BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - TRẦN MINH TRUNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOẠT CHẤT, HIỆU LỰC KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG VÀ XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ CHẾ PHẨM KÍCH THÍCH TRƯỞNG ĐANG SỬ DỤNG TRÊN RAU HIỆN NAY Chuyên ngành HĨA PHÂN TÍCH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HĨA PHÂN TÍCH NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS TẠ THỊ THẢO Hà Nội – Năm 2010 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn thân thực hiện, kết nghiên cứu đưa luận văn thân chưa nghiên cứu, sử dụng cơng bố tạp chí khoa học trước đây, số liệu kết nghiên cứu thực cách trung thực xác LỜI CẢM ƠN XW Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Tạ Thị Thảo, Phó chủ nhiệm Bộ mơn Hóa Phân tích - Khoa Hóa - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà nội tận tình hướng dẫn chuyên môn, phương pháp nghiên cứu tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Xin gửi lời trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học thầy, cô giáo Khoa Công nghệ Hóa học - Đại học Bách khoa Hà Nội tận tình dạy dỗ, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành nội dung học tập thực đề tài thuận lợi Xin trân trọng cảm ơn Ban giám đốc, lãnh đạo cán Phòng Kiểm định Dư lượng Chất luợng thuốc BVTV – Trung tâm Kiểm định Khảo nghiệm thuốc BVTV phía Bắc – Cục Bảo Vệ Thực tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình triển khai nghiên cứu đề tài Xin trân trọng cảm ơn Phòng Thanh tra Cục BVTV, Ban lãnh đạo cán phòng thử nghiệm thuộc Viện Bảo vệ thực vật, Viện nghiên cứu Rau quả, Viện điện sau thu hoạch giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, bạn lớp Cao học Hóa 2008 - 2010 giúp đỡ động viên hai năm học tập trình làm luận văn Hà Nội, tháng 11 năm 2010 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH .10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 13 1.1 Các chất điều tiết sinh trưởng trồng 13 1.1.1 Nhóm Auxin .14 1.1.2 Nhóm Cytokinin 15 1.1.3 Nhóm Abscisic 15 1.1.4 Etylen chất giải phóng etylen 16 1.1.5 Nhóm Gibberellin 17 1.2 Thiết bị sắc ký lỏng khối phổ hai lần HPLC- MS/MS 19 1.2.1 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 21 1.2.1.1 Pha tĩnh HPLC 22 1.2.1.2 Pha động HPLC 22 1.2.2 Nguồn ion hóa phận phân tích khối phổ 23 1.2.2.1 Bộ phận phân tích khối phổ 23 1.2.2.2 Các nguồn ion hóa 26 1.2.2.2.1 Chế độ ion hóa đầu phun điện tử (ESI) 26 1.2.2.2.2 Chế độ ion hóa hóa học áp suất khí (APCI) .27 1.3 Phương pháp QuEChES phân tích đa dư lượng thuốc BVTV .29 1.3.1 Phương pháp QuEChES .30 1.3.2 Phương pháp QuEChERS – AOAC 2007-01 