Xác định loài sán dây trên chó lây truyền sang người bằng kỹ thuật PCR polymerase chain reaction

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TNTN - BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KH & CN CẤP CƠ SỞ XÁC ĐỊNH LỒI SÁN DÂY TRÊN CHĨ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) ThS NGUYỄN PHI BẰNG AN GIANG, THÁNG 08 NĂM 2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TNTN - BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KH & CN CẤP CƠ SỞ XÁC ĐỊNH LỒI SÁN DÂY TRÊN CHĨ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: CƠ QUAN CHỦ TRÌ ThS.NGUYỄN PHI BẰNG THÀNH VIÊN THAM GIA LÊ THỊ THÚY HẰNG AN GIANG, THÁNG 08 NĂM 2016 Đề tài nghiên cứu khoa học “XÁC ĐỊNH LOÀI SÁN DÂY TRÊN CHÓ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction)”, tác giả Nguyễn Phi Bằng công tác khoa Nông Nghiệp TNTN thực Tác giả báo cáo kết nghiên cứu Hội đồng khoa học Đào tạo Trường Đại Học An Giang thông qua ngày 16/08/2017 Thư ký ThS Nguyễn Lan Phương Phản biện Phản biện ThS Ơn Hịa Thịnh PGS.TS Võ Lâm Chủ tịch Hội đồng PGS.TS VÕ VĂN THẮNG DANH SÁCH BẢNG Bảng Bảng Tỷ lệ nhiễm giun sán từ động vật sang người Bảng Tỷ lệ nhiễm sán dây chó theo tỉnh địa bàn khảo sát Bảng Tỷ lệ nhiễm sán dây chó theo lứa tuổi khảo sát Bảng Tỷ lệ nhiễm ghép sán dây chó theo lứa tuổi khảo sát Bảng Thành phần loài sán dây ký sinh chó theo lứa tuổi Bảng Tỷ lệ nhiễm sán dây theo giống chó Bảng Tỷ lệ nhiễm sán dây theo mùa vụ năm 24 24 25 26 26 28 29 30 TÓM TẮT Nghiên cứu nhằm xác định đặc điểm dịch tễ lồi sán dây ký sinh chó số tỉnh khu vực Đồng Bằng Sông Cữu Long như: An Giang, Đồng Tháp, Kiên Giang Sóc Trăng Xác định tỷ lệ nhiễm định danh phân loại sán dây dựa hình thái thực phương pháp Skrjabin Các mẫu sán dây có hình thái khơng nguyên vẹn định danh phân loại phương pháp PCR giải mã trình tự DNA Kết nghiên cứu cho thấy chó khu vực khảo sát có nhiễm sán dây với tỷ lệ 26,30% tỷ lệ có liên quan mật thiết đến lứa tuổi, giống mùa vụ ni chó Dipylidium caninum lồi sán dây chủ yếu gây tác hại chó khu vực với tỷ lệ 25,74% Phương pháp khuyếch đại cặp mồi DC28S gen 28S rRNA kết hợp với giải trình tự kiểm tra định danh vùng 28S rRNA sán dây cho thấy tỷ lệ mẫu sán dây khuyếch đại cặp mồi DC28S gen 91% Có 621 trình tự nucleotide giải mã thu 581 nucleotide có độ điện di tốt, kết Blast có 100 đoạn DNA có trình tự gần giống với DNA mẫu Kết so sánh trình tự nucleotide xác định trình tự DNA D.caninum với độ tương đồng 96% Xác định tỷ lệ nhiễm DNA sán dây D.caninum ký chủ trung gian phương pháp PCR giải trình tự 10%, trình tự DNA giải mã phù hợp với trình tự DNA sán dây D.caninum cơng bố Mỹ Ngân hàng gen giới với số đăng ký AF023120.1 Từ khố: chó, sán dây, PCR, trình tự gene, đặc điểm dịch tễ, 28S rARN ABSTRACT This study aimed to determine the epidemiological characteristics of tapeworms in dogs at An Giang, Dong Thap, Kien Giang and Soc Trang in Mekong Delta of Viet Nam Postmortem method of Skrjabin was used to determine the intection rate and morphological identification (phenotype) of intact samples The non-intact ones were identified by sequencing technique The results showed that dogs in the survey area had tapeworm infection rate of 26% and the rate