Nghiên cứu nhân giống in vitro cây hoa ban bauhinia variegata

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN TIẾN DŨNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA BAN (BAUHINIA VARIEGATA L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS TS Chu Hoàng Mậu Thái Nguyên, năm 2014 i Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN TIẾN DŨNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA BAN (BAUHINIA VARIEGATA L.) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học M· sè: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Mậu THÁI NGUYÊN - 2014 ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khoa học Tác giả Đồn Tiến Dũng iii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành Bản luận văn thạc sĩ Công nghệ sinh học Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Di truyền học & Sinh học đại, khoa Sinh – K , Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, cảm ơn bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua - Tác giả Đoàn Tiến Dũng iv Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ i Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục từ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY HOA BAN (Bauhinia variegata L.) 1.1.2 Chi Bauhinia 1.1.3 Vai trò Ban đời sống 10 1.2 IN VITRO 10 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thức vật 10 1.2.2 Các nhân tố ảnh hưởng tới trình ni cấy mơ tế bào thực vật 12 IN VITRO 16 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro giới 16 1.3.2 Nhân giống thân gỗ phương pháp in vitro Việt Nam 18 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 21 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 21 v Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 21 2.1.3 Phạm vi nghiên cứu 22 2.1.4 Địa điểm, thời gian tiến hành nghiên cứu 22 22 2.2.1 Giai doạn tạo mẫu vô trùng 24 2.2.2 Giai đoạn nhân nhanh 24 2.2.3 Giai đoạn hoàn chỉnh 28 Chƣơng 3: 32 32 IN VITRO CÂY BAN 33 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng k 33 36 IN VITRO 38 đến khả kéo dài chồi rễ Ban 38 nuôi cấy mô 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 Kết luận 44 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 vi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CT : Công thức BAP : Benzyladenin DNA : Deoxyribonucleic Acid Đ/C : Đối chứng K : Kinetin (6- Furfurylaminopurine) IAA : Indole -3- acetic acid NAA : α -Napthalene acetic acid THT : Than hoạt tính TN : Thí nghiệm CV : Sự sai khác công thức LSD : Độ tin cậy thí nghiệm v DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng nồng độ Javen đến ty lệ tạo mẫu nấm, vi khuẩn sau 15 ngày nuôi cấy 32 Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng Kinetin đến hệ số nhân nhanh chất lượng chồi Ban sau 45 ngày 34 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP đến trình nhân nhanh chất lượng chồi Ban sau 45 ngày 35 Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng Kinetin đến nhân nhanh, chất lượng chồi từ nách mầm hạt Ban sau 45 ngày 36 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng BAP đến hệ số nhân nhanh chất lượng chồi từ nách mầm hạt Ban sau 45 ngày 37 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả kéo dài chất lượng chồi Ban sau 45 ngày 39 Bảng 4.7 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chất lượng rễ chồi Ban sau 45 ngày kể từ ngày nuôi cấy 39 Bảng 4.8 Kết ảnh hưởng loại giá thể thích hợp đến khả sống, sinh trưởng Ban nuôi cấy mô sau 60 ngày ni cấy tính từ giai đoạn tiền chồi sau 30 ngày đưa vườn 41 vi DANH MỤC HÌNH 36 3.2 38 3.3 chồi Ban 40 Hình 3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sống Ban nuôi cấy mô 41 in vitro 42 in vitro 43 vii MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây Ban trắng (Bauhinia variegate L.) có nguồn gốc Đơng Nam Á phát triển trải dài từ Ấn Độ đến Trung Quốc Tuy có kích thước nhỏ Ban loại phổ biến trồng để ngăn cản hiệu ứng nhà kính Ấn Độ [8] Ban trắng (Bauhinia variegate L.) loại ban sinh trưởng phát triển mạnh khu vực Tây Bắc Việt Nam, rụng theo mùa có hoa màu trắng Cây Ban có khả thích nghi tốt, sinh trưởng tốt đất, không chịu nghèo dinh dưỡng Đã chọn trồng số tuyến đường Hà Nội từ đầu năm 1960 [19] Hoa Ban cịn có tác dụng làm thuốc, ban dùng để chống khuẩn tốt sử dụng làm thực phẩm Ngoài màu sắc kiểu dáng hoa đẹp, Ban cịn có giá trị loại thảo mộc, đặc trưng núi rừng