31 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 35 2.1 Đối tượng, mục tiêu nội dung nghiên cứu 35 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 35 2.1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 35 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 36 2.2.1 Chuẩn bị dung môi pha động dung dịch chuẩn 36 2.2.2 Các hoá chất khác 36 2.2.3 Dụng cụ .37 2.2.4 Thiết bị 37 2.3 Phương pháp nghiên cứu 38 2.3.1 Điều tra tình trạng sử dụng thuốc KTST rau Hà Nội 38 2.3.2 Khảo nghiệm hiệu lực kích thích sinh trưởng xác định thời gian cách ly 38 2.3.2.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm .38 2.3.2.2 Chỉ tiêu phương pháp điều tra 39 2.3.4 Điều kiện phân tích 42 2.3.4.1 Điều kiện phân tách hệ thống HPLC 42 2.3.4.2 Điều kiện phân tích hệ thống khối phổ APCI - MS/MS : 42 2.3.4.3 Tiến trình phân tích .43 2.3.4.4 Tính tốn kết 43 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Điều tra tình hình sử dụng thuốc KTST 44 3.1.1 Thực trạng sử dụng thuốc KTST địa bàn Hà Nội 44 3.1.2 Xác định thành phần hoạt chất 45 3.2 Xác định hiệu lực kích thích sinh trưởng thuốc rau 48 3.2.1 Rau xà lách (Lactuca sativa Capitala) 48 3.2.2 Rau cải (Brassica rapa L.) 51 3.3 Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích GA3 53 3.3.1 Tối ưu hoá điều kiện đo thiết bị HPLC – MS/MS 53 3.3.1.1 Khảo sát điều kiện hệ thống HPLC 53 3.3.1.1.1 Chọn điều kiện bơm mẫu 53 3.3.1.1.2 Chọn cột tách 53 3.3.1.1.3 Khảo sát thành phần pha động chế độ chạy 53 3.3.1.1.4 Khảo sát tốc độ dòng pha động 54 3.3.1.2 Khảo sát điều kiện khối phổ MS/MS .55 3.3.1.2.1 Xác định thông số cần khảo sát 55 3.3.1.2.2 Khảo sát điều kiện tối ưu MS/MS .56 3.2.2 Nghiên cứu xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 61 3.2.2.1 Khảo sát xây dựng đường chuẩn 61 3.2.2.2 Giới hạn phát LOD .64 3.2.2.3 Giới hạn định lượng LOQ 66 3.2.2.4 Khảo sát điều kiện chiết GA3 mẫu thực .66 3.2.2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng axit axetic đến hiệu suất thu hồi 67 3.2.2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng thể tích HCl 0,02M đến hiệu suất thu hồi 69 3.2.2.5 Đánh giá độ xác phương pháp 72 3.3 Phân tích dư lượng GA3 mẫu khảo nghiệm 75 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO .81 PHỤ LỤC 84 Phụ lục : Số liệu điều tra thống kê 84 Phụ lục : Số liệu khảo nghiệm sinh học 86 Phụ lục : Số liệu phân tích PHI 92 Phụ lục : Số liệu đánh giá độ xác phương pháp 94 Phụ lục : Số liệu xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 97 Phụ lục : Một số sắc ký đồ phân tích mẫu 99 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu Chú thích BVTV B¶o vƯ thùc vật HPLC Thiết bị sắc ký lỏng