Xác định hoạt tính sinh học và khả năng bảo quản thịt lợn của tinh dầu vỏ quả hồng bì

The ability to preserve pork meat of Clausena lansium (Lour.) Skeels peel oil is rated with the used concentration of 2%; the storage time is 4 days at a temperature of 15°C.. Key wo[r]

XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG BẢO QUẢN THỊT LỢN CỦA TINH DẦU VỎ QUẢ HỒNG BÌ

DETERMINATION OF BIOLOGICAL ACTIVITY AND ABILITY TO PRESERVE PORK MEAT OF CLAUSENA LANSIUM (LOUR.) SKEELS PEEL OIL

Nguyễn Văn Lợi

Trường Đại học Cơng nghiệp Hà Nội; loichebien@yahoo.com Tóm tắt - Trong vỏ hồng bì có khoảng 0,4 - 0,5% tinh dầu,

thành phần chủ yếu tinh dầu vỏ hồng bì β-pinene, terpinolene, α-humulene, α-terpineol Mục đích nghiên cứu xác định số hoạt tính sinh học khả ứng dụng tinh dầu vỏ hồng bì Thí nghiệm tiến hành với công thức sau: CT-ĐC: 0% tinh dầu, CT-A: 1% tinh dầu, CT-B: 2% tinh dầu, CT-C: 3% tinh dầu Đã xác định khả kháng khuẩn, chủng Escherichia coli nồng độức chế tối thiểu tinh dầu vỏ hồng bì 128µg/ml, chủng Salmonella typhi,

Staphylococcus aureus và Bacillus cereus nồng độức chế tối thiểu tinh dầu vỏ hồng bì 256µg/ml Bên cạnh xác định khả quét gốc tự tinh dầu vỏ hồng bì, với giá trị IC50 = 6,15 ± 0,01μg/ml Đã xác định khả bảo quản thịt lợn tinh dầu vỏ hồng bì, với nồng độ sử dụng 2%, thời gian bảo quản ngày nhiệt độ 15oC

Abstract - In Clausena lansium (Lour.) Skeels peel there is about 0.4-0.5% of oil; the major components of the oil are β-pinene, terpinolene, α-humulene, α-terpineol The purpose of this study is to determine biological activity and usability of Clausena lansium

(Lour.) Skeels peel oil Experiments are conducted with the following formula 4: CT-ĐC: 0% the oil, CT-A: 1% the oil, CT-B: 2% the oil and CT-C: 3% the oil Antibacterial ability is identified for strains of Escherichia coli with minimum inhibitory concentration of

Clausena lansium (Lour.) Skeels peel oil of 128µg/ml Strains such as Salmonella typhi, Staphylococcus aureus and Bacillus cereus

have minimum inhibitory concentration of Clausena lansium (Lour.) Skeels peel oil of 256µg/ml The ability of free radical scavenger of

Clausena lansium (Lour.) Skeels peel oil is determined with IC50= 6.15 ± 0.01μg/ml The ability to preserve pork meat of Clausena lansium (Lour.) Skeels peel oil is rated with the used concentration of 2%; the storage time is days at a temperature of 15°C Từ khóa - bảo quản thịt lợn; tiêu cảm quan; tiêu hóa sinh;

hoạt tính sinh học; tinh dầu vỏ hồng bì

Key words - preserve pork meat; organoleptic indicators; biochemical indicators; biological activity; Clausena lansium (Lour.) skeels peel oil

1.Mở đầu

Cây hồng bì có tên khoa học Clausenalansium (Lour.) Skeels, thuốc y học dân gian, sử dụng đểđiều trị bệnh cảm lạnh, sốt, đau dày, viêm xoang Ngồi việc sử dụng để làm thuốc, hồng bì sử dụng đểăn làm gia vị thực phẩm Cây hồng bì trồng nhiều tỉnh Bắc Giang, Hịa Bình, Sơn La, Lào Cai, Lạng Sơn, Phú Thọ, Trong hồng bì có chứa nhiều thành phần hóa học, đặc biệt tinh dầu Trong hồng bì có khoảng 0,4- 0,5% tinh dầu, tinh dầu hồng bì chủ yếu thành phần β-pinene, terpinolene, α-humulene, α-terpineol [1] Tinh dầu hồng bì có mùi thơm đặc trưng, có vai trị quan trọng ngành công nghiệp thực phẩm, dược phẩm mỹ phẩm [1] Hiện nước có cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học khả ứng dụng tinh dầu vỏ hồng bì bảo quản thịt Mục đích nghiên cứu xác định số hoạt tính sinh học khả ứng dụng tinh dầu vỏ hồng bì, góp phần làm sở khoa học cho việc ứng dụng tinh dầu công nghiệp thực phẩm