was closely related to age, breeding and season of dogs Dipylidium caninum is the dominant tapeworm infected in dogs (25,74%) The result was supported by PCR technique Using amplification DC28S primer of 28S rRNA gene associated sequencing of 28S rRNA area of tapeworm showed that the prevalence of tapeworm amplification by the DC28S primer was 91% Comparative results of nucleotide sequences were identified as D caninum DNA sequences with 96% homology Determination of D caninum DNA on host mediated by PCR and nucleotide sequencing The infection rate is 10% The sequence of the DNA sample matches with the DNA sequence of D caninum tapeworms published by the United States at the World Genealogical Center with registration number AF023120.1 Keyword: dogs, tapeworms, D caninum PCR, sequences gene MỤC LỤC CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 CÂU HỎI NGHIÊN CỨU 1.3 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 1.4 NỘI DUNG CHỦ YẾU CỦA ĐỀ TÀI 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI CHƯƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NGỒI NƯỚC 2.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC 2.3 CÁC ĐẶC ĐIỂM PHÂN LOẠI 2.4 2.5 ẶC ĐIỂM CĂN BỆNH SÁN DÂY 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 18 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.3 GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP VÀ KỸ THUẬT PCR 21 3.4 PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH SÁN DÂY BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ (PCR) VÀ GIẢI TRÌNH TỰ GENE 21 3.5 SỐ MẪU VÀ CÁC ĐOẠN MỒI TRONG THỰC HIỆN PHẢN ỨNG PCR VÀ GIẢI TRÌNH TỰ GENE 22 3.6 PHÂN TÍCH ĐẶC TÍNH DI TRUYỀN Ở MỨC ĐỘ PHÂN TỬ CỦA SÁN DÂY 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH CHĂN NI CHĨ T I CÁC ĐI M ĐI U TRA VÀ BỆNH GIUN SÁN TỪ ĐỘNG VẬT TRUYỀN SANG NGƯỜI CÁC ĐỊA BÀN KHẢO SÁT 4.2.1 Tình hình nhiễm sán dây chó tỉnh ĐBSCL 4.2.2 Tình hình nhiễm sán dây chó địa bàn khảo sát theo lứa tuổi 4.2.3 Kết khảo sát thành phần loài sán dây ký sinh theo lứa tuổi 4.2.4 Kết khảo sát tỷ lệ nhiễm sán dây theo giống chó 4.2.5 Kết khảo sát tỷ lệ nhiễm sán dây theo mùa vụ năm 4.3 KẾT QUẢ ĐỊNH DANH SÁN DÂY TRÊN CHÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ 4.3.1 Sản phẩm PCR điện di gel agarose 4.3.2 Giải mã trình tự nucleotitide sán dây 4.3.3 Kết Blast kiểm tra định danh trình tự nucleotide giải mã ngân hàng gen 4.3.4 Kết so sánh với ngân hàng gen giới 4.3.5 Kết giám định ký chủ trung gian CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 5.2 KHUYẾN NGHỊ 24 24 25 26 28 29 30 30 30 31 32 34 38 38 DANH SÁCH HÌNH Hình Sán dây Spirometra mansoni Hình Vịng đời sán dây Diphyllobothrium mansoni Hình Dipylidium caninum 10 Hình Trứng sán dây Dipylidium canium 10 Hình Taenia hydatigena 11 Hình Vịng đời loài sán dây Taenia spp., 12 Trứng Taenia pisiformis 13 Hình Multiceps multiceps 13 Hình Mesocestoides lineatus 14 Hình 10 Vịng đời sán dải cá Diphyllobothrium latum 15 Hình 11 Kết điện di sản phẩm PCR 30 Hình 12 Kết kiểm sốt chất lượng trình tự nucleotide Peak trace 31 Hình 13 Biểu đồ mô tả điện di nucleotide giải mã 32 Hình 14 Kết Blast trình tự nucleotide giải mã ngân hàng gen NCBI (Nationnal Center for Biotechnology Information) 32 Hình 15 Danh sách báo cáo mã gen đăng ký Ngân hàng gen quốc tế NCBI có trình tự Base gần giống với mẫu sán dây nghiên cứu 33 Hình 16 So sánh trình tự đoạn RNA gen 28S từ mẫu sán thu với trình tự gen D Caninum Ngân hàng gen quốc tế 33 Hình 17 Sản phẩm PCR chụp thạch Ararose 1% 34 Hình 18 Kết điện di Bazonito mẫu khảo sát giám định 35 Hình 19 Kết Blast trình tự nucleotide NCBI 35 Hình 20 Danh sách mã gen tương đồng với DNA mẫu phân tích đăng ký Ngân hàng gen giới 36 Hình 21 So sánh sai khác trình tự nucleotide mẫu so với mã đăng ký Mỹ 36 DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT PCR: Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen) ĐBSCL: Đồng sông Cửu Long DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid SCKS: Số chó khảo sát SCN: Số chó nhiễm TLN: Tỷ lệ nhiễm NCBI: National Center for Biotechnology Information - Trung tâm Thông tin Công nghệ Sinh học Quốc gia1 CDC: Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm soát phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ) OD: Optical Density (mật độ quang học) (1) NCBI thuộc NLM (National Library of Medicine - Thư viện Y khoa Quốc gia), đặt NIH (National Institutes of Health - Viện Y học Quốc gia Hoa Kỳ CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA NHIỆM VỤ KH & CN Chó mèo từ lâu xem thú cưng, người bạn thân thiết gần gũi người nên việc lây nhiễm bệnh từ động vật cưng được cảnh báo từ lâu, ký sinh trùng từ chó sang người dễ dàng chó ni bị nhiễm sán dây, bệnh ấu trùng có phức tạp khó điều trị, đặc biệt trẻ nhỏ (Huỳnh Hồng Quang, 2010) Zoonosis hay zoonose bệnh truyền nhiễm truyền từ động vật (kể vật nuôi động vật hoang dại) sang người từ người sang động vật Động vật đóng vai trị quan trọng việc trì nhiễm bệnh ổ chứa mầm bệnh tự nhiên (McCarthy & Moore, 2000) Hiện nay, việc kiểm sốt vệ sinh thú y chăn ni chó kiểm soát giết mổ chưa nhiều địa phương quan tâm mức nên nguy lây lan bệnh sán dây bệnh ấu trùng chó lớn Thêm vào đó, lồi sán khác có vịng đời lây truyền khác nhau, cách ký chủ trung gian hoàn toàn khác nên việc định danh để phân biệt xác lồi sán dây ký sinh có ý nghĩa quan trọng nhằm giám sát loài sán dây lưu hành phổ biến gây tác hại chủ yếu cho chó có nguy lây cho người nhằm cắt đứt vòng đời chúng ngăn chặn lây lan khâu then chốt cơng tác phịng bệnh kiểm soát bệnh Định danh sán dây chó từ trước đến phương pháp định danh hình thái học phương pháp gặp khó khăn việc giám định phân biệt lồi giống có cấu tạo hình thái giống nhau, sán dây giai đoạn ấu trùng ký sinh thể ký chủ trung gian, mẫu thu thập khơng cịn ngun vẹn cấu tạo, mẫu rời bị đứt khúc hay phần nhỏ sán dây Hơn chưa có nghiên cứu đánh giá mức độ biến đổi hình thái cung loài vùng sinh thái, địa lý hay vật chủ khác Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử để xác định trực tiếp hệ gen sán dây cho phép giám định xác lồi sán lưu hành DNA vật chất di truyền có tính ổn định cao, bị ảnh hưởng yếu tố môi trường giai đoạn vòng đời chúng, nói phương pháp chẩn đốn sinh học phân tử bổ sung tất khiếm khuyết phương pháp định danh hình thái truyền thống Chính ỊNH LỒI SÁN DÂY TRÊN CHĨ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction)” 1.2 MỤC TIÊU CỦA NHIỆM VỤ KH VÀ CN - Xác định đặc điểm dịch tễ bệnh sán dây chó - Ứng dụng kỹ thuật PCR việc nhận diện lồi sán dây gây tác hại chủ yếu chó có khả lây truyền sang người 1.4 NỘI DUNG CHỦ YẾU CỦA NHIỆM VỤ KH & CN - Xác định mức độ lưu hành sán dây chó tỉnh An Giang, Đồng Tháp, Sóc Trăng, Kiên Giang - Xác định loài sán dây gây bệnh chó tỉnh phương pháp mỗ khám tỉnh khảo sát - Một số đặc điểm dịch tễ sán dây chó tỉnh khảo sát - Ứng dụng kỹ thuật PCR để chẩn đoán nhận diện bệnh sán dây gây tác hại chủ yếu chó - Giải trình tự nucleotit lồi sán dây thực phản ứng PCR 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA NHIỆM VỤ KH & CN - Làm sở khoa học cho nghiên cứu giảng dạy - Kết nghiên cứu công bố tạp chí chuyên ngành hội thảo khoa học để tăng cường kiến thức khoa học thú y - Kết nhiệm vụ sở khoa học lồi sán có khả gây bệnh vùng khảo sát - Ứng dụng công nghệ sinh học chẩn đốn giám định lồi sán dây gây bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Agnieszka Tylkowska, Bogumila Pilarczyk, Aneta Gregorczyk, Ewelina Templin (2010), Gastrointestinal helminths of dogs in Western Pomerania, Poland Wiadomoœci Parazytologiczne 2010, 56(3), 269–276 Alimohammad Bahrami, Alizaman Doosti, Hoosain Nahravanian, Abdol mahdi Noorian and Salman Ahmadi Asbchin (2011) Epidemiological Survey of Gastro-Intestinal Parasites in Stray Dogs and Cats Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 5(9): 1944-1948 Beugnet, F., Delport, P., Luus, H., Crafford, D., Fourie, J (2013) Preventive efficacy of Frontline Combo and Certifect against Dipylidium caninum infestation of cats and dogs using a natural flea (Ctenocephalides felis) infestationmodel Parasite20(7) Beugnet, F., et al., (2014) Occurrence of Dipylidium caninum in fleas from client-owned cats and dogs in Europe using a new PCR detection assay Veterinary Parasitoglogy, ScienceDirect journal, VETPAR-7286, No.of Page 7,Germany Bo G., Xuejian W (2006) Neuroimaging and pathological findings in a child with cerebral sparganosis Case report Neurosurg journal, 2006 Dec., 105 (6 Suppl): 470 – China Bowman D D., Lynn R C., Eberhard M L, (2003) Georgis' Parasitology for Veterinarians, Elsevier Science, USA Công ty Vemedim, (không ngày tháng) Sổ tay chăm sóc chó mèo, Vemedim VietNam, Tp Cần Thơ Cục thống kê An Giang (2014) Thống kê An Giang Truy cập từ: http://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=496&idmid=1&itemid=1954 Currier R., Kinzer G., Deshields, E (1973) Dipylidium caninum infection in a 14 month-old-child Southern Medical Journal, 66 (9), pp 1060-1065 D Blair, T Agatsuma (1997) Geographical genetic structure within the human lung fluke, Paragonimus westermani, detected from DNA sequences Parasitology journal Cambridge University Press publishing No 04 Page 411-417 (1974) Huỳnh Hồng Quang (2010) Thận trọng sán dây chó, mèo Dipylidium caninum nhiễm bệnh người, Viện sốt rét ký sinh trùng Quy Nhơn, truy cập từ http://www.impeqn.org.vn/impeqn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=936&I D=3759 ngày 04/05/2015 Huỳnh Hồng Quang (2010) Thông tin cập nhật bệnh từ động vật truyền sang người, Viện sốt rét côn trùng ký sinh trùng Quy Nhơn Cập nhật ngày 08/04/2015 Truy cập từ: http://www.impeqn.org.vn/impeqn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=934&I D=3722 Huỳnh Hồng Quang (2008) Bệnh ký sinh trùng gây nên sán nhái người có liên quan đến thói quen ăn uống Viện sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Quy Nhơn Truy cập từ http://www.impe-qn.org.vn/impen/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=1068&ID=2253 Hyeong-Kyu Jeon, Hansol Park, Dongmin Lee, Seongjun Choe, Kyu-Heon Kim, Sun Huh, Woon-Mok Sohn, Jong-Yil Chai, Keeseon S Eom (2015) Human Infections with Spirometra decipiens Plerocercoids Identified by Morphologic and Genetic Analyses in Korea, Korean J Parasitol Vol 53, No 3: 299-305, 39 June 2015 ISSN (Print) 0023-4001, ISSN (Online) 1738-0006, pp 197-202, pp 299-305 Kim D G., Paek S H., Chang K H., Wang K C., Jung H W., Chi J G., Choi K S., Han D H (1996) Cerebral sparganosis Clinical manifestations, treatment, and outcome in Department of Neurosurgey, Seoul National University College of Medicine, Korea Neurosurg Journal, 85(6), pp 1066 – 71 http://www.PubMed.com Lê Hữu Khương (2005) Giun sán ký sinh chó số tỉnh miền nam Việt Nam Luận án tiến sĩ thú y Đại học Nông Lâm TPHCM Việt Nam Lê Hữu Nghị, Nguyễn Văn Duệ (2000) Tình hình nhiễm giun sán chó ni Tp Huế hiệu tẩy trừ Tạp chí Khoa học Kỹ Thuật Thú y, Tr 58-62 Lê Quang Long (1996), Sinh Lý Người Và Động Vật Gia, Hà Nội Lê Trần Anh Nguyễn Khắc Lực (2013) Nhiễm giun sán từ động vật sang người chẩn đoán Bệnh viện 103 (2009-2012) Tạp chí y – dược quân Số Tr 40-44 Lê Văn Thọ (2010) Cách chăm sóc chó cưng Tp Hồ Chí Minh: Nhà xuất Nơng Nghiệp Lương Trường Sơn, Đặng Thị Nga, Nguyễn Ngọc Ánh, Đỗ Thị Phượng Linh, Phạm Thị Thu Giang, Trần Thị Ngân, Mai Anh Lợi (2012) Tìm hiểu yếu tố dịch tễ, lâm sàng, cận lâm sàng kết điều trị bệnh nhân nhiễm giun sán đến khám Viện SR-KST-CT TP HCM Báo cáo Hội nghị Ký sinh trùng toàn quốc năm 2013, TP HCM Mangono S S., Rawina W S., Kurniawan A., Nakao M., Mulyani Tr., Wandra T., Ito A (2007) Diphyllobothriasis and sparganosis in Indonesia Tropical Medicine and Health, Vol 35 (2007); No pp 301 – 305 Mc Carthy, T.A Moore (2000) Emerging helminth zoonoses International Journal for Parasitology No 30, pp.1351-1360 Michael Thrusfield (2007) Veterinary epidemiology (3rd ed.) Veterinary Clinical Studies, University of Edinburgh Third Edition by Blackwell Science Ltd, Oxford OX4 2DQ, UK Muhammad Tayyab Farooqi, Azhar Maqbool, Kamran Ashraf, Muhammad Imran Rashid, Haroon Akbar and Ali Ahmad Sheikh (2014) Canine zoonosis; its potential and association of soil-borne helminthes from public parks and its gastro-intestinal helminthes in lahore, Pakistan Mukaratirwa S and Singh V P, (2010) Prevalence of gastrointestinal parasites of stray dogs im pounded by the Society for the Prevention of Cruelty to Animals (SPCA), Durban and Coast Journal of the South African Veterinary Association (2010) 81(2): 123–125 (En.) University of KwaZulu-Natal, Westville Campus, Durban, 4000 South Africa Nguyễn Đình Giậu (2000) Sinh Lý Học Người Và Động Vật, NXB Đại Học Quốc Gia, Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Hữu Hưng (2009) Bài giảng Ký sinh trùng thú y Tủ sách khoa Nông Nghiệp SHUD, Đại học Cần Thơ Nguyễn Hữu Hưng (2010) Giáo trình Bệnh ký sinh trùng gia súc gia cầm Nhà xuất Đại học Cần Thơ Thành phố Cần Thơ , – 69 (2002) tr 135 – 143 40 Nguyễn Phước Tương (2002), Ký sinh trùng vật nuôi thú hoang truyền sang người Tập I, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Hà Nội Nguyễn Quốc Vinh (2010) Tình hình nhiễm sán dây ký sinh chó hiệu tẩy trừ số chế phẩm thuốc Thành phố Cần Thơ (Luận văn thạc sĩ không xuất bản) Trường Đại học Cần Thơ, Cần Thơ, Việt Nam Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Lê, Phạm Sỹ Lăng, Nguyễn Văn Quang (2008) Giáo trình ký sinh trùng học thú y, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Quyên Phạm Công Hoạt (2011) xác định tương quan tỷ lệ nhiễm sán dây teania hydatigena trưởng thành chó tỷ lệ nhiễm ấu sán cysticercus tenuicollis trâu, bò, lợn - thử nghiệm thuốc tẩy sán dây cho chó Khoa học Kỹ Thuật Thú Y - tập XVIII - số – 2011 Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Quyên, Nguyễn Thị Ngân, Bùi Chí Vinh, Bùi Văn Dũng (2015) Tình hình nhiễm giun trịn đường tiêu hóa chó thành phố Việt Trì, tỉnh Phú Thọ Khoa học Kỹ Thuật Thú Y - tập XI - số – 2015 (1994) Nguyễn Văn Đề (2007) Ứng dụng công nghệ gen xác định thành phần loài ký sinh trùng Việt Nam Hội nghị chuyên đề Y–Sinh học phân tử ứng dụng ngành Ký sinh trùng- ĐHYHN, 10/2007 Nguyễn Văn Đề – 191 Nguyễn Văn Đề (2006) Bước đầu áp dụng Sinh học phân tử để xác định thành phần loài phân bố sán lá, sán dây thường gặp Việt Nam Đề tài cấp Bộ Bộ Y Tế (1999) Cần Thơ, Việt Nam Pablo Junquera (2013) Cysticercus tenuicollis, parasitic tapeworm of sheep, goats, cattle, pigs and other liverstock Biology prevention and control Truy cập từ http://parasitipedia.net/index.php?option=com_content&view=article&id=2580& Itemid=2863 (1990) Tạp chí – - 114 (1977) , Reddy S (1982) Infestation of a Five-Month-Old Infant with Dipylidium caninum Delaware Medicl Journal, 54 (8), pp 455-6 Soulsby, E.J.L (1982) Helminths, Arthropods and Protozoa of Domesticated Animals 7th edition, Bailliere Tindall, London Subudhi B N., Dash S., Chakrabarty D., Mishra D P., Senapati U (2006) Ocular sparganosis Indian Med Assoc Journal Sep; 104(9): 529 – 30 Berhampur Tadiwos Abere, Basaznew Bogale and Achenef Melaku (2013) Gastrointestinal helminth parasites of pet and stray dogs as a potential risk for human health in Bahir Dar town, north-western Ethiopia, Vet World 6(7): page 388-392, doi:10.5455/vetworld.2013.388-392 Trần Thị Dân (2000), Dịch tễ học, Tủ sách Đại Học Nông Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh 41 Wen Hui Li, Wan Zhong Jia, Zi Gang Qu, Zhi Zhou Xie, Jian Xun Luo, Hong Yin, Xiao Lin Sun, Radu Blaga and Bao Quan Fu (2013) Molecular Characterization of Taenia multiceps Isolates from Gansu Province, China by Sequencing of Mitochondrial Cytochrome C Oxidase Subunit Korean J Parasitol Vol 51, No 2: 197-201, April 2013 ISSN (Print) 0023-4001, ISSN (Online) 1738-0006, pp 197-202 Yamashita K., Akimura T., Kawano K., Wakuta Y., Aoki H., Gondou T (1990) Cerebral sparganosis mansoni Report of two cases Surg Neurol Journal, 33(1), pp 28 – 34 42 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH SÁN DÂY VÀ KÝ CHỦ TRUNG GIAN ĐIỂN HÌNH THU NHẬN ĐƯỢC TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU CÁC KIỂU HÌNH KHÁC NHAU CỦA PHÂN ĐẦU LỒI DIPYLIDIUM CANINUM CÁC LỒI SÁN DÂY ĐIỂN HÌNH THU THẬP ĐƯỢC TRONG QUÁ TRÌNH LẤY MẪU VÀ ĐỊNH DANH PHÂN LOẠI 2.1 CÁC DẠNG HÌNH THÁI CỦA CÁC LỒI SÁN DÂY 3.2 CÁC LOẠI ĐỐT KHÁC NHAU VÀ TRỨNG CỦA CÁC LOÀI SÁN DÂY 3.3 TRỨNG CỦA CÁC LOÀI SÁN DÂY 3.4 CÁC KÝ CHỦ VÀ ẤU TRÙNG KÝ CHỦ TRUNG GIAN CỦA LOÀI SÁN DÂY DIPYLIDIUM CANINUM PHỤ LỤC THỐNG KÊ CHI – SQUARE TEST Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm sán dây theo lứa tuổi chó Chi-Square Test: 13-24, >24 Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Total 13-24 >24 83 149 104.69 127.31 4.494 3.695 Total 232 315 335 293.31 356.69 1.604 1.319 650 398 484 882 Chi-Sq = 11.111, DF = 1, P-Value = 0.001 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm ghép sán dây theo lứa tuổi chó - Chi-Square Test: 1-2 loài, 3-4 loài lứa tuổi 12-24 tháng tuổi Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 1-2 loài 3-4 loài Total 71 12 83 41.50 41.50 20.970 20.970 12 41.50 20.970 Total 71 41.50 20.970 83 83 83 166 Chi-Sq = 83.880, DF = 1, P-Value = 0.000 - Chi-Square Test: 1-2 loài, 3-4 loài lứa tuổi 24 tháng tuổi Chi-Square Test: 13-24, >24 Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Total 13-24 >24 109 40 74.50 74.50 15.977 15.977 Total 149 40 109 74.50 74.50 15.977 15.977 149 149 149 298 Chi-Sq = 63.906, DF = 1, P-Value = 0.000 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm giống chó Chi-Square Test: giống chó nội lai, giống chó ngoại Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts giống chó nội lai giống chó ngoại Total 205 474 186.30 492.70 1.877 0.710 679 37 166 55.70 147.30 6.277 2.374 203 Total 242 640 882 Chi-Sq = 11.237, DF = 1, P-Value = 0.001 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm mùa năm Chi-Square Test: Mùa nắng, Mùa mưa Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Total Mùa nắng 69 89.43 4.668 271 250.57 1.666 340 Mùa mưa 163 142.57 2.929 Total 232 379 399.43 1.045 650 542 882 Chi-Sq = 10.308, DF = 1, P-Value = 0.001 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm loài sán dây 4.1 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm loài sán dây lứa tuổi 13-24 tháng tuổi Chi-Square Test: D.caninum, S.masoni, T.hydatigena, T.pisiformis, D.latum Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Total D.caninum 79 34.78 56.212 319 363.22 5.383 398 S.masoni 55 34.78 11.751 T.hydatigena 18 34.78 8.098 343 363.22 1.125 380 363.22 0.775 398 T.pisiformis D.latum Total 20 174 34.78 34.87 6.283 30.985 378 363.22 0.602 398 397 364.13 2.967 398 399 1817 1991 Chi-Sq = 124.180, DF = 4, P-Value = 0.000 4.1 Sự khác biệt tỷ lệ nhiễm loài sán dây lứa tuổi 24 tháng tuổi Chi-Square Test: D.caninum, S.masoni, T.hydatigena, T.pisiformis, D.latum Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Total D.caninum 148 58.80 135.317 336 425.20 18.713 484 S.masoni 82 58.80 9.154 T.hydatigena 34 58.80 10.460 402 425.20 1.266 450 425.20 1.446 484 T.pisiformis D.latum Total 24 294 58.80 58.80 20.596 47.412 460 425.20 2.848 484 Chi-Sq = 253.769, DF = 4, P-Value = 0.000 484 478 425.20 6.557 484 2126 2420 PHỤ LỤC PHIẾU ĐIỀU TRA MỖ KHÁM CHÓ Ngày lấy mẫu: Địa điểm giết mỗ Số thứ tự: Giới tính: Tuổi: □ 12-24 tháng; □ > 24 tháng Giống chó: □ Nội; □ Lai; □ Trọng lượng Thể trạng: □ Gầy; □ Trung Bình; □ Mập Bảng kết quả: Vị trí ký sinh Sán dây Ngoại Cường độ nhiễm Loài Ghi Người lấy mẫu PHỤ LỤC Các chuỗi gene truy cập Ngân hàng gen giới NCBI (National Center for Biotechnology Information, U.S National Library of Medicine) Dipylidium caninum 28S ribosomal RNA gene, partial sequence GenBank: AF023120.1 FASTA Graphics Go to: LOCUS AF023120 DEFINITION ACCESSION VERSION 1095 bp DNA linear INV 11-JUL-2000 Dipylidium caninum 28S ribosomal RNA gene, partial sequence AF023120 AF023120.1 KEYWORDS SOURCE Dipylidium caninum ORGANISM Dipylidium caninum Eukaryota; Metazoa; Platyhelminthes; Cestoda; Eucestoda; Cyclophyllidea; Dipylidiidae; Dipylidium REFERENCE AUTHORS TITLE (bases to 1095) Litvaitis,M.K and Rohde,K A molecular test of platyhelminth phylogeny: inferences from partial 28S rDNA sequences JOURNAL REFERENCE Invertebr Biol 118, 42-56 (1999) (bases to 1095) AUTHORS TITLE Litvaitis,M.K Direct Submission JOURNAL Submitted (05-SEP-1997) Zoology, University of New Hampshire, Rudman Hall, Durham, NH 03824, USA FEATURES source Location/Qualifiers 1095 /organism="Dipylidium caninum" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:66787" rRNA 1095 /product="28S ribosomal RNA" /note="D3-D6 expansion segment" ORIGIN taagatgcat gcaagtcaaa gggtcctacg aaaccccgag gcgtagtgaa agtgaggctc 61 gcgctgtgtc cctattctta ccgctcctct tggggagcgg tggatgtggg cgcggagtga 121 cgaggtgaga tcccgttgtt aggcactctt tcgctgtgcc tgtgtgtgca cagtcgagcc 181 ggcgggcgca tcaccggccc gtcccatggt gtggtcatcg actacggcaa ggcttcggac 241 gtgcgtgcgt gcctgcgtgc gtgtgttccg gtctacgcca gtcgttgcgt catcgggcgg 301 tgcatgagca tacawgttga gacccgaaag atggtgaact atgcttgcgt aggttgaagc 361 cagaggaaac tctggtggag gaccgtagcg attctgacgt gcaaatcgat cgtcaaacgt 421 gagtataggg gcgaaagact aatcgaacca tctagtagct ggttccctcc gaagtttccc 481 tcaggatagc tggcattcat tggcataatc agttttatcc ggtaaagcga atgattagag 541 gtgctgggtt cgaaacgagc tcaacctatt ctcaaacttt aaatgggtga gaggctcgac 601 tcgccccgct atgctctggc ccgcgtggtc aggcctacag gagtcgggcg ttgaatgtgc 661 gaatgccaag tgggccattt ttggtaagca gaactggcgc tgtgggatga accaaacgcc 721 cggttaaggt gcctaacact gacgctcatg agacaccaca aaaggtgttg gttaatacag 781 acagcaggac ggtggccatg gaagtcggca tccgctaagg agtgtgtaac gactcacmtg 841 ccgaattgac cagccctgaa aatggatggc gctagagmgt cggacatata ccgggccgtc 901 atckcaagat gggcggagtt gggccaamtg cgttgcggtt gcgttacgct gatggtctga 961 cgagggtcca ggcatggagt gcgatggcga gtaggagggt ctccgtggtg agcgtagaag 1021 cctcgggcgt gggcctgggt ggagccgcca cgggtgcaga tcttggtggt agtagcaaat 1081 attcaagtga gagcc ... SÁN DÂY TRÊN CHĨ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) ” 1.2 MỤC TIÊU CỦA NHIỆM VỤ KH VÀ CN - Xác định đặc điểm dịch tễ bệnh sán dây chó - Ứng dụng kỹ thuật PCR việc... THÁNG 08 NĂM 2016 Đề tài nghiên cứu khoa học “XÁC ĐỊNH LOÀI SÁN DÂY TRÊN CHÓ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) ”, tác giả Nguyễn Phi Bằng công tác khoa Nông Nghiệp... BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KH & CN CẤP CƠ SỞ XÁC ĐỊNH LỒI SÁN DÂY TRÊN CHĨ LÂY TRUYỀN SANG NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: CƠ QUAN