hiu nng cao KTST KÝch thÝch sinh tr−ëng LC-MS/MS ThiÕt bị sắc ký lỏng khối phổ lần LOD Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lng MRLs Mức d lợng tối đa cho phép ( mg/kg) NSP Ngµy sau phun R(%) HiƯu st thu håi (%) 10 TP Tr−íc phun 11 VTM Vitamin 12 DMFĐ Dung môi pha động 13 ACN Axetonitril 14 MeOH Metanol 15 GA3 Axit Gibberelic DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: So sánh QuEChES với phương pháp xử lý mẫu khác 29 Bảng 1: Cơng thức thí nghiệm khảo nghiệm thuốc KTST .39 Bảng 2: Các thơng số chế độ ion hóa APCI 42 Bảng 3: Các thông số chế độ quét MS/MS 42 Bảng 1: Các mức nồng độ chất chuẩn GA3 46 Bảng 2: Hàm lượng hoạt chất GA3 mẫu điều tra 47 Bảng 3: Bảng qui hoạch thực nghiệm xác định điều kiện tối ưu MS/MS .57 Bảng 4: Kết thực nghiệm theo bảng thiết kế thực nghiệm 57 Bảng 5: Các hệ số hồi quy thu từ thực nghiệm .58 Bảng 6: Điều kiện tối ưu cho thiết bị HPLC – MS/MS 61 Bảng 7: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ GA3 62 Bảng 8: Các thông số đường chuẩn 63 Bảng 9: Độ lặp lại thiết bị nồng độ GA3 ng/ml 64 Bảng 10: Ảnh hưởng nồng độ axit đến hiệu suất thu hồi 67 Bảng 11: Ảnh hưởng VHCI 0,02M đến hiệu suất thu hồi mẫu thêm chuẩn 70 Bảng 12: Chuẩn bị mẫu thêm chuẩn 73 Bảng 13: Hiệu suất, độ chụm mức LOQ phân tích GA3 rau xà lách 73 Bảng 14: Rau cải hiệu suất thu hồi, độ chụm mức LOQ 74 Bảng 15: Tình hình sử dụng thuốc KTST nông dân địa bàn Hà Nội Hà Tây 84 Bảng 16: Đặc điểm thuốc KTST dùng phổ biến .85 Bảng 17: Tác động thuốc KTST đến chiều cao xà lách 86 Bảng 18: Ảnh hưởng thuốc KTST đến khối lượng , suất tỷ lệ(%) thương phẩm xà lách 87 Bảng 19: Ảnh hưởng thuốc KTST đến số tiêu chất lượng rau xà lách .88 Bảng 20: Tác động thuốc KTST đến chiều cao cải 89 Bảng 21: Ảnh hưởng thuốc KTST đến khối lượng suất rau cải 90 Bảng 22: Ảnh hưởng thuốc KTST đến số tiêu chất lượng rau cải 91 Bảng 23: Kết xác định dư lượng thuốc KTST rau xà lách theo thời gian 92 Bảng 24: Kết xác định dư lượng thuốc KTST rau cải theo thời gian 93 Bảng 25: Xà lách – LOQ = 0,004 (mg/kg) 94 Bảng 26: Xà lách – LOQ = 0,01 (mg/kg) 94 Bảng 27: Xà lách – LOQ = 0,02 (mg/kg) 95 Bảng 28: Xà lách – LOQ = 0,08(mg/kg) 95 Bảng 29: Rau cải – LOQ = 0,01 (mg/kg) .96 Bảng 30: Rau cải – LOQ = 0,08 (mg/kg) .96 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: GA phân hủy chất kìm hãm sinh trưởng DELLA .18 Hình 2: Cơng thức cấu tạo GA3 18 Hình 3: Sơ đồ khối thiết bị HPLC-MS/MS .20 Hình 4: Mơ hình thiết bị khối phổ MS ( LC-MS ) 23 Hình 5: Cấu tạo hoạt động tứ cực 24 Hình 6: Mơ hình thiết bị khối phổ MS/MS 25 Hình 7: Cấu tạo đầu phun ESI 26 Hình 8: Vùng phản ứng chế độ ion hóa APCI 28 Hình 9: Cấu tạo nguồn ion