TÀI LIỆU TRẮC NGHIỆM, BÀI GIẢNG PPT CÁC MÔN CHUYÊN NGÀNH Y DƯỢC HAY NHẤT CÓ TẠI “TÀI LIỆU NGÀNH Y DƯỢC HAY NHẤT” ;https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. TÀI LIỆU LUẬN VĂN – BÁO CÁO – TIỂU LUẬN (NGÀNH Y DƯỢC). DÀNH CHO SINH VIÊN CÁC TRƯỜNG ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH Y DƯỢC VÀ CÁC NGÀNH KHÁC, GIÚP SINH VIÊN HỆ THỐNG, ÔN TẬP VÀ HỌC TỐT KHI HỌC TÀI LIỆU LUẬN VĂN – BÁO CÁO – TIỂU LUẬN (NGÀNH Y DƯỢC)
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUN BỘ MƠN SINH HỌC THỰC NGHIỆM ĐỀ CƯƠNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI ĐÁNH GIÁ THỰC TRẠNG NHIỄM HPV (HUMAN PAPILLOMA VIRUS) Ở CỔ TỬ CUNG PHỤ NỮ NGƯỜI KINH TẠI TỈNH KONTUM NĂM 2014 BẰNG KỸ THUẬT REAL-TIME PCR Sinh viên thực hiện: Lớp: ĐẮK LẮK, NĂM MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Tính cấp thiết Mục tiêu đề tài Ý nghĩa 3.1 Ý nghĩa khoa học .2 3.2 Ý nghĩa thực tiễn .2 CHƯƠNG TỔNG QUAN .4 1.1 Khái niệm ung thư cổ tử cung 1.1.1 Cấu tạo cổ tử cung 1.1.2 Tác nhân gây ung thư cổ tử cung 1.1.3 Sự hình thành ung thư xâm lấn cổ tử cung nhiễm HPV 1.1.4 Cơ chế sinh học phân tử gây ung thư cổ tử cung 1.2 Đặc điểm sinh học HPV (Human Papilloma Virus) 1.2.1 Cấu tạo HPV 1.2.2 Các tuýp HPV .8 1.2.3 Cơ chế xâm nhiễm nhân lên HPV 1.2.4 Khả đáp ứng miễn dịch nhiễm HPV 1.3 Tình hình nghiên cứu tỷ lệ nhiễm HPV giới Việt Nam 10 1.3.1 Trên giới .10 1.3.2 Ở Việt Nam 10 1.4 Các yếu tố nguy ung thư cổ tử cung 11 1.5 Kỹ thuật real – time PCR 12 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nội dung nghiên cứu 13 2.2 Đối tượng nghiên cứu 13 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 13 2.3.1 Địa điểm nghiên cứu 13 2.3.2 Thời gian nghiên cứu 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu .13 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu 13 2.4.2 Mẫu nghiên cứu 13 2.4.3 Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm HPV nghiên cứu 14 2.4.4 Phương pháp khảo sát số vấn đề liên quan đến phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung 15 2.4.5 Phương pháp thu thập số liệu 17 2.4.6 Biện pháp hạn chế sai lệch thông tin 18 2.4.7 Kỹ thuật xét nghiệm chuẩn đoán HPV nghiên cứu 18 2.5 Kỹ thuật Real – time PCR .18 2.6 Xử lý phân tích số liệu 20 2.7 Một số hạn chế đề tài 21 2.8 Y đức nghiên cứu 21 PHỤ LỤC .22 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết Ung thư cổ tử cung (UTCTC) bệnh ung thư phụ khoa thường gặp phụ nữ tuổi 35 trở lên Trên giới, phút lại có phụ nữ chết UTCCT, hàng năm có khoảng 530.232 trường hợp mắc UTCCT chuẩn đoán, chiếm 8,8% trường hợp UTCCT phụ nữ khoảng 275.008 phụ nữ (51,9%) chết UTCCT Tại Việt Nam, ước tính 100.000 người phụ nữ có 20 trường hợp mắc bệnh UTCCT 11 trường hợp tử vong, hàng năm có khoảng 5.000 trường hợp mắc 2.000 trường hợp tử vong UTCCT Một số lý dẫn đến tỉ lệ mắc bệnh UTCTC cao bao gồm số phụ nữ tham gia khám phụ khoa định kỳ để tầm soát ung thư cịn thấp, chương trình tầm sốt chưa bao phủ rộng, ý thức phòng bệnh UTCCT phụ nữ cịn hạn chế thiếu chương trình tun truyền giáo dục UTCTC xảy với người phụ nữ đặc biệt bệnh thường gặp người phụ nữ 35 – 40 tuổi trở Đây giai đoạn quan trọng đời người phụ nữ với nhiều thiên chức lớn lao: làm vợ, làm mẹ, người chăm sóc gia đình nữa, độ tuổi người phụ nữ đồng thời tạo dựng nghiệp cho HPV (Human Papilloma Virus) xác định nguyên nhân cần thiết gây UTCTC Hiện có 100 tuýp HPV biết đến có 16 tuýp xếp vào dạng có nguy cao gây UTCTC, tuýp HPV16 HPV18 gây nguy hiểm Tiếp theo tuýp HPV45 gây 70% trường hợp UTCTC Các cịn lại có khả gây tổn thương vùng sinh dục lành tính gây muộn cóc tay chân Ở vùng địa lý khác tỷ lệ nhiễm HPV phụ nữ phân bố nhóm nguy khác khác Một số yếu tố xem tăng nguy nhiễm HPV phát triển UTCTC như: phụ nữ có quan hệ tình dục sớm (trước 18 tuổi) quan hệ với nhiều người; dùng thuốc tránh thai kéo dài; sinh đẻ nhiều (từ lần trở lên); hút thuốc lá; tình trạng suy giảm miễn dịch nhiễm HIV; mắc bệnh lây truyền qua đường tình dục, đặc biệt bệnh viêm sinh dục nhiễm Trichomonas, Chlamydia trachomatis, Herpes simplex virus týp (HSV2) UTCTC không xảy đột ngột mà âm thầm trải qua giai đoạn từ lúc nhiễm HPV, gây nên biến đổi bất thường tế bào cổ tử cung, tổn thương tiền ung thư đến ung thư, kéo dài trung bình từ 10 – 15 năm Đặc biệt giai đoạn tiền ung thư gần khơng có triệu chứng gì, người dân nhận biết bệnh không khám phụ khoa Đây nỗi lo người phụ nữ bắt đầu quan hệ tình dục Làm để phịng ngừa phát sớm UTCTC ln câu hỏi lớn cần trả lời Tỉnh Kon Tum Tỉnh có dân số trẻ Đến năm 2009, dân số tồn Tỉnh 432.865 người, có 24 dân tộc sinh sống, dân tộc thiểu số