ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC -o0o - LÊ TRÍ NHƠN KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG VÀ SỰ SINH TỔNG HỢP CHẤT ALKALOID CỦA MÔ SẸO CÂY DỪA CẠN CATHARANTHUS ROSEUS (L.) G DON CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, 08/2014 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS TS Lê Thị Thủy Tiên Cán chấm nhận xét 1: PGS TS Bùi Văn Lệ Cán chấm nhận xét 2: TS Trần Trung Hiếu Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 08 năm 2014 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn Thạc sĩ bao gồm: Chủ tịch hội đồng: PGS TS Nguyễn Đức Lượng Thư ký hội đồng: TS Nguyễn Tấn Trung Ủy viên Phản biện 1: PGS.TS Bùi Văn Lệ Ủy viên Phản biện 2: TS Trần Trung Hiếu Ủy viên Hội đồng: PGS TS Lê Thị Thủy Tiên Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá Luận văn Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA KTHH ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự - Hạnh phúc -ooOoo - NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Lê Trí Nhơn MSHV: 12310743 Ngày, tháng, năm sinh: 02/04/1987 Nơi sinh: Mỹ Tho – Tiền Giang Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã số : 60.42.80 I TÊN ĐỀ TÀI: “ Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên tăng trưởng sinh tổng hợp hợp chất alkaloid mô sẹo dừa cạn Catharanthus roseus L.G.Don.” II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Tạo nhân giống in vitro Khảo sát ảnh hưởng nguyên liệu khởi đầu đến hình thành tăng trưởng mô sẹo Khảo sát ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật lên hình thành, tăng sinh tổng hợp alkaloid mô sẹo Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật mật độ tế bào khởi đầu đến hình thành tăng trưởng huyền phù tế bào Định tính định lượng Vinca alkaloid thu từ mô sẹo huyền phù tế bào III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 01/2014 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 10/07/2014 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên Tp HCM, ngày 09 tháng 08 năm 2014 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA….……… (Họ tên chữ ký) Luận văn Cao Học LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin gửi lòng biết ơn chân thành tới quý Thầy Cơ trường Đại học Bách Khoa, Thành phố Hồ Chí Minh đặc biệt Thầy Cô khoa Kỹ thuật Hóa Học Luận văn hồn thành nhờ giúp đỡ lớn từ Phó Giáo Sư – Tiến sĩ Lê Thị Thủy Tiên, Cô truyền thụ phần lớn kiến thức chuyên ngành quý báu suốt năm em học tập trường Cô quan tâm nhắc nhở, động viên trình làm luận văn, chia sẻ khó khăn giúp đỡ em cần truyền đạt kiến thức kinh nghiệm Cơ ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, góp ý tạo điều kiện tốt để em hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô Em chân thành gửi lời cảm ơn đến Phó Giáo Sư - Tiến sĩ Nguyễn Thúy Hương Tiến sĩ Huỳnh Ngọc Oanh quan tâm tạo điều kiện thiết bị dụng cụ phịng thí nghiệm góp ý q trình làm luận văn Cũng khơng thể qn gửi lời cảm ơn tới Ths Trần Trúc Thanh, Ths Võ Thanh Phúc giúp đỡ dụng