Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phôi người ngày 3 ngày 5 trước đông lạnh và sau rã đông bằng kỹ thuật thủy tinh hóa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y ĐOÀN THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI CẤU TRÚC PHƠI NGƯỜI NGÀY 3, NGÀY TRƯỚC ĐÔNG LẠNH VÀ SAU RÃ ĐÔNG BẰNG KỸ THUẬT THỦY TINH HÓA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHỊNG HỌC VIỆN QN Y ĐỒN THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI CẤU TRÚC PHƠI NGƯỜI NGÀY 3, NGÀY TRƯỚC ĐÔNG LẠNH VÀ SAU RÃ ĐÔNG BẰNG KỸ THUẬT THỦY TINH HÓA Chuyên ngành: Mã số: Mô Phôi thai học 62.72.01.03 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hướng dẫn Khoa học: PGS.TS QUẢN HOÀNG LÂM GS.TS NGUYỄN ĐÌNH TẢO HÀ NỘI - 2013 ĐẶT VẤN ĐỀ Sau trường hợp mang thai thực từ phôi trữ lạnh năm 1983 đến nay, kỹ thuật đông lạnh phôi trở thành phổ biến nhiều trung tâm thụ tinh ống nghiệm nhiều nước giới Tuy nhiên, thực tế cho thấy tỷ lệ phôi làm tổ, tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh thấp so với chuyển phơi tươi, nhiều q trình trữ lạnh làm ảnh hưởng đến chất lượng phôi Nhiều nghiên cứu giới nhằm nâng cao tỷ lệ sống phôi sau rã đông, nâng cao tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh Các kỹ thuật trữ lạnh cải tiến, chia thành nhóm chính: hạ nhiệt độ chậm (slow-freezing) kỹ thuật thuỷ tinh hố (Vitrification) Thủy tinh hóa q trình làm lạnh mẫu nỗn phơi với thời gian nhanh Trong suốt q trình hạ nhiệt độ, tồn khối vật chất bên bên tế bào chuyển thành dạng kính (glass-like), đặc biệt khơng có hình thành tinh thể đá bên mẫu tế bào, tránh tổn thương tinh thể đá gây nên Đây phương pháp đông lạnh đơn giản dễ thực hiện, tiết kiệm thời gian, tiết kiệm nguyên liệu trang thiết bị…đồng thời cho tỷ lệ phôi sống, tỷ lệ phôi làm tổ cao so với phương pháp đông lạnh chậm Hiện nay, đông lạnh thuỷ tinh hoá kỹ thuật trung tâm thụ tinh ống nghiệm khu vực giới nghiên cứu ứng dụng điều trị Tại Việt Nam phương pháp thực bệnh viện phụ sản Từ Dũ vào tháng năm 2006 bước đầu thấy kết tốt Trung tâm Công nghệ Phôi Học viện Quân y bắt đầu thực đông phôi kỹ thuật thuỷ tinh hố từ tháng 11/2006 Đơng lạnh phơi tiến hành giai đoạn phát triển phôi Đông lạnh phôi giai đoạn phôi tiền nhân (ngày 1) gặp khó khăn việc lựa chọn phôi để đông lạnh xác định số lượng phôi để rã đông, đông lạnh phôi giai đoạn phôi phân chia (ngày ngày 3) thường phổ biến nhất, lựa chọn phôi trước sau rã đơng dựa vào tiêu chuẩn hình thái thuận lợi, phơi bào có tính tồn nên bị ảnh hưởng phơi bào thối hóa Phơi giai đoạn kết dính (ngày 4) giai đoạn nhạy cảm khó đánh giá mặt hình thái nên thường không đông lạnh giai đoạn Đông lạnh phôi giai đoạn phôi nang (ngày 5, 6, 7) có lợi giai đoạn phơi phân chia có nhiều tế bào nên việc thối hóa số lượng nhỏ tế bào không ảnh hưởng đến phôi Nhiều nghiên cứu khẳng định đông lạnh phơi ngày có tỷ lệ phơi sống tỷ lệ có thai cao so với phơi ngày ngày [68], [71] Đông phôi giai đoạn phôi nang giúp làm giảm tỷ lệ đa thai, tỷ lệ tạo phôi nang đạt khoảng 50 - 60% Hiện nay, nhiều ý kiến khác kỹ thuật đông lạnh phôi thời điểm thực đông lạnh Cơ sở việc xác định ảnh hưởng qui trình đơng lạnh thời điểm đơng lạnh đến hiệu q trình đơng lạnh phơi việc nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc phơi trước đơng lạnh sau rã đơng Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phơi người ngày 3, ngày trước đông lạnh sau rã đơng kỹ thuật thuỷ tinh hóa” Mục tiêu: Mơ tả biến đổi hình thái cấu trúc phơi ngày 3, ngày trước đông lạnh sau rã đơng kỹ thuật thủy tinh hóa So sánh tỷ lệ phôi sống, tỷ lệ phôi làm tổ tỷ lệ có thai phơi ngày với phơi ngày sau rã đông kỹ thuật thủy tinh hóa CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình vơ sinh giới Việt Nam 1.1.1 Khái niệm vô sinh Vô sinh tình trạng cặp vợ chồng khơng có thai sau năm chung sống, giao hợp bình thường, khơng sử dụng biện pháp tránh thai (WHO, 2000) [7] Đối với trường hợp mà người vợ 35 tuổi thời gian tháng đánh giá vơ sinh Vơ sinh ngun phát, cịn gọi vơ sinh loại I: tình trạng vô sinh cặp vợ chồng mà người vợ chưa có thai lần Vơ sinh thứ phát, cịn gọi vơ sinh loại II: tình trạng vô sinh cặp vợ chồng mà người vợ có thai trước Vơ sinh nữ trường hợp vô sinh nguyên nhân người vợ Vô sinh nam trường hợp vô sinh nguyên nhân người chồng [65], [95] Những trường hợp vô sinh không rõ nguyên trường hợp vô sinh mà khơng tìm thấy ngun nhân gây vơ sinh vợ chồng [31] 1.1.2 Tình hình vơ sinh giới Theo Tổ chức y tế giới năm 2010, tỷ lệ vô sinh chung giới dao động khoảng từ – 13%, tùy theo quốc gia Trong nhóm vơ sinh biết rõ nguyên nhân chiếm tỉ lệ khoảng 80%, lại 20% vô sinh không rõ nguyên nhân Trong số cặp vơ sinh biết rõ ngun nhân tỉ lệ vô sinh nữ chiếm 40%, vô sinh nam chiếm 40%, cịn lại khoảng 20% vơ sinh nam nữ [107] 1.1.3 Tình hình vơ sinh Việt Nam Theo Nguyễn Viết Tiến (2010), tỷ lệ vô sinh chung tồn quốc chiếm 7,7% Trong tỷ lệ vô sinh nguyên phát 3,9%, vô sinh thứ phát 3,8% Tỷ lệ vô sinh Việt Nam có khác biệt vùng sinh thái nhóm cặp vợ chồng khác [11] Xét đặc điểm phân bố nguyên nhân dẫn đến vô sinh theo tác giả nghiên cứu đưa kết khác Theo nghiên cứu Trần Thị Trung Chiến, Trần Văn Hanh, Phạm Gia Khánh cs ngun nhân gây vơ sinh nam chiếm khoảng 40,8% số trường hợp vô sinh [1] Một nghiên cứu khác Nguyễn Khắc Liêu cs thực 1000 cặp vô sinh bệnh viện phụ sản Trung ương tỉ lệ vơ sinh nữ chiếm khoảng 54%, vô sinh nam chiếm khoảng 36%, cịn lại 10% vơ sinh khơng rõ ngun [7] Những số nêu phần cho thấy thực trạng tình hình vơ sinh khơng vấn đề y học, mà ảnh hưởng đến mặt đời sống xã hội 1.2 Quá trình thụ tinh nuôi cấy phôi người 1.2.1 Sự thụ tinh người - Sự thụ tinh kết hợp giao tử đực (tinh trùng) với giao tử (nỗn) tạo thành hợp tử có nhiễm sắc thể lưỡng bội đặc trưng loài - Tinh trùng noãn thụ tinh đĩa cấy (IVF) tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) đánh giá sau 18 – 20 dựa vào hình thành tiền nhân Xét khía cạnh sinh học, thụ tinh liên quan đến bước theo sau:  Sự lựa chọn tinh trùng tham gia trình thụ tinh  Sự xâm nhập tế bào tinh trùng qua lớp vỏ noãn  Sự gắn kết tinh trùng màng bào tương nỗn  Sự hịa hợp nhân dẫn đến việc hình thành nhiễm sắc thể phơi 1.2.2 Ni cấy phơi Sau nỗn tinh trùng thụ tinh tạo thành phơi, phơi có tiền nhân nuôi cấy môi trường IVF, G1 đến ngày thứ tiếp tục nuôi cấy môi trường G2 từ ngày đến ngày Phôi giai đoạn tiền nhân (2PN – phôi ngày 1) phân cắt phơi theo quy luật hồn tồn khơng đồng thời thành tế bào Phơi ngày có từ – tế bào, hình thái phơi đánh giá dựa vào số tế bào, độ đồng phôi bào, tỷ lệ phần trăm mảnh vỡ bào tương Phơi ngày có từ - tế bào, hình thái phơi đánh giá dựa vào số tế bào, độ đồng phôi bào, tỷ lệ phần trăm mảnh vỡ bào tương Phôi ngày (phôi dâu – morula embryo): tế bào liên kết chặt chẽ khơng cịn nhìn thấy ranh giới tế bào, bắt đầu quan sát thấy khoang chứa dịch tế bào Phôi ngày (phôi nang – blastocyst embryo): Phôi dãn rộng, màng suốt dãn mỏng, khoang chứa dịch lớn, phôi có tế bào nụ phơi lớp tế bào ni Sự đánh giá hình thái phơi dựa vào độ dãn rộng phôi, đám tế bào bên (nụ phơi), lớp tế bào ni [39] Hình 1.1 Các mốc thời gian phát triển phôi từ giai đoạn tiền nhân đến giai đoạn phôi nang * Nguồn: Theo Ebner T, 2003 [34] 1.3 Lược sử, nguyên tắc, định phương pháp đông lạnh phôi 1.3.1 Lược sử nghiên cứu đông lạnh phôi Phôi động vật trữ thành công phôi chuột vào năm 1972 (trích dẫn từ [20]) Tiếp sau đó, kỹ thuật trữ phôi phát triển áp dụng cho trữ phôi gia súc Đến năm 1983, phôi người trữ thành công báo cáo Monash, Úc [96] Tại Việt Nam, đứa trẻ đời từ phôi trữ lạnh Bệnh viện Phụ Sản Từ Dũ năm 2002 [14] Trong thời gian ngắn kỹ thuật đông phôi phát triển với quy trình đơng lạnh đơn giản tối ưu hóa Cơng nghệ đơng lạnh áp dụng để lưu trữ giao tử (noãn, tinh trùng), phôi giai đoạn phát triển khác (phôi tiền nhân, phôi phân chia, phôi nang) gần đông lạnh mô buồng trứng Phương pháp đông lạnh kỹ thuật thủy tinh hóa Rall Fahy thực thành cơng lần phơi bị vào năm 1985 [78] Kỹ thuật thực rộng rãi gia súc vào nhiều năm sau Tuy nhiên, quy trình trữ lạnh thủy tinh hóa Kuleshova L ứng dụng noãn người vào năm 1999 sau vài tháng, thực phôi người phát triển giai đoạn phôi nang Ngày 20 tháng năm 1999, em bé giới từ phôi đông lạnh kỹ thuật thủy tinh hóa đời [53] Hiện nay, đông lạnh phôi phương pháp thủy tinh hóa kỹ thuật trung tâm thụ tinh ống nghiệm lớn khu vực giới ứng dụng điều trị bước thay phương pháp hạ nhiệt độ chậm trước Bên cạnh đó, nhà khoa học không ngừng thực kiểm chứng lâm sàng nhằm chứng minh kỹ thuật thật an toàn hiệu người 1.3.2 Nguyên tắc đông lạnh phôi Nguyên tắc đông lạnh làm giảm nhiệt độ môi trường chứa mẫu tế bào hay mẫu mô xuống nhiệt độ -196oC Ở nhiệt độ này, hầu hết hoạt động sinh học bên tế bào gồm phản ứng sinh hóa hoạt đơng trao đổi chất bị ngừng lại Do đó, tế bào sống dạng tiềm sinh (không phát triển) bảo quản thời gian dài Với điều kiện nhiệt độ thấp, phân tử nước, chất hịa tan mơi trường