Thông tin tài liệu
GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Khi nhu cầu sống người ngày cải thiện nhu cầu ăn uống ngày cao, số lượng mà chất lượng, ăn no mà phải ăn ngon Vì vậy, việc có sản phẩm, thực phẩm vừa đáp ứng thị hiếu, vừa đáp ứng dinh dưỡng độ an toàn thực phẩm vấn đề cần thiết Trong năm gần với xu đổi hội nhập, kinh tế nước ta ngày phát triển, thu nhập quốc dân tăng cao Góp phần làm nên điều ngành công nghiệp thực phẩm, quan trọng lónh vực rượu bia – nước giải khát Đặc biệt không nhắc đến ngành công nghiệp sản xuất bia Bia loại nước uống có độ cồn thấp sản xuất trình lên men đường môi trường lỏng không chưng cất sau lên men Đặc trưng bia hương vị hoa houblon, bọt mịn xốp Ngoài khả giải khát, có giá trị dinh dưỡng cao, chứa nhiều vitamin( chủ yếu nhóm vitamin B 1, B2,PP…) cung cấp lượng lớn lượng cho thể, đặc biệt CO2 hòa tan bia có tác dụng giải nhiệt nhanh, hổ trợ tiêu hóa Nhờ ưu điểm bia sử dụng rộng rãi hầu giới với sản lượng ngày tăng Ở nước ta ngày nay, sản phẩm bia không phong phú nhãn hiệu SaiGon, Heneiken, Zorok, Tiger, Hanoi, Đại Việt … mà đa dạng chủng loại: bia tươi, bia -1- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang đóng chai, bia đóng lon; nhìn chung dù hình thức hay chủng loại loại bia gây nên ý khác người thưởng thức Nhưng trước tình hình sản phẩm bị ảnh hưởng vấn đề vệ sinh an toàn thực phẩm, người tiêu dùng có tâm lý lo ngại sử dụng sản phẩm sản xuất nước, liệu sản phẩm bia có tránh khỏi ngờ vực không Ngoài bia thông dụng tầng lớp công nhân người lao động, bia lon ngày ưa chuộng tầng lớp cán viên chức tầøng lớp thượng lưu Vấn đề đặt bia có nguy nhiễm vi sinh cao, bia lon sao? Được bảo quản nồng độ CO cao khả nhiễm vi sinh gây hại cho người tiêu dùng nào? Để giải vấn đề nên thực đề tài “ khảo sát hệ vi sinh vật đánh giá mức độ an toàn vi sinh bia” phạm vi báo cáo tiến hành kiểm tra diện Coliforms Ercherichia coli có số sản phẩm bia lon: Zorok, Hanoi, Đại Việt, bigC, Sanmiguel siêu thị BigC quận Gò Vấp 1.2 Mục đích Khảo sát có mặt hay mặt số lượng vi sinh vật gây bệnh gây hại đến sức khỏe người tiêu dùng sản phẩm bia lon Và đưa nhận xét tổng quan khả an toàn vệ sinh thực phẩm sản phẩm bia lon thị trường -2- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang CHƯƠNG II: TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu bia Bia loại nước giải khát có độ cồn nhẹ khoảng – 5%, sản xuất từ đại mạch, hoa houblon, lên men điều kiện lạnh với tham gia nấm men Saccharomyces Cerevisiae trình lên men Saccharomyces Carlsbergenis(tên Saccharomyces Cerensiae) trình lên men chìm Thành phần hóa học bia, cồn, H 2O CO2, chứa số vitamin, số khoáng chất đa lượng, hợp chất nitơ số chất thơm đặc trưng Quá trình sản xuất bia đòi hỏi nghiệm ngặt kó thuật Bởi chất trình lên