm, đầu kéo nhỏ thành mao quản có đường kính từ 0,5-1mm (đường kính thay đổi tùy vào tim loài khác nhau) Phần chứa dung dịch gắn với ống cao su Đầu nhỏ ống Straub luồn vào động mạch chủ trái tim tách rời, sau dùng kẹp để cố định chặt)
- Ống thông tim (Canuyn, thay cho ống Straub) - Các ống nhựa (hoặc cao su) có khóa
- Đồng hồ bấm giây
- Bút ghi cảm nhiệt kim loại (có thể dùng nhiệt đèn cồn tụ
điện để làm nóng đầu kim ghi 450C)
- Giấy cảm nhiệt (có thể dùng giấy thường cho ám khói bề mặt giấy)
- Máy động ký (Kymograph)
(3)Trụ quay hoạt động quay tròn nhờ phận động điện phận lên giây cót
Tốc độ trụ quay điều chỉnh cho phù hợp với thí nghiệm Đi kèm với trụ quay thường có thiết bị tạo nhịp, xác định thời gian, nguồn điện kích thích, hệ thống giá đỡ…
Trong Sinh lý học, máy động ký sử dụng cho thí nghiệm nhằm tìm hiểu quy luật hoạt động quan thần kinh, hệ tiêu hóa, hệ hơ hấp, hệ Có thể thực thí nghiệm cấp diễn trường diễn.
b Hóa chất
- Dung dịch Tyrode (sử dụng cho tim thỏ, bọ…) - Dung dịch Ringer (sử dụng cho tim ếch, cóc)
- Dung dòch Adrenalin 1.10-3
- Dung dòch Acetylcholin 1.10-3
- Dung dòch CaCl2 2%
- Dung dòch KCl 2%
Chú ý: - Các dung dịch hormon phải bảo quản điều kiện tránh tối đa ánh sáng, thường xuyên phải đậy nắp
Bảng 4.1 Công thức dung dịch sinh lý
Ringer Locke Tyrode
NaCl 6-6,5 9,0 8,0
KCl 0,1 0,2 0,2
CaCl2 0,1 0,2 0,2
NaHCO3 0,1 0,19 1,0
MgCl2 0,16 1,0
NaH2PO4 0,16 0,05
Glucose 1,0 1,0
Chú ý: - Khi pha dung dịch cần sử dụng nước cất trung tính tránh muối kim loại nặng làm tổn thương tế bào sống mô sống
- Luôn pha NaHCO3 Na2HPO4 sau để đảm bảo hồ
tan
THÀNH PHẦN
(4)c Mẫu vật
- Thỏ khỏe mạnh (hoặc Bọ-Guinea pig)
- Ếch khỏe mạnh
- Trước thí nghiệm giờ, khơng nên cho vật ăn
III THỰC HAØNH
1. Thao tác máy động ký
- Dán giấy cảm nhiệt vào trụ ghi (mặt láng giấy nằm phía ngồi), hơ nóng kim ghi đèn cồn đặt phía đầu kim ghi
- Bố trí vị trí máy, giá đỡ cho thuận lợi, giải phẫu chế phẩm xong thí nghiệm ngay, tránh để lâu, tim rời hoạt động yếu
- Đặc biệt, bố trí tiếp cận đầu kim ghi mặt giấy (đã dán bao quanh trụ) cho có khả tiếp xúc tốt (luôn tiếp xúc với bề mặt giấy suốt trình khởi động máy, lực ma sát kim ghi giấy phải giảm mức tối thiểu, kim ghi ln vng góc với trục trụ ghi)
- Chạy thử máy thử ghi dao động giấy, tắt máy để giải phẫu ếch
2. Làm chế phẩm tim rời ếch - Hủy tủy ếch
Chú ý: - Nếu hủy não thành cơng ếch duỗi thẳng hai chân chỗ hủy não không bị chảy máu, ếch bất động
- Quá trình giải phẫu khơng da ếch bị khơ,
dùng khăn ẩm bao lấy ếch Ếch hủy tủy xong, gọi ếch tủy
Dùng ngón tay trỏ ấn đầu ếch xuống
Dùng kim hủy não đâm thẳng góc vào lỗ xương chẩm ếch (nơi tiếp giáp xương đầu xương sống)
Quay mũi nhọn kim phía miệng ếch (để lọt vào xoang não, hủy xoang não)
Cẩn thận đưa kim lọt vào ống xương sống (để phá tủy sống) Ghim ếch nằm ngửa lên khay mổ mổ mở lồng ngực
(5)- Ghim ếch nằm ngửa lên khay mổ
- Cắt da ngực theo đường tam giác cân, đỉnh nằm bụng dưới, hai
đỉnh lại nằm hai vị trí nách
- Dùng kéo cắt bỏ thành ngực theo đường cắt da, cẩn thận cắt rời mơ
liên kết, cố gắng không gây tổn thương nội quan, tim
- Dùng kẹp nhấc nhẹ bao tim, đưa mũi kéo nhỏ cắt dọc theo trục dài
tim, tách bao tim qua hai bên để tim lộ
Tìm lỗ chẫm phá xoang não Hủy tủy sống
Buộc mạch
- Dùng kim cong luồn cung động mạch phải, sau buộc chặt