xung quanh, vật chất bên tế bào tồn dạng kết hợp (dạng tinh thể dạng kính) khơng có yếu tố từ mơi trường bên bên ngồi tác động đến tế bào giai đoạn [8], [57] Trong q trình làm lạnh rã đơng, số thay đổi môi trường chứa tế bào thân tế bào ảnh hưởng đến cấu trúc, chức năng, toàn vẹn khả sống phôi sau rã đông Tương tự tế bào khác, phôi bị ảnh hưởng dạng tổn thương xảy khoảng nhiệt độ khác suốt trình làm lạnh rã đông Trong khoảng nhiệt độ từ 15oC đến -5 oC, nhiệt độ lạnh yếu tố gây tổn thương tế bào làm phá hủy giọt lipit bào tương cấu trúc vi ống Từ -5 oC đến -80 oC, hình thành tinh thể đá nội bào ngoại bào nguyên nhân gây tổn thương tế bào, tổn thương xem nguy hiểm tế bào trữ lạnh nói chung phơi nói riêng Ở nhiệt độ từ -50 oC đến -150 oC gây tượng đứt gãy màng suốt màng bào tương Trong q trình rã đơng, dạng tổn thương tế bào xảy q trình đơng lạnh theo trình tự ngược lại Trong quan trọng khả tái kết tinh, hậu xuất lại tinh thể đá nội bào nhiệt độ tăng -120 oC Do đó, q trình rã đơng đa số tác giả cho cẩn phải vượt qua giai đoạn cách nhanh chóng để hạn chế việc gây thêm tổn thương cho tế bào [8], [57] 1.3.2.1 Những thay đổi bên tế bào làm lạnh Để đạt nhiệt độ trữ, tế bào phải làm lạnh từ nhiệt độ sống xuống đến -196oC Quá trình hạ nhiệt độ gây thay đổi môi trường tế bào, có khả ảnh hưởng đến cấu trúc chức tế bào lưu trữ: - Giảm hoạt động enzym: nghiên cứu cho thấy nhiệt độ giảm từ 37oC xuống -7oC, hoạt động enzym giảm lần Tuy nhiên, ảnh hưởng giảm hoạt động enzym lên tế bào chưa sáng tỏ - Giảm độ hòa tan khí mơi trường: bên cạnh khí hịa tan theo nồng độ, môi trường nuôi cấy tế bào thường dùng CO2 làm hệ đệm để cân độ pH mơi trường Khi làm lạnh, khí khơng cịn dạng hịa tan mà tách thành bọt khí có khả làm tổn hại đến tế bào [97] - Hình thành tinh thể nước đá: nước môi trường nuôi cấy để lạnh 0oC (khoảng -5oC đến -15oC) dần kết tinh thành tinh thể nước đá Hiện tượng xảy mơi trường có pha chất hịa tan chất bảo quản lạnh có nhiệt độ đơng đá thấp bình thường Những tinh thể nước đá hình thành bên sát bên tế bào có khả gây tổn thương học lên màng tế bào bào quan [97] - Tăng nồng độ chất hịa tan mơi trường: hậu hình thành tinh thể nước đá Khi nước chuyển sang dạng tinh thể tinh khiết, lượng nước thể lỏng giảm Do đó, nồng độ chất hòa tan tăng lên gây cân áp lực thẩm thấu, kéo nước từ bên tế bào làm tổn thương màng lipoprotein tế bào [16], [106] - Tăng nhiệt độ tiềm ẩn: hậu hình thành tinh thể nước đá Phân tử nước chuyển từ thể lỏng sang thể rắn làm thoát lượng nhiệt Nếu nhiều phân tử nước chuyển sang thể rắn lượng nhiệt đủ lớn để làm thay đổi nhiệt độ môi trường từ vài độ âm lên lại 0oC Thay đổi ảnh hưởng đến chức tế bào sau rã đông [106] 1.3.2.2.Các biện pháp hạn chế tổn thương tế bào làm lạnh * Sử dụng chất bảo quản lạnh: Các môi trường dùng để đông lạnh ln sử dụng hay nhiều hợp chất có tác dụng bảo vệ phôi khỏi hậu bất lợi q trình đơng lạnh Các hợp chất gọi chất bảo quản lạnh hay chất bảo vệ đông lạnh cryoprotectants (CPAs): dimethysulforxide (DMSO), propylene glycol (PG), ethylene glycol (EG) Các chất bảo vệ đơng lạnh nhìn 119 cho thấy tỷ lệ phơi sống, tỷ lệ có thai tỷ lệ phôi làm tổ tương ứng 90,7%,; 34,8%; 18,1% [80] Nina Desai cs (2010) tiến hành đông lạnh phôi 200 chu kỳ bệnh nhân có tuổi 38 tuổi, kết thấy phơi sống 94%, tỷ lệ có thai tỷ lệ 45% [33] Kết phôi sống tác giả tương tự nhiên cứu Tuy nhiên, tỷ lệ có thai tính theo số bệnh nhân nghiên cứu đạt 34,2% thấp so với nghiên cứu Nina Desai, nghiên cứu Nina Desai chọn bệnh nhân tuổi 38 tuổi Một số nghiên cứu Việt Nam: Đặng Quang Vinh cs (2008) tiến hành Trung tâm IVF Bệnh viện Vạn Hạnh [13] nghiên cứu 494 phơi rã đơng phương pháp thủy tinh hóa có tỷ lệ phơi sống sau rã đơng 100%, tỷ lệ phôi sống nguyên vẹn 99% Nghiên cứu Nguyễn Thị Thu Lan cs (2010) phôi đông lạnh ngày phương pháp thủy tinh hóa, kết tỷ lệ phơi sống sau rã đơng 99,01%, tỷ lệ có thai 29,5% [6] So với phương pháp đông lạnh chậm trước nghiên cứu Nguyễn Thị Minh cs (2006) tiến hành Trung tâm hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Phụ sản Trung ương 783 phôi ngày 230 phôi ngày rã đông cho tỷ lệ phôi sống 76,7% thấp so với đông lạnh kỹ thuật thủy tinh hóa [9] Nhiều tác giả cho tỷ lệ phôi sống cao kỹ thuật đông lạnh phơi thủy tinh hóa kỹ thuật nồng độ chất bảo quản sử dụng cao so với kỹ thuật đông lạnh chậm, giúp cho trình khử nước bên tế bào nhanh hồn tồn, tránh hình thành tinh thể đá tế bào, nhờ mà tránh tổn thương tế bào tinh thể đá