Tây Bắc [19] Nhưng nạn phá rừng bừa bãi, đốt rừng làm nương rẫy làm giảm đáng kể số lượng quần thể thực vật Dù khả sinh sản mức cao khả phát tán nảy mầm hạt kém, việc nhân giống phương pháp thủ công gieo hạt, dâm cành, chiết cành… đạt hiệu nhân không cao Hiện việc ứng dụng công nghệ sinh học vào sản xuất phổ biến Việt Nam việc sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng triệt để, nhằm nhân nhanh giống quý có giá trị với số lượng lớn, chất lượng cao Xuất phát từ phân tích trên, chúng tơi lựa chọn đề tài luận văn thạc sĩ là: “Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa Ban (Bauhinia variegata L.)” in vitro 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Thúy Hà (2003), Giáo trình Cơng Nghệ Sinh học, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nxb Y học, TP HCM Nguyễn Thành Danh, Lê Xuân Đắc, Lê Thị Xuân (2005), “Kết bước đầu nhân giống in vitro Vù hương (Cinamomum balansae Lecomte.) kỹ thuật nuôi cấy phơi hạt xanh góp phần bảo tồn đa dạng sinh học” Những vấn đề nghiên cứu Khoa học Sự sống, báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc 2005, Nxb Khoa học Kỹ thuật: 450-453 Lê Xuân Đắc, Hà Hồng Hải, Đào Thị Thu Hà, Nguyễn Thanh Danh, Lê Thị Xuân, Nông Văn Hải, Lê Trần Bình (2004) “Nhân nhanh bảo tồn Màng tang (Litsea verticillata) tìm thấy Vườn Quốc gia Cúc Phương kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật” Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 2(4): 479-486 Lê Văn Tường Huân, 2012, “Nghiên cứu nuôi cấy mơ bao báp (Adansonia grandidieri L.)”, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, Tập 75A, Số 6, (2012), 165-174 Lê Văn Hồng (2007), Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật, Nxb Khoa học Kỹ thuật Dương Mộng Hùng (1993), “Chọn trội nhân giống ni cấy mơ tế bào cho hai lồi Bạch đàn E camaldulensis E Urophylla”, Báo cáo đề tài, Đại học Lâm nghiệp, Hà Nội Phạm – Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam (quyển I, II, III), Nxb Trẻ 46 Nguyễn Như Khanh (2006), Sinh học phát triển thực vật, Nxb Giáo dục Hà Nội 10 Lê Đình Khả cộng (2003), Chọn tạo nhân giống cho số loài trồng chủ yếu Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 11 Lê Đình Khả, Dương Mộng Hùng (2003), Giống rừng, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội 12 Lê Đình Khả (2006), Lai giống rừng, Nxb nông nghiệp Hà Nội, tr 154 – 161 13 Nguyễn Hoàng Lộc (2007), Nhập môn công nghệ sinh học, Nxb Đại Học Huế 14 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, tr 526-527 15 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thuỷ Tiên (2006), Công nghệ tế bào, Nxb Đại Học Quốc gia Hồ Chí Minh 16 Đồn Thị Mai cộng (2000), “Kết bước đầu nhân giống Bạch đàn phương pháp nuôi cấy mơ phân sinh”, Tạp chí Lâm nghiệp, (số 10/2000), tr 46 – 47 17 Đoàn Thị Mai cộng (2005), “Bước đầu ứng dụng công nghệ mô – hom nhân giống Trầm hương”, Tạp chí NN&PTNT (số 2), tr 57 – 67 18 Nguyễn Hoàng Nghĩa (2006), Một số loài bị đe dọa Việt Nam, Nxb Nơng Nghiệp Hà Nội 19 Hồng Thị Sản (2009), Phân loại học thực vật, Nxb Giáo dục 20 Lưu Trường Sinh, Hoàng Văn Lương (2005), “Nghiên cứu hoàn thiện qui trình nhân giống Trinh nữ hồng cung phương pháp in vitro” 47 Những vấn đề nghiên cứu Khoa học Sự sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc 2005, Nxb Khoa học Kỹ thuật 21 Nguyễn Đức Thành ( 2000), Nuôi mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 22 Nguyễn Quang Thạch, (1995), Công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 23 Nguyễn Quang Thạch, (2000), Giáo trình sinh lý thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 24 Nguyễn Văn Uyển (1996), Những phương pháp công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông Nghiệp TPHCM 25 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 26 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học (tập 2), Nxb Giáo dục Hà Nội 27 Lê Thị Xuân, Schemluck M, Mai Văn Trì (1996) “Cây Thơng đỏ Lâm Đồng (Taxus walli chiana) nguồn nguyên liệu quí để sản xuất thuốc chữa ung thư nhóm Taxoid”, Tạp chí hóa học, 34(1): 80-81 Tiếng Anh 28 Balaraju K, Agastian P, Preetamraj JP, Arokiyaraj S, Ignacimuthu S (2008), Micropropagation of Vitex agnus catus (Verbenaceae) A valuable medicinal plant, In vitro Cellular and Developmental Biology Plant, 44(5): 436-441 29 Bangaru NT, Nageswara RS, Sarada MN, Jagan MYSYV, Sudhakar