đánh giá tác động kháng candida albicans của bài thuốc dị hoàng thang gia giảm trên in vitro

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG KHÁNG CANDIDA ALBICANS CỦA BÀI THUỐC DỊ HOÀNG THANG GIA GIẢM TRÊN IN VITRO Chủ nhiệm đề tài ThS DS LÊ THỊ LAN PHƯƠNG ThS PHAN THỊ MỸ LINH Cơ quan chủ quản ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH TP HỒ CHÍ MINH THÁNG 03 NĂM 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀOTẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG KHÁNG CANDIDA ALBICANS CỦA BÀI THUỐC DỊ HOÀNG THANG GIA GIẢM TRÊN IN VITRO Chủ nhiệm đề tài ThS DS LÊ THỊ LAN PHƯƠNG ThS PHAN THỊ MỸ LINH TP HỒ CHÍ MINH THÁNG 03 NĂM 2018 ii MỤC LỤC Trang MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ vii THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 Bệnh nhiễm nấm Candida 1.1.1 Sơ lược nấm Candida 1.1.2 Bệnh nhiễm nấm Candida âm đạo 1.1.3 Điều trị 1.2 Chứng đới hạ theo y học cổ truyền .4 1.3 Bài thuốc Dị hoàng thang .5 1.3.1 Cơ sở lý luận thuốc 1.3.2 Các dược liệu thuốc 1.3.3 Các cơng trình nghiên cứu liên quan CHƯƠNG 2- VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.2 Hóa chất 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Chiết xuất cao thuốc Dị hoàng thang .9 2.2.3 Khảo sát số tiêu chuẩn cao chiết Dị hoàng thang 11 2.2.4 Đánh giá tác động kháng C albicans in vitro 11 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu 14 CHƯƠNG 3- KẾT QUẢ 15 3.1 Đánh giá phương pháp thử nghiệm kháng C albicans in vitro khoanh giấy khuếch tán 15 3.2 Bài thuốc Dị hoàng thang gia giảm nghiên cứu 15 iii 3.3 Chiết xuất cao thuốc Dị hoàng thang 17 3.5 Khảo sát số tiêu chuẩn cao chiết Dị hồng thang 18 3.5.1 Hình thức cảm quan .18 3.5.2 Độ ẩm 18 3.5.3 Độ tro toàn phần 18 3.6 Khảo sát tác động kháng Candida albicans in vitro 19 3.6.1 Khảo sát hoạt tính kháng C albicans 19 3.6.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu phát triển C albicans (MIC) 22 3.6.3 Bàn luận .23 CHƯƠNG 4- KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 24 4.1 Kết luận .24 4.2 Kiến nghị 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 PHỤ LỤC 27 iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT C albicans Candida albicans DĐVN Dược điển Việt Nam DHT Dị hoàng thang DHT (6) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 6g Hoàng bá DHT (8) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 8g Hoàng bá DHT (10) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 10g Hoàng bá DHT (12) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 12g Hoàng bá NC Nước cất Flu Fluconazole MIC Nồng độ ức chế tối thiểu MH Muller-Hinton v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Đường kính vòng kháng C albicans Fluconazole 15 Bảng Đường kính vịng kháng C albicans của vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang 16 Bảng 3 Hiệu suất chiết cao thuốc Dị hoàng thang gia giảm 17 Bảng Độ ẩm cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 18 Bảng Độ tro toàn phần cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 18 Bảng Đường kính vịng kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 20 Bảng Số lượng khúm nấm C albicans đĩa thạch 22 Bảng 4.1 Tóm tắt kết nghiên cứu 24 vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Chồi nấm sợi giả C albicans nhuộc Gram kính hiển vi Hình Các dược liệu thuốc Dị hoàng thang Hình 2 Các dược liệu thuốc Dị hoàng thang sau sơ chế Hình Sơ đồ tổng quát quy trình chiết cao Dị hồng thang 10 Hình So sánh huyền dịch vi nấm với ống McFarland 0.5 12 Hình Lấy láng huyền dịch vi nấm lên đĩa thạch 12 Hình Xác định đo vịng kháng nấm 13 Hình Tác động kháng C albicans khoanh giấy khuếch tán Fluconazole 15 Hình Hoạt tính kháng C albicans vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang 16 Hình 3 Cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang gia giảm 18 Hình Hoạt tính kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 19 Biểu đồ Hoạt tính kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 21 vii THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thơng tin chung: - Tên đề tài: Đánh giá tác động kháng Candida albicans thuốc Dị hoàng thang gia giảm in vitro - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: a) ThS DS Lê Thị Lan Phương Điện thoại: 0907748591 Email: ltlphuong@ump.edu.vn b) ThS Phan Thị Mỹ Linh Điện thoại: 0931101250 Email: phanlinh173@ump.edu.vn - Đơn vị quản lý chuyên môn: Khoa Y học Cổ Truyền – Phịng Thí nghiệm Y Dược Cổ Truyền - Thời gian thực hiện: Từ 05/2017 đến 05/2018 Mục tiêu: Đánh giá tác động kháng nấm Candida albicans in vitro cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang gia giảm Nội dung chính: • Chiết xuất cao nước thuốc Dị hồng thang gia giảm • Khảo sát số tiêu chuẩn cao chiết nước thuốc Dị hồng thang gia giảm • Khảo sát tác động kháng C albicans cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang gia giảm phương pháp khoanh giấy khuếch tán xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) phát triển C albicans Kết đạt được: Qua khảo sát sơ khả kháng C albicans khoanh giấy khuếch tán vị thành phần thuốc Dị hoàng thang: Hoài sơn, Khiếm thực, Hoàng bá, Xa tiền tử, Bạch cho kết nồng độ khảo sát Hoàng bá thành phần thuốc có khả kháng C albicans tốt Do đó, tiến hành gia giảm vị viii Hoàng bá lượng g, 10 g 12 g (vị Hoàng bá thuốc gốc nghiên cứu trước g) Nghiên cứu cho thấy tác động kháng nấm C albicans in vitro cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang gia giảm DHT (6), DHT (8), DHT (10) DHT (12) tỷ lệ thuận với lượng Hoàng bá gia giảm Do đó, để tăng hiệu kháng nấm C.albicans thuốc Dị hồng thang gia thêm lượng vị Hoàng bá thuốc lên 10 g, 12 g Hiện nay, bệnh nhiễm loài nấm Candida phổ biến cộng đồng, ngày khó khăn để chữa trị ảnh hưởng nhiều đến đời sống người bệnh Với kết nghiên cứu tiền đề trước nghiên cứu nhóm cho thấy thuốc Dị hồng thang có nguồn gốc từ tự nhiên lựa chọn sử dụng để kháng Candida albicans ix MỞ ĐẦU Bệnh nhiễm loài vi nấm Candida phổ biến nước vùng nhiệt đới, vùng có khí hậu nóng ẩm quanh năm Việt Nam Candida vi nấm sống hoại sinh da niêm mạc, chúng gây bệnh khả bảo vệ chỗ da niêm mạc bị tổn thương toàn thân người bị suy yếu Trong đó, niêm mạc âm đạo, âm hộ phụ nữ nơi dễ dàng bị nấm Candida ký sinh chỗ, phát triển gây bệnh [14] Có đến 75% phụ nữ bị nấm âm đạo lần đời ba tác nhân gây viêm nhiễm âm đạo C albicans [2] Hiện để điều trị viêm âm đạo nấm Candida gây dùng kháng sinh theo đường uống đặt âm đạo kem bơi ngồi [1] Tuy nhiên viêm nhiễm Candida thường tái tái lại nhiều lần chí có phụ nữ bị nhiễm nấm suốt đời dẫn đến người bệnh phải sử dụng thuốc lâu ngày làm ảnh hưởng đến đời sống sinh hoạt thường trực người bệnh có nhiều tác dụng phụ khơng mong muốn vơ tình tiêu diệt vi sinh vật có lợi dẫn đến tình trạng kháng thuốc khiến cho việc chữa trị ngày khó khăn Do đó, ngày có nhiều người tìm đến nguồn thuốc y học cổ truyền, dược liệu có nguồn gốc tự nhiên để điều trị bệnh Trong y học cổ truyền, khơng có khái niệm tương đồng bệnh viêm âm đạo nhiễm nấm Candida mà có chứng Đới hạ Tùy vào thể bệnh lâm sàng mà các thuốc điều trị thích hợp Trong đó, Dị hồng thang thuốc cổ phương, theo y học cổ truyền thuốc lâm sàng phép chữa giúp bổ chỗ hư yếu nhâm mạch, trừ thấp, thận hoả, thuốc dùng chữa chứng hồng đới chứng đới khác thuộc đới hạ [8] Bài thuốc gồm có Hồng bá, Xa tiền tử, Khiếm thực, Hồi Sơn Bạch Trong đó, Hồng bá cho quy vào hạ tiêu, thấp nhiệt, chữa bệnh liên quan đến phận bên bàng quang, tiết niệu, đường sinh dục, Xa tiền tử có tác dụng ức chế số vi trùng bệnh da, Khiếm thực, Bạch quả, Hồi sơn dùng chữa chứng đới hạ [4] Nhằm góp phần tìm kiếm thuốc y học cổ truyền có nguồn gốc từ thảo dược tự nhiên có tác dụng kháng Candida albicans chúng tơi tiến hành nghiên cứu chứng minh cao chiết nước thuốc Dị hồng thang có tác dụng kháng C albicans nồng độ 1000 mg/mL 2000 mg/mL, giá trị MIC 1000 mg/mL [6] Như cao chiết nước Dị hồng thang ban đầu cho thấy có tác dụng kháng nấm C albicans, nhiên nồng độ cao chiết để có tác dụng kháng nấm cao (từ 1000 CHƯƠNG 3- KẾT QUẢ 3.1 Đánh giá phương pháp thử nghiệm kháng C albicans in vitro khoanh giấy khuếch tán Đối chứng trắng Đối chứng nhiễm Thử nghiệm Flu Hình Tác động kháng C albicans khoanh giấy khuếch tán Fluconazole Bảng Đường kính vịng kháng C albicans Fluconazole Tác nhân kháng Nồng độ Đường kính vịng kháng (mm) Flu 25 µg/khoanh giấy 29,33±1,36 NC - Khơng tạo vịng kháng C albicans Kết hình 3.1 bảng 3.1 cho thấy với tác nhân kháng nấm Fluconazole (25 µg/ khoanh giấy) tạo vòng kháng 29,82±1,53 mm, kết phù hợp với bảng tiêu chuẩn đưa theo hướng dẫn NCCLS (M44-A)[]: đường kính vịng kháng nấm Fluconazole (25 µg/khoanh giấy) C albicans ATCC 90028 28-39 mm, đĩa giấy đối chứng nước cất khuẩn lạc nấm mọc khắp mép khoanh giấy Đĩa đối chứng nhiễm (đĩa thạch MH có cấy C albicans): khuẩn lạc vi nấm mọc đều, đĩa đối chứng trắng (đĩa thạch MH) không bị nhiễm Điều chứng tỏ thử nghiệm tác động kháng C albicans in vitro thực điều kiện phịng thí nghiệm thành công, tiếp tục khảo sát tác dụng kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang 3.2 Bài thuốc Dị hoàng thang gia giảm nghiên cứu Các vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang: Hoài sơn, Khiếm thực, Hoàng bá, Xa tiền tử, Bạch nghiên cứu khả kháng C albicans riêng lẻ 15 với mục đích tìm vị thuốc thành phần có hoạt tính kháng C albicans tốt để tiến hành gia giảm nghiên cứu tác động kháng C albicans tồn Hình Hoạt tính kháng C albicans vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang Bảng Đường kính vịng kháng C albicans của vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang Tác nhân kháng Nồng độ C albicans (20 µL/khoanh giấy) NC - Khơng tạo vịng kháng Flu 25 µg/khoanh giấy 29,33±1,53 Hồng bá Đường kính vịng kháng (mm) 15,33±1,15 Hồi sơn Dịch chiết nước tỷ lệ Khiếm thực 2:1 (w/v) Xa tiền tử Khơng xác định vịng kháng Bạch Kết từ hình 3.2 bảng 3.2 cho thấy khoanh giấy chứa NC (nước cất) khơng tạo vịng kháng, khoanh giấy chứa thuốc đối chứng Flu (25 µg/ khoanh giấy) tạo vịng kháng to rõ theo ghi nhận 29,33±1,53 mm Ngồi trừ Hồng bá tạo vịng kháng 15,33±1,15 mm, vị cịn lại Hồi sơn, Khiếm thực, Xa tiền tử, Bạch khơng xác định vịng kháng nấm nồng độ khảo sát Hồng bá có chứa 1,6% Becberin Panmatin [3,5], Berberin Panmatin xem chất có khả kháng nhiều vi khuẩn, vi nấm [6] Một nghiên cứu nhóm nhà nghiên cứu Hàn Quốc Hoàng bá nồng độ 400 µg/khoanh giấy ức chế đáng kể chủng nấm Candida C albicans, C glabrata, C krusei, C parapsilosis, nghiên cứu cho thấy thành phần hoạt động kháng nấm chủ 16 yếu Berberin Palmatin, nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) Berberin C albicans 125-250 mg/L, C krusei mg/L, C parapsilosis >500 mg/L, Palmatine C parapsilosis 15,6 mg/L [9] Với kết thử nghiệm nói thuốc Dị hồng thang Hồng bá xem thành phần có tác dụng kháng nấm C albicans tốt Trong sách y học, liều dùng Hoàng bá lâm sàng dạng thuốc sắc hoàn tán dao động từ 3-12 g/ngày: DĐVN IV: – 12 g/ngày dạng thuốc sắc hoàn tán [3]; Những thuốc vị thuốc Việt Nam: – 10 g/ngày dạng thuốc sắc, thuốc bột [5]; Dược học cổ truyền: – 12 g/ngày [8]; Thuốc y học cổ truyền ứng dụng lâm sàng – 10 g/ngày [14] Hoàng bá thuốc Dị hoàng thang sử dụng nghiên cứu tiền đề 8g (Hoài sơn 40g, Khiếm thực 40g, Hoàng bá 8g, Xa tiền tử 4g, Bạch 10 quả) [15] Trong đề tài này, Hoàng bá gia giảm lượng 6g, 10g 12g để nghiên cứu tác động kháng nấm C albicans cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang 3.3 Chiết xuất cao thuốc Dị hoàng thang Bảng 3 Hiệu suất chiết cao thuốc Dị hoàng thang gia giảm Tổng dược liệu ban đầu Cao chiết Khối lượng (g) Độ ẩm (%) Cao chiết thu (g) Khối Độ ẩm lượng (g) (%) Hiệu suất chiết (%) DHT (6) 103,6 4,91±0,32 11,95 4,09±0,13 12,15 DHT (8) 105,8 4,82±0,31 12,15 4,18±0.27 11,48 DHT (10) 107,8 5,03±0,38 13,20 4,10±0,17 12,45 DHT (12) 109,7 5,30±0,44 15,45 4,32±0,41 14,19 Kết chiết suất cao bảng 3.3 cho thấy hiệu suất chiết cao nước thuốc Dị hồng thang gia giảm vị Hồng bá khơng khác biệt đáng kể Các vị thành phần thuốc Hoài sơn, Khiếm thực, Bạch đa số chứa nhiều tinh bột, chất béo, chất nhầy [5] dẫn tới bã sau chiết cịn lại có khối lượng lớn, điều giải thích hiệu suất chiết cao Dị hoàng thang gia giảm thấp dao động từ 12,15 – 14,19% 17 3.5 Khảo sát số tiêu chuẩn cao chiết Dị hồng thang 3.5.1 Hình thức cảm quan Hình 3 Cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang gia giảm Cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang chất rắn, khơ rời nhau, màu vàng cánh gián, mùi thơm nhẹ, vị đắng 3.5.2 Độ ẩm Bảng Độ ẩm cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm Cao chiết Độ ẩm trung bình(%) DHT (6) 4,09±0,13 DHT (8) 4,18±0.27 DHT (10) 4,10±0,17 DHT (12) 4,32±0,41 Cao chiết nước thuốc Dị hồng thang gia giảm có độ ẩm trung bình từ 4,09 – 4,32% < 5%, cao chiết đạt tiêu chuẩn độ ẩm cao khô theo qui định DĐVN IV [1] 3.5.3 Độ tro toàn phần Bảng Độ tro toàn phần cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm Cao chiết Độ tro trung bình(%) DHT (6) 4,34±0,67 DHT (8) 5,21±0,85 DHT (10) 4,94±0,90 DHT (12) 5,08±0,70 Cao chiết nước thuốc Dị hồng thang gia giảm có độ tro tồn phần trung bình từ 4,34 - 5,21% 18 3.6 Khảo sát tác động kháng Candida albicans in vitro 3.6.1 Khảo sát hoạt tính kháng C albicans 3.6.1.1 Khảo sát hoạt tính kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm DHT (6) DHT (8) DHT (10) DHT (12) Hình Hoạt tính kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 19 Bảng Đường kính vịng kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm Tác nhân kháng Nồng độ Đường kính vịng kháng C.albicans (mg/mL) (mm) Fluconazole 25 µg/ khoanh giấy 29,83±2,14 Nước cất - - 2000 9,67±0,82 1000 8,50±1,05 500 7,17±0,75 250 - 125 - 2000 12,83±0,98 1000 10,17±0,75 500 8,50±1,05 250 - 125 - 2000 18,50±1,05 1000 16,00±1,26 500 13,83±0,98 250 11,00±1,41 125 8,67±1,03 2000 22,83±1,47 1000 19,50±1,05 500 17,17±1,47 250 13,83±1,17 125 11,67±1,03 Cao chiết DHT (6) Cao chiết DHT (8) Cao chiết DHT (10) Cao chiết DHT (12) Ghi chú: “-” Khơng xác định vịng kháng nấm 20 Đường kính vịng kháng (mm) 25 20 15 10 0 500 1000 1500 2000 Nồng độ cao chiết mg/mL DHT (6) DHT (8) DHT (10) DHT (12) Biểu đồ Hoạt tính kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm Tác động kháng nấm C.albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm xác định dựa khả ức chế phát triển C.albicans thể qua đường kính vịng kháng nấm hình 3.4 Trong thử nghiệm này, kết bảng 3.6 biểu đồ 3.1 cho thấy đường kính vịng kháng C albicans cao chiết DHT (6), DHT (8), DHT (10) DHT (12) tỉ lệ thuận với nồng độ cao chiết tức nồng độ cao chiết cao hiệu kháng C albicans cao nồng độ cao chiết đường kính vịng kháng tăng tỉ lệ thuận với lượng Hoàng bá sử dụng thuốc 21 3.6.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu phát triển C albicans (MIC) Bảng Số lượng khúm nấm C albicans đĩa thạch Tác nhân kháng Nồng độ Số lượng khuẩn lạc Số lượng khuẩn lạc C.albicans (mg/mL) phát triển sau 24 phát triển sau 48 Flu 25 µg/20µL 0 NC - >300 >300 2000 >3 >3 1000 >18 >23 500 >24 >30 250 >31 >37 125 >48 >51 2000 0 1000 16 250 >25 >27 125 >36 >42 2000 0 1000 0 500 0 250 125 3 2000 0 1000 0 500 0 250 125 1 DHT (6) DHT (8) DHT (10) DHT (12) Kết bảng 3.7 tiến hành xác định MIC phương pháp đĩa thạch cho thấy sau 24 48 đĩa đối chứng chứa Flu không thấy phát triển C.albicans, đĩa đối chứng nước cất vi khuẩn phát triển khắp bề mặt đĩa thạch (>300 22 khuẩn lạc), điều chứng tỏ thử nghiệm MIC có ý nghĩa để tiếp tục đánh giá giá trị MIC cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm Thơng qua kết khảo sát nhận thấy MIC nấm C.albicans DHT (6) cao > 2000 mg/mL, DHT (8) 1000 mg/mL, riêng DHT (10) DHT (12) cần nồng độ thấp 250 mg/mL 125 mg/mL ức chế phát triển C.albicans 3.6.3 Bàn luận Kết chiết xuất cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm cho thấy hiệu suất, hình thức cảm quan bên ngồi, độ ẩm, độ tro tồn phần khơng có khác biệt đáng kể Kết thí nghiệm kháng C albicans sử dụng khoanh giấy khuếch tán cho thấy DHT (10), DHT(12) tất nồng độ khảo sát từ 125 – 2000 mg/mL tạo vòng kháng, DHT (8), DHT (6) nồng độ 500 mg/mL bắt đồng có tác động kháng C.albicans Tại nồng độ khảo sát, so sánh với cao chiết DHT (8): Khi giảm lượng Hoàng bá xuống 6g cao chiết DHT (6) tạo vòng kháng nhỏ 2-3 mm ngược lại gia lượng Hoàng bá lên 10g cao chiết DHT (10) tạo vòng kháng lớn 5-6 mm gia lên 12g DHT (12) tạo vòng kháng lớn 8-10 mm Như cao chiết nước thuốc Hồng dị thang có khả kháng C.albicans nhiều gia vị Hoàng bá lên 10g, 12g so với lượng thuốc gốc 8g ngược lại giảm vị Hồng bá xuống 6g tác động kháng C.albicans giảm Khi tiến hành thử nghiệm tìm MIC DHT (10), DHT (12) nồng độ 250 mg/mL 125 mg/mL ức chế tối thiểu phát triển nấm C.albicans (số lượng khuẩn lạc phát triển < 3) DHT (8) nồng độ cao chiết lên đến 1000 mg/mL có khả ức chế DHT (6) nồng độ cao khảo sát 2000 mg/mL chưa ức chế phát triển C albicans Từ kết cho thấy, để tăng hiệu kháng nấm C.albicans thuốc Dị hồng thang gia thêm lượng vị Hoàng bá 23 CHƯƠNG 4- KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Bảng 4.1 Tóm tắt kết nghiên cứu Cao chiết Hình thức DHT (6) Rắn Hiệu suất Độ ẩm Độ tro Vòng kháng MIC (%) (%) (%) (mm) (mg/mL) 12.12 4.09 4,34 7.17-9.67 >2000 11.48 4.18 5,21 8.05-12.83 1000 12.45 4.10 4,94 8.67-18.50 250 14.19 4.32 5,08 11.67-22.83 125 Khô rời DHT (8) Màu vàng cánh gián DHT (10) DHT (12) Ngọt, đăng Đánh giá so sánh tác động kháng C albicans thuốc Dị hoàng thang gia giảm vị Hoàng bá DHT(6), DHT(8), DHT(10) DHT(12) Tác động kháng nấm C albicans in vitro cao chiết nước thuốc Dị hoàng thang tỷ lệ thuận với lượng Hoàng bá gia giảm Khi Hoàng bá gia lên 10 g, 12 g làm tăng hiệu kháng C albicans thuốc Dị hoàng thang so với gốc (Hoàng bá g) 4.2 Kiến nghị Tiến hành nghiên cứu tác dung kháng C albicans thuốc Dị hoàng thang in vivo Các nghiên cứu độc tính thuốc Dị hoàng thang 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO Array J A., et al (2011), “Phytochemical screening,Antifungal and Antioxidant activity of Euryale ferox- SALISB a threatened aquatic plant of Kashmir Himalaya”, Journal of Pharmacy Research, 4(7), pp 2170-2174 Bộ môn phụ sản – Trường Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh (2011), Sản phụ khoa – Tập II, NXB Y học, tr 753-754 Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam lần xuất thứ tư, NXB Y Học, tr 730-731, 827-828, 862-863, 884-885, 906-907, 920, PL 9, PL 129-131, PL 182-183, PL 240, PL 244-246, PL 259-269 Clinical and Laboratory Standards Institute (2009), Method for Antifungal Disk diffusion susceptibility Testing of Yeasts, Approved ,Guideline 3rd edition CLSI document M44-A2 Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học, tr 197199, 215-217, 774-775, 846-850 Hoffmann David, Fnimh, AHG (2003), medical herbalism: the science and practice of herbal medicine Lim S., Lee D., Kim H (2004), “Invitro activities of Terminaliae Fructus, Plantaginis Semen, Cnidii Rhizoma, Taraxaci Herba, Scutellarie Radix extract against vaginosis associated Candida albicans, Candida tropicalis and Gardnerella vaginali”, The Journal of Oriental Gynecology, 17(4), pp 34-35 Nguyễn Phương Dung (2016), Dược học cổ truyền, NXB Đại học Sư Phạm TP Hồ Chí Minh, tr 103-104 Park K., et al (1999), “Differential inhibitory effects of protoberberines on sterol and chitin biosyntheses in Candida albicans”, Journal Antimicrobial Chemotherapy, 43(5), pp 667-674 10 Phạm Văn Trịnh, Lê Thị Hiền (2008), Bệnh học ngoại – phụ Y học cổ truyền, NXB Y Học, tr 162-165, 169-172 11 Phan Thị Mỹ Linh, Võ Thanh Phong, Lê Thị Lan Hương (2017), đánh giá tác dụng kháng Candida albicans cao chiết Dị hoàng thang in vitro, tạp chí Y học Tp Hồ Chí Minh: Hội nghị khoa học kỹ thuật khoa Y Học Cổ Truyền – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh năm 2017, phụ tập 21-số 12 Phó Thanh Chủ (2007), Nữ khoa nhi khoa, NXB Phương Đông, tr 18-32 25 13 Rogerio A Lobo, David M Gershenson, Gretchen M Lentz, Fidel A Valea (2017), Comprehensive Gynecology (7th edition), Elsevier Health Sciences, pp 541-543 14 Trần Quốc Bảo, Trần Quốc Bình (2011), Thuốc y học cổ truyền ứng dụng lâm sàng, NXB Y học – Hà Nội, tr 50 15 Trần Xuân Mai, Trần Thị Kim Dung, Ngô Hùng Dũng, Lê Thi Xuân, Phan Anh Tuấn (2005), Vi nấm học, Ký sinh trùng y học, NXB Đà Nẵng, tr 380-382, 391-392, 433, 439, 458-463, 466-468 26 PHỤ LỤC Phụ lục Đường kính vịng kháng C albicans thuốc đối chứng Fluconazole Đường kính vịng kháng (mm) Tác nhân kháng C albicans Lần Lần Lần Lần Lần Lần Fluconazole 31 28 29 29 31 28 Nước cất - - - - - - Ghi chú: “-” Không xác định vòng kháng Phụ lục Độ ẩm Bài thuốc Độ ẩm thuốc (%) Độ ẩm cao chiết (%) DHT (6) 5.18 4.98 5.56 4.21 4.52 3.95 DHT (8) 4.48 5.08 4.89 4.59 4.85 5.02 DHT (10) 5.26 4.59 5.23 3.92 4.49 5.11 DHT (12) 5.86 5.41 4.82 4.76 5.19 3.98 Phụ lục Độ tro toàn phần Khối lượng (g) Cao chiết Chén mẫu DHT (8) DHT (10) DHT (12) Độ tro (%) toàn phần (%) Chén nung Mẫu cao 21.01 20.98 0.66 21.95 21.92 0.63 22.21 22.18 0.71 4.41 23.42 23.39 0.64 4.59 23.41 23.38 0.65 22.34 22.30 0.68 6.18 20.87 20.84 0.63 4.02 22.56 22.53 0.63 20.97 20.94 0.54 5.82 21.48 21.45 0.65 4.99 21.49 21.46 0.71 22.09 22.06 0.54 sau nung DHT (6) Độ ẩm cao 3.63 4.23 4.82 4.51 4.64 4.97 4.85 4.99 4.43 5.83 27 Phụ lục Đường kính vịng kháng C albicans vị thuốc thành phần thuốc Dị hoàng thang Tác nhân kháng Nồng độ C albicans Fluconazole Đường kính vịng kháng (mm) (25 µg/ khoanh giấy) Hoài sơn Khiếm thực Hoàng bá Dịch chiết nước tỷ lệ 2:1 (w/v) Xa tiền tử Bạch 29 28 31 - - - - - - 14 16 16 - - - - - - Ghi chú: “-” Không xác định vòng kháng C albicans Phụ lục Đường kính vịng kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hồng thang gia giảm Đường kính vịng kháng (mm) Tác nhân kháng Nồng độ (mg/mL) C albicans DHT (6) DHT (8) DHT (10) 2000 1000 500 250 125 11 10 - - - - 7 - - 10 - - 9 - - 10 - - 12 10 - - 13 9 - - 14 11 10 - - 12 10 - - 14 10 - - 12 11 - - 18 17 13 11 17 16 14 9 19 17 13 12 10 28 DHT (12) 18 17 15 13 20 14 13 11 19 15 15 10 24 19 17 14 13 22 21 19 13 12 25 20 15 15 10 21 19 16 15 12 23 20 18 12 11 22 18 18 14 12 Ghi chú: “-” Không xác định vòng kháng C albicans 29 ... C albicans Candida albicans DĐVN Dược điển Việt Nam DHT Dị hoàng thang DHT (6) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 6g Hoàng bá DHT (8) Bài thuốc Dị hoàng thang chứa 8g Hoàng bá DHT (10) Bài thuốc Dị. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀOTẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG KHÁNG CANDIDA ALBICANS CỦA BÀI THUỐC DỊ HOÀNG THANG GIA GIẢM TRÊN IN VITRO. .. cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 18 Bảng Độ tro toàn phần cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm 18 Bảng Đường kính vịng kháng C albicans cao chiết thuốc Dị hoàng thang gia giảm