gây nên Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ phôi sống sau rã đông 95,2%, chứng tỏ tiêu chuẩn lựa chọn phôi để trữ lạnh tiên lượng khả sống phôi sau rã đông tốt Như vậy, việc lựa chọn phôi để đông lạnh yếu tố định đến sống phôi sau rã đông 120 - Đối với phôi đông lạnh ngày 5: Cùng với phát triển vượt bậc chuyên ngành hỗ trợ sinh sản, người ta ni cấy phơi đến ngày với mục đích chuyển phơi với số lượng để giảm tỷ lệ đa thai cho bệnh nhân Do đó, đơng lạnh phơi ngày đưa nghiên cứu Rất nhiều tác giả có kết nghiên cứu khác tỷ lệ phôi sống sau rã đông, tỷ lệ phôi làm tổ tỷ lệ có thai chuyển phơi đông lạnh ngày Nghiên cứu tiến hành 194 phôi 81 chu kỳ đông lạnh phôi ngày (tương ứng với 78 bệnh nhân) Kết cho thấy tỷ lệ phôi sống sau rã đông 89,2%, tỷ lệ phôi sống nguyên vẹn 70,6%, tỷ lệ có thai tỷ lệ làm tổ tương ứng 32,5% 16,6% Kết nghiên cứu tương đương với nghiên cứu Lieberman cs (2006) cho thấy tỷ lệ phôi sống sau rã đơng 87%, tỷ lệ có thai 35% [trích dẫn từ 26] Nghiên cứu M.Wikland cs (2010) 321 phôi ngày 103 chu kỳ đông lạnh phơi phương pháp thủy tinh hóa cho thấy tỷ lệ phôi sống sau rã đông 81,4%, tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh ngày 53,6% [108] Trong nghiên cứu tỷ lệ phôi sống thấp nghiên cứu chúng tôi, nhiên, tỷ lệ có thai lại cao nhiều Một nghiên cứu khác Rikikazu Sugiyama (2010) lại có kết tỷ lệ phôi sống phôi nang 100%, tỷ lệ có thai đạt 24,2% [91] Như vậy, theo chúng tôi, tỷ lệ phôi sống phản ánh hiệu chu kỳ đơng lạnh, tỷ lệ có thai tỷ lệ làm tổ phơi cịn phụ thuộc vào nhiều yểu tố khác tuổi, chất lượng phôi, kỹ thuật chuyển phôi… - So sánh kết đông lạnh phôi ngày ngày phương pháp thủy tinh hóa Trong nghiên cứu chúng tơi có 444 phơi rã đơng, có 250 phôi đông lạnh ngày thứ 194 phôi đông lạnh ngày thứ Khi so sánh hiệu đông lạnh phôi ngày ngày thứ chúng tơi thấy thời gian lưu trữ trung bình phôi ngày ngày không khác với p = 0,068 Tuy nhiên, tỷ lệ phôi sống sau rã đông phôi đông lạnh ngày 121 95,2%, phôi đông lạnh ngày thứ 89,2% Tỷ lệ phôi sống phôi đông lạnh ngày cao có ý nghĩa thống kê so với phơi đơng lạnh ngày với OR = 2,41 (95% CI 1,10 – 5,36), p = 0,016 Tỷ lệ phôi sống nguyên vẹn sau rã đông phôi đông lạnh ngày thứ cao có ý nghĩa thống kê so với phôi đông lạnh ngày với OR = 3,17 (95% CI 1,88 – 1,54), p = 0,001 Như nói phơi đơng lạnh ngày có tỷ lệ phôi sống tỷ lệ phôi nguyên vẹn cao so với phôi đông lạnh ngày Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Kuwayama cs (2007) cho thấy tỷ lệ phôi sống phôi đông lạnh ngày 98%, tỷ lệ phôi sống phôi ngày 90% [56] Nghiên cứu Hartshorne cs (1990) cho tỷ lệ sống phôi giảm số phôi bào tăng [45] Nghiên cứu Mary E.P cs (2011) tiến hành 2880 phôi đông lạnh ngày 503 phôi đông lạnh ngày cho thấy tỷ lệ phôi sống tương ứng 85% 88%, khác khơng có ý nghĩa thống kê [67] Chúng cho ảnh hưởng chất bảo quản, tốc độ làm lạnh rã đông, tỷ lệ diện tích bề mặt (S-surface area) thể tích (V- volume) phơi đặc tính sinh học có vai trị lớn việc định tỷ lệ sống phôi sau rã đông Tỷ lệ S/V thấp tỷ lệ sống phơi cao Với tính chất này, phơi đơng lạnh giai đoạn phát triển khác khả sống phôi thay đổi theo phát triển phôi Những phôi giai đoạn phân chia muộn khả sống phôi sau rã đông [88] So sánh tỷ lệ có thai đơng lạnh phơi ngày ngày 5: Trong nghiên cứu chúng tơi có 86 chu kỳ đơng lạnh phơi ngày ứng với 79 bệnh nhân 81 chu kỳ đông lạnh phôi ngày ứng với 78 bệnh nhân Các bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày có độ dầy niêm mạc tử cung trung bình 10,06 ± 1,41 mm, bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày có độ dầy niêm mạc tử cung trung bình 10,13 ± 1,90 mm, khác biệt không 122 có ý nghĩa thống kê Số phơi chuyển trung bình bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày 2,7 ± 1,1 phơi, bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày 2,17 ± 1,2 phôi Số phôi chuyển trung bình bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày thứ cao số phơi chuyển trung bình bệnh nhân có phơi đơng lạnh ngày có ý nghĩa thống kê bệnh nhân đông lạnh phôi ngày có nhiều phơi hơn, sau rã đơng tỷ lệ phôi sống cao hơn, lựa chọn phôi để chuyển chọn tối đa phôi Kết cho thấy tỷ lệ có thai chu kỳ đơng lạnh phơi ngày có cao tỷ lệ có thai chu kỳ đơng lạnh phơi ngày 5, nhiên khác khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Tỷ lệ làm tổ phôi đông lạnh ngày 14,7%, phôi đông lạnh ngày 16,6.