hóa đa chế độ ESI + APCI 28 Hình 10: Quy trình chiết mẫu AOAC 2007.01 32 Hình 1: Quy trình phân tích mẫu 41 Hình 1: Tình hình sử dụng thuốc KTST nơng dân số địa bàn Hà Nội …… 44 Hình 2: Đường chuẩn xác định hàm lượng GA3 mức nồng độ .46 Hình 3: Sắc ký đồ “Viên sủi GA3” lượng cân Sp1 46 Hình 4: Sắc ký đồ “Viên sủi GA3” lượng cân Sp2 47 Hình 5: Tác động thuốc KTST đến chiều cao xà lách 48 Hình 6: Ảnh hưởng thuốc KTST đến suất xà lách .50 Hình 7: Tác động thuốc KTST đến chiều cao cải .51 Hình 8: Ảnh hưởng thuốc KTST đến suất rau cải 52 Hình 9: Sắc ký đồ TIC chuẩn GA3 55 Hình 10: Mặt mục tiêu biểu diễn phụ thuộc diện tích pic yếu tố ảnh hưởng 59 Hình 11: Phổ đồ GA3 điều kiện tối ưu .60 Hình 12: Đường chuẩn GA3 khoảng tuyến tính 63 Hình 13: Sắc đồ chuẩn GA3 mẫu trắng mức XLOD = 0,5 ng/ml 65 Hình 14: Sắc ký đồ TIC mẫu spike chiết 2% axit axetic 68 Hình 15: Sắc ký đồ TIC mẫu spike chiết 3% axit axetic 68 Hình 16: Sắc ký đồ TIC chuẩn GA3 có nồng độ ng/ml 69 Hình 17: Ảnh hưởng thể tích HCl 0,02N chiết đến hiệu suất thu hồi .70 Hình 18: Sắc ký đồ EIC phổ khối mẫu spike ng/ml pH = 71 10 Bảng 20: Tác động thuốc KTST n chiu cao cõy ci Các tiêu Nồng độ (ppm) TT Tên thuốc Tăng phọt 920 120 13,9 a 17,2 b - 8,6 22,0 a -3,1 37,0 a - 15,1 Tăng phọt 920 240 14,5 a 18,8 ab - 2,0 22,4 a -4,2 42,0 a - 5,4 “Viªn sđi GA3” 120 14,5 a 19,9 a 3,2 22,9 a -2,1 41,5 a - 6,1 “Viªn sñi GA3” 240 14,4 a 20,1 a 3,8 22,5 a -3,7 41,3 a - 6,2 Mega farm 200 WP 28 13,4 a 18,3 ab 4,4 21,1 a 2,7 37,3 a - 7,4 Mega farm 200 WP 56 14,4 a 19,6 a 0,1 22,8 a -3,1 38,5 a - 12,8 §èi chøng - 14,4 a 19,2 ab - 23,2 a 44,5 a - TP ChiỊu cao c©y (cm) NSP Tû lƯ so víi ChiỊu cao ®èi chøng c©y (%) (cm) NSP Tû lƯ so víi ChiỊu cao đối chứng (%) (cm) - 14 NSP Tỷ lệ so với Chiều cao đối chứng (%) (cm) Ghi : - NSP : Ngày sau phun - Các chữ khác sau chữ số cột sai khác đáng tin mức ý nghĩa 5% theo phép thử đa biên độ Duncan 89 Bảng 21: Ảnh hưởng thuốc KTST đến khối lượng suất rau cải TT Tªn thuèc Nồng độ (ppm) Các tiêu Khối lợng (g/cây) Tỷ lệ so với đối chứng (%) Năng suất (tấn/ha) Tỷ lệ so với đối chứng (%) Tăng phọt 920 120 62,6 a 71,8 42,7 a 76,1 Tăng phọt 920” 240 83,8 a 96,1 54,7 a 97,5 “Viªn sñi GA3” 120 80,6 a 92,4 52,8 a 94,1 “Viªn sđi GA3” 240 69,0 a 79,1 45,2 a 80,6 Mega farm 200 WP 28 65,8 a 75,5 43,1 a 76,8 Mega farm 200 WP 56 77,4 a 88,8 50,7 a 90,4 §èi chøng - 87,2 a - 56,1 a - Ghi : - NSP : Ngày sau phun - Các chữ khác sau chữ số cột sai khác đáng tin mức ý nghĩa 5% theo phép thử đa biên độ Duncan 90 Bảng 22: Ảnh hưởng thuốc KTST đến số tiêu chất lượng rau cải TT Tên thuốc Nồng độ (ppm) Vật chất khô Tỷ lệ % Tỷ lệ so đối chứng (%) Các tiêu Hàm lợng