2.Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.Nguyên vật liệu

Vỏ hồng bì thu mua huyện Yên Thế - tỉnh Bắc Giang, tách tinh dầu phương pháp chưng cất lôi nước làm khan natrisunfat Tinh dầu vỏ hồng bì sử dụng để bảo quản thịt lợn có mùi thơm đặc trưng, suốt có màu vàng nhạt [2] Thí nghiệm sử dụng chủng vi khuẩn Viện Vi sinh vật Công nghệ Sinh học cung cấp: Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, Salmonella typhi và Bacillus cereus Thịt lợn mua lị mổở huyện Đơng Anh - Hà Nội Sử dụng thịt lợn khỏe mạnh, để lấy mẫu thịt, dùng dao inox thớt gỗ nghiến khử trùng nước sôi, mẫu thịt sau lấy, bao gói bao bì polyetylen đựng thùng xốp có chứa nước đá để vận chuyển nơi bảo quản Mỗi mẫu bảo quản sử dụng 1.500g thịt lợn chia thành miếng, miếng có trọng lượng 300g

2.2.Phương pháp nghiên cứu

2.2.1.Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu phương pháp đo đường kính vòng kháng khuẩn

Chuẩn bị dịch vi khuẩn: Cấy ria tạo khuẩn lạc môi trường thạch MHA, vi khuẩn tồn trữ ống thạch nghiêng bảo quản lạnh 4oC Từống tồn trữ, chọn 2-3 khuẩn lạc đưa vào ống nghiệm chứa 5ml môi trường TSB khử trùng, nuôi cấy 37oC, với thời gian 24 giờ Mật độ vi khuẩn sau nuôi cấy môi trường TSB xác định theo phương pháp đo mật độ quang (OD) bước sóng 625nm

cơng thức: D – d = BK (mm) [3], với D: đường kính vịng kháng khuẩn (mm), d: đường kính lỗ khoan thạch (mm) 2.2.2.Phương pháp khảo sát nồng độức chế tối thiểu tinh dầu

Khảo sát nồng độức chế tối thiểu MIC theo phương pháp hòa tan môi trường lỏng TSB, pha dung dịch đối chứng tinh dầu thành dãy nồng độ cần thử Dãy nồng độ cần thử 128µg/ml, 256µg/ml, 512µg/ml, 1.024µg/ml, 2.048µg/ml, 4.096µg/ml 8.192µg/ml Dùng pipet hút tinh dầu pha lỗng theo dãy nồng độ thử dung dịch đối chứng vào ống nghiệm chuẩn bị sẵn môi trường, lắc cho tinh dầu cho dung dịch đối chứng hịa tan vào mơi trường Dùng pipet hút 20µl dịch vi khuẩn chuẩn bịđưa vào ống nghiệm, nuôi 37oC, với thời gian 24 Nồng độ ức chế tối thiểu MIC tính ống nghiệm có nồng độ tinh dầu thấp có thểức chế phát triển vi khuẩn So sánh với ống nghiệm trước đem nuôi, ống nghiệm đục chứng tỏở nồng độ tinh dầu vi khuẩn phát triển, ống nghiệm chứng tỏở nồng độ tinh dầu vi khuẩn khơng phát triển Ở nồng độ thấp vi khuẩn khơng phát triển ghi kết (≤), trường hợp đến nồng độ cao mà thấy vi khuẩn mọc kết ghi (>) [3]

