NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH TỔNG hợp một số dẫn CHẤT n HYDROXYBENZAMID MANG KHUNG 2 OXOINDOLIN HƢỚNG KHÁNG tế bào UNG THƢ LUẬN văn THẠC sĩ dƣợc học hà nội 2016

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH TỔNG HỢP MỘT SỐ DẪN CHẤT N-HYDROXYBENZAMID MANG KHUNG 2-OXOINDOLIN HƢỚNG KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH TỔNG HỢP MỘT SỐ DẪN CHẤT N-HYDROXYBENZAMID MANG KHUNG 2-OXOINDOLIN HƢỚNG KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƢỢC PHẨM & BÀO CHẾ MÃ SỐ: 60 72 04 02 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Hải Nam NCS ThS Trần Thị Lan Hƣơng HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực đề tài với nhiều nỗ lực cố gắng, thời điểm hoàn thành khóa luận lúc tơi xin phép đƣợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành với ngƣời dạy dỗ, hƣớng dẫn giúp đỡ suốt thời gian qua Trƣớc hết với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc xin bày tỏ lời cám ơn chân thành đến GS.TS Nguyễn Hải Nam, TS Phan Thị Phƣơng Dung, ThS Trần Thị Lan Hƣơng - Bộ mơn Hóa Dƣợc - trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, ngƣời thầy trực tiếp hƣớng dẫn tận tình bảo tơi thời gian thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa Dƣợc - trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Khoa Dƣợc - Đại học Quốc gia Chungbuk - Hàn Quốc giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn Tơi xin bày tỏ tình cảm thân thƣơng đến anh chị, bạn em nhóm tổng hợp mơn Hố Dƣợc, đặc biệt bạn Lê Công Huân em Nguyễn Văn Huân, ngƣời chia sẻ buồn vui, đồng hành suốt thời gian nghiên cứu Cuối xin đƣợc gửi lời cám ơn sâu sắc đến bố mẹ, gia đình bạn bè ln động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 29 tháng năm 2016 Học viên Nguyễn Thị Hồng Hạnh MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN 1.1 ACID HYDROXAMIC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA CÁC DẪN CHẤT 1.1.1 Histon deacetylase (HDAC) 1.1.2 Một số đích tác dụng khác acid hydroxamic 1.2 CÁC ACID HYDROXAMIC ỨC CHẾ HDAC 11 1.2.1 Cơ chế tác dụng 11 1.2.2 Liên quan cấu trúc – tác dụng acid hydroxamic ức chế HDAC 12 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CÁC ACID HYDROXAMIC 15 1.3.1 Tình hình nghiên cứu acid hydroxamic giới 16 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc acid hydroxamic 18 PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 HÓA CHẤT, NGUYÊN VẬT LIỆU 21 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.3.1 Nghiên cứu docking 22 2.3.2 Tổng hợp dẫn chất: 22 2.3.3 Kiểm tra độ tinh khiết chất tổng hợp đƣợc 22 2.3.4 Xác định cấu trúc: 23 2.3.5 Thử hoạt tính sinh học 23 2.3.6 Đánh giá mối liên quan cấu trúc hóa học, số lý hóa với hoạt tính sinh học chất tổng hợp đƣợc 25 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 NGHIÊN CỨU DOCKING 26 3.2 TỔNG HỢP HÓA HỌC 27 3.2.1 Tổng hợp dẫn chất N-hydroxy-4-((3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)benzamid (IIIa) 27 3.2.2 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-flouro-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIb) 30 3.2.3 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-cloro-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIc) 31 3.2.4 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-bromo-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIId) 32 3.2.5 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-nitro-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIe) 33 3.2.6 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-methyl-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIf) 34 3.2.7 Tổng hợp dẫn chất 4-((5-methoxy-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIg) 35 3.2.8 Tổng hợp dẫn chất 4-((7-cloro-3-(hydroxyimino)-2-oxoindolin-1yl)methyl)-N-hydroxybenzamid (IIIh) 36 3.3 KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT 37 3.4 KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 38 3.4.1 Kết phân tích phổ hồng ngoại IR 38 3.4.2 Kết phân tích phổ khối lƣợng MS 40 3.4.3 Kết phân tích phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H-NMR 40 3.4.4 Kết phân tích phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR 42 3.5 HOẠT TÍNH SINH HỌC 44 3.6 SƠ BỘ ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ GIỐNG THUÔC 45 PHẦN BÀN LUẬN 47 4.1 TỔNG HỢP HÓA HỌC 47 4.2 KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 48 4.2.1 Phổ hồng ngoại 48 4.2.2 Phổ khối lƣợng MS 49 4.2.3 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 50 4.3 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC 65 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR : Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance) 13 C-NMR : Cộng hƣởng từ hạt nhân 13C (Carbon Nuclear Magnetic Resonance) A431 : Tế bào ung thƣ biểu mô A549 : Tế bào ung thƣ phổi ngƣời CTCL : U tế bào lympho T da(Cutaneous T cell lymphoma) DCM : Dicloromethan DMF : Dimethyl formamid EGFR : Thụ thể yếu tố tăng trƣởng biểu mô (Epidermal Growth Factor Receptor) FDA : Cục quản lý thực phẩm dƣợc phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) HAT : Histon acetyltranferase HDAC : Histon deacetylase HepG2 : Tế bào ung thƣ gan HL-60 : Tế bào ung thƣ bạch cầu IC50 : Nồng độ ức chế 50% (Inhibitory Concentration) IR : Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) MCF-7 : Tế bào ung thƣ vú MeOH : Methanol MMP : Protein chứa kim loại (Metalloproteinase) MS : Phổ khối lƣợng (Mass Spectrometry) SRG : Nhóm nhận diện bề mặt ( Surface RecognitionGroup) T0nc : Nhiệt độ nóng chảy TACE : Enzym chuyển yếu tố hoại tử khối u (Tumor Necrosis Factor-α Converting Enzyme) TCA : Acid tricloroacetic TCL : Sắc kí lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TNF-α : Yếu tố hoại tử khối u (Tumor Necrosis Factor alpha) TSA : Trichostatin A ZBG : Nhóm kết thúc gắn với Zn2+ (Zinger binding group) DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 CTCT chung acid hydroxamic Hình 1.2.Mơ hình cấu trúc hoạt động thụ thể yếu tố tăng trƣởng biểu bì Hình 1.3 Các dẫn chất acid hydroxamic mang khung quinazolin Hình 1.4 Các dẫn chất acid hydroxamic khung N-aryl salicylamid Hình 1.5 Một số acid hydroxamic ức chế MMP Hình 1.6 Các dẫn chất α,β-cyclic- β-benzamido hydroxamic 10 Hình 1.7 Dẫn chất β,β-cyclic-β-benzamido hydroxamic 11 Hình 1.8 Vai trị điều khiển chu trình tế bào chất ức chế HDAC 12 Hình 1.9 Cấu trúc acid hydroxamic ức chế HDAC 13 Hình 1.10 Mơ hình ZBG theo nghiên cứu Vanommeslaeghe K 15 Hình 1.11 Các dẫn chất N-hydroxyfurylacrylamid 16 Hình 1.12 Dẫn chất N1-((5-bromo-2-thiopheneyl)methyl)-N7-hydroxy-N1-(4methoxyphenyl) heptanediamid 16 Hình 1.13 Cấu trúc chất tƣơng tự SAHA có nhóm C7 17 Hình 1.14 Cấu trúc HPOB nghiên cứu Lee J.H cộng 17 Hình 1.15 Các dẫn chất acid hydroxamic mang khung isatin-3-oxim 18 Hình 1.16 Cấu trúc số dẫn chất hydroxamic với cầu nối propenamid19 Hình 4.1 Phổ khối lƣợng chất IIIc 49 Hình 4.2 Biểu đồ so sánh giá trị IC50 dãy chất IIIa-h với SAHA dòng tế bào SW620 PC-3 52 Hình 4.3 Biểu đồ so sánh giá trị IC50 dãy chất với SAHA dòng tế bào AsPc-1 NCI-H23……………………………………………………52 Phụ lục 3.3: Phổ 1H-NMR IIIc Phụ lục 3.3: Phổ 1H-NMR mở rộng IIIc Phụ lục 3.4: Phổ 1H-NMR IIId Phụ lục 3.4: Phổ 1H-NMR mở rộng IIId Phụ lục 3.5: Phổ 1H-NMR IIIe Phụ lục 3.5: Phổ 1H-NMR mở rộng IIIe Phụ lục 3.6: Phổ 1H-NMR IIIf Phụ lục 3.6: Phổ 1H-NMR mở rộng IIIf Phụ lục 3.7: Phổ 1H-NMR IIIg Phụ lục 3.7: Phổ 1H-NMR mở rộng IIIg Phụ lục 3.8: Phổ 1H-NMR IIIh Phụ lục 3.8: Phổ 1H-NMR mở rộng IIIh Phụ lục 4.1: Phổ 13C-NMR IIIa Phụ lục 4.1: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIa Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR IIIb Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIb Phụ lục 4.3: Phổ 13C-NMR IIIc Phụ lục 4.3: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIc Phụ lục 4.4: Phổ 13C-NMR IIId Phụ lục 4.4: Phổ 13C-NMR mở rộng IIId Phụ lục 4.5: Phổ 13C-NMR IIIe Phụ lục 4.5: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIe Phụ lục 4.6: Phổ 13C-NMR IIIf Phụ lục 4.6: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIf Phụ lục 4.7: Phổ 13C-NMR IIIg Phụ lục 4.7: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIg Phụ lục 4.8: Phổ 13C-NMR IIIh Phụ lục 4.8: Phổ 13C-NMR mở rộng IIIh Phụ lục 5.1 Kết thử hoạt tính sinh học Ghi chú: 53A (IIIa); 53B (IIIb); 53C (IIIc); 53D (IIId); 53E (IIIe) 53F (IIIf); 53G (IIIg); 53H (IIIh) ... TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ N? ??I NGUY? ?N THỊ HỒNG HẠNH TỔNG HỢP MỘT SỐ D? ?N CHẤT N- HYDROXYBENZAMID MANG KHUNG 2- OXOINDOLIN HƢỚNG KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ LU? ?N V? ?N THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUY? ?N NGÀNH: CÔNG NGHỆ... tr? ?n, thiết kế d? ?n chất acid hydroxamic mang khung isatin-3-oxim với cầunốiphenylvà ti? ?n hành đề tài: "Tổng hợp số d? ?n chất N- hydroxybenzamid mang khung 21 oxoindolin hƣớng kháng tế bào ung thƣ" với... Nam 2. 2 N? ??I DUNG NGHI? ?N CỨU - Tổng hợp đƣợc số d? ?n chất N- hydroxybenzamid mang khung 2oxoindolin - Kiểm tra độ tinh khiết khẳng định cấu trúc chất tổng hợp đƣợc - Thử hoạt tính kháng tế bào ung