cụ, hóa chất phịng thí nghiệm trao đổi q trình thực thí nghiệm Tơi cảm ơn giúp đỡ, hỗ trợ nhiệt tình trợ giúp em Nguyễn Lê Minh Châu – sinh viên ngành Công nghệ sinh học Khóa 2009 để hồn thành luận văn Ngồi ra, tơi xin cảm ơn gia đình người thân ủng hộ, động viên trợ giúp tơi gặp khó khăn q trình học tập làm việc Xin gửi lời Chúc sức khỏe dồi đến Thầy Cô, bạn gia đình Xin chân thành cảm ơn Tp Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 07 năm 2014 Học viên thực Lê Trí Nhơn i Luận văn Cao Học TĨM TẮT Mô sẹo từ trụ hạ diệp mầm dừa cạn in vitro, đốt thân in vitro non trưởng thành nuôi cấy môi trường MS có bổ sung kinetin 0,5 mg/l kết hợp với 2,4–D (0,5 mg; 1,0 mg; 1,5 mg 2,0 mg/l) hay NAA (0,5 mg; 1,0 mg; 1,5 mg 2,0 mg/l) Kết cho thấy thời gian tạo sẹo từ trụ hạ diệp mầm ngắn từ đốt thân in vitro non trưởng thành nghiệm thức khảo sát Sự cảm ứng mô sẹo xảy nhanh đồng thời số tăng trưởng mô sẹo cao môi trường có bổ sung kinetin 2,4–D so với mơi trường có bổ sung kinetin NAA Sự tăng sinh mô sẹo môi trường MS bổ sung kinetin 0,5mg/l 2,4 – D nồng độ 1,0 2,0 mg/l tốt nhất, mơ sẹo có dạng xốp nên nghiệm thức sử dụng cho mục đích tạo mơ sẹo để cung cấp nguyên liệu tạo huyền phù tế bào Huyền phù tế bào hình thành tăng sinh ổn định sau tuần ni cấy Thể tích tế bào khởi đầu có ảnh hưởng quan trọng đến tăng trưởng huyền phù tế bào thể tích 2,0 ml tế bào khởi đầu/ 20ml môi trường lỏng có hiệu cao Vinblastine diện mơ sẹo tất mơi trường có 2,4 – D Với huyền phù tế bào, vinblastine có tế bào ni cấy mơi trường có 2,4 – D 0,5 hay 2,0 mg/l Vincristine ghi nhận có mặt mơ sẹo huyền phù tế bào nghiệm thức có 2,4 – D 1,5 mg/l ii Luận văn Cao Học MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC HÌNH viii CÁC TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Giới thiệu dừa cạn 2.1.1 Đặc điểm hình thái, sinh trưởng dừa cạn Việt nam .4 2.1.2 Giá trị y học dừa cạn .5 2.2 Hợp chất vinca alkaloid 2.2.1 Hợp chất alkaloid 2.2.1 Phân loại alkaloid 2.2.3 Vinca alkaloid dừa cạn 2.2.3.1 Hợp chất Vinblastine 2.2.3.2 Hợp chất Vincristine .8 2.3 Sinh tổng hợp alkaloid dừa cạn 2.3.1 Sinh tổng hợp alkaloid dừa cạn 2.3.2 Cơ chế tác dụng dược lý alkaloid dừa cạn 12 2.3.2.1 Tác dụng dược lý 12 2.3.2.2 Cơ chế tác dụng 13 2.4 Các kỹ thuật nuôi cấy tế bào thực vật 14 2.4.1 Tạo mô sẹo từ mô hay quan thực vật 14 2.4.2 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng thực vật tạo mô sẹo 15 2.4.2.1 Auxin 15 iii Luận văn Cao Học 2.4.2.2 Cytokinin 16 2.4.2.3 Gibberellin 18 2.4.3 Sự tạo huyền phù tế bào 19 2.5 Tình hình nghiên cứu nước nước ngồi 20 2.