chiếm 53% dân số, có dân tộc người sống lâu đời bao gồm: Xơ Đăng; Bana; Giẻ - TRiêng, Gia Rai; Brâu Rơ Măm Có khoảng 234.114 dân số độ tuổi lao động làm việc ngành kinh tế, có khoảng 162.470 người lao động ngành nông - lâm – thủy sản Đời sống người dân ổn định nhiều người nghèo, trình độ dân trí chưa cao, cịn số phong tục tập quấn lạc hậu nên kiến thức chăm sóc sức khỏe sinh sản nói chung, viêm nhiễm đường sinh dục nữ hạn chế Do việc phát nhiễm HPV, ngăn ngừa ung thư cổ tử cung địa bàn Tỉnh Kon Tum việc đáng quan tâm Thực tế 95% bệnh ung thư cổ tử cung tuýp HPV nguy gây nên, có nghĩa phương pháp phát tin cậy có liên quan đáng kể đến chuẩn đốn tiên lượng Các phương pháp thông thường để phát vi rút sử dụng kỹ thuật PCR Tuy nhiên kỹ thuật PCR mang tính định tính khơng mang tính định lượng kỹ thuật Real – time PCR vừa định tính vừa định lượng cho phép xác định mức độ nhiễm vi rút Trên sở tơi nghiên cứu đề tài “Đánh giá thực trạng nhiễm HPV (Human Papilloma Virus) cổ tử cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 2014 kỹ thuật Real-time PCR” Mục tiêu đề tài Xác định tỷ lệ nhiễm HPV, nhiễm tuýp HPV nguy cao dẫn đến ung thư cổ tử cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 2014 kỹ thuật Real-time PCR Đề xuất số vấn đề liên quan đến việc phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung Ý nghĩa 3.1 Ý nghĩa khoa học Bằng kỹ thuật Real-time PCR, đề tài xác định tỷ nhiễm HPV, tỷ lệ nhiễm tuýp có nguy cao, mức độ nhiễm HPV tế bào cổ cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 214 Ngồi đề tài cịn đề xuất vấn đề liên quan đến việc phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu đề tài góp phần vào cơng tác tư vấn bảo vệ sưc khỏe cho cộng đồng, đặc biệt phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum việc hiểu biết, nhận thức bệnh biện pháp đề phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Khái niệm ung thư cổ tử cung Ung thư cổ tử cung tổn thương ác tính phát triển từ tế bào cổ tử cung Ung thư xuất tế bào tử cung biến đổi bất thường cách tự động khơng kiểm sốt Ung thư cổ tử cung tiến triển cách xâm lấn chỗ hay lan rộng đến quan khác thể gây tử vong Nhiễm HPV lâu dài điều kiện thuận lợi dẫn đến ung thư cổ tử cung Một triệu chứng thông thường chảy máu âm đạo bất thường, giai đoạn muộn hơn, người bệnh có biểu huyết trắng có mùi hơi, có lẫn máu, chảy máu âm đạo sau giao hợp sau làm việc nặng dù không chu kỳ kinh nguyệt Nặng chảy dịch có máu âm đạo, kèm theo đau bụng, lưng, vùng chậu chân Cũng có nhiều trường hợp khơng có triệu chứng phát ung thư Người phụ nữ giới bị phát mắc bệnh ung thư cổ tử cung Henrietta Lacks, người Mỹ gốc Phi qua đời 31 tuổi Tuổi thường gặp ung thư cổ tử cung 30 – 59, đỉnh cao 48 – 52 tuổi Có thể nhận thấy đỉnh ung thư cổ tử cung muộn tân sinh cổ tử cung khoảng 10 – 15 năm Có 99,7% trường hợp ung thư cổ tử cung có diện HPV tuýp nguy cao theo nghiên cứu Cơ quan Quốc tế ung thư Ở Việt Nam UTCCTU ung thư thường gặp người phụ nữ từ 15 – 44 tuổi mà nguyên nhân gây bệnh nhiễm HPV 1.1.1 Cấu tạo cổ tử cung Gồm hai phần: cổ cổ - Cổ ngồi: phần nhơ vào âm đạo, bao phủ biểu mơ lát tầng khơng sừng hóa, giống tế bào biểu mô lát tầng âm đạo trơn láng hơn, gồm có lớp tế bào từ L1 – L5 + L1: lớp đáy (lớp sinh sản) có hàng tế bào + L2: lớp cận đáy có – hàng tế bào + L3: lớp trung gian (lớp tế bào gai) có – hàng tế bào + L4: lớp bề mặt (lớp tế bào gai trưởng thành) có – hàn tế bào + L5: lớp bong vảy - Cổ trong: ống hình trụ nối cổ ngồi với thân cổ tử cung bao phủ lớp tế bào đơn tiết nhầy, mặt đáy tế bào màng đáy bên có lớp tế bào khơng liên tục, tế bào có kích thước nhỏ, nhân tịn, tương đối khó thấy gọi tế bào dự trữ Các tế bào dự trữ có chức tương tự tế bào lớp đáy biểu mơ cổ ngồi, giữ nhiệm vụ sinh sản tế bào trụ tiết nhầy thay cho tế bào bị hư hỏng, bong tróc Biểu mơ gấp nếp sâu vào mô đệm tạo thành khe tuyến Lỗ cổ tử cung ranh giới giũa cổ cổ cổ tử cung - Vùng tiếp giáp: vùng nằm biểu mô lát tầng khơng sừng hóa cổ ngồi biểu mô tuyến trụ đơn cổ gọi lỗ cổ ngồi mơ học Đây vùng chuyển tiếp hai loại tế bào biểu mô Gai – Trụ Khi chưa đến tuổi dậy đuờng tiếp hợp Gai – Trụ xa khỏi lỗ tử cung Ở phụ nữ tuổi hoạt động tình dục, tuyến cổ lan dần xuống cổ tạo vùng lộ tuyến cổ tử cung, đẩy đường tiếp hợp Gai - Trụ xa khỏi lỗ cổ tử cung, biểu mơ cổ phải thích nghi với mơi trường ưa a xít âm đạo cách tăng sản tế bào dự trữ tạo nên lớp tế bào biệt hóa theo hướng gai, đẩy dần lớp tế bào trụ lên cuối hình thành nên biểu mơ lát tùng hình thành nên biểu mơ lát tầng tương tự cổ ngồi Chính hoạt động tăng sản chuyển sản với tác nhân viêm kéo