P (2010), Conservation of an endangered medicinal plant Centella asiatica through Plant Tissue culture, Drug Invention Today, 2(1): 17-21 48 30 Bedir E, Lata H, Schaneberg B, Khan IA, Morase RM (2003), Micropropagation of Hydrastis canadensis: Goldenseal a North American endangered species, Planta Med: 86-88 31 Chan LK, Lim SY, Pan LP (2009), Micropropagation of Gynura procumbens (Lour.) Merran important medicinal plant, Journal of Medicinal Plants, 3(3): 105-111 32 Dibax R, Eisfeld CL, Cuquel FL, Koehler H, Quoirin M (2005), Plant regeneration from cotyledonary explants of Eucalyptus camaldulensis, Science Agriculture, 62: 406-412 33 Geetha SP, Raghu AV, Martin G, George S, Balachandran I (2009), In vitro Propagation of Two Tuberous Medicinal Plants: Holostemma adakodien and Ipomoea mauritianaProtocols for In vitro Cultures and Secondary Metabolite Analysis of Aromatic and Medicinal Plants, Springer Protocols, (547)7: 81-92 34 George EF (1993), Plant propagation by tissue culture (2), Exegetics Ltd, Edin 35 Guillaumin A (1912), Rutacéae, Flore Gesnesneerale de L Indo-chine 36 Hoang VD, Tan GT, Zhang HJ, Tamex PA, Hung NV, Cuong NM, Soejarto DD, Fong HH, Pezzuto JM (2002), Natural anti - HIV agents part I : (+)- demethoxyepiexcelsin and verticillatol from Litsea verticillata, Phytochemistry, 59(3): 325-329 37 Hussain MT, Chandrasekhar T, Rama GG (2008), In vitro propagation of Crotalaria verrucosa L animportant ethnobotanical plant, Journal of Medicinal Plants, 2(9): 242-245 49 PHỤ LỤC Phụ lục Kết xử lý số liệu BALANCED ANOVA FOR VARIATE NHIEM FILE IRRISTAT 12/ 4/** 14:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng tới hiệu khử trùng hạt ban VARIATE V003 NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 20589.3 6863.11 667.61 0.000 * RESIDUAL 82.2408 10.2801 * TOTAL (CORRECTED) 11 20671.6 1879.23 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE IRRISTAT 12/ 4/** 14:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng tới hiệu khử trùng hạt ban VARIATE V004 CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 19100.3 6366.78 ****** 0.000 * RESIDUAL 36.6304 4.57880 * TOTAL (CORRECTED) 11 19137.0 1739.72 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 14:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng tới hiệu khử trùng hạt ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 NHIEM 100.000 76.5400 12.3433 2.46667 CHET 100.000 100.000 11.1067 32.0933 SE(N= 3) 1.85114 1.23542 5%LSD 8DF 6.03637 4.02858 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 14:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng tới hiệu khử trùng hạt ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NHIEM CHET GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 47.838 12 60.800 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 43.350 3.2063 3.5 0.0000 41.710 2.1398 3.5 0.0000 50 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCHOI FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:40 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban VARIATE V003 SCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 256.000 51.2000 76.80 0.000 * RESIDUAL 12 8.00000 666666 * TOTAL (CORRECTED) 17 264.000 15.5294 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HESO FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:40 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban VARIATE V004 HESO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.13247 226493 79.16 0.000 * RESIDUAL 12 343335E-01 286112E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.16680 686353E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:40 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 SCHOI 15.6667 16.3333 18.3333 22.3333 25.6667 23.6667 HESO 1.04667 1.09000 1.22333 1.49000 1.71000 1.58000 SE(N= 3) 0.471404 0.308821E-01 5%LSD 12DF 1.45256 0.951584E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:40 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SCHOI HESO GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 20.333 18 1.3567 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.9407 0.81650 4.0 0.0000 0.26198 0.53489E-01 3.9 0.0000 51 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCHOI FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban VARIATE V003 SCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 