% Tỷ lệ làm tổ phơi đơng lạnh ngày có cao tỷ lệ làm tổ phôi đông lạnh ngày thứ 3, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Rikikazu Sugiyama (2011): tỷ lệ có thai phơi đơng lạnh ngày 25%, phôi đông lạnh ngày 24,2%, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê [91] Như vậy, nghiên cứu cho thấy chuyển phôi đông lạnh ngày ngày cho tỷ lệ có thai tỷ lệ làm tổ tương đương Chuyển phơi đơng lạnh ngày an tồn lựa chọn phơi phát triển tốt chuyển vào tử cung giai đoạn phôi làm tổ Chuyển phôi ngày tránh tượng đa thai làm giảm nguy cho người mẹ thai [77] Tuy nhiên để có phơi ngày phải nuôi cấy phôi thêm ngày nữa, điều kiện nuôi cấy phôi cần phải tối ưu hóa với mơi trường ni cấy riêng, nồng độ oxy phù hợp Trong nghiên cứu chúng tơi, điều kiện nuôi cấy phôi chưa tối ưu nên tỷ lệ phôi nang đạt chiếm 50 – 60% Do đó, nhiều bệnh nhân khơng có phơi để lưu trữ sau rã đơng phôi tỷ lệ phôi sống phôi đông lạnh ngày thứ thấp so với phôi đông lạnh ngày 3, có số bệnh nhân sau rã đơng khơng có phơi để 123 chuyển Trong nghiên cứu chúng tơi, số chu kỳ có phơi để chuyển phôi sau rã đông ngày 100%, phôi đông lạnh ngày 95,1% Kết nghiên cứu tương tự Rikikazu Sugiyama (2011) [91] So sánh kết theo dõi thai chuyển phôi đông lạnh ngày thứ ngày thấy tỷ lệ sẩy thai, tỷ lệ thai lưu, tỷ lệ bênh nhân có thai, thai tương đương Tuy nhiên, chuyển phôi đông lạnh ngày thứ khơng có trường hợp bị chửa ngồi tử cung, chuyển phơi đơng lạnh ngày có trường hợp chiếm 13,3% Các nguyên nhân gây chửa ngồi tử cung thường gặp kỹ thuật chuyển phôi, niêm mạc tử cung không tốt, co bóp tử cung…Tuy nhiên, trường hợp chúng tơi cho phơi giai đoạn ngày giai đoạn phù hợp để phôi làm tổ, phơi gần với giai đoạn phơi màng nên có thời gian di chuyển tử cung bị ảnh hưởng co bóp tử cung nên gặp chửa ngồi tử cung Chuyển phôi đông lạnh phôi ngày không gặp trường hợp thai , thai chuyển phơi đơng lạnh phơi ngày có trường hợp thai chiếm tỷ lệ 3,3% trường hợp thai chiếm tỷ lệ 3,3% Kết nghiên cứu tương tự Rikikazu Sugiyama (2011) tiến hành 768 chu kỳ đông lạnh phôi ngày 179 chu kỳ đông lạnh phôi ngày Kết cho thấy tỷ lệ có thai thai nhóm tương đương Có trường hợp thai nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày thứ 3, khơng có trường hợp thai, thai nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày [91] Tuy nhiên, kỹ thuật giảm thiểu thai an toàn pháp luật cho phép nên tâm lý bệnh nhân muốn có nhiều phơi để chuyển, bệnh nhân ln có mong muốn có phơi dư để lưu trữ Chúng cho rằng, so với chuyển phôi đông lạnh ngày chuyển phơi đơng lạnh ngày an toàn hơn, phù hợp với giai đoạn làm tổ 124 phôi, tránh tỷ lệ đa thai, tỷ lệ thai tử cung cho bệnh nhân Tuy nhiên, theo chúng tơi, trung tâm chưa có điều kiện nuôi cấy phôi ngày tối ưu, kết hợp tiêu chuẩn số bệnh nhân có phơi đơng lạnh, tỷ lệ sống phơi sau rã đơng, số chu kỳ có phơi để chuyển sau rã đơng, tỷ lệ có thai bệnh nhân chuyển phơi đơng lạnh chuyển phơi ngày có lợi cho bệnh nhân theo chúng tơi giai đoạn vừa lựa chọn phơi tốt để chuyển phơi tươi vừa tiên lượng khả sống phôi đông lạnh sau rã đông, mặt khác để nuôi cấy phôi đến giai đoạn phơi nang địi hỏi bệnh nhân phải có nhiều phơi để lựa chọn tỷ lệ tạo phơi nang có 50 - 60%, phần giải tâm lý yên tâm cho bệnh nhân sau chuyển phơi tươi cịn phơi để đơng lạnh Mặt khác, tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh ngày ngày khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 4.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ có thai chu kỳ chuyển phôi đông lạnh 4.5.1 Ảnh hưởng thời gian lưu trữ đến tỷ lệ sống phôi sau rã đông tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh Trong thời gian nghiên cứu thấy hầu hết bệnh nhân chuyển phôi lưu trữ sau chu kỳ chuyển phôi tươi thất bại Một số trường hợp có thai phơi tươi sau quay lại chuyển phơi lưu trữ sau năm Trong nghiên cứu chủ yếu bệnh nhân chuyển phôi đông lạnh sau lưu trữ tháng Do đó, chúng tơi chia thành nhóm thời gian lưu trữ tháng, từ 7-12 tháng, từ 13 - 24 tháng 24 tháng (trên năm) Kết cho thấy tỷ lệ phơi sống nhóm phôi đông lạnh ngày thứ phôi đông lạnh ngày thứ tương tương Về tỷ lệ có thai bệnh nhân chuyển phơi đơng lạnh ngày thứ ngày thứ nhóm phôi lưu trữ tháng – 12 tháng khác khơng có ý nghĩa thống kê Ở nhóm lưu trữ phơi từ 13 – 24 tháng 24 tháng có số trường hợp nên tính tỷ lệ phần trăm khơng 125 có ý nghĩa Tuy nhiên, chúng tơi thấy nhóm phơi đơng lạnh năm phôi đông lạnh ngày ngày có trường hợp, trường hợp có thai Như nói thời gian đơng lạnh phơi năm khơng ảnh hưởng đến khả sống tỷ lệ có thai chuyển