Nghiên cứu, sản xuất và thử nghiệm vacxin nhược độc đông khô phòng bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gà

luận văn, tiến sĩ, thạc sĩ, báo cáo, khóa luận, đề tài

Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN HỒNG MINH "NGHIÊN CỨU, SẢN XUẤT VÀ THỬ NGHIỆM VẮCXIN NHƯỢC ðỘC ðÔNG KHÔ PHÒNG BỆNH VIÊM PHẾ QUẢN TRUYỀN NHIỄM Ở GÀ" Chuyên ngành: Thú y Mã s ố: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Ng ười hướng dẫn khoa học: TS. Trần Thị Liên HÀ NỘI - 2007 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là ñề tài nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, do tôi khảo sát nghiên cứu, có sự giúp ñỡ của các ñồng nghiệp trong cơ quan và chưa từng ñược sử dụng công bố trong bất kỳ công trình khoa học nào. Tôi xin cam ñoan, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 06 tháng 11 năm 2007 Tác giả Nguyễn Hồng Minh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân còn có sự hướng dẫn tận tình của thầy hướng dẫn khoa học TS. Trần Thị Liên. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến thầy hướng dẫn, người ñã giành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban giám ñốc Xí nghiệp thuốc thú y Trung - Tập thể cán bộ công nhân viên trong phân xưởng vắcxin virút ñông khô – Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương - Ban ñào tạo sau ñại học - Viện khoa học kỹ thuật nông nghiệp Việt nam ðã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân, bạn bè, ñồng nghiệp - Những người luôn tạo ñiều kiện, ñộng viên, giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 06.11.2007 Nguyễn Hồng Minh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC Trang Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt và ký hiệu v Danh mục các bảng vi Danh mục các hình vii Mở ñầu 1 1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. ðối tượng và phạm vi nghiên cứu 2 4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 2 Chương 1. Tổng quan tài liệu và cơ sở khoa học 3 1.1. Giới thiệu chung về bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gà 3 1.2. Miễn dịch học bệnh IB 15 1.3. Những yêu cầu cơ bản ñể sản xuất vắcxin IB 18 1.4. ðông khô vắcxin 23 1.5. Phòng bệnh bằng vắcxin 26 Chương 2. Nội dung, nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 30 2.1. Nội dung 30 2.1.1. Khảo sát ñặc tính sinh học của virút giống 30 2.1.2. Nghiên cứu xây dựng qui trình sản xuất vắcxin IB 30 2.1.3. Kiểm nghiệm vắcxin IB ñông khô 30 2.1.4. Thử nghiệm vắcxin thành phẩm 30 2.2. Nguyên liệu nghiên cứu 30 2.3. Phương pháp nghiên cứu. 31 2.3.1. Phương pháp chuẩn ñộ hiệu giá virút vắcxin IB trên trứng gà có phôi 31 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 2.3.2. Phương pháp sản xuất vắcxin IB trên trứng gà có phôi. 32 2.3.3. Phương pháp ñông khô vắcxin. 33 2.3.4. Phương pháp kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vắcxin. 