2.2.3.Phương pháp xác định khả chống oxy hóa tinh dầu vỏ hồng bì

Khả chống oxy hóa tinh dầu vỏ hồng bì thực theo phương pháp DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) sau: Mẫu thí nghiệm gồm 0,1 ml tinh dầu vỏ hồng bì, 2ml ethyl acetat, 1,9ml methanol 1ml DPPH Mẫu trắng gồm 0,1ml tinh dầu vỏ hồng bì, 2ml ethyl acetat 2,9ml methanol Mẫu kiểm chứng gồm 2ml ethyl acetat, 2ml methanol 1ml DPPH Hỗn hợp sau phối trộn lắc nhẹ để yên bóng tối nhiệt độ phòng 30 phút, đo độ hấp thụ bước sóng 517nm Thí nghiệm lặp lại lần tính cơng thức SC% = [(Ao-(A-Ab)/Ao] × 100 % [4], SC: hoạt tính qt gốc tự (%), Ao: độ hấp thụ mẫu kiểm chứng, A: độ hấp thụ mẫu thí nghiệm, Ab: độ hấp thụ mẫu trắng

Giá trị IC50 tính theo hoạt tính quét gốc tự tương quan với nồng độ khác tinh dầu vỏ hồng bì, thí nghiệm lặp lại với n=3 Phương trình biểu diễn mối liên quan nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì %DPPH bị khử y = 405,1x - 1,602 Từ giá trị IC tinh dầu vỏ hồng bì có nồng độ pha lỗng khác nhau, phương pháp nội suy tính giá trị IC50

2.2.4.Phương pháp bố trí thí nghiệm

Sử dụng tinh dầu vỏ hồng bì để bảo quản thịt lợn nồng độ 0%, 1%, 2% 3%, thí nghiệm bố trí sau:

T

T Thành phần (%)

Cơng thức thí nghiệm

CT-ĐC CT-A CT-B CT-C

1 Thịt lợn 100 99 98 97

2 Tinh dầu

Ghi chú: CT-ĐC: Công thức đối chứng, 0% tinh dầu, CT-A: 1% tinh dầu, CT-B: 2% tinh dầu, CT-C: 3% tinh dầu Các công thức

này thực nhiệt độ 15oC

Tiến hành thí nghiệm: Thịt lợn trước đưa vào bảo quản xát muối bề mặt, với nồng độ muối 2% so với khối lượng thịt lợn để khử khuẩn, sau dùng xi-lanh tiêm tinh dầu vỏ hồng bì vào miếng thịt phun tinh dầu lên bề mặt miếng thịt này, bao gói kín bao bì polyetylen đưa vào tủ lạnh, điều chỉnh nhiệt độ 15oC Sở dĩ chọn nhiệt độ 15oC để bảo quản nhiệt độ trung bình vào mùa đơng miền Bắc năm gần khoảng 15oC Sau đó phân tích, đánh giá chất lượng sản phẩm thịt lợn cơng thức tìm cơng thức phù hợp để bảo quản

2.2.5.Phương pháp phân tích tiêu hóa sinh Xác định hàm lượng protein thịt lợn theo tiêu chuẩn TCVN 8134:2009 [5], hàm lượng lipid xác định theo tiêu chuẩn TCVN 8137: 2009 [6] Hàm lượng chất khoáng xác định theo phương pháp đặc trưng nguyên tố: P xác định theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 7141:2002 [7] K, Fe xác định theo phương pháp đo hấp thụ nguyên tử máy AAS-3300 (Perkin Elmer), Ca, Mg xác định phương pháp chuẩn độ EDTA, S xác định theo phương pháp khối lượng, Zn, Mn, Cu xác định theo TCVN 1537: 2007 (ISO 06869: 2000) [8]

2.2.6.Phương pháp phân tích tiêu vi sinh

Tổng số vi khuẩn hiếu khí xác định theo tiêu chuẩn TCVN 7928:2008 [9], Coliforms theo tiêu chuẩn TCVN 6848:2007 [10], Escherichia coli theo tiêu chuẩn TCVN 9976:2013 [11], Clostridium perfringers theo tiêu chuẩn TCVN 4991: 2005 [12], Staphylococcus aureus theo tiêu chuẩn TCVN 4830-1:2005 [13] Salmonella theo tiêu chuẩn TCVN 4829:2005 [14]

hội đồng nhận phiếu đánh giá, mẫu thịt lợn mã hóa chữ in hoa, sau đánh giá điền kết vào phiếu Sau lần đánh giá mẫu, thành viên phải sử dụng nước lọc để vị trước đánh giá mẫu