dài, dẫn đến nghịch sản không điều trị chuyển thành ung thư cổ tử cung 1.1.2 Tác nhân gây ung thư cổ tử cung Nguy ung thư cổ tử cung liên quan tới yếu tố như: nhiều bạn tình, quan hệ tình dục tuổi thiếu niên, sinh đẻ nhiều, sử dụng thuốc ngừa thai lâu dài, thời gian đặt vòng tránh thai, mắc bệnh truyền nhiễm qua đường tình dục, viêm nhiễm dai dẳng, hút thuốc lá, nhiễm HPV tuýp nguy cao đứng hàng đầu Vài năm sau bắt đầu sinh hoạt tình dục giao hợp thường xyên, người ta có 50 – 80% khả nhiễm HPV nguy mắc bệnh tăng theo số bạn tình đời Phần lớn, thể người có khả tạo miễn nhiễm tiêu diệt HPV vòng – năm HPV biến thể Tuy nhiên – % phụ nữ không diệt siêu vi trùng bị nhiễm dần nặng lên Sau vài năm, HPV gây biến đổi bất thường niêm mạc cổ tử cung, tạo tế bào bất thường, có khả hóa ác Nếu khơng khám nghiệm, phát giác theo dõi, tế bào phát triển thành ác tính, xâm lấn đưa đến ung thư cổ tử cung Nhà khoa học người Canada Alexander Meisels lần phát diên tế bào bóng hay cịn gọi tế bào rỗng khẳng định phết tế bào cổ tử cung có nhiễm HPV năm 1976 Các năm sau ngày có nhiều nghiên cứu cho thấy mối liên quan nhiễm HPV ung thư cổ tử cung Vào năm 2000 mối liên quan nhiễm HPV ung thư cổ tử cung nhà khoa học khẳng định sau tổng hợp kết nghiên cứu nhiễm HPV ung thư cổ tử cung Nhà vi rút học người Đức Harald Zur Hausen nhận giải Nobel y học kiện vào năm 2008 1.1.3 Sự hình thành ung thư xâm lấn cổ tử cung nhiễm HPV Quá trình tiến triển từ bị nhiễm HPV đến ung thư cổ tử cung theo lâm sàng trải qua giai đoạn: - Giai đoạn 0: ung thư chỗ - Giai đoạn I: tế bào ung thư khu trú cổ tử cung + Ia: vi xâm lấn – tổn thương có d < mm + Ib: xâm lấn – tổn thương có d > 2mm - Giai đoạn II: ung thư lan rộng tới âm đạo trừ 1/3 dưới, lan đến chu cung chưa đến vách chậu + IIa: lan đến âm đạo trừ 1/3 + IIb: chu cung đáy tử cung di động - Giai đoạn III: ung thư lan rộng đến 1/3 âm đạo, lan đến chu cung – vách chậu + IIIa: lan tới 1/3 âm đạo + IIIb: lan tới vách chậu - Giai đoạn IV: di + IVa: ung thư lan rộng quan vùng chậu bàng quang, trực tràng hay quan xa + IVb: di xa Quá trình hình thành tốc độ biến chuyển ung thư cổ tử cung phụ thuộc vào hệ miễn dịch người bị nhiễm mạnh hay yếu Khoảng 80% phụ nữ tuổi trưởng thành bị nhiễm HPV lần đời Tuy nhiên có 10% phụ nữ bị nhiễm HPV có biểu loạn sản giai đoạn tiền ung thư, số có gần 8% ung thư chổ Khoảng 10 – 20% số người ung thư giai đoạn chưa xâm lấn giới hạn cổ tử cung, không điều trị trở thành ung thư dạng xâm lấn Như vậy, tổng số triệu phụ nữ bị nhiễm HPV ban đầu có trung bình 0,16% hay 1.600 người bị ung thư xâm lấn [ ] 1.1.4 Cơ chế sinh học phân tử gây ung thư cổ tử cung Các týp HPV nguy cao nguyên nhân trực tiếp dẫn đến ung thư cổ tử cung Cơ chế sinh học phân tử gây ung thư cổ tử cung diễn sau: vi rút xâm nhiễm vào lớp tế bào đáy thuộc biểu mô lát tầng thể, týp HPV nguy cao sản sinh gen gây ung thư (oncogen) chủ yếu E6 E7 Sau gen chèn vào hệ gen tế bào vật chủ làm cấu trúc gen E2 HPV bị phá vỡ không cịn khả kiể sốt hai gen E6 E7, gen mã tổng hợp gen tương ứng đồng thời tương tác vơ hiệu hóa gen điều hịa chu trình phân bào tế bào chủ pRb p53 thúc đẩy trình phân bào Kết tế bào nhiễm HPV sinh sản cách tự phát, khơng kiểm sốt phát triển thành tế bào ung thư Đồng thời gen điều hòa pRb tế bào chủ bị kìm hãm tương tác với gen E7, tế bào tăng sinh gen điều hịa p6INK4A nhằm tái lập kiểm sốt Kết làm cho tế bào bị nhiễm HPV týp nguy cao tăng cao hàm lượng E7 vi rút p6INK4A có khả chuyển thành dạng ung thư Các nghiên cứu Microarray cho thấy nhiễm HPV, gen có vai trị quan trọng trình sinh trưởng tế bào đáp ứng miễn dịch interferon chống vi rút bị kiềm hãm, đồng thời làm tăng biểu hàng loạt gen có vai trị hình thành khối u Nhiều nghiên cứu cho thấy đồng nhiễm nhiều týp HPV với có mặt nguy cao làm tăng khả tiến triển ung thư cổ tử cung Tuy tuýp nguy thấp không gây ung thư lây nhiễm độc lập, đồng nhiễm tuýp có nguy cao chúng làm tăng nhanh chuyển dạng tế bào rút ngắn thời gian tiến triển thành ung thư cổ tử cung Tỷ lệ đồng nhiễm cao 39%[ ] 1.2 Đặc điểm sinh học HPV (Human Papilloma Virus) 1.2.1 Cấu tạo HPV Human Papilloma Virus loại vi rút có lõi ADN khơng có vỏ bọc thuộc họ Papovaviridae, dịng Taxonomic cổ Có kích thước nhỏ, đường kính trung bình khoảng 50 – 55 nm, vỏ casid HPV có 20 mặt cấu thành 72 capsomer, capsomer gồm có hai loại protein casid L1 L2 Protein L1 pentamer thành phần chủ yếu vỏ capsid Genome HPV phân tử ADN kép, khép vịng, siêu xoắn, có kích thước nằm khoảng từ 7,2 kbp đến 8,1 kbp Khung đọc mở mã hóa cho tồn protein HPV nằm mạch phân tử ADN kép Dựa vào chức năng, genome HPV