Hàm lợng diệp N tổng số VTM C lơc (%) Tû lƯ mg/100g Tû lƯ mg/100g Tû lƯ so so so ®èi ®èi ®èi chøng chøng chøng (%) (%) (%) P tæng sè K tæng sè (%) Tû lƯ so ®èi chøng (%) (%) Tû lƯ so đối chứng (%) Tăng phọt 920 120 7,14 1,22 69,85 1,34 302 0,93 0,186 1,04 0,128 1,10 0,200 1,05 Tăng phọt 920 240 6,34 1,09 53,71 1,03 324 1,00 0,206 1,15 0,110 0,95 0,170 0,89 “Viªn sđi GA3” 120 6,32 1,08 51,05 1,12 285 0,88 0,174 0,97 0,103 0,89 0,190 1,11 “Viªn sđi GA3” 240 6,05 1,04 58,04 1,12 307 0,94 0,160 0,89 0,108 0,93 0,210 1,11 Mega farm 200WP 28 6,65 1,14 60,46 1,16 326 1,00 0,184 1,03 0,116 1,00 0,190 1,00 Mega farm 200WP 56 6,41 1,10 53,84 1,04 335 1,03 0,210 1,17 0,123 1,06 0,180 0,95 Đối chứng - 5,84 - 51,96 - 325 - 0,179 - 0,116 - 0,190 - 91 Phụ lục : Số liệu phân tích PHI Bảng 23: Kết xác định dư lượng thuốc KTST rau xà lách theo thời gian TT Công thức xử lý Công thức D lợng GA3 sau xử lý (mg/kg) Nồng độ ngày ngµy ngµy ngµy ngµy (ppm) Tăng phọt 920 120 2.90 0.11 0.05 0.03 < LOQ < LOQ Tăng phọt 920 240 5.27 0.28 0.16 0.04 0.02 < LOQ “Viªn sđi GA3” 120 3.30 0.15 0.07 0.05 < LOQ < LOQ “Viªn sđi GA3” 240 5.52 0.32 0.56 0.21 0.03 < LOQ An Khang 20WT 25 0.32 0.05 0.01 0.01 < LOQ < LOQ An Khang 20WT 50 0.09 0.09 0.03 0.02 < LOQ < LOQ Đối chứng Kh«ng xư lý < LOQ 92 Bảng 24: Kết xác định dư lượng thuốc KTST rau cải theo thời gian TT C«ng thøc xư lý C«ng thøc D− lợng GA3 sau xử lý (mg/kg) Nồng độ ngµy ngµy ngµy ngµy ngµy (ppm) Tăng phọt 920 120 0,67 0,19 0,16 0,14 0,10 < LOQ Tăng phọt 920 240 1,06 0,28 0,29 0,22 0,06 < LOQ “Viªn sđi GA3” 120 0,43 0,09 0,08 0,07 0,04 < LOQ “Viªn sđi GA3” 240 0,85 0,11 0,10 0,08 0,06 < LOQ Mega farm 28 0,17 0,04 0,03 0,01 < LOQ < LOQ 56 0,31 0,05 0,04 0,04 0,03 < LOQ Kh«ng xö lý < LOQ 200WP Mega farm 200WP Đối chứng 93 Phụ lục : Số liệu đánh giá độ xác phương pháp Bảng 25: Xà lách – LOQ = 0,004 (mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 1.3835 60.995 2 1.2218 57.97 1.1944 65.24 1.2055 56.94 1.3173 67.665 SD 0.0942 4.72 Xtb 1.29 64.33 %RSD 7.33 7.33 Bảng 26: Xà lách – LOQ = 0,01 (mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 4.2135 84.2700 3.9265 78.5300 4.1411 82.8220 4.3680 87.3600 5 3.8652 77.3040 SD 0.25 4.93 Xtb 4.04 80.79 %RSD 6.097 6.097 94 Bảng 27: Xà lách – LOQ = 0,02 (mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 10 8.5708 85.708 10 8.4225 84.225 10 8.3722 83.722 10 7.9917 79.917 10 8.1606 81.606 SD 0.29 2.90 Xtb 8.3657 83.657 3.47 3.47 %RSD Bảng 28: Xà lách – LOQ = 0,08(mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 40 35.0136 87.5340 40 35.9411 89.85275 40 36.2309 90.57725 40 37.5523 93.88075 40 36.6738 91.6845 SD 1.1739387 