men trình sinh hóa phức tạp việc tạo sản phẩm C2H5OH tạo nhiều sản phẩm phụ metanol(CH3OH), aldehyt(- CHO), axetol(= C = O)… Vì nhiệm vụ công nghệ sản xuất bia phải có tác động làm kìm hãm phản ứng sinh hóa phụ, hạn chế tạo sản phẩm phụ, sản phẩm độc tố người Đồng thời, bia sản phẩm không chưng cất nên nghiêm ngặt yêu cầu mặt nhiệt độ Nhiệt độ trình lên men định đến chất lượng sản phẩm Giá trị dinh dưỡng bia phụ thuộc vào chất hòa tan thành phần hóa học chúng Các chất hòa tan bia thể người tiêu hóa tốt, -3- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang chúng chất dễ hấp thụ, bia sử dụng liều lượng chúng giữ vai trò quan trọng cung cấp lượng cho thể Rượu bia thành phần cung cấp lượng, 1g rượu cung cấp lượng tương đương với 7,08Kcal Các chất đạm, vitamin(chủ yếu vitamin B) khoáng chất,… chủ yếu dạng hòa tan dễ tan 2.2 Lịch sử phát triển Những sản phẩm lên men từ lúa mạch biết đến từ 8000 năm trước công nguyên(TCN) Người ta cho Osiris(vị thần nông nghiệp Ai Cập) người hướng dẫn người làm bia từ lúa mạch Tuy nhiên, theo Herodotus viết kỷ thứ năm TCN lại cho công lao thuộc ông Osiris Iris Bằng đoán tin người ta suy tôn Osiris Iris phát triển cách ngẫu nhiên lên men có “sự can thiệp vị thần thánh” mà Osiris Iris người thhực Thời trung cổ, thầy tu người công nghiệp hóa việc sản xuất bia Ở tu viện St.Gall, Thụy Só, ngøi ta giữ đïc xưởng bia cổ Cũng thời này, ngøi ta bắt đầu tạo hương cho bia cách thêm vào dịch hèm loại thảo mộc có vị đắng hương thơm Những người đứng đầu giữ bí mật chất tạo hương thu từ nguồn lợi lớn Đến kỉ thứ 8, người ta biết sử dụng hoa houblon Nghiên cứu khoa học sản xuất bia thực bắt đầu năm 1876, với việc xuất “nghiên cứu bia” Louis Pastuer Trước tiên ông bệnh bia phát triển vi sinh vật -4- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang đưa tảng quy trình sản xuất hợp lí Ông phát minh phương pháp trùng mang tên ông, Pastuer, mà ngày người ta áp dụng để tránh nhiễm khuẩn cho bia Do vậy, nghiên cứu khoa học tạo bước phát triển nhanh sản xuất bia tạo nên ngành công nghiệp lớn mạnh ngày phát triển 2.2.1 Sản xuất bia nước Anh cổ xưa Theo nhiều tài liệu lịch sử, vào kỉ sau công nguyên người Briton người Ailen bắt đầu sản xuất “coirm”(tên xưa bia vàng) từ lúa mạch Phương pháp người Briton sản xuất tương tự người Ai Cập cổ Đại: thóc lúa ngâm nước cho nảy mầm, làm khô nghiền thành bột, sau pha vào lượng nước định, lên men tạo loại đồ uống êm dịu, ấm nóng, đậm đà có cảm giác lâng lâng Lịch sử bia gắn kết với nhà thờ St.Brigid nơi sản xuất bia vàng miền Đông để cung cấp cho tất nhà thờ vùng Sau này, từ tu viện xuất nhà sản xuất bia vàng đảo quốc sương mù Tất tu viện giới tu só có nơi sản xuất bia riêng họ Vào khoảng thời Trung Cổ, bia vàng trở thành đồ uống chọn cho bữa sáng, bữa trưa