33 2.3.5. Phương pháp kiểm tra chất lượng vắcxin 34 2.3.6. Phương pháp xác ñịnh hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vắcxin bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) 36 2.3.7. Phương pháp xử lý số liệu. 38 Chương 3. Kết quả nghiên cứu và thảo luận 39 3.1. Kết quả khảo sát ñặc tính sinh học của virút giống 39 3.1.1. Khảo sát ñặc tính gây nhiễm của virút giống IB trên trứng gà có phôi 40 3.1.2. Xác ñịnh hiệu giá virút giống trên trứng gà có phôi. 44 3.2. Kết quả nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vắcxin IB nhược ñộc ñông khô 50 3.2.1. Quy trình sản xuất vắcxin IB 50 3.2.2. Kết quả nghiên cứu và theo dõi các thông số kỹ thuật trong quy trình ñông khô vắcxin IB. 51 3.3 Kết quả kiểm nghiệm vắcxin IB 59 3.3.1 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm và chân không của lọ vắcxin ñông khô 59 3.3.2. Kết quả kiểm tra vô trùng vắcxin IB 61 3.3.3. Kết quả kiểm tra an toàn. 62 3.3.4. Kết quả kiểm tra hiệu lực vắcxin IB. 64 3.4. Kết quả thử nghiệm vắcxin IB tại Xí nghiệp thuốc thú y trung ương. 74 Kết luận và ñề nghị 79 Tài liệu tham khảo 80 Phụ lục 89 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU IB Avian infectious bronchitis (Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm của gà) ARN Acid ribonucleic BHK-21 Baby hamster kidney – 21 (Tế bào thận chuột hamster dòng 21) CAM Chorioallantoic membrane (Màng nhung niệu) CEK: Chick embryo kidney (Tế bào thận phôi gà) CEL Chick embryo liver (Tế bào gan phôi gà) CID 50 50% chick infective dose (Liều gây nhiễm gà 50%) CK Chick kidney (Tế bào thận gà) CPE Cytopathic effect (Bệnh lý tế bào) EDS76 Egg Drop Syndrome – 76 (Hội chứng giảm ñẻ của gà) EID 50 50% Egg-infective dose (Liều gây nhiễm trứng 50%) HA Haemagglutination (Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà) HI Haemagglutination inhibition (Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà) M Membrain (Protein màng) M41 Massachusetts – 41 N Nucleocapsid (Protein nhân) NI Neutralisation index (Chỉ số trung hòa) PBS Phosphate buffered saline (Dung dịch muối ñệm) S Spike (Protein gai) SARS Severe acute respiratory syndrome (Hội chứng hô hấp cấp tính) SN Serum neutralisation (Phản ứng trung hòa) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1. Kết quả khảo sát ñặc tính gây nhiễm của virút giống IB trên trứng gà có phôi ở các nồng ñộ pha loãng 41 Bảng 3.2. Kết quả xác ñịnh hiệu giá virút giống IB 45 Bảng 3.3. Số liệu tính toán xác ñịnh hiệu giá virút giống IB 46 Bảng 3.4. Kết quả xác ñịnh thời ñiểm thu hoạch nguyên dịch virút 48 Bảng 3.5. Kết quả thí nghiệm về tỷ lệ chất bổ trợ (skimmilk) trong vắcxin IB ñông khô 52 Bảng 3.6. Thông số kỹ thuật chính trong quá trình ñông khô vắcxin IB 54 Bảng 3.7. Kết quả kiểm tra ñộ ẩm và chân không của vắcxin IB ñông khô. 60 Bảng 3.8. Kết quả kiểm tra vô trùng vắcxin IB ñông khô 62 Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra an toàn của vắcxin IB ñông khô 63 Bảng 3.10. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vắcxin IB 65 Bảng 3.11. Kết quả ñánh giá hiệu lực bằng phương pháp gây nhiễm trên trứng gà có phôi 67 Bảng 3.12. Kết quả ñánh giá hiệu lực bằng phương pháp xác ñịnh nhu ñộng lông rung khí quản 69 Bảng 3.13. Kết quả xác ñịnh hiệu giá virút IB của các lô vắcxin thành phẩm 71 Bảng 3.14. Kết quả xác ñịnh tính bền vững của vắcxin IB ñông khô bảo quản ở nhiệt ñộ 2-8 o C. 73 Bảng 3.15. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể HI của gà sau khi sử dụng vắcxin IB 76 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1. Sơ ñồ kỹ thuật về giống 39 Hình 3.2. Tỷ lệ trứng chết thai ở các thời ñiểm sau khi gây nhiễm virút giống IB 42 Hình 3.3. So sánh bệnh tích thai của những phôi chết ở thời ñiểm 36 giờ 43 Hình 3.4. So sánh bệnh tích thai của những thai chết ở thời ñiểm 48 giờ 43 Hình 3.5. Biểu ñồ biểu diễn hiệu giá HA trung bình ở các thời ñiểm sau khi gây nhiễm virút IB của các lô trứng thí nghiệm 49 Hình 3.6. Sơ ñồ quy trình sản xuất vắcxin IB nhược ñộc ñông khô 50 Hình 3.7. ðồ thị quy trình ñông khô vắcxin IB 57 Hình 3.8. ðồ thị biểu diễn kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vắcxin IB ñông khô. 61 Hình 3.9. Sự biến thiên hàm lượng kháng thể kháng virút IB của hai lô gà thí nghiệm ở những thời ñiểm theo dõi. 77 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 1 MỞ ðẦU 1. Tính cấp thiết của ñề tài Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm của gà (IB - Avian infectious bronchitis) do virút thuộc nhóm coronavirus gây ra, là một bệnh truyền nhiễm cấp tính, dễ lây lan qua tiếp xúc với những triệu chứng ñặc trưng ở ñường hô hấp như là ho, hắt hơi và có tiếng ran khí quản. Ngoài ra, bệnh có thể gây ảnh hưởng ñến thận gây viêm thận cấp hoặc mãn, gây chảy nước mũi ở gà con và gây ảnh hưởng rất lớn ñến sản lượng và chất lượng trứng ở ñàn gà ñẻ [26]. Bệnh có tỷ lệ nhiễm cao và là một trong những nhân tố chính gây giảm hiệu quả kinh tế ñối với ngành chăn nuôi gà ở nước ta, nhất là trong thời kỳ chuyển dịch phương thức chăn nuôi từ phân tán, nhỏ lẻ sang chăn nuôi tập trung, công nghiệp hiện nay. Cho ñến nay, bệnh chưa có thuốc ñiều trị. Biện pháp tốt nhất ñể kiểm soát dịch bệnh là thực hiện an toàn sinh học và sử dụng vắcxin phòng bệnh Tuy nhiên, chưa có cơ sở nào trong nước nghiên cứu, sản xuất vắcxin phòng bệnh này. Trong những năm qua, chúng ta vẫn phải nhập một số lượng lớn vắcxin IB với giá thành cao. Vì vậy việc nghiên cứu, sản xuất thành công và nhanh chóng ñưa vào lưu hành vắcxin viêm phế quản truyền nhiễm trong nước, vừa tiết kiệm ngoại tệ cho ñất nước, vừa chủ ñộng có vắcxin dự phòng cho chương trình tiêm phòng của các ñịa phương là một yêu cầu cấp thiết. ðể ñáp ứng yêu cầu của thị trường và góp phần tích cực vào việc khống chế dịch bệnh cho ñàn gà, nâng cao hiệu quả chăn nuôi, chúng tôi ñã tiến hành ñề tài: “Nghiên cứu, sản xuất và thử nghiệm vắcxin nhược ñộc ñông khô phòng bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gà”. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 2 2. Mục tiêu nghiên cứu − Nghiên cứu xây dựng qui trình sản xuất vắcxin IB trên phôi gà. − Xây dựng một số chỉ tiêu kỹ thuật cơ bản trong qui trình sản xuất và kiểm nghiệm vắcxin. − Thử nghiệm vắcxin thành phẩm. 3. ðối tượng và phạm vi nghiên cứu a. ðối tượng nghiên cứu − Giống virút viêm phế quản truyền nhiễm. − Gà ở các lứa tuổi. − Trứng gà có phôi sạch bệnh. b. Phạm vi nghiên cứu − Nghiên cứu sản xuất vắcxin trong ñiều kiện phòng thí nghiệm của Xí nghiệp thuốc thú y TW. − Nghiên cứu trên các lô gà ñược bố trí thí nghiệm tại Xí nghiệp thuốc thú y TW. − Kiểm tra chất lượng các lô vắcxin thí nghiệm. − Thử nghiệm vắcxin thành phẩm tại Xí nghiệp. 4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài - Ý nghĩa khoa học ðề tài ñã xác ñịnh ñược một số chỉ tiêu về giống gốc, hoàn thiện một số thông số kỹ thuật về ñông khô và ñã xây dựng ñược quy trình sản xuất, kiểm nghiệm vắcxin IB ở gà. - Ý nghĩa thực tiễn + Cung cấp cho thị trường chăn nuôi gà một loại vắcxin nhược ñộc ñông khô an toàn, có hiệu lực theo tiêu chuẩn nhà nước. + Chủ ñộng trong việc cung cấp vắcxin IB phòng chống dịch bệnh cho gà.