Phát hiện đột biến gen gây bệnh α thalassemia bằng kỹ thuật multiplex pcr

T À I L IỆ U TH A M K H Ả O Chadha, R., Gupta, s., and Pathak, N Artesunate­loaded chitosan/lecithin nanoparticles: Preparation, characterization, and in vivo studies Drug Development and Industrial Pharmacy, 38,1538­1546 (2012) Efferth, T Willmar Schwabe Award 2006: antiplasmodial and antitumor activity of artemisinin­from bench to bedside Planta medica, 73,299­309 (2007) Gabriels, M., and Plaizier­Vercammen, J Physical and chemical evaluation of liposomes, containing artesunate Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 31, 655­667 (2003) Kumari, A., Yadav, s K., and Yadav, s c Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 75,1­18 (2010) Pradhan, R­, Poudel, B K., Ramasamy, T., Choi, H.­G., Yong, c s., and Kim, J o Docetaxel­Loaded Poiylactic Acid­Co­Glycolic Acid Nanoparticles: Formulation, Physicochemical Characterization and Cytotoxicity Studies Journal of Nanoscience and Nanotechnology, 13, 5948­5956 (2013) Woerdenbag, H J­, Moskal, T A., Pras, N., Malingré, T M­, Ei­Feraiy? F s., Kampinga, H H., and Konings, A w Cytotoxicity of artemisinin­related endoperoxides to Ehrlich ascites tumor cells Journal of natural products, 56, 849­856 (1993) Xiao, X.­C­, and Hong, Z.­G Firstborn microcrystallization method to prepare nanocapsules containing artesunate Internationa journal of nanomedicine, 5,483 (2010) Xu, Q., Li, Z.­X., Peng, H.­Q., Sun, Z.­W­, Cheng, R.­L., Ye, Z.­M., and Li, W.“X Artesunate inhibits growth and induces apoptosis in human osteosarcoma HOS cell line in vitro and in vivo Journal of Zhejiang University SCIENCE B, 12,247­255 (2011) PHÁT HIỆN ĐỘT BIỂN GEN GÂY BỆNH a THALASSEMIA BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR ThS B ài Thị M inh Phượng* Hướng dẫn: GS.TS Tạ Thành Vãn** TÓM T T a Thalassmia bệnh di truyền gen lặn nằm NST 16, bệnh nhân mắc bệnh nạy gánh nặng cho thân, gia đinh, xã hội Hiện nay, tỷ lệ mắc bệnh tương đối cao chi phí cho điều trị bệnh ỉớn Xuất phái từ vấn đề đó, chúng tơi nghiên cứu đề tài nhằm phát gen gây đột biến bệnh để có biện pháp tư vấn di truyền trước hôn nhân nhằm giảm tỷ lệ mắc bệnh Đối tu­ợng phương pháp nghiên cửu: Nghiên cứu 33 bệnh nhân chẩn 'đoán bị a Thalassmia Mục tiêu: Phát gen đột biến gây bệnh a Thalassmia Kết quả: Đột biến SEA chiếm tỷ lệ cao 54,7% Điều cho thấy Việt Nam đột biến SEA chiếm chu yếu Đột biến a 4.2 chiếm tỷ lệ cao thứ Đột biến a 3.7 chiếm tỷ ỉệ 16,7% Không t m thấy đột biến THAI, đột biến FIL Kết luận: Đây kỹ thuật hữu ích cho việc phát sớm gen gây đột biến có hướng tư vấn di truyền trước nhân * Từ khóa: Đột biến gen; a Thalassmia D t ction o f d is a s -c au sing g n m uta ton s in a th alass m ia b y m u ltip l x p r t chniq u Sum m ary a Thalassmia recessive genetic disease is located on chromosome 16, patients suffering from such a disease are a burden to themselves, their families, and society The morbidity is now relatively high and the expense for this tteatment is quite much Originating from that problem, we conducted this study aimed to detect disease­causing gene mutations to propose genetic counseling measures before marriage, therefore, the incidence of disease can be reduced * Đại học Y Được Thai Bình Đại học Y Hà Nội ** 555 Subjects and methods: 33 patients diagnosed with a Thalassmia Objective: To detect the disease­causing gene mutation a Thalassmia Results: Mutation SEA accounts for highest percentage (54.7%) This shows that in Vietnam mutations SEA dominated Mutations a 4.2 comes the second, a 3.7 occupies 16.7% No mutation THAI and FEL was found Conclusion: This is a useful technique in early detection of gene mutations towards genetic counseling before marriage * Key words: Gene mutation; a thalassmia ▼ nn IT f It n>ir* tJO j í IIA T VAN a Thalassemia bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể (NST) thường đo đột biến gen a­globin nằm cánh ngắn NST số 16 (16pl3.3) quy định, gây giảm khả tổng hợp chuỗi a­globin Đây ỉà bệnh huyết sắc tố phổ biến toàn giới nguyên nhân hàng đầu (chiếm tới 60­90% nguyên nhân) gây phù thai nước Đông Nam Á Tại Việt Nam, tỷ lệ người mang gen bệnh phân bố nước khác tùy địa phương, nhóm dân tộc Trong đó, tỷ lệ người mang gen đột biến đoạn lớn dạng SEA (Đông Nam Á) cao (tỷ lệ 90 ­ 95%), Bắc Thái Lan 14%, Nam Trung Quốc 5,0 ­ 8.8%, Hồng Kông Ịà 4,5%, Trung tâm Thái Lah ỉà 3,7% dạng Bắc Đài Loan 3,5% Hầu hết trẻ bị bệnh có biểu hiện: thiếu máu nhược sắc, đa xanh, lách to, mệt mỏi chậm chạp, xương ph đại dễ gãy, hay mắc bệnh nhiễm trùng, suy tim khó thở, bất thường gan, mật Trẻ mắc bệnh thường chết sớm v suy tim nhiễm trùng nặng Sự phát triển kỹ thuật sinh học phân tử cho phép phát đột biến hiểu biết rõ sinh lý bệnh a Thalassemia phục vụ tư vấn di truyền trước sinh Xuất phát từ thực tế đó, tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm: ­ Xác định đột biển g n a ­ globin bệnh nh ân a Thalass mia ­ N hận x é t đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh n hân a Thalass mia II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHI N c ứ u 2.1 Đối tượng nghiền cứu Chọn 33 bệnh nhân chẩn đốn a Thalassemia 2.2 Thịi gian địa điểm nghiên cứu " Thòi gian nghiên cứu: T tháng 12 ­ 2012 đến ­ 2013 ­ Địa điểm nghiên cứu: Trung tâm Nghiên cứu Gen Protein ­ Trường Đại học Y Hà Nội 2.3 P hutm g p há p nghiên cứu ­ Sử dụng k ỹ thuật m ultiplex PC R vào tr nh phát đột biến gen phổ biến gây bệnh a Thalassem ia V iệt Nam (SEA, THAI, FIL, 0,3.7, a4.2) - Phương pháp phân tích bệnh chứng 2.4 K ỹ th u ật nghiên cứu 2.4.1 Tách chietA D N ADN tách chiết từ tế bào bạch cầu máu ngoại vi phương pháp phenol/chlorofor 2.4.2 Thiết kể m ồl cho m ultiplex PC R M ồi thiết kế nhằm phát số đột biển thường gặp Việt N am với mồi đặc hiệu bổ sung với đột biến Các đột biến là: a3.7,