3.Kết thảo luận

3.1.Hoạt tính sinh học của tinh dầu vỏ quả hồng bì 3.1.1.Khả kháng khuẩn tinh dầu vỏ hồng bì

Tiến hành khảo sát khả kháng khuẩn tinh dầu vỏ hồng bì nồng độ 128µg/ml, 256µg/ml, 512µg/ml, 1.024µg/ml, 2.048µg/ml, 4.096µg/ml 8.192µg/ml chủng vi khuẩn thí nghiệm sau: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi và Bacillus cereus Kết quảđược trình bày bảng

Bảng Khả kháng khuẩn tinh dầu vỏ hồng bì

TT Chủng vi khuẩn thí nghiệm

Đường kính vịng trịn kháng khuẩn

(mm)

Nồng độ ức chế tối thiểu MIC (µg/ml)

1 Escherichia coli 46,05 128

2 Salmonella typhi 39,15 256 Staphylococcus

aureus

38,12 256

4 Bacillus cereus 36,20 256

Kết nghiên cứu bảng cho thấy tinh dầu vỏ hồng bì có khả kháng khuẩn mạnh chủng vi khuẩn thí nghiệm Đường kính vịng trịn kháng khuẩn chủng Salmonella typhi 39,15mm, Staphylococcus aureus 38,12mm, Bacillus cereus là 36,20mm Tinh dầu vỏ hồng bì có tác dụng mạnh chủng vi khuẩn Escherichia coli,đường kính vịng trịn kháng khuẩn đo lớn 46,05mm Tiến hành xác định nồng độức chế tối thiểu MIC cho tất chủng vi khuẩn thí nghiệm, kết khảo sát cho thấy MIC tinh dầu vỏ hồng bì chủng Escherichia coli là 128µg/ml, chủng Salmonella typhi, Staphylococcus aureus và Bacillus cereus 256µg/ml 3.1.2.Hoạt tính qt gốc tự DPPH tinh dầu vỏ quả hồng bì

Hoạt tính qt gốc tự DPPH tinh dầu vỏ hồng bì thực phịng thí nghiệm Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Tiến hành khảo sát nồng độ khác nhau, kết quảđược trình bày bảng

Bảng Hoạt tính quét gốc tự DPPH tinh dầu vỏ hồng bì

T T

Nồng độ (µg/ml)

%DPPH bị khử Tinh dầu vỏ

hồng bì Vitamin E

1 0,06 22,12 89,15

2 0,05 15,58 67,83

3 0,04 12,25 52,35

4 0,03 8,63 32,64

5 0,02 5,15 18,72

Hoạt tính quét gốc tự DPPH tinh dầu vỏ hồng bì xác định thông qua giá trị IC50 thể qua bảng

Bảng Giá trị IC50 tinh dầu vỏ hồng bì vitamin E

TT Mẫu IC50 (µg/ml)

1 Tinh dầu vỏ hồng bì 6,15 ± 0,01

2 Vitamin E 4,21 ± 0,02

Kết bảng cho thấy vitamin E trung hòa 50% gốc tự DPPH nồng độ IC50= 4,21± 0,02µg/ml, tinh dầu vỏ hồng bì trung hịa 50% gốc tự DPPH nồng độ IC50= 6,15± 0,01µg/ml Như vậy, tinh dầu vỏ hồng bì có hoạt tính qt gốc tự nhỏ vitamin E dùng để khảo sát thí nghiệm Tính dầu vỏ hồng bì có hoạt tính qt gốc tự 68,45% so với vitamin E Điều chứng tỏ hoạt tính kháng oxy hóa tinh dầu vỏ hồng bì cao

3.2.Ảnh hưởng của nồng độ tinh dầu vỏ quả hồng bì đến sự biến đổi chất lượng của thịt lợn

3.2.1.Ảnh hưởng nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì đến sự biến đổi tiêu hóa sinh thịt lợn

Sử dụng tinh dầu vỏ hồng bì để bảo quản thịt lợn nồng độ 0%, 1%, 2% 3%; nhiệt độ bảo quản 15oC Kết quảđược trình bày bảng

Bảng Ảnh hưởng nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì đến sự biến đổi tiêu hóa sinh thịt lợn

TT hóa sinh Chỉ tiêu (%)