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 20 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 3.1 Vật liệu 25 3.1.1 Vật liệu tạo mầm in vitro 25 3.1.2 Vật liệu tạo chồi in vitro 25 3.1.3 Vật liệu tạo mô sẹo 26 3.1.4 Vật liệu tạo huyền phù tế bào 28 3.1.5 Chất chuẩn dùng để định lượng vinblastine 28 3.2 Phương pháp thực 29 3.2.1 Tổng qt quy trình thí nghiệm 29 3.2.2 Phương pháp khử trùng 30 3.2.2.1 Khử trùng hạt 30 3.2.2.2 Khử trùng đốt thân 31 3.2.2.3 Khử trùng non trưởng thành 33 3.2.3 Các tiêu khảo sát 34 3.2.3.1 Sự hình thành tăng sinh mơ sẹo 34 3.2.3.2 Sự hình thành tăng sinh huyền phù tế 35 3.2.4 Phương pháp chiết xuất định tính alkaloid dừa cạn 36 3.2.5 Phương pháp định lượng alkaloid dừa cạn 37 3.2.5.1 Nguyên lý phương pháp LCMS 37 3.2.5.2 Ứng dụng phương pháp LCMS 38 3.2.5.3 Thiết bị sử dụng phương pháp LCMS 38 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 41 4.1 Kết 41 4.1.1 Ảnh hưởng loại nồng độ auxin lên hình thành mô sẹo 41 iv Luận văn Cao Học 4.1.1.1 Sự tạo sẹo mơi trường có 2,4 – D 41 4.1.1.2 Sự tạo sẹo mơi trường có NAA 44 4.1.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên tăng sinh mô sẹo 47 4.1.2.1 Với auxin 2,4 - D 47 4.1.2.2 Với auxin NAA 49 4.1.3 Kết định tính alkaloid từ mơ sẹo 52 4.1.4 Kết định lượng vinblastine định tính vincristine mơ sẹo có nguồn gốc từ mô sẹo 56 4.1.5 Sự hình thành tăng sinh huyền phù tế bào 57 4.1.5.1 Sự tạo huyền phù tế bào 57 4.1.5.2 Sự tăng sinh huyền phù tế bào .58 4.1.5.3 Kết 62 4.2 Bàn luận 63 4.2.1 Vai trò vật liệu khởi đầu hình thành mơ sẹo 63 4.2.2 Vai trò auxin ngoại sinh lên hình thành tăng sinh mơ sẹo 63 4.2.3 Ảnh hưởng mật độ tế bào khởi đầu lên tăng sinh huyền phù tế bào 64 4.2.4 Vai trò auxin tổng hợp hợp chất thứ cấp 65 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 5.1 Kết luận 67 5.2 Kiến nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined v Luận văn Cao Học DANH MỤC ẢNH Trang Ảnh 2.1 Cây hoa dừa cạn Ảnh 3.1 Quả hạt dừa cạn 25 Ảnh 3.2 Cây dừa cạn trưởng thành cung cấp vật liệu tạo chồi in vitro 26 Ảnh 3.3 Cây mầm dừa cạn 10 ngày tuổi 26 Ảnh 3.4 Cây in vitro sau tuần nuôi cấy 27 Ảnh 3.5 Lá non dừa cạn dùng để tạo mô sẹo 27 Ảnh 3.6 Mô sẹo tuần tuổi dùng để tạo huyền phù tế bào 28 Ảnh 3.7 Chất chuẩn dùng để định lượng vinblastine 28 Ảnh 3.8 Thiết bị sử dụng phương pháp LCMS 38 Ảnh 3.9 Bảng giá trị chạy kết sử dụng phần mềm LCMS 39 Ảnh 4.1 Mô sẹo tháng tuổi từ trụ hạ diệp mơi trường có 2,4 – D 2,0 mg/l 41 Ảnh 4.2 Mô sẹo tháng tuổi từ đốt thân in vitro môi trường có 2,4 – D 2,0 mg/l 42 Ảnh 4.3 Mô sẹo tháng tuổi từ non trưởng thành 2,4 – D 2,0 mg/l 43 Ảnh 4.4 Mô sẹo từ trụ hạ diệp mơi trường có NAA 2,0 mg/l 44 Ảnh 4.5 Mô sẹo từ đốt thân in vitro mơi trường có NAA 2,0 mg/l 45 Ảnh 4.6 Mô sẹo từ non trưởng thành có NAA 2,0 mg/l 46 Ảnh 4.7 Mô sẹo môi trường có 2,4 – D 2,0 mg/l 47 Ảnh 4.8 Mô sẹo từ trụ hạ diệp mầm dừa cạn 2,4 – D nồng độ thay đổi 49 Ảnh 4.9 Mô sẹo tăng sinh môi trường NAA 2,0 mg/l 50 Ảnh 4.10 Mô sẹo từ non trưởng thành NAA nồng độ thay đổi 52 Ảnh 4.11 Dịch chiết mô sẹo 55 Ảnh 4.12 Dịch chiết sau thử thuốc thử Wagner Mayer 55 Ảnh 4.13 Huyền phù tế bào khởi đầu thí nghiệm khảo sát mật độ tế bào 58 Ảnh 4.14 Thể tích tế bào lắng huyền phù tế bào 2,4 – D 1,0 mg/l 58 vi Luận văn Cao Học DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 3.1 Công thức thuốc thử Mayer Wagner 37 Bảng 4.1 Tỷ lệ mẫu cấy từ trụ hạ diệp tạo sẹo 41 Bảng 4.2 Tỷ lệ mẫu cấy