phôi đông lạnh Trong nghiên cứu chúng tơi khơng có trường hợp lưu trữ phơi năm Nguyễn Thị Minh cs (2006) nghiên cứu 192 chu kỳ rã đông phôi phương pháp đông lạnh chậm cho kết tương tự [9] Nghiên cứu Riggs R cs (2010) nghiên cứu 11 768 phôi đông lạnh chu kỳ chuyển phôi đông lạnh từ 1987 đến 2008 cho thấy thời gian bảo quản không ảnh hưởng đến khả sống phôi sau rã đông tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh [81] Mandelbaum J cs (1995) báo cáo khả sống phôi giảm sau năm lưu trữ, số báo cáo khác cho thấy phơi trữ an toàn thời gian kéo dài đến năm [21], [61], hầu hết thống cho khả sống làm tổ phôi không bị ảnh hưởng khoảng thời gian tối đa chấp nhận năm [Trích dẫn từ 90] 4.5.2 Ảnh hưởng tuổi đến tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh Trong nghiên cứu gộp nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày ngày để xét ảnh hưởng tuổi đến tỷ lệ có thai chuyển phôi đông lạnh Hầu hết bệnh nhân có phơi lưu trữ bệnh nhân trẻ tuổi, chúng tơi chia số bệnh nhân thành nhóm tuổi 30 tuổi, từ 30 đến 35 tuổi 35 tuổi Tỷ lệ có thai nhóm tương ứng 36,2%, 33,7% 29,1%, nhiên khác tỷ lệ khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Kết tương tự với nghiên cứu Lê Thị Phương Lan (2004) nghiên cứu 50 trường hợp chuyển phôi đông lạnh phương pháp đông lạnh chậm [4] Nghiên cứu Nguyễn Thị Minh (2006) tiến hành 192 bệnh nhân đông lạnh phôi ngày phương pháp đơng lạnh chậm, kết tỷ lệ có thai nhóm tuổi 30 tuổi, từ 30 tuổi đến 35 tuổi, từ 36 tuổi đến 39 tuôi 40 tuổi khác khơng có ý nghĩa thống kê [9] Nghiên cứu 126 YE Ying-hui (2001) 60 bệnh nhân chuyển phôi đông lạnh 35 tuổi 13 bệnh nhân 35 tuổi có kết có thai tương ứng 26,7% 38,5% Sự khác khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 [111] Nghiên cứu Mukaida (2003) 99 bệnh nhân có tuổi từ 24 - 34 tuổi 108 bệnh nhân có tuổi từ 35 - 46 tuổi cho kết có thai tương ứng 40% 33% khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê [71] Phải tất bệnh nhân chuyển phơi đơng lạnh có chuẩn bị niêm mạc tử cung chủ động đầy đủ nên tuổi bệnh nhân khơng thấy ảnh hưởng đến kết có thai bệnh nhân chuyển phôi đông lạnh 4.5.3 Ảnh hưởng độ dầy niêm mạc tử cung đến kết có thai bệnh nhân chuyển phơi đơng lạnh Đối với bệnh nhân chuyển phôi đông lạnh, việc chuẩn bị niêm mạc tử cung coi khâu đóng vai trò quan trọng Đây kỹ thuật sử dụng nội tiết ngoại sinh theo dõi nội tiết nội sinh thể để tạo niêm mạc tử cung tốt cho phôi làm tổ Phôi làm tổ vào giai đoạn chế tiết chu kỳ kinh nguyệt, khoảng ngày 18 - 24 chu kỳ hay cịn gọi “cửa sổ làm tổ” phơi Xác định “cửa sổ làm tổ” hay ‘cửa sổ chuyển phôi’ mấu chốt kỹ thuật chuẩn bị niêm mạc tử cung để tạo hiệu chuyển phôi đơng lạnh Có nhiều phương pháp để chuẩn bị NMTC chu kỳ chuyển phơi trữ lạnh, có phương pháp chính: (1) theo dõi chu kỳ tự nhiên, thường sử dụng cho bệnh nhân trẻ tuổi, có phóng nỗn đặn, có điều kiện theo dõi nội tiết siêu âm nang noãn độ dày niêm mạc tử cung ngày; (2) sử dụng nội tiết ngoại sinh để chuẩn bị NMTC, (3) sử dụng kích thích buồng trứng, gây phóng nỗn để xác định thời điểm chuyển phôi Trong đề tài sử dụng phương pháp dùng nội tiết ngoại sinh để chuẩn bị NMTC Với sử dụng nội tiết ngoại sinh, có nhiều phác đồ thực giới: - Sử dụng estrogen progesterone với liều thay đổi pha nang noãn chu kỳ kinh nguyệt 127 - Sử dụng nội tiết với liều cố định suốt pha nang nỗn kết hợp hay không kết hợp với GnRHa Trong nghiên cứu sử dụng estrogen progesterone với liều thay đổi pha nang noãn chu kỳ kinh nguyệt để chuẩn bị NMTC cho chuyển phôi đông lạnh Với phác đồ đạt mục đích chuẩn bị NMTC tốt tạo điều kiện cho phơi đông lạnh làm tổ sau chuyển lại buồng tử cung Nghiên cứu Nguyễn Thị Minh cs (2006) 192 chu kỳ rã đông phôi cho thấy có trường hợp NMTC có độ dày 7,5mm có thai, trường hợp NMTC có độ dày 7,5mm khơng có thai Với độ dày NMTC 8mm tỷ lệ có thai cao, tỷ lệ có thai khơng khác biệt nhóm có NMTC 8mm với nhóm NMTC 8mm [9] Kết nghiên cứu Lê Thị Phương Lan cs (2004) [4] cho kết tương tự Trong nghiên cứu chúng tơi, loại bỏ trường hợp có điểm chất lượng phôi trường hợp điểm chuyển phôi 2, lại 91 chu kỳ để xét đến ảnh hưởng NMTC đến tỷ lệ có thai Kết cho thấy có trường hợp điểm niêm mạc tử cung điểm khơng có trường hợp có thai, tỷ lệ có thai nhóm NMTC điểm 23,1%, tỷ lệ có thai cao nhóm có điểm NMTC điểm 59,5% So sánh tỷ lệ có thai nhóm có điểm NMTC điểm điểm thấy tỷ lệ có thai nhóm có điểm NMTC điểm cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm có điểm NMTC điểm Như vậy, nghiên cứu cho thấy độ dầy NMTC từ mm đến 14 mm niêm mạc thuận lợi cho phôi làm tổ Như độ dầy NMTC đóng vai trị quan trọng thành công chu kỳ chuyển phôi đông lạnh Niêm mạc trước chuyển phơi phải đạt 7,5 mm, để tạo điều kiện tốt cho làm tổ phơi độ dầy NMTC phải đạt từ mm đến 14 mm Nếu NMTC chưa thuận lợi để chuyển phơi kéo dài thêm thuốc vài ngày thời gian cho phép làm tổ phôi Khi dùng thêm thuốc mà NMTC mm nên hỗn định rã đơng chu kỳ để chuẩn bị cho chu kỳ sau tốt 128 4.5.4 Ảnh hưởng chất lượng phơi chuyển đến tỷ lệ có thai chuyển phôi đông lạnh Nhiều nghiên cứu báo cáo khẳng định vai trị chất lượng phơi chuyển tiếp nhận tử cung tới tỷ lệ có thai chuyển phơi tươi phơi đơng lạnh sau rã đơng, chất lượng phơi đóng vai trò quan trọng Nghiên cứu Staessen cs (1992) chuyển phôi cho bệnh nhân chia làm nhóm: nhóm A phơi khơng có mảnh vỡ bào tương, nhóm B phơi có tỷ lệ mảnh vỡ bào tương 20%, nhóm C phơi có tỷ lệ mảnh vỡ bào tương từ 20% trở lên cho thấy tỷ lệ có thai nhóm A B cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm C [90] Nghiên cứu John F Payne cs (2003) cho thấy tỷ lệ có thai tăng số phơi tốt tăng Tỷ lệ có thai chuyển từ phơi tốt trở lên 42,9%, có phơi tốt 40%, khơng có phơi tốt 26,1% [76] Nghiên cứu Đặng Quang Vinh cs (2005) khảo sát 164 bệnh nhân chuyển phôi đông lạnh chia thành nhóm: nhóm gồm bệnh nhân có phơi tốt sau rã đơng, nhóm gồm bệnh nhân khơng có phơi tốt sau rã đơng Phơi sau rã đơng xem tốt có phơi có 100% phơi bào cịn ngun vẹn Tỷ lệ có thai lâm sàng nhóm cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm (35,5% 11,1%) [12] Trong nghiên cứu Nguyễn Thị Minh cs (2006) 192 chu kỳ chuyển phôi rã đông cho thấy tỷ lệ có thai giảm có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) chất lượng phôi giảm Với trường hợp có phơi tốt (phơi độ 4, sau ni qua đêm có tế bào phân chia tiếp) để chuyển kết có thai đạt 46,9%, cao trường hợp có phơi tốt để chuyển (34,4%), tỷ lệ có thai giảm rõ bệnh nhân có phôi phôi độ để chuyển (25%) giảm xuống 8,3% bệnh 129 nhân chuyển phơi độ , khơng có trường hợp có thai nhóm bệnh nhân có phơi độ để chuyển [9] Trong nghiên cứu chúng tơi có nhóm: nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày thứ nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày thứ Đối với nhóm chuyển phơi đơng lạnh ngày thứ 3, sau loại bỏ trường hợp có điểm niêm mạc tử cung điểm kỹ thuật chuyển phơi cịn lại 68 chu kỳ để xét ảnh hưởng chất lượng phơi đến kết có thai, kết có trường hợp có điểm chất lượng phơi điểm khơng có trường hợp có thai, tỷ lệ có thai nhóm có điểm chất lượng phôi điểm 57,9% cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm có điểm chất lượng phơi điểm (25%) Đối với nhóm chuyển phôi đông lạnh ngày thứ cho kết tương tự Trong 65 chu kỳ để xét ảnh hưởng chất lượng phơi có chu kỳ có điểm chất lượng phơi điểm khơng có trường hợp có thai, tỷ lệ có thai nhóm có điểm chất lượng phôi điểm 45,9% cao có ý nghĩa so với nhóm có diểm chất lượng phơi điểm Qua nghiên cứu thấy chất lượng phơi sau rã đơng đóng vai trị quan trọng tỷ lệ có thai, việc đánh giá chất lượng phơi chuyển góp phần nâng cao tỷ lệ có thai đồng thời định số phôi chuyển để giảm tỷ lệ đa thai cho bệnh nhân 4.5.5 Ảnh hưởng kỹ thuật chuyển phơi đến kết có thai chuyển phơi đơng lạnh Trong nghiên cứu sau loại bỏ trường hợp có NMTC khơng tốt (điểm niêm mạc tử cung 2), điểm chất lượng phôi lại 107 trường hợp để xét ảnh hưởng kỹ thuật chuyển phơi đến kết có thai Kết cho thấy có 14 trường hợp có điểm chuyển phơi điểm khơng có trưởng hợp có thai, 17 trường hợp điểm chuyển phơi điểm có trường hợp có thai chiểm tỷ lệ 23,5%, cịn 76 trường hợp điểm chuyển phơi có 43 trường hợp có thai, chiếm tỷ lệ 130 56,5% Kết nhóm có điểm kỹ thuật chuyển phơi điểm cao có ý nghĩa so với nhóm chuyển phơi điểm Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Cem Fiỗicioglu v cs (2005) trờn 1158 trng hp chuyn phụi chia thành nhóm: nhóm (827 trường hợp): chuyển phôi dễ tương đương với điểm chuyển phôi nghiên cứu chúng tơi điểm, nhóm (284 trường hợp): chuyển phôi vừa, tương đương với điểm chuyển phơi điểm, nhóm (47 trường hợp): chuyển phơi khó, tương đương với điểm Kết cho thấy tỷ lệ có thai nhóm 41,4%, nhóm 36,2% cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm (17%), khác nhóm nhóm khơng có ý nghĩa thơng kê [37] Nghiên cứu Candido Tomas cs cho kết tương tự, tỷ lệ có thai nhóm chuyển phôi dễ chuyển phôi vừa 30,3%, tỷ lệ có thai chủa nhóm chuyển