bữa tối Chè cà phê thời chưa phát triển Khi việc sản xuất bia vàng nhà thờ trở nên phổ biến, bắt đầu xuất xưởng sản xuất bia có quy mô lớn Có hai nhóm sản phẩm sản xuất đó: lên men theo xu hướng ngâm ủ thùng bia( bia mạnh) sản xuất thông qua -5- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang loại dịch đường pha loãng (bia nhẹ) Các thùng lên men bia vàng làm gỗ hoàn toàn Việc đánh giá chất lượng bia vàng có từ năm 1266, từ đầu năm 1305, sở sản xuất bia bắt buộc phải có giấy phép sản xuất Bia Anh bắt đầu sang Pháp Becket với Chancellor vua Henry cử sang Pháp để cầu hôn công chúa Pháp Ông ta đem nhiều bia vàng Anh để làm quà Thứ đồ uống gây ngạc nhiên cho người Pháp: đồø uống lành mạnh nhất, chút cặn bã nào, cạnh tranh với rượu vang màu sắc vượt trội hương vị 2.2.2 Sản xuất bia nước khác Các sản phẩm đồ uống lên men sản xuất Ở Nga, đồ uống dân gian Quass (nước Kvas), làm từ lúa mạch ủ mạch nha, làm dịu cách cho thêm nho khô (để tạo bọt), mẫu bánh mì lùa mạch đen (để tạo vị chua nhẹ) hoa khác để tạo màu Ở vùng núi Nam Mỹ có sản phẩm đồ uống Chica từ ngô thổ sản vùng núi sản xuất Để tạo sản phẩm này, ngô nghiền hòa thành bột nhão sau để lắng, cháo ngô thu đuộc vào bầu, cho thêm nước để lên men, sản phẩm cuối sản phẩm mời khách Ở vài nước bao gồm: Trung Quốc Nhật Bản, sản phẩm lên men truyền thống dựa sở lúa gạo, ví dụ: rượu Sake lên men trạng thái rắn (Koji) Ở Trung Quốc, phát triển quan trọng công nghiệp sản -6- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang xuất bia, thông qua thành viên hội buôn bao gồm nhà sản xuất bia hàng đầu giới, có thành tựu lớn thời gian gần nay, thể quốc gia lớn sản xuất bia giới Tại Nhật từ nguồn gốc ban đầu nhà mày bia thực nghiệm công ty Mỹ Wiegland Copeland thung lũng Spring – Yolohama, công ty bia Kirin thành lập năm 1907 Trước công ty bia Osaka công ty trách nhiệm hữu hạn Các nhà máy bia Asahi thành lập 1889 Ở Philippin, Sanmiguel hùng mạnh người sản xuất chính, nước Thái Lan Singarpo có cạnh tranh hãng tiếng Heniken, Guinness Carlsberg Ở nước Phương Đông khác, bia đồ uống thứ yếu 2.3 Giá trị dinh dưỡng bia Bia nước giải khát có từ lâu đời, ngày bia tiêu thụ mạnh thị trường Việt Nam thị thường giới Bia sản xuất từ nguyên liệu đại mạch, hoa houblon nước với nấm men, bia có độ cồn nhẹ – 5%, có gas, có bọt mịn xốp, có vị hương thơm đặc trưng, nguồn dinh dưỡng phong phú - Chất đạm: đặc biệt đạm hòa tan chiếm – 10% chất tan,bao gồm: protein, peptide, aminoacide - Glucid: glucid tan (70% dextrin, pentosan – sản phẩm caramen hóa) - Vitamin: chủ yếu vitamin nhóm B (B 1, B2…) Việc sản xuất tiêu thụ bia Việt Nam khiêm tốn chủ yếu tập trung thành phố lớn -7- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang Bia loại thức uống bổ dưỡng giúp làm giảm nhanh khát cho người