từ đốt thân in vitro tạo sẹo 42 Bảng 4.3 Tỷ lệ mẫu cấy từ non dừa cạn tạo sẹo 43 Bảng 4.4 Tỷ lệ mẫu cấy từ trụ hạ diệp tạo sẹo 44 Bảng 4.5 Tỷ lệ mẫu cấy từ đốt thân in vitro tạo sẹo 45 Bảng 4.6 Tỷ lệ mẫu cấy từ non dừa cạn tạo sẹo 46 Bảng 4.7 Sự tăng sinh mơ sẹo mơi trường có kinetin 2,4 – D 48 Bảng 4.8 Sự tăng sinh mơ sẹo mơi trường có kinetin NAA 50 Bảng 4.9 Kết định tính alkaloid từ mơ sẹo mơi trường 2,4 – D 53 Bảng 4.10 Kết định tính alkaloid từ mơ sẹo mơi trường có NAA 54 Bảng 4.11 Hàm lượng vinblastine mơ sẹo mơi trường có 2,4 – D 57 Bảng 4.12 Kết định tính vincristine mơ sẹo mơi trường có 2,4 – D 57 Bảng 4.13 Chỉ số tăng trưởng huyền phù tế bào 2,4 – D 1,0 mg/l 59 Bảng 4.14 Chỉ số tăng trưởng huyền phù tế bào môi trường 2,4 – D 2,0 mg/l 60 Bảng 4.15 Kết định lượng vinblastine có truong huyền phù tế bào 2,4 - D 62 Bảng 4.16 Định tính vincristine huyền phù tế bào môi trường 2,4 – D 62 vii Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU HP 2.0_1-B,3_01_11121.d dmm.m MAU HP 2.0 Acquisition Date 7/22/2014 3:26:07 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Intens Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste 120 100 80 60 40 20 0 10 12 Time [min] MAU HP 2.0_1-B,3_01_11121.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) Intens +MS, 9.0min #535, 100%=384, -Spectral Bkgrnd 406.2157 100 80 406.7183 60 40 20 407.2265 405.0 # RT [m in] 9.0 405.5 Area 2184.5 Int Type Manual Bruker Compass DataAnalysis 4.0 406.0 Int ens 123 406.5 407.0 407.5 408.0 m/z S/N Chromatogram 20.8 EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) printed: 7/22/2014 11:01:19 AM Page of Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Phòng TN PTTT 227 Nguyễn Văn Cừ F4.Q5 Tp.HCM Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập- Tự Do- Hạnh Phúc ♦♦♦ BẢNG KẾT QUẢ Cơ quan, người gởi mẫu: Lê Trí Nhơn – Bilfinger – Tebodin Vietnam Địa chỉ: 444A/446-Cách mạng tháng 8- phường 11- Quận Dạng mẫu: Mô Sẹo huyền phù tế bào Chỉ tiêu phân tích: Vincristine Ngày gởi mẫu: 12-07-2014 Kết phân tích: STT Tên mẫu Kết 01 0.5 D Không Phát 02 1D Không Phát 03 2.0 D Không Phát 04 HP 0.5 Không Phát 05 HP 1.0 Không Phát 06 HP 2.0 Không Phát 07 1.5 D Phát 08 HP 1.5 Phát Phương pháp HPLC-MS Ghi Kết có ý nghĩa mẫu gửi Kết có phổ sắc ký đồ phổ MS kèm theo Tp HCM, ngày 22 tháng 07 năm 2014 Người phân tích Tổng số 01 Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU 0.5D_1-B,6_01_11124.d dmm.m MAU 0.5D Acquisition Date 7/22/2014 4:14:20 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Intens Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste 150 100 50 0 10 12 Time [min] MAU 0.5D_1-B,6_01_11124.d: EIC 406.2000±0.0500 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) Intens 406.2174 +MS, 8.9min #529, 100%=12307, -Spectral Bkgrnd 250 200 150 406.7172 100 50 407.2202 407.6935 405.50 # RT [mi n] 8.8 405.75 Area 1862.8 406.00 406.25 406.50 406.75 Int Type Inte ns S/N Chromatogram Chromatogram 173 16702.5 Bruker Compass DataAnalysis 4.0 printed: 407.00 407.25 407.50 407.75 m/z EIC 406.2500±0.0500 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) 7/22/2014 12:17:53 PM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU 1D_1-B,1_01_11119.d dmm.m MAU 1D Acquisition Date 7/22/2014 2:56:42 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve Intens 300 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste 250 200 150 100 50 0 10 Time [min] MAU 1D_1-B,1_01_11119.