phơi khó 21,1% (p = 0,0002) [94] Trong nghiên cứu Nguyễn Thị Minh cs (2006) cho thấy trường hợp chuyển phơi dễ, nhẹ nhàng, catheter khơng có máu, kết có thai đạt 51,1% Tỷ lệ có thai giảm đáng kể, đạt 12% chuyển phơi khó, đặc biệt có máu catheter, tổn thương niêm mạc tử cung [9] Như vậy, kỹ thuật chuyển phôi yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ có thai tỷ lệ làm tổ chu kỳ chuyển phôi điều trị vô sinh Khi chuyển phôi phải đảm bảo không gây tổn thương NMTC, khơng gây kích thích tạo co tử cung, khơng để phơi mơi trường ngồi tủ cấy, không để ánh sáng chiếu trực tiếp vào phơi, điều địi hỏi người chuyển phơi phải có tay nghề cao, phải chuẩn bị tâm lý cho bệnh nhân thoải mái trước chuyển phôi Khác với chất lượng phơi độ dày niêm mạc tử cung cịn phụ thuộc vào thân bệnh nhân, kỹ thuật chuyển phôi chủ yếu phụ thuộc vào tay nghề người thầy thuốc Do đó, việc đào tạo rèn luyện để nâng cao tay nghề đóng góp vào thành công điều trị Quan trọng nghiên cứu cho thấy thành công phụ thuộc vào phối hợp bác sỹ lâm sàng nhà phơi học phịng thí nghiệm 131 KẾT LUẬN Sự biến đổi hình thái cấu trúc phơi ngày 3, ngày trước đông lạnh sau rã đông kỹ thuật thủy tinh hóa + Ở mức độ vi thể không thấy thay đổi độ dầy màng suốt đường kính phơi trước đơng lạnh sau rã đông cụ thể là: Độ đày màng suốt phôi trước đông lạnh sau rã đơng - Ngày 3: 14,70 ± 1,13 µm 14,80 ± 1,20 µm (p > 0,05) - Ngày 5: 13,60 ± 1,50 µm 12,40 ± 1,30 µm (p > 0,05) Đường kính phơi trung bình phơi trước đơng lạnh sau rã đông: - Ngày 3: 147,2 ± 7,82 µm 147,5 ± 8,14 µm (p > 0,05) - Ngày 5: 153,5 ± 9,40 µm 152,7 ± 9,8 µm (p > 0,05) + Ở mức độ siêu vi thể quan sát kính hiển vi điện tử thấy : - Bề mặt, cấu trúc bên màng suốt phôi ngày ngày sau rã đông bị tổn thương làm độ xốp, khó quan sát glycoprotein dạng sợi - Các phơi bào sống sau rã đơng có thành phần cấu trúc màng, nhân phơi bào bị tổn thương, số phơi bào bào tương có vài chỗ thối hóa hạt xuất khơng bào - Phơi bào bị thối hóa sau rã đơng có màng tế bào co rúm, ti thể bị biến dạng chất sáng, không quan sát thấy mào ti thể, lưới nội bào bị dãn rộng, màng nhân bị đứt đoạn co rúm So sánh tỷ lệ phôi sống, tỷ lệ phơi làm tổ tỷ lệ có thai lâm sàng phôi đông lạnh ngày với ngày phương pháp thủy tinh hóa - Tỷ lệ phôi sống phôi đông lạnh ngày sau rã đông 95,2%, tỷ lệ phôi sống phôi đông lạnh ngày 89,2% Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 132 - Tỷ lệ phôi nguyên vẹn phôi đông lạnh ngày sau rã đơng (88,4%) cao có ý nghĩa so với tỷ lệ phôi nguyên vẹn phôi ngày sau rã đông (70,6%) với p < 0,001 - Sau nuôi cấy qua đêm tỷ lệ phôi ngày tiếp tục phát triển 68,4% Phôi độ sau rã đơng ni cấy qua đêm có tỷ lệ phân chia tiếp 83,8%, tỷ lệ phôi phân chia tiếp phôi độ sau rã đông 57,4% - Sau nuôi cấy qua đêm tỷ lệ phôi ngày tiếp tục phát triển 75,1% Các phơi 3AA, 2AA có tỷ lệ phát triển sau nuôi cấy tương ứng 100%, 96,3% Trong đó, phơi 2BB, 3BB có tỷ lệ phôi tiếp tục phát triển đạt tương ứng 9% 40% - Tỷ lệ phôi làm tổ phôi rã đông ngày 14,7% không khác biệt so với tỷ lệ phôi làm tổ phôi rã đơng ngày 16,6% - Tỷ lệ có thai bệnh nhân có phơi ngày rã đơng 34,2% khơng khác biệt so với tỷ lệ có thai bệnh nhân có phơi rã đơng ngày 32,4% - Chất lượng phôi chuyển, niêm mạc tử cung, kỹ thuật chuyển phôi yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến tỷ lệ có thai tỷ lệ làm tổ chu kỳ chuyển phôi đông lạnh 133 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu hình thái siêu cấu trúc phôi trước đông lạnh sau rã đông với số lượng phôi nhiều Nên hỗ trợ màng cho tất phơi đơng lạnh q trình đơng lạnh rã đơng làm ảnh hưởng đến cấu trúc glycoprotein màng suốt làm cho phơi khó màng tự nhiên Nên nghiên cứu thêm với số lượng lớn phơi ni cấy ngày kết hợp với chẩn đốn di truyền phôi trước làm tổ để lựa chọn phôi chuyển tối ưu (thường phôi) cho chu kỳ IVF Việt Nam tương lai ... dụng kỹ thuật  35 Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phơi người ngày ngày trước đông lạnh sau rã đông kỹ thuật thủy tinh hóa tiêu: Đánh giá biến đổi hình thái cấu trúc, siêu cấu trúc phơi trước. .. ngày 3, ngày trước đông lạnh sau rã đông kỹ thuật thuỷ tinh hóa? ?? Mục tiêu: Mơ tả biến đổi hình thái cấu trúc phơi ngày 3, ngày trước đông lạnh sau rã đông kỹ thuật thủy tinh hóa So sánh tỷ lệ... đơng lạnh phơi việc nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc phôi trước đông lạnh sau rã đông Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phơi người ngày 3, ngày trước