uống bia, giúp tiêu hóa nhanh thức ăn ăn uống ngon miệng, giảm mệt mỏi tăng phần tỉnh táo người uống sử dụng liều lượng thích hợp Thành phần bia gồm có nước 80 – 89%, chất hòa tan 5,5 – 10,7%trong đường dextrin chiếm 2,7 – 5% Hàm lượng etanol loại bia thường khác 1,5 – 2% loại bia nhẹ, 4,8 – 5% loại bia mạnh Các thành phần phi cồn bia dao động từ – 3% loại bia nhẹ, – 10% loại bia mạnh; thành phần tạo nên phần rắn bia chứa tới 80% hydratcacbon chủ yếu dextrin CO chiếm khoảng 0,3 – 0,45% thành phần chịu trách nhiệm chủ yếu giá trị giải khát tính ổn định bia Một số lượng nhỏ acid lactic, axetic, formic, sucxinic có mặt tất loại bia, chiếm khoảng 0,15 – 0,4% Các acid amin bia 0,15 – 0,75%có nguồn gốc từ protein nguyên liệu thô, trình sinh trưởng phát tiển nấm men Nồng độ etanol từ -14mg/lít bia Khi vượt 25mg/lít etanol làm cho bia có mùi khó chịu Nồng độ diacetyl vượt 0,35mg/lít làm cho bia có mùi khó chịu, mặc khác diacetyl chất độc gây kìm hãm trao đổi chất, có ảnh hưởng xấu đến sinh sản, độ lắng, độ đục, độ trong, làm chất men gây mùi khó chịu, gây đau đầu cho người tiêu dùng Chất tạo bọt bia protein, polysaccharide thành phần đắng tạo Mùi thơm bia quy định có mặt rượu bậc cao, acid hữu dễ bay hơi, este hợp chất cacbonyl Mùi thơm phản ánh có mặt hợp chất chứa lưu huỳnh -8- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang Ngoài bia có nhiều loại enzym khác như: amylaza, proteaza có tác dụng tốt cho tiêu hóa Một lít bia cung cấp khoảng từ 400 – 500kalo, lượng 50% cung cấp từ protein Theo nghiên cứu hiệp hội bia cho biết: lít bia thành phẩm có chứa 30 – 40g gluxit, – 3g protein, cung cấp số loại khoáng chất magie, vitamin tổng hợp Tuy uống với số lượng nhiều gây ảnh hưởng xấu đến sức khỏe, hệ thần kinh người đặc biệt người mắc bệnh béo phì, tiểu đường, rối loạn tiêu hóa bệnh tim mạch Bảng 2.1 Các chất dinh dưỡng lít bia Thành phần Năng lượng Đơn vị Kcal Trong bia* 440,00 Protein g 4,90 Chất béo g 0,00 Carbonhydrat g 28,20 Xô g 2,00 – 6,00* Vitamin g 0,35 Khoáng g 0,98 – 3,66 2.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia 2.4.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ bia giới Trong thị trường nước giải khát, bia sản phẩm tiêu thụ hàng đầu giới Thị trường bia lớn Châu Mỹ Tại Châu Á thị trường bia có bước nhảy vọt, sản lượng bia -9- GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang tăng gấp đôi so với 10 năm trước Dẫn đầu phong trào Trung Quốc, đứng thứ hai giới Đối với nước phát triển đặc biệt nước khu vực Đông Nam Á thời gian tới tăng cường vào đầu tư cho ngành bia để phát triển ngành thành ngành công nghiệp mang lại ngân sách nhiều Hiện giới có 25 nước sản xuất bia với sản lượng 100 tỷ lít/năm Trong đó: Mỹ, Đức sản xuất 10 tỷ lít/năm, Trung Quốc tỷ lít/năm Bảng 2.2 Sản lượng