Chương 2 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1.Phương pháp chuẩn ñộ hi ệu giá virút vắcxin IB trên trứng gà có phôi (Reed Muench).
Giống virút vắcxin IB mang từ nước ngoài về (Giống gốc - Master seed), giống ñược nuôi cấy trên trứng gà có phôi sạch bệnh ấp 10 ngày tuổi. Sau khi gây nhiễm kiểm tra bệnh tích, thu hoạch nước niệu nang. Huyễn dịch virút giống ñược chia ra các lọ nhỏ, ñông khô giữ làm giống sản xuất (Working Seed).
Giống sản xuất ñược chuẩn ñộ trên trứng gà có phôi và ñược tính toán theo phương pháp Reed - Muench [71].
Phương pháp chuẩn ñộ virút vắcxin IB ñược tiến hành trên trứng gà có phôi.
− Hoàn nguyên lọ vắcxin ñông khô bằng dung dịch PBS (hoặc nước muối
sinh lý 0,9%) vô trùng.
− Dùng dung dịch PBS (hoặc nước muối sinh lý 0,9%) pha loãng virút theo
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………32
− Gây nhiễm virút ở các nồng ñộ ñã pha loãng vào xoang niệu nang của
trứng gà có phôi ấp 9 – 11 ngày tuổi, mỗi nồng ñộ 5 quả, mỗi quả 0,1 ml.
− 30 quả không tiêm làm ñối chứng.
− Hàn kín lỗ tiêm bằng parafin, ấp tiếp ở nhiệt ñộ 370C, hàng ngày soi
trứng, quan sát sự biến ñổi của phôi. Những quả chết phôi ở các thời ñiểm soi trứng và 2 quả ñối chứng âm ñược cất vào tủ lạnh dương 40C. Sau 120 giờ gây nhiễm virút toàn bộ số trứng sống và chết ñều ñược giết lạnh. Ghi kết quả sống, chết ở các nồng ñộ. Sau khi trứng ñược giết lạnh, tiến hành mổ trứng thu hoạch nước niệu nang ñồng thời ñánh giá sự có mặt của virút IB. Việc ñánh giá này, dựa trên các tiêu chí:
+ Dựa vào các bệnh tích ñặc trưng khi gây nhiễm virút IB trên trứng gà có phôi.
+ Lấy mẫu nước niệu nang ñã gây nhiễm virút sử lý enzyme và tiến hành phản ứng ngưng kết hồng cầu gà.
− Ghi kết quả các nồng ñộ pha loãng.
− Tính toán liều gây nhiễm 50% (EID50) theo phương pháp Reed -Muench .