Công thức

CT-T CT-ĐC CT-A CT-B CT-C

1 Protein 19,15 17,96 18,95 19,12 19,12

2 Lipid 6,95 6,75 6,87 6,93 6,92

3 Nước 72,61 69,27 71,86 72,54 72,52

4 Vitamin 0,54 0,44 0,47 0,52 0,51

5 Chất

khoáng

0,16 0,12 0,13 0,15 0,15 Ghi chú: CT-T: Thịt lợn tươi (mới giết mổ)

3.2.2.Ảnh hưởng nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì đến sự biến đổi tiêu vi sinh vật thịt lợn

Để xác định ảnh hưởng tinh dầu vỏ hồng bì tới biến đổi tiêu vi sinh vật thịt lợn, sử dụng tinh dầu với nồng độ 0%, 1%, 2% 3% Kết quảđược trình bày bảng

Bảng 5.Ảnh hưởng tinh dầu vỏ hồng bì đến biến đổi các tiêu vi sinh thịt lợn

Chỉ tiêu vi sinh Giới hạn nhiễm Công thức

CT-T CT-ĐC CT-A CT-B CT-C

Tổng số vi sinh vật hiếu khí (sl/g, ml)

3.105 102 3.105 2.105 105 105

Coliforms (chỉ

số MPN/g, ml) 50 75 65 0

Escherichia coli (sl/g, ml)

3 15 12 0 Clostridium

perfringers (sl/g, ml)

10 20 14 0

Staphylococcus aureus (sl/g,ml)

10 13 12 0 Salmonella

typhi (sl/25g,25ml)

0 0 0

Thịt lợn công thức CT-ĐC công thức CT-A tiêu vi sinh vật như: Tổng vi sinh vật hiếu khí, Coliforms, Escherichia coli, Clostridium perfringers, Staphylococcus aureus và Salmonella typhi đều vượt giới hạn cho phép Trong thịt lợn công thức CT-B CT-C, sau ngày bảo quản nhiệt độ 15oC, chỉ tiêu vi sinh vật đều thấp giới hạn cho phép So với thịt lợn tươi giết mổ lấy thịt từ lợn khỏe mạnh, thịt lợn cơng thức CT-B CT-C có tổng số vi sinh vật hiếu 105, lớn hơn so với thịt lợn tươi, cịn tiêu vi sinh vật khác khơng có thay đổi sau ngày bảo quản, đến ngày thứ tiêu vi sinh vật có thay đổi rõ rệt Điều kết luận tinh dầu vỏ hồng bì nồng độ từ 2-3% có tác dụng ức chế phát triển vi sinh vật thịt lợn

Kết quảđánh giá cảm quan bảng cho thấy, sau ngày bảo quản, thịt lợn công thức CT-ĐC CT-A có cấu trúc bên ngồi mềm nhũn, có nhớt bề mặt, xuất mùi hôi, đặc biệt thịt cơng thức CT-ĐC cịn xuất màu xám, với tổng điểm giá trị cảm quan công thức CT-ĐC 10,18 công thức CT-A 11,12, hai công thức xếp loại Thịt lợn cơng thức CT-B có màu hồng tươi, bề mặt thịt khơng có nhớt, độđàn hồi tốt, thịt có mùi tự nhiên xen lẫn với mùi thơm tinh dầu Thịt công thức CT-B, luộc thịt nước luộc trong, có vị mùi thơm Thịt cơng thức CT-C, luộc thịt nước luộc thịt có mùi thơm, thịt có vị đắng tinh dầu vỏ hồng bì Trong cơng thức cơng thức CT-B đánh giá cao với tổng điểm 16,75 xếp loại khá, thịt lợn công thức CT-C với tổng điểm 16,13 xếp loại Đến ngày thứ thịt lợn công thức CT-B CT-C xuất mùi ôi, vị chua, màu

thâm tím, độđàn hồi giảm có nhớt bề mặt Do để giảm giá thành sản phẩm hạn chế tượng thịt lợn có vịđắng, chọn nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì 2% để bảo quản thịt lợn phù hợp

3.2.3.Ảnh hưởng nồng độ tinh dầu vỏ hồng bì đến sự biến đổi tiêu cảm quan thịt lợn