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) Intens +MS, 8.9min #534, 100%=26589, -Spectral Bkgrnd 406.2170 250 200 150 406.7144 100 50 408.4995 404.0 # 404.5 RT [min] 9.0 405.0 Area 4180.4 Bruker Compass DataAnalysis 4.0 405.5 Int Type Chromatogram 406.0 Intens 300 406.5 S/N 2549.8 printed: 407.0 407.5 408.0 408.5 m/z Chromatogram EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) 7/22/2014 12:24:37 PM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU 1.5D_1-B,2_01_11120.d dmm.m MAU 1.5D Acquisition Date 7/22/2014 3:10:04 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 600 400 200 0 10 12 Time [min] MAU 1.5D_1-B,2_01_11120.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) Intens +MS, 9.1min #543, 100%=123632, -Spectral Bkgrnd 406.1724 300 200 406.7186 100 405.1665 407.2204 405.6995 405.0 # RT [min] 9.1 405.5 Area 8135.7 Bruker Compass DataAnalysis 4.0 407.7019 406.0 Int Type Chromatogram 406.5 Intens 368 S/N 802.2 printed: 407.0 407.5 408.1916 408.0 408.5 m/z Chromatogram EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) 7/22/2014 10:58:40 AM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment Acquisition Date D:\Data\dmm 2014\MAU 1.5D THEM CHUAN 50 PPB_1-A,3_01_11129.d dmm.m Operator MAU 1.5D THEM CHUAN 50 PPB Instrument / Ser# 7/22/2014 8:02:17 AM Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 2500 2000 1500 1000 500 0 10 12 Time [min] MAU 1.5D THEM CHUAN 50 PPB_1-A,3_01_11129.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.0200 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (4.02,1,GA) Intens +MS, 9.0min #536, 100%=6811, -Spectral Bkgrnd 406.2165 2000 1500 406.7195 1000 500 407.2275 407.7118 404.5 # RT [min] 9.0 405.0 Area 56009 405.5 Int Type Manual Bruker Compass DataAnalysis 4.0 Intens 2425 406.0 S/N 1140.1 printed: 406.5 407.0 407.5 408.1954 408.0 408.5 m/z Chromatogram EIC (406.2000; 811.4000)±0.0200 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (4.02,1,GA) 7/22/2014 10:54:57 AM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU 2D_1-B,5_01_11123.d dmm.m MAU 2D Acquisition Date 7/22/2014 3:58:15 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 80 60 40 20 0 10 12 Time [min] MAU 2D_1-B,5_01_11123.d: EIC 406.2000±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) Intens 406.2178 +MS, 9.0min #538, 100%=8679, -Spectral Bkgrnd 60 50 40 30 406.7193 20 10 407.2270 404.5 # 405.0 RT [mi n] 9.1 Area 1494.8 405.5 Int Type Chromatogram Bruker Compass DataAnalysis 4.0 406.0 Int en s 78 406.5 S/N 2524.6 printed: 407.0 407.5 408.0 m/z Chromatogram EIC 406.2000±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (3.01,1,GA) 7/22/2014 12:11:56 PM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU HP 0.5_1-B,4_01_11122.d dmm.m MAU HP 0.5 Acquisition Date 7/22/2014 3:42:11 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Intens 600 Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste 500 400 300 200 100 0 10 12 Time [min] MAU HP 0.5_1-B,4_01_11122.