chia thành ba vùng chính: - Vùng gen mã hóa cho protein sớm (E-Early) gồm gen E1, E2, E3, E4, E6 E7 Chứa khung đọc mở mã hóa cho protein tham gia vào trình chép, phiên mã chuyển dạng tế bào trình nhân lên vi rút tiến triển ung thư cổ tử cung - Vùng gen mã hóa cho protein muộn (L – Late) chứa khung đọc mở mã hóa cho protein cấu trúc L1 L2 hình thành vỏ capsid vi rút - Vùng điều hòa ngược gọi vùng điều khiển dài (LCR – Long Control Region) khơng có chức mã hóa, làm nhiệm vụ kiểm sốt q trình phiên mã, vùng có kích thước 400 – 1000bp Vùng LCR mang trình tự điều khiển trình chép HPV 1.2.2 Các tuýp HPV HPV có 100 tuýp phát dựa vào khác biệt trình tự ADN, khác biệt gen tuýp vào khoảng 10% Các tuýp xác định lai phân tử ADN tuýp nghiên cứu týp biết, mức độ tương đồng nhỏ 50% coi tuýp Dựa vào khả gây ung thư vi rút ta chia chúng thành nhóm: - Nhóm nguy cao (HR – HPV – Hight Risk Human Papilloma Virus): gồm tuýp 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 55, 56, 59, 66, 68 Các týp có khả tổ hợp ngẫu nhiên vào ADN tế bào chủ dẫn đến tăng hoạt động gen E6, E7 vi rút Gen E7 gây bất hoạt gen ức chế u nằm nhiễm sắc thể 17 p53 gen ức chế u nằm nhiêm sắc thể số 13 pRb (Rb – Retino blastoma) tế bào chủ Gen E6 thúc đẩy giáng hóa gen p53 gen bax – gen thúc đẩy tự hủy tế bào, đồng thời tái hoạt hóa telomerase, kết tế bào chủ bị thúc đẩy tăng sinh hóa, dẫn đến loạn sản ung thư cổ tử cung[ ] Nhiều nghiên cứu gần cho thấy tuýp HPV nguy cao 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 diện gần 100% trường hợp ung thư cổ tử cung xâm lấn, 75 – 90% tổn thương tiền ung thư Có đến 99,7 % phụ nữ ung thư cổ tử cung tìm thấy HPV phết tế bào cổ tử cung, tuýp 16 chiếm 50%, tuýp 18, 31 45 chiếm 30% - Nhóm nguy thấp (LR – HPV – Low Risk Human Papilloma Virus): gồm týp 1, 2, 4, 6, 7, 11, 26, 42, 53, 54, 62, 66, 70, 73 AD týp tồn dạng vịng khơng tổ hợp vào ADN tế bào chủ nên có khả gây ung thư, ρ = 0,1186 theo tỷ lệ nhiễm HPV theo nghiên cứu Vũ Thị Nhung Thành phố Hồ Chí Minh năm 2006 + Độ xác tương đối (sai số cho phép tương đối), chọn ε = 0,37 Thay số liệu vào tính n = 209 mẫu - Phương pháp chọn mẫu: chọn mẫu ngẫu nhiên hệ thống Số lượng mẫu 210 mẫu Những yêu cầu phụ nữ trước lấy mẫu: + Không thụt rửa sâu vào âm đạo trước xét nghiệm + Khơng quan hệ tình dục trước xét nghiệm – ngày + Không điều trị bệnh phụ khoa trước lấy mẫu – ngày Người nghiên cứu Cán Y tế giải thích rõ mục tiêu yêu cầu nghiên cứu Đối tượng đồng ý tham gia nghiên cứu phát giấy mời có ghi thời gian địa điểm thu mẫu - Tiêu chí chọn mẫu + Tiêu chí đưa vào: tất phụ nữ người Kinh tham gia quan hệ tình dục từ 15 – 60 tuổi có quan hệ tình dục đồng ý tham gia nghiên cứu + Tiêu chí loại trừ: Đang chu kỳ kinh nguyệt Phụ nữ cắt bỏ cổ tử cung Viêm nhiễm nặng đặt thuốc Phụ nữ có bệnh tâm thần Phụ nữ có thai Khơng hợp tác 2.4.3 Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm HPV nghiên cứu Tất mẫu sau thu nhận từ đối tượng nghiên cứu xét nghiệm Sinh học phân tử kỹ thuật Real – time PCR để xác định mẫu âm tính hay dương tính với vi rút HPV Sau mẫu dương tính với vi rút HPV tiếp tục phân tích định tuýp kỹ thuật Real – time PCR - Xét nghiệm Sinh học phân tử kỹ thuật Real – time PCR xác định nhiễm HPV: nhiễm HPV biến nhị giá có giá trị: + Nhiễm: dương tính với vi rút HPV, có đường biểu diễn dương tính chu kỳ 25 trở sau 14 + Khơng nhiễm: âm tính với vi rút HPV chứng nội phải dương tính, có đường biểu diễn đường - Xét nghiệm Real – time PCR định tuýp HPV: tuýp HPV biến định tính, có giá trị : 16, 18, 31, 33, 35 2.4.4 Phương pháp khảo sát số vấn đề liên quan đến phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung Các yếu tố nguy lây nhiễm HPV: - Dân tộc: biến định tính xác định thơng qua giấy chứng minh nhân dân, có giá trị: kinh; dân tộc thiểu số - Khu vực sinh sống: biến định tính khơng liên tục, xác định thơng qua vấn, có giá trị: nông thôn; thị trấn, thị tứ; thành phố - Thời gian sinh sống địa phương đến nay: biến định lượng khơng liên tục, tính năm, sau mã hóa thành biến định tính, gồm giá trị: nhỏ năm; từ – năm; từ 10 – 14 năm; từ 15 – 19 năm; từ 20 năm trở lên - Tuổi: biến định tính khơng liên tục, tính năm, xác định thơng qua giấy chứng minh nhân dân, sau mã hóa thành biến định tính, có giá trị: 18 – 19 tuổi; 20 – 29 tuổi; 30 – 39 tuổi; 40 – 60 tuổi - Trình độ học vấn: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: mù chữ; tiểu học; trung học sở; trung học phổ thông; sau trung học phổ thông - Nghề nghiệp: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: cơng chức nhà nước; cơng nhân; nông dân; buôn bán; nội trợ; nghề