2.9348467 Xtb 35.84 89.61 %RSD 3.28 3.28 95 Bảng 29: Rau cải – LOQ = 0,01 (mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 3.4196 68.392 3.6354 72.708 3.7403 74.806 3.5581 71.162 5 3.6873 73.746 SD 0.19 3.79 Xtb 3.55 71.07 %RSD 5.32 5.32 Bảng 30: Rau cải – LOQ = 0,08 (mg/kg) Mô tả Ref Value Conc Final Conc Recovery (ng/ml) (ng/ml) (%) 40 32.4437 81.10925 40 34.0486 85.12150 40 33.1707 82.92675 40 33.1198 82.79950 40 33.8659 84.66475 SD 1.01 2.51 Xtb 33.15 82.89 %RSD 3.03 3.03 96 Phụ lục : Số liệu xác nhận giá trị sử dụng phương pháp Trên rau xà lách Name Type Level RT Area Final Conc 5.1739 Accuracy GA3 = ng/ml Cal l2 3.452 12460.62 103.4788 GA3 = ng/ml Cal l2 3.462 12040.02 4.9721 99.44252 GA3 = 40 ng/ml Cal l5 3.452 85596.79 40.2666 100.6665 GA3 = 40 ng/ml Cal l5 3.456 83759.16 39.3848 98.46212 GA3 = 20 ng/ml Cal l4 3.451 44233.61 20.4195 102.0973 GA3 = 20 ng/ml Cal l4 3.458 43398.78 20.0189 100.0944 GA3 = ng/ml Cal l1 3.468 5747.72 1.9529 97.64599 GA3 = ng/ml Cal l1 3.468 6071.72 2.1083 111.2646 GA3 = 10 ng/ml Cal l3 3.457 22402.51 9.9443 99.44321 GA3 = 10 ng/ml Cal l3 3.462 22241.20 9.8669 98.66922 MeOH Sample Blank xa lach Sample Control 2.1 = ng/ml Sample 3.496 4561.92 1.3835 Control 2.2 = ng/ml Sample 3.495 4224.35 1.2218 Control 2.3 = ng/ml Sample 3.486 4167.38 1.1944 Control 2.4 = ng/ml Sample 3.483 4190.18 1.2055 Control 2.5 = ng/ml Sample 3.489 4423.44 1.3173 MeOH Sample Control 5.1 = ng/ml Sample 3.456 10459.23 4.2135 Control 5.2 = ng/ml Sample 3.495 10083.41 3.9265 Control 5.3 = ng/ml Sample 3.479 10308.72 4.1411 Control 5.4 = ng/ml Sample 3.489 10781.29 4.3680 Control 5.5 = ng/ml Sample 3.498 9733.87 3.8652 MeOH Sample Control 10.1 = 10 ng/ml Sample 3.496 19540.45 8.5708 Control 10.2 = 10 ng/ml Sample 3.475 19231.62 8.4225 Control 10.3 = 10 ng/ml Sample 3.486 19126.48 8.3722 Control 10.4 = 10 ng/ml Sample 3.482 18333.87 7.9917 Control 10.5 = 10 ng/ml Sample 3.489 18865.92 8.1606 MeOH Sample Control 40.1 = 40 ng/ml Sample 3.488 74649.35 35.0136 Control 40.2 = 40 ng/ml Sample 3.49 76582.47 35.9411 Control 40.3 = 40 ng/ml Sample 3.476 77186.27 36.2309 Control 40.4 = 40 ng/ml Sample 3.493 79940.53 37.5523 Control 40.5 = 40 ng/ml Sample 3.489 78109.83 36.6738 MeOH Sample 97 Trên rau cải : Name Type Level RT GA3 = ng/ml - cai Cal c2 3.55 GA3 = ng/ml - cai Cal c2 GA3 = 40 ng/ml - cai Cal c5 GA3 = 40 ng/ml - cai Cal c5 GA3 = 20 ng/ml - cai Cal c4 GA3 = 20 ng/ml - cai Cal c4 GA3 = ng/ml - cai Cal GA3 = ng/ml - cai Cal GA3 = ng/ml - cai GA3 = ng/ml - cai Area Final Conc Accuracy 28053 4.81637175 96.32743 3.543 28058 4.81725119 96.34502 3.536 224540 39.3763956 98.44099 3.543 225202 39.4928345 98.73209 3.539 115280.0806 20.1587098 100.7935 3.54 112996.6128 19.7570715 98.78536 c1 3.54 12957.85088 2.1612917 108.0646 c1 3.537 12640.52089 2.10547665 105.2738 Cal c1 3.546 12925.00306 2.15551411 107.7757 Cal c1 3.538 12663.4208 2.10950451 105.4752 GA3 = ng/ml - cai Cal c1 3.542 11824.83154 1.96200536 98.10027 GA3 = ng/ml - cai Cal c1 3.551 12258.0372 2.03820174 101.9101 GA3 = 10 ng/ml - cai Cal c3 3.531 55451.01571 9.63539832 96.35398 GA3 = 10 ng/ml - cai Cal c3 3.538 54395.37592 9.44972224 94.49722 MeOH Sample Blank cai Sample Control 5.1 = ng/ml Sample 3.572 20112.23 3.4196 Control 5.2 = ng/ml Sample 3.562 21339.02 3.6354 Control 5.3 = ng/ml Sample 3.565 21935.45 3.7403 Control 5.4 = ng/ml Sample 3.581 20899.12 3.5581 Control 5.5 = ng/ml Sample 3.581 21634.44 3.6873 MeOH Sample Contro40.1 = 40 ng/ml Sample 3.548 192881.47 33.8079 Contro40.2 = 40 ng/ml Sample 3.562 194454.64 34.0486 Contro40.3 = 40 ng/ml Sample 3.557 189258.11 33.1707 Contro40.4 = 40 ng/ml Sample 3.572 188969.35 33.1198 Contro40.5 = 40 ng/ml Sample 3.581 193211.59 33.8659 98 Phụ lục : Một số sc ký phõn tớch mu Định tính LC-MS/MS: GA3 Tg Q1 Mass Rt Q2 Area Mass Rt Area St=2*10-5 mg/ml 345.2 143.1 3.625 21890 221.1 3.604 8882 Sp=48.71*10e-5 mg/ml 345.2 143.1 3.604 33263 221.1 3.604 9160 99 Định lượng HPLC – DAD DAD1 B, Sig=206,16 Ref=360,100 (10040809.D) 1 - G i b e re l l i c a c i d mAU 120 100 80 60 Sp3=0.654 mg/ml; -> 20.9% 40 20 0 10 15 20 25 25 DAD1 B, Sig=206,16 Ref=360,100 (10040808.D) 1 - G i b e re l l i c a c i d mAU 120 100 80 60 Sp2=0.6232 mg/ml; -> 21.3% 40 20 0 10 15 Sắc đồ ’’Tăng phọt’’ 100 20 DAD1 B, Sig=206,16 Ref=360,100 (10040804.D) 1 1 - G ib e re llic a c id mAU 120 100 80 60 40 Sp1=0.582 mg/ml; ->216.3 g/kg 20 0 10 15 20 25 25 DAD1 B, Sig=206,16 Ref=360,100 (10040805.D) 1 - G ib e re llic a c id mAU 120 100 Sp2=0.5931 mg/ml; -> 214.7 g/kg 80 60 0 20 40 10 15 20 Sắc đồ ’’ Megafarm 200WT ’’ 101 Sắc ký đồ EIC mẫu xà lách sau phun h Sắc ký đồ EIC mẫu rau cải sau phun h 102 Sắc ký đồ EIC mẫu Blank Sắc ký đồ EIC MeOH 103 ... xác định loại thuốc, hoạt chất KTST dùng phổ biến - Xác định loại hoạt chất, hàm lượng thuốc kích thích sinh trưởng sử dụng phổ biến rau - Phân tích chất lượng rau tác dụng thuốc kích thích sinh. .. hoạch 2.3.2.3 Xác định ảnh hưởng thuốc chất lượng rau Các tiêu xác định chất lượng rau phương pháp xác định tiêu sau : + Hàm lượng chất khô(%): xác định theo phương pháp sấy khô đến khối lượng không... dụng thuốc KTST, chủng loại thuốc KTST sử dụng, liều lượng sử dụng, loại rau số lần phun thuốc lứa rau 2.3.2 Khảo nghiệm hiệu lực kích thích sinh trưởng xác định thời gian cách ly 2.3.2.1 Phương