Cảm quan tiêu quan trọng đểđánh giá chất lượng thịt lợn, tiêu cảm quan xác định theo tiêu chuẩn TCVN 3215-79 Kết quảđánh giá tiêu cảm quan thịt lợn sau ngày bảo quản thể bảng Bảng 6.Ảnh hưởng tinh dầu vỏ hồng bì đến biến đổi

chỉ tiêu cảm quan thịt lợn

Chỉ tiêu cảm quan

CT-ĐC CT-A CT-B CT-C

Cấu trúc 1,96 2,37 3,89 3,87

Thịt mềm nhũn, bề

mặt thịt có nhớt

Thịt mềm nhũn, bề

mặt thịt có nhớt

Thịt có độ đàn hồi tốt, khơng

có nhớt

Thịt có độ đàn hồi tốt,

khơng có nhớt

Màu sắc 2,16 2,29 4,51 4,49

Thịt có màu hồng nhạt xen

lẫn màu xámvà

nhăn

Thịt có màu hồng nhạt

nhăn

Thịt có màu hồng

tươi, bề mặt bình

thường

Thịt có màu hồng tươi, bề mặt bình

thường

Mùi 3,04 3,27 3,72 3,59

Thịt xuất mùi hôi

Thịt xuất mùi

hơi

Thịt có mùi tự nhiên xen

lẫn với mùi thơm đặc trưng tinh

dầu

Thịt có mùi tự nhiên xen lẫn với mùi

thơm đậm tinh dầu

Vị 3,02 3,19 4,63 4,18

Thịt có

vị chua vThị chua ịt có Thngịọt có vt đặc ị trưng

Thịt có vị đắng tinh dầu Tổng

điểm 10,18 11,12 16,75 16,13

Xếp loại Kém Kém Khá Khá

4.Kết luận

bì, nồng độ sử dụng 2%, thời gian bảo quản ngày nhiệt độ 15oC

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Trần Huy Thái, Nguyễn Xuân Phương, “Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu hồng bì dại Clausena excavate Việt Nam”, Tạp chí Dược liệu, 7, 2002, p.41-45

[2] Nguyễn Văn Lợi (2017), “Nghiên cứu quy trình tách chiết tinh dầu vỏ hồng bì Clausena Lansium (lour.) Skeels”, Tạp chí Cơng nghiệp hóa chất, 2, p.15-22

[3] Perez C, Pauli M, Bazevque P, “An antibiotic assay by the agar welldiffusionmethod”, Acta Biologiae et Medicine Experimentalis, 15, 1990, p.113-115

[4] Matook S.M, Fumio H, “Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan (Citrus grandis Osbeck) fruit tissues”, Food Chemistry, 94, 2006, p.529-534

[5] Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8134, Thịt sản phẩm thịt - Xác định hàm lượng protein (phương pháp chuẩn), 2009, p.1-5

[6] Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8137, Thịt sản phẩm thịt - Xác định hàm lượng chất béo tự do, 2009, p.1-6

[7] Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 7141, Thịt sản phẩm từ thịt - Xác

định phốt tổng số (phương pháp quang phổ), 2002, p.1-7 [8] Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 1537, Xác định hàm lượng Ca, Cu, Fe,

Mg, Mn, K, Na Zn - Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử, 2007, p.1-7

[9] Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 7928, Xác định lượng tổng số vi khuẩn hiếu khí phương pháp gel pectin, 2008, p.1-2

[10]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6848, Phương pháp định lượng Coliforms - Kỹ thuật đếm khuẩn lạc, 2007, p.1-6

[11]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 9976, Thịt thủy sản - Định lượng Escherichia coli phương pháp sử dụng đĩa đếm Petrifilm, 2013, p.1-5

[12]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4991, Phương pháp định lượng Clostridium perfringers đĩa thạch - Kỹ thuật đếm khuẩn lạc, 2005, p.1-7

[13]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4830-1, Phương pháp định lượng Staphylococcus có phản ứng dương tính với Coagulase (Staphylococcus aureus loài khác) đĩa, 2005, p.1-7 [14]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4829, Phương pháp phát

Salmonella đĩa thạch, 2005, p.1-10

[15]Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 3215-79, Sản phẩm thực phẩm phân tích cảm quan - Phương pháp cho điểm, 1979, p.1-13