khác - Tình trạng nhân: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có chồng; góa chồng; ly dị, ly thân; độc thân có quan hệ tình dục - Tuổi bắt đầu quan hệ tình dục: biến định lượng khơng liên tục, tính năm, xác định thơng qua vấn, sau mã hóa thành biến định tính, có giá trị: 15 - 19 tuổi; từ 20 - 29 tuổi; 30 – 39 tuổi; 40 – 60 tuổi - Tuổi bắt đầu sinh con: biến định lượng không liên tục, xác định thông qua vấn, sau mã hóa thành biến định tính, có giá trị: 15 – 19 tuổi; 20 – 29 tuổi; 30 – 39 tuổi; 40 – 60 tuổi - Số lần sinh con: biến định lượng không liên tục, tính số lần sinh, xác định thơng qua vấn, sau mã hóa thành biến định tính, có giá trị: chưa sinh; sinh 12 lần; từ lần trở lên 15 - Tính chung thủy người chồng: biến định tính, xác định thơng qua vấn, gồm giá trị: chung thủy; không chung thủy; khơng biết - Số bạn tình: biến định lượng khơng liên tục, tính số người, xác định thơng qua vấn, sau mã hóa thành biến định tính, có giá trị: người; từ người trở lên - Tình hình viêm nhiễm đường sinh dục, biến định tính, xác định thơng qua vấn Có giá trị: khơng; có ; dai dẳng - Tình hình sử dụng bao cao su: biến định tính xác định thông qua vấn, gồm giá trị: thường xun; khơng thường xun; khơng dùng -Tình hình sử dụng thuốc tránh thai: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, gồm giá trị: có; khơng; thường xuyên; không thường xuyên - Tiền sử nạo hút thai: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, gồm giá trị: có; khơng - Tinh hình hút thuốc lá: biến số định tính, xác định thơng qua vấn, gồm giá trị: có; khơng; chồng hút; vợ chồng hút + Không hút thuốc lá: chưa hút loại thuốc số điếu hút quảng đời nhỏ 100 điếu bỏ thuốc 12 tháng tính đến ngày nghiên cứu + Hút thuốc lá: số điếu thuốc hút quảng đời từ 100 điếu trở lên tiếp tục hút thuốc bỏ thuốc kể từ thời điểm bỏ hút đến ngày nghiên cứu chưa đầy 12 tháng - Tình hình sử dụng rượu bia: biến định tính, xác định thơng qua vấn; gồm có giá trị: khơng; có ít; có sử dụng nhiều Kiến thức phụ nữ HPV: - HPV gây bệnh gì: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: bệnh đường sinh dục, ung thư cổ tử cung ; - Đã nghe thơng tin HPV chưa: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: chưa nghe; nghe - Nghe thông tin HPV từ đâu: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: báo, đài, ti vi; pano, tờ rơi; từ nguồn thông tin khác - HPV lây truyền qua đâu: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: quan hệ tình dục; máu; ăn uống, vệ sinh; khơng biết; đường khác 16 - Có biết vaccine phịng bệnh HPV gây khơng: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có; khơng; khơng biết - Lợi ích việc tiêm vaccine HPV là: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: phịng bệnh HPV gây ra; khơng có tác dụng; khơng biết Thái độ phụ nữ HPV: - Hiểu biết mức độ nguy hiểm bệnh HPV gây ra: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: nguy hiểm; không nguy hiểm; - Mức độ quan tâm tới thông tin liên quan tới HPV: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: khơng quan tâm; có quan tâm; quan tâm - Thái độ việc tiếp xúc với người bệnh HPV gây ra: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: tiếp xúc bình thường; hạn chế tiếp xúc; khơng tiếp xúc - Thái độ việc phân biệt đối xử với người bệnh HPV gây có nên hay khơng: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có; khơng; khơng biết - Thái độ việc xét nghiệm phát HPV phụ nữ độ tuổi sinh sản có nên hay khơng: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có; khơng; khơng biết - Thái độ việc tiêm vaccine phịng bệnh HPV có nên hay khơng: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có; khơng; khơng biết Thực hành phụ nữ độ tuổi sinh sản HPV: - Tình hình vệ sinh phận sinh dục: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: thường xun; khơng thường xun; ít; ý kiến khác - Tình hình khám phụ khoa định kỳ – 12 tháng lần: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: định kỳ; không định kỳ; chưa khám - Việc xét nghiệm phát HPV: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: xét nghiệm; chưa xét nghiệm; không cần thiết xét nghiệm - Việc tiêm vaccine phòng bệnh HPV gây ra: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: têm; chưa tiêm; khơng cần thiết - Việc sử dụng biện pháp phòng bệnh HPV gây ra: biến định tính, xác định thơng qua vấn, có giá trị: có; chưa; ý kiến khác 2.4.5 Phương pháp thu thập số liệu 17 Sử dụng phiếu điều tra để xác định đặc điểm đối tượng nghiên cứu (phụ lục 1) Phiếu điều tra gồm phần: - Thông tin chung - Thông tin hành vi liên quan - Thông tin xét nghiệm 2.4.6 