917.167 183.433 300.16 0.000 * RESIDUAL 12 7.33336 611113 * TOTAL (CORRECTED) 17 924.500 54.3824 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HESO FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban VARIATE V004 HESO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.06329 812659 208.67 0.000 * RESIDUAL 12 467334E-01 389445E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 4.11003 241766 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 SCHOI 15.0000 21.0000 29.3333 31.6667 35.0000 33.0000 HESO 1.00000 1.39000 1.93333 2.11000 2.33333 2.19000 SE(N= 3) 0.451336 0.360298E-01 5%LSD 12DF 1.39072 0.111020 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 13:34 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SCHOI HESO GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 27.500 18 1.8261 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.3744 0.78174 2.8 0.0000 0.49170 0.62406E-01 2.8 0.0000 52 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCHOI FILE IRRISTAT 12/ 4/** 23:50 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban VARIATE V003 SCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 545.333 109.067 196.32 0.000 * RESIDUAL 12 6.66672 555560 * TOTAL (CORRECTED) 17 552.000 32.4706 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE IRRISTAT 12/ 4/** 23:50 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.70018 1.34004 199.35 0.000 * RESIDUAL 12 806663E-01 672219E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.78085 398874 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 23:50 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 SCHOI 19.0000 19.6667 24.0000 33.6667 30.3333 29.3333 HSNC 2.11000 2.18333 2.66000 3.73333 3.36667 3.25667 SE(N= 3) 0.430333 0.473364E-01 5%LSD 12DF 1.32600 0.145859 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 23:50 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SCHOI HSNC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 26.000 18 2.8850 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.6983 0.74536 2.9 0.0000 0.63156 0.81989E-01 2.8 0.0000 53 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCHOI FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:56 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban VARIATE V003 SCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1574.94 314.989 708.71 0.000 * RESIDUAL 12 5.33342 444452 * TOTAL (CORRECTED) 17 1580.28 92.9575 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HESO FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:56 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban VARIATE V004 HESO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 19.4602 3.89203 723.70 0.000 * RESIDUAL 12 645354E-01 537795E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 19.5247 1.14851 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:56 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 SCHOI 17.6667 18.3333 23.3333 33.0000 41.6667 37.6667 HESO 1.96333 2.03667 2.59667 3.67000 4.63333 4.18333 SE(N= 3) 0.384903 0.423397E-01 5%LSD 12DF 1.18602 0.130463 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:56 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chất lượng chồi bật phôi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SCHOI HESO GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 28.611 18 3.1806 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.6414 0.66667 2.3 0.0000 1.0717 0.73335E-01 2.3 0.0000 54 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE NSUAT FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:19 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả kéo dài chất lượng chồi Ban VARIATE V003 NSUAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 27.1528 5.43056 214.83 0.000 * RESIDUAL 12 303334 252778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 27.4561 1.61507 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:19 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả kéo dài chất lượng chồi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 NSUAT 2.43333 2.48333 3.21667 4.78333 5.65000 4.66667 SE(N= 3) 0.917929E-01 5%LSD 12DF 0.282845 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:19 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả kéo dài chất lượng chồi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NSUAT GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 3.8722 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2709 0.15899 4.1 0.0000 55 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE NSUAT FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:26 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chất lượng rễ chồi Ban VARIATE V003 NSUAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 393.778 78.7556 177.20 0.000 * RESIDUAL 12 5.33335 444445 * TOTAL (CORRECTED) 17 399.111 23.4771 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:26 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chất lượng rễ chồi Ban MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 NSUAT 1.33333 10.3333 13.3333 14.6667 15.0000 12.6667 SE(N= 3) 0.384901 5%LSD 12DF 1.18601 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 10:26 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chất lượng rễ chồi Ban F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NSUAT GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 11.222 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.8453 0.66667 5.9 0.0000 56 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SONG FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:44 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng Ban nuôi cấy mô VARIATE V003 SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 266.889 133.444 57.19 0.000 * RESIDUAL 14.0000 2.33334 * TOTAL (CORRECTED) 280.889 35.1111 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:44 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng Ban nuôi cấy mô VARIATE V004 CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 266.889 133.444 57.19 0.000 * RESIDUAL 14.0000 2.33334 * TOTAL (CORRECTED) 280.889 35.1111 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TYLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:44 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng Ban nuôi cấy mô VARIATE V005 TYLE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2965.74 1482.87 57.20 0.000 * RESIDUAL 155.533 25.9222 * TOTAL (CORRECTED) 3121.27 390.159 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:44 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng Ban nuôi cấy mô MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 SONG 27.6667 20.6667 14.3333 CHET 2.33333 9.33333 15.6667 TYLE 92.2233 68.8867 47.7767 SE(N= 3) 0.881918 0.881918 2.93951 5%LSD 6DF 3.05070 3.05070 10.1683 - 57 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 12/ 4/** 12:44 PAGE Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng Ban nuôi cấy mô F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SONG CHET TYLE GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 20.889 9.1111 69.629 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.9255 1.5275 7.3 0.0003 5.9255 1.5275 7.3 0.0003 19.752 5.0914 7.3 0.0003 58 | | | | Phụ lục Môi trƣờng MS Bottle I II III Component NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4 7H2O 37,0 MgSO4 4H2O 2,23 ZnSO4 7H2O 1,058 CuSO4 5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44,0 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 KH2PO4 IV H3BO3 Na2MoO4.2H2O V Amount to Take Preparation (ml) Stock Solution (g/l) 20 0,025 FeSO4 7H2O 2,784 Na2EDTA 2H2O 3,724 1.650,0 1.900,0 370,0 10 10 22,3 10,6 0,83 0,025 17,0 0,62 Final concentratic (mg/ l) 170,0 10 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 ThiamineHCl 100 0,1 0,1 PyridoxineHCl 100 0,5 0,5 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 PH 5,8 59 ... TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN TIẾN DŨNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA BAN (BAUHINIA VARIEGATA L.) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học M· sè: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người... (Bauhinia variegata L.)” Mục tiêu nghiên cứu Xác định quy trình nhân giống in vitro hoa Ban (Bauhinia variegata L.) ậ Nội dung nghiên cứu 3.1 Tối ưu phương pháp khử trùng tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Ban. .. Như vậy, lượng chồi Ban in vitro ảnh hưởng tới hệ số nhân chất 3.1) 35 3.1 nh hƣởng kinetin 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng kinetin Ban ghiên cứu ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả nhân chất lượng chồi