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) Intens +MS, 9.0min #536, 100%=500, -Spectral Bkgrnd 406.2186 400 406.7179 300 200 100 407.2204 407.7131 405.0 # RT [m in] 9.0 405.5 Area 11727 Int Type Manual Bruker Compass DataAnalysis 4.0 406.0 Int ens 595 406.5 407.0 407.5 408.0 m/z S/N Chromatogram 94.6 EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) printed: 7/22/2014 11:02:47 AM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU HP1.0_1-B,7_01_11125.d dmm.m MAU HP1.0 Acquisition Date 7/22/2014 4:30:23 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 80 60 40 20 0 10 12 Time [min] MAU HP1.0_1-B,7_01_11125.d: EIC 406.2000±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd # RT [min] Area Int Type Bruker Compass DataAnalysis 4.0 Intens S/N Chromatogram printed: Max m/z 7/22/2014 12:20:11 PM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU HP1.5_1-B,8_01_11126.d dmm.m MAU HP1.5 Acquisition Date 7/22/2014 4:46:28 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 80 60 40 20 0 10 12 Time [min] MAU HP1.5_1-B,8_01_11126.d: EIC 406.2000±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd # RT [min] Area Int Type Bruker Compass DataAnalysis 4.0 Intens S/N Chromatogram printed: Max m/z 7/22/2014 12:21:20 PM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\MAU HP 2.0_1-B,3_01_11121.d dmm.m MAU HP 2.0 Acquisition Date 7/22/2014 3:26:07 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Intens Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste 120 100 80 60 40 20 0 10 12 Time [min] MAU HP 2.0_1-B,3_01_11121.d: EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) Intens +MS, 9.0min #535, 100%=384, -Spectral Bkgrnd 406.2157 100 80 406.7183 60 40 20 407.2265 405.0 # RT [m in] 9.0 405.5 Area 2184.5 Int Type Manual Bruker Compass DataAnalysis 4.0 406.0 Int ens 123 406.5 407.0 407.5 408.0 m/z S/N Chromatogram 20.8 EIC (406.2000; 811.4000)±0.1000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (2.01,1,GA) printed: 7/22/2014 11:01:19 AM Page of Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only Chromatogram Report Analysis Info Analysis Name Method Sample Name Comment D:\Data\dmm 2014\VIBLASTINE 50 PPB_1-B,9_01_11130.d dmm.m VIBLASTINE 50 PPB Acquisition Date 7/22/2014 8:19:11 AM Operator Instrument / Ser# Mai micrOTOF-Q 10187 Acquisition Parameter Source Type Focus Scan Begin Scan End ESI Not active 200 m/z 2000 m/z Ion Polarity Set Capillary Set End Plate Offset Set Collision Cell RF Positive 4500 V -500 V 600.0 Vpp Set Nebulizer Set Dry Heater Set Dry Gas Set Divert Valve 1.2 Bar 