Biện pháp hạn chế sai lệch thông tin Sai lệch thông tin từ nguồn: từ người vấn người vấn Biện pháp khắc phục: - Không quấy rầy thời gian vấn - Người vấn: tập huấn kỹ giao tiếp cách khai thác nội dung câu hỏi điều tra thử - Người vấn: cảm thấy thoải mái dễ chịu điểm vấn Đảm bảo khơng có can thiệp quan chức thời gian vấn Có thời gian để trả lời đầy đủ bảng câu hỏi - Sau buổi lấy mẫu xét nghiệm, kiểm tra việc điền thông tin câu hỏi - Câu hỏi thiết kế mục tiêu, rõ ràng cho phép thu thập thông tin cần thiết, ngắn gọn đơn giản, hợp lý, dễ hiểu, dễ trả lời - Phỏng vấn thử: tiến hành điều tra thử 10 người, phát nội dung không phù hợp câu hỏi, từ chỉnh lý bổ sung trước điều tra thức - Kiểm tra kiện: câu hỏi yêu cầu trả lời đầy đủ, sau hoàn tất kiểm tra giám sát viên tính phù hợp câu trả lời 2.4.7 Kỹ thuật xét nghiệm chuẩn đoán HPV nghiên cứu Theo danh sách đối tượng nghiên cứu vấn thông qua phiếu điều tra Sau bác sĩ sản phụ khoa dùng mỏ vịt vô trùng nhúng nước muối sinh lý thăm khám lấy tế bào cổ tử cung để xét nghiệm Sinh học phân tử kỹ thuật Real – time PCR Cách lấy mẫu làm xét nghiệm Sinh học phân tử kỹ thuật Real – time PCR: dùng que tâm vô trùng lấy tế bào vị trí bề mặt vùng chuyển tiếp tế bào cổ tử cung Mẫu bảo quản dung dịch TE1x, điều kiện lạnh – 30oC trước phân tích 2.5 Kỹ thuật Real – time PCR 18 Kỹ thuật phân Real – time PCR gồm bước sau: Bước 1: Thu nhận xử lý mẫu Mẫu thu cho vào eppendorf 1,5ml vơ trùng có chứa sẵn dung dịch Tex1, đem vortex 30 giây đến phút Bước 2: Tách chiết DNA tổng số - Cho 200µl mẫu vào vơ trùng có sẵn 900µl dung dịch pED1, vortex 30 giây, để yên 10 phút, thêm vào 200µl dung dịch pEX2 trộn cho tồn dung dịch tuýp thành huyền dịch màu trắng đục, đem ly tâm 13.000 vòng/phút thời gian phút - Thu 600µl dịch có chứa ADN vào vơ trùng có sẵn 600µl dung dịch pEX3 trộn đều, để yên 10 phút ngăn đông tủ lạnh, đem ly tâm 13.000 vòng/phút thời gian 10 phút - Loại bỏ dịch nổi, thu cặn màu hồng, cho từ từ 900µl dung dịch EX4 đem ly tâm 13.000 vòng/phút thời gian phút - Loại bỏ dịch nổi, thu cặn, để khô nhiệt độ 60oC 10 – 15 phút, cho vào 50µl dung dịch ED5, trước sử dụng, dùng pipet trộn đến cặn tan hoàn toàn - Bảo quản mẫu ADN - 20oC Bước 3: Thực phản ứng Real – time PCR với cặp mồi Thực với tuýp HPV – rPCR mix cần (có sẵn thị trường) - Chỉ lấy đủ số tuýp HPV – rPCR mix cần - Đánh dấu ký hiệu vào thân hay nắp tuýp tùy theo máy Real – time PCR đọc từ nắp hay đáy tuýp - Cho 5µl chứng dương, chứng âm, dịch ADN tách chiết vào tuýp HPV – rPCR mix, thực mẫu mở nắp tương ứng, thực xong đóng nắp tuýp thật kỷ thật nhanh để tránh nguy ngoại nhiễm, đem ly tâm nhẹ 4000 vòng/phút thời gian phút - Bật máy Real – time PCR 15 phút trước chạy chương trình, bật máy tính, chờ khởi động xong gọi chương trình Real – time PCR lên, phải kiểm tra chắn máy tính máy Real – time PCR kết nối với chọn chức chờ “Heat lid” đạt 105oC chương trình luân nhiệt bắt đầu - Cài đặt vị trí mẫu “Plate setup” phần mềm với vị trí mẫu đặt máy Real – time PCR 19 - Với mẫu bệnh phẩm: chọn loại mẫu “unknown”, đặt tên số tương ứng với ký hiệu mẫu - Với chứng dương âm: để kiểm tra nên chọn mẫu “unknow” không nên chọn PTC (positive control) hay NTC (negative control), đặt tên chứng dương, chứng âm tương ứng - Chọn màu “FAM” “HEX” cho mẫu, chứng dương chứng âm, màu FAM phát trình tự mục tiêu HPV, màu HEX phát trình tự chứng nội - Cài đặt chương trình Protocol cho máy Real – time PRC hoạt động: chu kỳ 95 oC/5 phút, 40 chu kỳ 95 oC/15 giây, 55 oC/1 phút (chọn đọc kết bước này), 72 o C/20 giây - Lưu file liệu vào máy tính, nên chọn lưu phần vùng ổ cứng khơng cài hệ điều hành - Cho máy Real – time PCR chạy chương trình Tùy theo máy mà cài đặt chương trình khác Bước 4: Phân tích kết Sau kết thúc chương trình Real – time PCR chuyển sang chế độ “Analysis” để phân tích kết quả, tùy theo máy phân tích đồ thị dạng “Linear” dạng “Log” hai Phân tích chứng dương chứng âm: chọn giếng chứng dương âm, chọn màu FAM đến màu HEX thí nghiệm đạt yêu cầu tiếp tục bước phân tích kết quả, chứng dương có đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu FAM tuyến tính vượt tín hiệu (đường biểu diễn dương tính) đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu HEX dương tính thẳng khơng vượt q tín hiệu (đường biểu diễn âm tính), chứng âm có đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu FAM âm tính đường biểu diễn tín hiệu màu HEX dương tính Tiêu chuẩn kết luận mẫu nhiễm HPV ADN máy Real – time PCR: chọn màu FAM nên chọn mẫu phân tích chế độ liệu thơ để có kết xác - Mẫu dương tính: mẫu có đường biểu diễn dương tính rõ ràng