bia tính theo triệu hl Quốc gia Đức Nga Anh Tây Ban Nha Ba Lan Hà Lan Uckraina CH Czech Pháp Bỉ Rumani Italy o Đan Mạch Thổ Nhó Kì Ireland Bồ Ñaøo 2002 108,4 73,9 56,7 27,9 26,0 24,9 15,0 18,1 18,3 15,7 11,9 12,6 8,9 7,9 7,4 9,1 6,9 2003 105,5 75,6 58,0 29,7 27,3 25,1 16,9 17,9 18,1 15,7 12,9 13,7 8,9 8,3 7,6 8,7 7,2 2004 105,8 84,2 58,8 30,2 28,0 23,8 19,2 18,8 18,6 17,4 13,8 13,2 8,7 8,6 8,2 8,1 7,7 2005 105,9 88,4 58,9 30,2 28,5 23,0 21,9 19,0 18,6 17,2 14,4 13,3 8,9 8,6 8,1 8,0 7,8 Nha Hungari Serbi/Monten 7,5 5,0 7,8 5,5 6,9 5,6 7,0 5,8 ero Hy Lạp Bulgari Slovakia Thụy Ñieån Croatia 4,5 4,0 4,8 4,7 3,9 4,5 4,5 4,8 4,2 3,8 4,5 4,4 4,2 3,8 3,8 4,5 4,5 4,2 4,2 3,8 - 10 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang μm x 0,5μm, hai đầu tròn, có lông quanh tế bào, đứng riêng lẻ, xếp thành chuỗi ngắn, di động không hình thành nha bào Nhiệt độ phát triển thích hợp 37 oC, pH = 7,4 Mọc tốt môi trường dinh dưỡng thông thông thường nhiệt độ biến thiên từ – 45oC Hình 2.6 Vi khuẩn Escherichia coli Bảng 2.12 đặc điểm hình thái khuẩn lạc E coli số môi trường nuôi cấy Môi trường nuôi cấy Thạch dinh dưỡng Đặc điểm Khuẩn lạc tròn ướt, màu trắng đục lồi để lâu có Thạch máu Thạch gelatin dạng khô rìa nhăn Chủng dung huyết α β Thạch không tan chảy Môi trường canh dinh Đục môi trường, sau dưỡng lắng xuống đáy, có màu tro nhạt có màu xám, có mùi trứng thối - 54 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thò Minh Trang Eosin mythylen (EMB) MacConkey (MCK) Kligler iron agar (KIA) Khuẩn lạc có ánh kim tím Tạo khóm đỏ hồng Lên men đường glucose lactose (vàng/vàng), sinh gas, không sinh H2S Khuẩn lạc xanh mạ Brilliant green agar (BGA) 2.8 Các phương pháp thông thường phát coliforms Escherichia coli 2.8.1 Vật liệu thiết bị - Đặt bể điều nhiệt trì nhiệt độ 45,5 oC ±2oC, mực nước phải ngập môi trường - Loại nhiệt kế giành cho phòng thí nghiệm 1- 55oC, với 0,1oC đơn vị - Ủ 35oC ± 1oC - Máy lắc - Vô trùng pipet 10ml - Vô trùng dụng cụ xử lí mẫu - Chuẩn bị bình pha loãng thủy tinh chịu nhiệt, cổ nhám, nắp nhám polyethylen - Chuẩn bị buret vô trùng chứa dung dịch đệm phosphat - pH kế 2.8.2 Môi trường hóa chất - Brilliant green lactose bile (BGLB) broth, 2% - Lauryl tryptose (LST) broth - EC broth - Levine's eosin-methylene blue (L-EMB) agar - Tryptone (tryptophane) broth - MR-VP broth - Koser's citrate broth - Plate count agar (PCA) (standard methods) - 55 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang - Butterfield's phosphate-buffered water or equivalent diluent (except for shellfish) - Kovacs' reagent - Voges-Proskauer (VP) reagents - Gram stain reagents - Methyl red indicator - Violet red bile agar (VRBA) - VRBA-MUG agar - EC-MUG medium - Lauryl tryptose MUG (LST-MUG) broth - Peptone Diluent, 0.1% 2.8.3 