200 °C 9.0 l/min Waste Intens 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 10 12 Time [min] VIBLASTINE 50 PPB_1-B,9_01_11130.d: EIC 406.2000; 811.4000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (4.02,1,GA) Intens +MS, 8.9min #533, 100%=2306, -Spectral Bkgrnd 406.2178 2000 1500 406.7192 1000 500 407.2103 407.7118 404.5 # RT [min] 8.8 405.0 405.5 Area 76463 Int Type Chromatogram Bruker Compass DataAnalysis 4.0 406.0 406.5 Intens 2919 S/N 187361.0 printed: 407.0 407.5 408.0 408.5m/z Chromatogram EIC 406.2000; 811.4000 +All MS, -Spectral Bkgrnd, Smoothed (4.02,1,GA) 7/22/2014 10:51:47 AM Page of Page of ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TÓM TẮT LÝ LỊCH KHOA HỌC Bản thân Họ tên khai sinh: Lê Trí Nhơn Phái: Nam Sinh ngày: 02/04/1987 Nơi sinh: Tiền Giang Dân tộc: Kinh Tôn giáo: Không Địa thường trú: 143/9 Tết Mậu Thân, Phường 4, Tp Mỹ Tho, Tiền Giang Địa liên lạc: 15/1/7 Đường 12, p.5, Q Gò Vấp, TP HCM Điện thoại: 0933093833 Email: trinhonle@gmail.com Nghề nghiệp, nơi làm việc: Process Discipline Engineer, Bilfinger - Tebodin Vietnam Co., Ltd Ngày vào Đoàn TNCS-HCM: Ngày vào Đảng CSVN: Diện sách: Q trình đào tạo a ĐẠI HỌC Tốt nghiệp Trường/Viện: Đại học Bách Khoa - Tp Hồ Chí Minh Ngành học: Cơng Nghệ Sinh Học Loại hình đào tạo: Chính quy Thời gian đào tạo từ năm: 2006 đến năm: 2012 Xếp loại tốt nghiệp: Trung bình b SAU ĐẠI HỌC Thực tập khoa học, kỹ thuật từ đến Tại Trường, Viện, Nước: Nội dung thực tập: Học cao học/làm NCS từ năm: 2012 đến năm: 2014 Đại học Bách Khoa Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Ngày nơi bảo vệ luận văn thạc sĩ: 15/08/2014, Đại học Bách Khoa http://www.grad.hcmut.edu.vn/hv/hv_print_llkh.php?hisid= 8/5/2014 Page of Quá trình học tập làm việc thân (từ học đại học đến nay): Từ Ngày Đến Ngày Học làm việc 05/09/2006 25/04/2012 Sinh viên 05/09/2012 01/8/2012 Học viên Cao Học 11/03/2013 Project Engineer 15/03/2013 Process Discipline Engineer Thành tích học tập Ở đâu Đại học Bách Khoa, Tp HCM Đại học Bách Khoa, Tp HCM ITD Automation Co., Ltd Bilfinger - Tebodin Vietnam Co., Ltd Kết hoạt động khoa học, kỹ thuật Khả chuyên môn, nguyện vọng hoạt động khoa học, kỹ thuật Lời cam đoan Tôi xin cam đoan nội dung khai thật xin chịu trách nhiệm trước pháp luật nội dung lý lịch khoa học thân Ngày 05 tháng 08 năm 2014 Người khai ký tên Lê Trí Nhơn http://www.grad.hcmut.edu.vn/hv/hv_print_llkh.php?hisid= 8/5/2014 ... trưởng mô sẹo Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên hình thành, tăng sinh tổng hợp alkaloid mơ sẹo Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật mật độ tế... nguyên vẹn ni cấy điều kiện thích hợp Đề tài: ? ?Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên tăng trưởng sinh tổng hợp hợp chất alkaloid mô sẹo dừa cạn Catharanthus roseus L.G.Don? ?? tiến... trò chất điều hòa sinh trưởng thực vật tạo mơ sẹo Các chất điều hịa sinh trưởng thực vật có ảnh hưởng lớn đến sinh lí tế bào q trình ni cấy Các ảnh hưởng bao gồm: Làm tăng q trình phân bào Các chất