bắt đầu chu kỳ 36 trở trước - Mẫu âm tính : chứng nội phải dương tính kết luận mẫu âm tính 2.6 Xử lý phân tích số liệu - Nhập số liệu: phần mềm Epidata phiên 3.1 20 - Xử lý số liệu: phần mềm STATA phiên 10.0 + Thống kê mơ tả: trình bày kết tần số, tỷ lệ %, tỷ số tỷ lệ mắc PR (Prevalence Ratio) biến số + Thống kê phân tích: Kiểm định thống kê ρ, χ2 so sánh tỷ lệ nhiễm HPV với số yếu tố liên quan phép kiểm định chi bình phương (Chi-squared test) phép kiểm định xác Fisher (Fisher’s exact test) có lớn 20 % tần số bảng mong đợi nhỏ - Mức khác biệt có ý nghĩa thống kê ρ nhỏ 0,05 2.7 Một số hạn chế đề tài - Có thể gặp sai số có nguồn gốc từ người vấn vấn người vấn do: + Các thông tin hành vi khai thác nghiên cứu nhạy cảm nên đối tượng trả lời theo hướng tích cực, xu ướng che dấu hành vi nguy như: tuổi quan hệ tình dục lần đầu, số bạn tình, đối tượng tham gia nghiên cứu nên ảnh hưởng đến chất lượng thông tin + Kỹ khai thác thông tin không đồng từ người vấn khác + Một số thơng tin khai thác bị ảnh hưởng theo chủ quan người vấn - Tỷ lệ nhiễm nghiên cứu thấp nên tần số quan sát nhỏ, việc sử dụng test thống kê để kiểm định khác biệt bị hạn chế 2.8 Y đức nghiên cứu Việc nghiên cứu không ảnh hưởng xấu đến người nghiên cứu - Tất đối tượng tham gia nghiên cứu giải thích cụ thể mục đích, nội dung nghiên cứu - Các đối tượng nghiên cứu tham gia cách tự nguyện hợp tác tốt trình nghiên cứu - Từ kết nghiên cứu tư vấn cách phòng chống phát sớm ung thư cổ tử cung - Mọi thơng tin đối tượng giữ bí mật sử dụng cho mục đích nghiên cứu - Số liệu xử lý báo cáo dạng tổng hợp 21 22 PHỤ LỤC CỘNG HÒA XÁ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc PHIẾU ĐIỀU TRA Về kiến thức, thái độ, thực hành yếu tố nguy HPV phụ nữ độ tuổi sinh sản (Dành cho người tham gia nghiên cứu) Họ tên: Địa chỉ/ số ĐT: Tuổi/ năm sinh: I Các yếu tố nguy lây nhiễm HPV Dân tộc: Kinh Khu vực sinh sống: Nông thôn Dân tộc thiểu số Thị trấn, thị tứ Thành phố Thời gian sinh sống địa phương tới nay: Nhỏ năm Từ – năm Từ 15 – 19 năm Từ 10 – 14 năm Từ 20 năm trở lên Nhóm tuổi người tham gia vấn thuộc: 15 đến 19 tuổi 20 đến 29 tuổi 30 đến 39 tuổi 40 đến 49 tuổi Trình độ học vấn chị: Mù chữ Tiểu học THCS PTTH TH, CĐ, ĐH Nghề nghiệp chị nay: Nội trợ Bn bán Làm nơng Cơng nhân Trí thức Nghề khác: …… Tuổi bắt đầu quan hệ tình dục chị: 15 đến 19 tuổi 20 đến 29 tuổi 30 đến 39 tuổi 49 tuổi Tình trạng nhân: 23 40 đến Có chồng Góa chồng Ly dị, ly thân Độc thân có quan hệ tình dục Tuổi bắt đầu sinh con: 15 đến 19 tuổi 20 đến 29 tuổi 30 đến 39 tuổi 40 đến 49 tuổi 10 Số lần sinh con: Chưa có Một Nhiều 11 Tính chung thủy người chồng: Chung thủy Không chung thủy Không biết 12 Số bạn tình: Một Nhiều 13 Tình hình viêm nhiễm đường sinh dục: Khơng Có Dai dẳng 14 Tình hình sử dụng bao cao su: Thường xuyên Không thường xuyên Khơng dùng 15 Tình hình sử dụng thuốc tránh thai: Khơng Có Thường xun Khơng thường xun 16 Tình hình hút thuốc lá: Khơng Có Chồng hút Cả vợ chồng hút 17 Tình hình sử dụng rượu, bia: Khơng Có Có sử dụng nhiều II Kiến thức phụ nữ độ tuổi sinh sản HPV Theo chị HPV gây bệnh gì? Bệnh đường sinh dục, ung thư cổ tử cung,… Không biết Chị nghe thông tin HPV chưa? Chưa nghe Đã nghe Chị nghe thông tin HPV từ đâu (nếu nghe thông tin HPV)? Báo, đài, ti vi Pano, tờ rơi Theo chị HPV lây truyền qua: 24 Từ nguồn thơng tin khác Quan hệ tình dục Máu Ăn uống, vệ sinh Không biết Con đường khác:…… Chị có biết vaccin phịng bệnh HPV gây khơng? Có Khơng Khơng biết Lợi ích việc tiêm vaccin HPV là: Phòng bệnh HPV gây Khơng có tác dụng Khơng biết III Thái độ phụ nữ độ tuổi sinh sản HPV Bệnh HPV gây bệnh: Nguy hiểm Khơng nguy hiểm Khơng biết Chị có quan tâm tới thông tin liên quan tới HPV không (như thông tin liên quan tới HPV Ti vi, báo, đài, từ vấn đề tài này, ) Không quan tâm Có quan tâm Rất quan tâm Theo chị có nên tiếp xúc với người bệnh HPV gây khơng? Tiếp xúc bình thường Hạn chế tiếp xúc Khơng tiếp xúc Theo chị có nên phân biệt đối xử với người bệnh HPV gây không? Có Khơng Khơng biết Phụ nữ độ tuổi sinh sản nên xét nghiệm phát HPV khơng? Có Khơng Khơng biết Chị có đồng ý phụ nữ độ tuổi sinh sản nên tiêm vaccin phòng bệnh HPV khơng? Có Khơng Khơng biết IV Thực hành phụ nữ độ tuổi sinh sản HPV Tình hình vệ sinh phận sinh dục chị: Thường xun Khơng thường xun Rất Ý kiến khác……… Tình hình khám phụ khoa định kỳ tới 12 tháng lần chị: Định kỳ Không định kỳ Chưa khám Chị xét nghiệm phát HPV chưa? Đã xét nghiệm Chưa xét nghiệm nghiệm Chị tiêm vaccin phòng bệnh HPV gây chưa? 25 Không cần thiết xét Đã tiêm Chưa tiêm Không cần thiết Chị sử dụng biện pháp phòng bệnh HPV gây chưa (như sử dụng bao cao su, chung thủy vợ chồng,…)? Có Chưa Ý kiến khác: ……… …… , ngày … tháng … năm 201 Họ tên cán vấn Họ tên người vấn 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hồ Huỳnh Thùy Dương (2013), “Ý nghĩa số thị sinh học chuẩn đoán ung thư cổ tử cung”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh 17(3), 19 – 21 2013 Lan Vu, T & Bui, D., (2012), “Prevalence of cervical human papilloma virus infection among married women in Vietnam, 2011”, Asian Pac J Cancer prew, 13(1), 37 – 40 Lan Vu, T & Ha Le, T T., (2011), “Cervical human papilloma virus infection among the general population in Vietnam: a situation analysis”, Asian Pac J Cancer Prew, 12(2), 561 – 566 Lan Vu, T., Le, H., Luong, O., Tran, H., Nguyen, N & Luu, H., (2012), “Prevalence of cervical human papillomavirus infection among married women in Hanoi, Vietnam, 2010”, Asia Pac J Public Health, 24(2), 385 – 390 Lê Thị Kiều Dung & Trần Thị Lợi (2005), “Mối liên quan nhiễm loại HPV với tân sinh biểu mô tử cung”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh 9(1), 25 – 30 Nguyễn Thủy Giang (2013), “Thực trạng nhiễm HPV (Human Papilloma Virus) cổ tử cung phụ nữ tuổi sinh đẻ Phường Tự An Thành phố Buôn Ma Thuột Tỉnh Đăk Lăk” Luận văn Thạc sĩ Sinh học Nguyễn Thị Hồng Nhung (2011), “VBS – Vietnam’s Biotechnology Society HPV ung thư cổ tử cung” Vũ Thị Nhung (2006), “Khảo sát tình hình nhiễm type HPV (Human Papillomavirus) phụ nữ TP Hồ Chí Minh kỹ thuật sinh học phân tử”, Báo cáo Đề tài Khoa học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh 2006 Nguyễn Thị Tuyết Vân (2008), “Nhiễm Type Human Papilloma virus phụ nữ tuổi sinh đẻ”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 14(1), 503 – 507 10 Phạm Hùng Vân (2007), “Xác định kiểu gen HPV kỹ thuật giải trình tự trực tiếp sản phẩm PCR đặc hiệu gen L1”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 11(3), 96 – 101 11 Pham, T H., Herrero, R., Vaccarella, S., Smith, J S., Nguyen Thuy, T T., et al., (2003), “Human papillomavirus infection among women in South and North Vietnam”, Int J Cancer, 104(2), 213 – 220 12 Phạm Việt Thanh (2009), “Định danh HPV phụ nữ có phế lát mỏng CTC bất thường”, Hội nghị Sản phụ khoa Việt – Pháp – Châu Á – Thái Bình Dương lần thứ IX 13 Trần Thị Lợi & Hồ Văn Phúc (2009), “Tỉ lệ nhiễm HPV yếu tố liên quan phụ nữ từ 18 – 69 TP Hồ Chí Minh”, Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 14(1), 503 – 507 Tiếng Anh 27 14 Ayres, A R & Silva, G A (2010), “Cervical HPV infection in Brazil: systematic review”, Rev Saude Publica, 44(5), 963 – 974 15 Backer & et al (1991), “Structure of bovine and Human Papillomaviruses analysis by cryoelectron miscoscopy and three – dimensional imagine reconstruction”, Biophys J., 60(6), 1445 – 1456 16 Castellsague, X & et al (2007), “HPV and Cervical Cancer in the World: 2007 Report”, Vaccine, 25 17 Chan, R., Khoo, L., Ho, T H., Koh, C F., Lee, I W., Yam, K L., et al (2001), “ A comparative study of cerviral cytology, colposcopy and PCR for HPV in female sex workers in Singapore”, Int J STD AIDS, 12(3), 159 – 163 18 Chang, C H., Chen, T H., Hsu, R C., Chou, P H., Yang, J J & Hwang G Y (2005), “The prevalence of HPV – 18 and variants of E6 gene isolated from cervical cancer patients in Taiwan”, J Clin Virol 32(1), 33 – 37 19 Chen, Q., Lou, Z Y., Lin, M., Q L., Chen, C Y., Yang, C., et al (2012), “Prevalence ang genotype distribution of human papillomavirus infection in women attending hospitals in Chaozhou f Guangdong province”, Asian Pac J Cancer Prew, 13(4) 1529 – 1524 20 De Sanjose, S., Siaz, M., Castellsague, X., Clifford, G., Bruni, L., Munoz, N., et al (2007), “Worldwide prevalence ang genotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women wth normal cytology: a meta – analysis”, Lancet Infect Dis, 7(7), 453 – 359 21 Ferlay & et al (2005), “Estimated number of case and incidence of cerviral cancer”, http://www.rho.org/images/figue1_000.gif 28 ... đề tài ? ?Đánh giá thực trạng nhiễm HPV (Human Papilloma Virus) cổ tử cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 2014 kỹ thuật Real- time PCR? ?? Mục tiêu đề tài Xác định tỷ lệ nhiễm HPV, nhiễm tuýp HPV. .. thư cổ tử cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 2014 kỹ thuật Real- time PCR Đề xuất số vấn đề liên quan đến việc phòng ngừa phát sớm ung thư cổ tử cung Ý nghĩa 3.1 Ý nghĩa khoa học Bằng kỹ thuật. .. dung nghiên cứu Đánh giá tỷ lệ nhiễm HPV, nhiễm tuýp HPV nguy cao dẫn đến ung thư cổ tử cung phụ nữ người Kinh Tỉnh Kon Tum năm 2014 kỹ thuật Realtime PCR Khảo sát số vấn đề liên quan đến việc