vị trí cách tim khoảng 1cm, cắt gọn hai đầu Máu không cịn lưu thơng vào động mạch phải (nên thắt nhiều nút tránh trường hợp bị xúc thí nghiệm).Tương tự, dùng kim cong luồn cung động mạch trái sau tim 1cm, cắt vết chữ V vị trí phía ngồi sợi buộc hờ Máu chảy ra, để máu chảy tự khỏi mạch vị trí vết cắt
- Lật ngược tim lên, luồn kim có tĩnh mạch chủ chia làm nhánh,
cắt vết chữ V phía ngồi sợi khoảng 1cm buộc hờ
Rửa tim
Luồn ống nhỏ giọt có sẵn dung dịch Ringer ống, bơm vào vết cắt V tĩnh mạch chủ, máu tim tống qua vết cắt động mạch trái
Tiếp tục bơm dung dịch Ringer vào thấy tim trắng (sạch hết máu tim), sau buộc chặt tĩnh mạch chủ, cắt gọn đầu
Luồn ống thông tim (Canuyn)
(6)Ống thông tim chứa đầy dung dịch Ringer gắn với kim thông tim Luồn đầu kim thông tim qua vết cắt chữ V cung động mạch trái, dùng ngón tay đẩy nhẹ nhàng cho đầu kim vào tận tâm thất xuyên qua van nhĩ thất nằm vách nhĩ thất (lúc kim qua van thất – động ta nghe có tiếng “sậc” nhỏ được) Buộc cung động mạch vào kim thông, kẹp chặt Nâng ống thông tim lẫn tim lên, dùng kéo cắt tim khỏi lồng ngực, cắt mạch đưa tim với ống thông tim
Chú ý: Cắt nút chỉ, tránh làm tổn thương xoang tĩnh mạch, có hạch xoang tim quan trọng
Nút thắt (động mạch phải)
Nút thắt
(động mạch trái) Vết cắt chữ V
Nút thắt (Xoang tónh mạch)
Vị trí luồn ống thông cố định tim
Vị trí đưa ống dung dịch rửa tim
Hình 4.3 Các thao tác cung động mạch
(7)Ghim ếch lên khay giải phẫu Giải phẫu lồng ngực
Thực đường cắt, bộc lộ lồng ngực Cắt mang bao tim bộc lộ tim ngồi Hình 4.5 Các bước tiến hành giải phẫu lồng ngực
(8)Luồn xoang tĩnh mạch Rửa tim dung dịch Ringer
Đưa kim vào cung động mạch trái
Hình 4.7 Chế phẩm tim rời hồn chỉnh
Thông tim qua van nhó thất Hình 4.6 Thao tác luồn ống thông tim cô lập tim khỏi thể
a
b c d e f
g
h i
j k l m
Hình 4.8 Sơ đồ ống thông tim.
(9)3 Thí nghiệm
Tim rời sau lập co bóp làm cho mực nước ống thơng tim chuyển động lên xuống (do nút cột hở, dung dịch nhỏ giọt ngồi nhiều, q trình thí nghiệm cần theo dõi mực dung dịch ống chứa)
- Cố định tim rời lên giá ghi, ống thông tim lúc chứa dung
dịch Ringer mức độ 2/3 thể tích ống (5-6ml)
- Cặp kẹp mỏm tim vào chóp tim cho khơng gây lủng
thành tim, kẹp mỏm tim nối với kim ghi phía trước hệ thống địn bẩy Hoạt động co bóp tim làm cho kim ghi di chuyển lên xuống Kim ghi đốt nóng đèn cồn ghi lên giấy cảm nhiệt đồ thị hoạt động tim rời
- Ghi đồ thị hoạt động bình thường tim 10 phút (với dung dịch
Ringer)
Dung dòch Ringer
Kim thông tim
Kẹp cá sấu
Cặp moûm tim
Sợi chỉ Kim
Đèn cồn Trụ
ghi
KYMOGRAP H
(10)- Nhỏ đến ba giọt dung dịch adrenalin vào ống thông tim
(chứa dung dịch Ringer) Quan sát hoạt động tim rời ảnh hưởng adrenaline
- Dùng pipette hút hết dung dịch ống thông tim, thay dung dịch
Ringer mới, ghi đồ thị tim hoạt động lại sau nhỏ - giọt dung dịch
CaCl2 vào ống thơng tim, quan sát co bóp tim đồ thị
- Tiến hành thí nghiệm tương tự với chất lại (KCl acetylcholin)
- Chú ý: Thí nghiệm với dung dịch adrenalin trước, dung dịch acetylcholin
sau
- Khi thử với chất mới, phải thay dung dịch cũ (đổ bỏ dung dịch cũ)
bằng dung dịch Ringer để tim hoạt động trở lại bình thường
03 phút (tim ếch)
Hình 4.10 Tác dụng Acetylcholin lên tim rời
03 phút (tim ếch)
Hình 4.11 Tác dụng Adrenalin lên tim rời
Điểm nhận kích thích