MPN kieåm tra cho Coliforms, Coliform phân E.coli Cân 50g mẫu cho vào bình vô trùng li tâm tốc độ cao Nếu mẫu lưu trữ 18 phải đông lạnh nhiệt độ – oC Thêm 450 ml dung dịch đệm phosphat li tâm vòng phút Chuẩn bị dung dịch pha loãng với chất pha loãng vô trùng Số lượng dung dịch pha loãng phụ thuộc vào mật độ Coliforms dự đoán Lắc 25 lần xoáy trộn 7giây Không sử dụng pipets để cung cấp lớn 10% tổng khối lượng mẫu.Chuyển 1ml mẫu vào ống nghiệm, độ pha loãng tiến hành lặp lại lần Chú ý: Sử dụng ống MPN để phân tích động vật có vỏ vùng nước thu hoạch sò ốc Ủ ống 35oC thời gian 24h Các ống âm tính ủ tiếp 24h để kiểm tra ghi lại phản ứng 2.8.4 MPN – kiểm tra dạng vi khuẩn Coli Từ ống nghiệm sinh khí trên, lấy phần chuyển sang ống nghiệm chứa môi trường BGBL.Ủ ống 35oC, thời gian 48h - 56 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang 2.8.5 MPN – thử nghiệm IMViC a Indole: Cấy VSV thử nghiệm qua môi trường canh trypton ủ khoảng 24 giờ 37oC Nhỏ vài giọt ether để kéo indol lên bề mặt môi trường, thêm vài giọt thuốc thử Kovac’s Quan sát sau vài phút Thử nghiệm (+): bề mặt môi trường xuất hiện vòng màu đỏ cánh sen Thử nghiệm (-): không xuất hiện vòng đỏ Hình 2.7 Thử nghiệm Indole b Voges – proskauer (VP): Cấy vi sinh vật vào môi trường glucose phosphate (MR-VP Broth) Ủ nhiệt độ 370C vòng từ 2-5 ngày Thêm vào canh khuẩn dung dịch thuốc thử anpha- naphtol 5% cồn và dung dịch KOH 40% hay NaOH 40 % với tỷ lệ 3:1 Quan sát phản ứng xảy phút Thử nghiệm (+):xuất hiện màu đỏ hay hồng sáng mặt môi trường Thử nghiệm (-): môi trường không đổi màu - 57 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang Hình 2.8 Thử nghiệm Voges – proskauer c Methyl: sau thử nghiệm VP, tiếp tục ủ ống nghiệm thêm 48h 35oC Thêm giọt dung dịch methyl đỏ vào ống Nếu có màu vàng phản ứng âm tính d Citrat: môi trường thử nghiệm khả biến dưỡng citrate sử dụng citrate làm nguồn cacbon có chứa muối ammonium dùng làm nguồn đạm tăng giá trị pH môi trường Sự gia tăng giá trị pH thị đổi màu thị pH môi trường e Sử dụng đường lactose: cấy vào ống LST ủ 48h 35oC Nếu có khí sinh phản ứng âm tính Bảng 2.13 Bảng kết thử nghiệm IMViC STT Thử nghiệm sinh hóa Kết Kết Kết Indol + + - Methyl Red + - - Voges Proskauer - + + - 58 - GVHD: KS.Phaïm Minh Nhựt Khả sử dụng citrate Sự hiện diện E.coli mẫu SVTH: Trần Thị Minh Trang Có Khơng + khơng CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM 3.1 Định lượng Coliforms phương pháp MPN 3.1.2 Giới thiệu phương pháp MPN Phương pháp MPN phương pháp thay phương pháp đếm khuẩn lạc để xác định mật độ vi sinh vật mẫu, phương pháp dựa nguyên tắc xác suất thống kê phân phân bố vi sinh vật độ pha loãng khác mẫu Mỗi độ pha loãng nuôi cấy lặp lại nhiều lần môi trường lỏng chọn, thông thường phải cấy lặp lại từ 3-10 lần nồng độ pha loãng Các độ pha loãng tiến hành cho lần lặp lại có số lần cho dầu hiệu dương tính số lần cho dấu hiệu âm tính Số lần lặp lại cho dấu hiệu dương tính âm tính ghi nhận để đối chiếu với bảng thống kê ( bảng Mac Crady ) giá trị ước đoán số lượng vi sinh vật mẫu - 59 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang Quy trình thực phương pháp sau: cho vào ống nghiệm có chứa môi trường thích hợp cho tăng trưởng loại vi sinh vật cần định lượng thể tích xác dung dịch mẫu pha loãng Ủ nhiệt độ thời gian thích hợp Ghi nhận lại số ống cho kết dương tính âm tính độ pha loãng Sử dụng kết tra bảng Mac Crady để tính mật độ vi sinh vật Đô xác phương pháp phụ thuộc vào số ống nghiệm lặp lại độ pha loãng : số lần lặp lại độ pha loãng lớn độ xác trị số MPN cao Phương pháp MPN dùng để phân tích Coliform nhóm vi sinh vật khác chúng phát triển môi trường lỏng tạo tín hiệu dễ dàng nhận dạng như: sinh hơi, làm đục môi trường chọn lọc, làm thay đổi pH môi trường… 1.1 10-1 1.2 1.3 1ml 2.1 2.2 2.3 3.1 3.2 3.3 10-2 1ml 10-3 - 60 - Các nồng độ pha loãng GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang Hình : Hệ thống định lượng vi sinh vật phương pháp MPN 3.2 Xác định tổng số Coliforms 3.2.1 Định nghóa Coliforms Coliforms trực khuẩn gram âm, không sinh bào tử, hiếu khí kị khí tùy nghi, có khả lên men lactose Sau ủ 37 oC± 1oC 24 – 48 Nhóm Coliforms diện khắp nơi tự nhiên, ruột người động vật Coliforms xem nhóm vi sinh vật thị: số lượng diện củ chúng thực phẩm thực phẩm, nước hay loại mẫu môi trường dùng để thị khả diện vi sinh vật gây bệnh khác 3.2.2 Nguyên tắc Mẫu đồng cấy lượng định lên môi trường thạch chọn lọc thích hợp chứa lactose Sau ủ 37oC ± 1oC 24 = 48h, đếm số lượng khuẩn lạc Coliforms điển hình Xác định lại phản ứng đặc trưng Môi trường chọn lọc Coliforms môi trường chứa lactose, nguồn carbon nhất, đồng thời môi trường chứa muối mật tác nhân chọn lọc tác nhân thị neutral red, crystal violet Khẳng định dòng khuẩn lạc đặc trưng môi trường canh chọn lọc canh BGBL 3.2.3 Môi trường sử dụng Brilliant Green Bile Lactose broth (BGBL) 3.2.4 Dụng cụ Pipet, đầu type vô trùng Ống nghiệm vô trùng Ống Durnham vô trùng - 61 - GVHD: KS.Phạm Minh Nhựt SVTH: Trần Thị Minh Trang thủy tinh 250 ml Tủ ấm 37oC 3.2.5 Qui trình phân tích a Chuẩn bị mẫu Mẫu dùng làm thí nghiệm: bia lon Hút 10ml mẫu cho vào ống nghiệm có môi trường.Tất thao tác phải thực điều kiện vô trùng Khi đó, ta có dung dịch pha loãng 10-1 Dịch pha loãng pha loãng theo dãy thập phân cách dùng micropipette (pipetman) vô trùng chuyển 1ml từ ống nghiệm 10-1 vào ống nghiệm thứ hai, ta có dịch pha loãng 10-2 Tiếp tục thực tương tự để có độ pha loãng 10-3 Nhưng trình pha loãng cho 1ml dung dịch pha loãng mẫu chứa khoảng
Ngày đăng: 04/03/2021, 21:44
Xem thêm:
