Đáp ứng miễn dịch trên thỏ đối với escherichia coli

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRUỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA X W ĐÀO THỊ DƯ ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN THỎ ĐỐI VỚI ESCHERICHIA COLI (E COLI) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ NGÀNH : 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ Hướng dẫn khoa học: CBHD1 CBHD2 PGS TS NGUYỄN NGỌC HẢI PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 12 NĂM 2008 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Ngọc Hải PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng …năm TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC Tp Hồ Chí Minh, ngày………tháng…….năm……… NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Đào Thị Dư Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 18/11/1981 Nơi sinh: Bắc Ninh Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 03107696 I- TÊN ĐỀ TÀI: Đáp ứng miễn dịch thỏ Escherichia coli (E coli) II- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Thực theo mục tiêu nghiên cứu: Gây đáp ứng miễn dịch thỏ nhằm thu hiệu giá kháng thể cao Nội dung nghiên cứu bao gồm: Đáp ứng miễn dịch quy trình gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy trình khơng gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy trình tiêm E coli khơng có trợ chất Đáp ứng miễn dịch quy trình tiêm E coli có bổ sung trợ chất Quy trình làm tăng độ nhạy kháng thể Staphylococcus aureus Quy trình hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu III- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: tháng 01/2008 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: tháng 11/2008 V- CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS TS NGUYỄN NGỌC HẢI PGS TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH Nội dung đề cương luận văn thạc sỹ Hội đồng chuyên ngành thông qua Tháng 01 năm 2008 TRƯỞNG PHÒNG ĐT-SĐH TRƯỞNG KHOA QL CHUYÊN NGÀNH LỜI CẢM ƠN Lời xin trân trọng bày tỏ lịng biết ơn đến Cha - Mẹ – Gia đình tôi, Người cho sống, động viên giúp sức cho suốt thời gian theo học trường Xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy PGS.TS Nguyễn Ngọc Hải, Thầy PGS.TS Nguyễn Đức Lượng người đưa phương hướng, mục tiêu hướng dẫn khoa học cặn kẽ tận tình cho em suốt trình học tập thực hồn thành luận văn Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy TS Nguyễn Tiến Thắng, Cô TS Nguyễn Thúy Hương thầy cô khác truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm dành cho em giúp đỡ quý báu trình học tập nghiên cứu môn Công nghệ sinh học Xin chân thành cảm ơn Thầy Nguyễn Anh Phụng, Cô Nguyễn Thị Thu Năm giúp đỡ tạo điều kiện tốt thời gian tơi làm thí nghiệm Trường Đại Học Nơng Lâm Tp HCM Các bạn học lớp CH – CNSH, người mang lại niềm vui, kiến thức ý kiến đóng góp chân thành Xin gởi lời cảm ơn đặc biệt đến bạn Và cuối cùng, xin trân trọng cảm ơn ý kiến đóng góp từ phía bạn đọc để đề tài nghiên cứu hồn thiện Tơi xin cam đoan số liệu trình bày phần kết luận văn thân tơi thực hiện, không chép người khác Đào Thị Dư TÓM TẮT LUẬN VĂN Sau thử nghiệm gây đáp ứng miễn dịch thỏ E coli thu kết quả: Đối với qui trình gây tối miễn dịch thỏ 105 ngày hiệu giá kháng thể sau thử phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm thu khoảng (12,67 – 14,89) Đối với qui trình khơng gây tối miễn dịch thỏ sau 105 ngày hiệu giá kháng thể sau thử phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm thu từ (12,67 – 13,67) Đối với qui trình tiêm E coli khơng có trợ chất sau 105 ngày hiệu giá kháng thể sau thử phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm thu từ (12,39 –12,94) Đối với qui trình tiêm E coli có trợ chất montanide sau 105 ngày lấy máu để xác định hiệu giá kháng thể thử nghiệm phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm thu hiệu giá kháng thể khoảng (13,89 – 14,28) Để tạo kháng thể đặc hiệu tác giả sử dụng vi khuẩn E coli K88 E coli DH5 để thử nghiệm  Đối với qui trình hấp phụ kháng thể không đặc hiệu E coli K88 hiệu giá kháng thể sau thử phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm 10,28, giảm hiệu giá kháng thể so với hiệu giá kháng thể ban đầu  Đối với qui trình hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli DH5 hiệu giá kháng thể sau thử phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm 10,82, giảm hiệu giá kháng thể so với hiệu giá kháng thể ban đầu Để tăng độ nhạy phản ứng ngưng kết đề tài sử dụng vi khuẩn Staphylococus aureus hấp phụ kháng thể kết ghi nhận hạt ngưng kết lớn rõ ràng hơn, độ nhạy phản ứng ngưng kết tăng lên bậc so với đối chứng không hấp phụ với Staphylococus aureus ASTRACT The experiment of imumune response in rabbits against E coli Showed the results: For the procedure of challenge, the antibody titer evaluated by tube agglutination test was about of 12,67 – 14,89 after 105 days For the procedure of non challenge, the antibody titer evaluated by tube agglutination test was about of 12,67 – 13,67 after 105 days For the procedure with adjuvant (montanide), the antibody titer after 105 days evaluated by tube agglutination test was of immunization about of 13,89 – 14,28 For the procedure without adjuvant the antibody titer evaluated by tube agglutination test was of immunization about of 12,39 – 12,94 after 105 days The bacteria E coli K88 and E coli DH5 were used for absorbing of non specific antibody:  Absorbed antiserum with E coli K88 showed the antibody titer about of 10,28, that decreased the antibody titer in comparing with the initial antibody titer  Absorbed antiserum with E coli DH5 showed the antibody titer about of 10,82, that decreased the antibody titer in comparing with the initial antibody titer Sensitivity of slide agglutination test with antiserum in binding to protein A of the Staphylococus aureus cells increased one level in comparing with those of normal antiserum MỤC LỤC Trang CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Giới hạn đề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Những nguyên lý miễn dịch học 2.1.1 Khái niệm miễn dịch 2.1.2 Kháng nguyên 2.1.2.1 Khái niệm 2.1.2.2 Hapten 2.1.2.3 Epitop 2.1.3 Kháng thể 2.1.3.1 Khái niệm 2.1.3.2 Cấu trúc phân tử globulin miễn dịch 2.2 Đáp ứng miễn dịch 2.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả đáp ứng miễn dịch thú 2.2.1.1 Loài thú 2.2.1.2 Yếu tố di truyền 2.2.1.3 Kháng nguyên 2.2.1.4 Qui trình gây miễn dịch 10 2.2.1.5 Trợ chất 11 2.2.2 Cơ chế đáp ứng miễn dịch dịch thể 12 2.2.2.1 Các tế bào tham gia đáp ứng miễn dịch dịch thể 12 2.2.2.2 Cơ chế hình thành đáp ứng miễn dịch dịch thể 17 2.3 Chất bổ trợ 20 2.3.1 Vai trò chất bổ trợ 20 2.3.1.1 Làm tăng tổng hợp kháng thể 20 2.3.1.2 Làm tăng phản ứng phản vệ 21 2.3.1.3 Làm tăng phản ứng mẫn chậm 21 2.3.1.4 Tăng phản ứng ghép ức chế phát triển ung thư 22 2.3.1.5 Trợ chất vấn đề tổng hợp interferon 22 2.3.2 Cơ chế tác dụng chất bổ trợ 22 2.3.2.1 Những thay đổi không đặc hiệu 22 2.3.2.2 Cơ chế tác dụng chất bổ trợ lên phản ứng đặc hiệu 23 2.3.3 Các loại chất bổ trợ 26 2.3.3.1 Nhóm aluminium 26 2.3.3.2 Chất bổ trợ Freund chế phẩm có dầu khác 27 2.3.3.3 Chất bổ trợ Montanide 28 2.3.4 Tính an toàn trợ chất 29 2.3.5 Yêu cầu trợ chất lý tưởng 29 2.4 Phản ứng ngưng kết kháng nguyên- kháng thể 30 2.4.1 Các lực liên kết kháng nguyên- kháng thể 31 2.4.2 Các đặc tính chung liên kết KN-KT 31 2.4.3 Phản ứng ngưng kết 32 2.4.3.1 Nguyên lý 32 2.4.3.2 Điều kiện hình thành mạng lưới ngưng kết 32 2.4.3.3 Phản ứng ngưng kết KN-KT xảy theo pha 32 2.4.3.4 Phản ứng ngưng kết trực tiếp 33 2.4.3.5 Phản ứng ngưng kết gián tiếp 33 2.4.3.6 Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng ngưng kết KN-KT 34 2.4.4 Nhận định kết phản ứng kết hợp KN-KT 35 2.4.4.1 Định tính 35 2.4.4.2 Định lượng 35 2.4.5 Hiện tượng dương tính giả âm tính giả 36 2.4.5.1 Dương tính giả 36 2.4.5.2 Âm tính giả 36 2.4.5.3 Cách khắc phục dương tính giả, âm tính giả 37 2.5 Protein A Staphylococcus aureus 37 2.6 Tổng quan E coli 39 2.6.1 Đặc điểm nuôi cấy 39 2.6.2 Đặc điểm sinh hóa 39 2.6.3 Đặc điểm kháng nguyên độc tố 40 2.6.3.1 Cấu trúc kháng nguyên 40 2.6.3.2 Độc tố 41 2.6.4 Tính gây bệnh 42 2.6.5 Sức đề kháng 43 2.7 Tổng quan thỏ 43 2.7.1 Lịch sử thỏ 43 2.7.2 Đặc điểm thỏ 43 2.7.3 Đáp ứng miễn dịch thỏ 44 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 3.1 Thời gian địa điểm 45 3.1.1 Thời gian 45 3.1.2 Địa điểm 45 3.2 Nội dung nghiên cứu 45 3.3 Vật liệu thí nghiệm 45 3.3.1 Nguyên liệu 45 3.3.2 Hóa chất 45 3.3.3 Môi trường 46 Luận Văn Thạc Sĩ 89 Phụ Lục  Sabouraud dextrose Pepton 10g pH 5,6  0,2 Glucose 40g Nước cất lít Agar 5g Hấp tiệt trùng 121 0C / 15 phút trước đổ đĩa thêm chloramphennicol  Simon citrat medium Sodium citrat 2g Bromothymol blue 0,08g NaCl 5g Nước cất 1lít K2HPO4 1g Agar 15g (NH4)2SO4 1g pH 7,6  0,2 Hấp tiệt trùng 121 0C / 15 –20 phút Cách pha số hóa chất – thuốc thử  Thuốc Thử Kowacs D dimetylaminobenzaldehyte 5g Cồn ethanol 75ml HCL đậm đặc 25ml Hòa tan D dimetylaminobenzaldehyte vào cồn, từ từ cho HCl vào giữ 40C  Dung Dịch Methyl Red Methyl red 0.1g Ethanol 95% 30ml Nước cất 50ml Hòa tan Methyl red vào Ethanol , bổ sung đủ 50ml nước cất  Dung Dịch NaOH 1N Cân 40g NaOH pha vào 50ml nước cất lắc để 24 giờ, gạn lấy nước bên pha loãng với nước cất cho đủ 1lít  Dung Dịch KOH 40% KOH 40g Nước cất 100ml  Crystal violet Dung dịch : Crystal violet Ethanol HVTH: Đào Thị Dư 1g 96% Luận Văn Thạc Sĩ 90 Dung dịch 2: Oxalate amonium Nước cất Phụ Lục 0.8g 80ml Trộn hai dung dịch với  Dung dịch Lugol Iod 1g KI 2g Nước cất 300ml Cho mẫu cân iod KI vào cối, dùng chày nghiền nhỏ, thêm khoảng ml nước để cất hòa tan iod KI Chuyển dung dịch vào bình định mức, thêm nước đủ 300 ml, giữ lọ màu tối  Dung Dịch  -Napthtol Cân 6g  - napthtol bình định mức 100ml cồn 900, giữ lọ màu tối Hình ảnh minh họa Hình A: E coli mơi trường EMB Hình B: Phản ứng sinh hóa E coli Hình C: Thử ngưng kết ống nghiệm HVTH: Đào Thị Dư Luận Văn Thạc Sĩ 91 Phụ Lục B KẾT QUẢ HỆ SỐ DƯƠNG NHỮNG NGHỊCH ĐẢO CỦA ĐỘ PHA LỖNG NHỮNG MẪU SỐ Bảng A: Kết thí nghiệm theo quy trình gây tối miễn dịch E coli (hệ số chuyển dương) Thoû Thoû Thoû Thoû 19 Thoû 20 Thoû 21 Thoû 37 Thoû 38 Thoû 39 Thoû Thoû Thoû Thoû 22 Thoû 23 Thoû 24 Thoû 40 Thoû 41 Thoû 42 Thoû Thoû Thoû Thoû 25 Thoû 26 Thoû 27 Thoû 43 Thỏ 44 Thỏ 45 Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B Trước tiêm ĐC ĐC ĐC ĐC ĐC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M HVTH: Đào Thị Dư 0 10 0 10 10 0 0 20 0 20 10 0 Sau mũi mẫn cảm 0 10 0 10 10 80 20 40 40 40 40 80 40 20 40 Sau mũi nhắc laïi 0 10 0 10 0 640 160 320 320 160 320 640 320 320 320 Sau mũi nhắc lại 0 10 0 10 10 640 320 640 640 640 640 640 640 1280 640 40 640 80 Sau mũi nhắc lại 0 20 0 10 10 1280 640 1280 640 1280 1280 1280 1280 1280 1280 Sau mũi nhắc lại 0 20 0 10 10 2560 1280 2560 1280 2560 2560 2560 2560 2560 2560 Sau mũi nhắc lại 0 10 0 10 10 10240 5120 5120 5120 5120 10240 20480 5120 2560 10240 Lấy máu lần Lấy máu lần 0 10 0 10 10 20480 5120 10240 10240 10240 10240 20480 10240 5120 20480 0 10 0 10 0 20480 5120 10240 10240 10240 20480 20480 10240 10240 20480 1280 2560 10240 40960 40960 40960 640 1280 2560 5120 20480 40960 40960 40 640 1280 1280 2560 20480 20480 20480 10 80 640 1280 2560 10240 40960 40960 40960 10 80 640 1280 2560 5120 20480 20480 20480 40 640 1280 2560 10240 40960 40960 40960 20 80 640 1280 2560 5120 10240 20480 20480 10 80 640 1280 2560 2560 20480 40960 20480 Luận Văn Thạc Sĩ 92 Phụ Lục Bảng B: Kết thí nghiệm theo quy trình khơng gây tối miễn dịch E coli (hệ số chuyển dương) Thoû 10 Thoû 11 Thoû 12 Thoû 28 Thoû 29 Thoû 30 Thoû 46 Thoû 47 Thoû 48 Thoû 13 Thoû 14 Thoû 15 Thoû 31 Thoû 32 Thoû 33 Thoû 49 Thoû 50 Thoû 51 Thoû 16 Thoû 17 Thoû 18 Thoû 34 Thoû 35 Thỏ 36 Thỏ 52 Thỏ 53 Thỏ 54 Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B Trước tiêm ĐC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M HVTH: Đào Thị Dư Sau mũi nhắc lại 0 20 10 10 10 80 160 320 80 160 320 320 160 160 320 Sau mũi nhắc lại 0 10 10 10 10 320 160 640 320 640 320 640 320 320 640 Sau mũi nhắc laïi 0 10 10 20 10 2560 1280 1280 1280 1280 2560 5120 1280 1280 2560 Sau mũi nhắc lại 0 10 10 20 10 5120 2560 5120 5120 2560 5120 10240 2560 5120 10240 Lấy máu lần Lấy máu lần 0 10 0 10 10 0 0 10 20 10 0 Sau mũi mẫn cảm 0 20 10 10 10 20 40 40 20 40 40 80 40 20 40 Sau mũi nhắc lại 0 10 10 10 10 1280 640 1280 640 1280 1280 1280 1280 640 1280 0 10 10 10 10 10240 5120 5120 10240 5120 5120 10240 2560 5120 10240 0 10 10 10 10 10240 2560 5120 10240 5120 5120 10240 2560 5120 10240 80 640 1280 2560 5120 10240 10240 10240 80 640 1280 2560 5120 10240 20480 20480 20 640 1280 1280 5120 10240 20480 20480 10 80 640 1280 2560 5120 10240 10240 10240 10 160 640 1280 2560 5120 5120 10240 10240 40 640 640 5120 10240 10240 20 80 320 1280 2560 5120 10240 10240 10240 10 80 640 1280 2560 5120 20480 20480 20480 1280 2560 Luận Văn Thạc Sĩ 93 Phụ Lục Bảng C: Kết thí nghiệm theo quy trình không gây tối miễn dịch hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli DH5 (hệ số chuyển dương) Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B Thỏ 10 Thỏ 11 Thỏ 12 Thỏ 28 Thoû 29 Thoû 30 Thoû 46 Thoû 47 Thoû 48 Thoû 13 Thoû 14 Thoû 15 Thoû 31 Thoû 32 Thoû 33 Thoû 49 Thoû 50 Thoû 51 Thoû 16 Thoû 17 Thoû 18 Thoû 34 Thoû 35 Thoû 36 Thoû 52 Thoû 53 Thoû 54 HVTH: Đào Thị Dư ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M Thử KN E coli H29 Thử KN E coli DH5 Lấy máu lần (1) 0 0 0 0 880 220 880 880 220 440 880 220 440 3520 Lấy máu lần (2) 0 0 0 0 880 440 880 880 440 880 880 880 880 3520 Lấy máu lần (3) 0 0 0 0 1760 880 880 1760 440 1760 1760 880 440 3520 (1) (2) (3) 0 0 0 0 110 55 55 110 55 110 110 55 55 110 0 0 0 0 110 55 110 110 110 110 110 110 55 220 0 0 0 0 110 110 110 220 110 110 110 110 55 220 1760 1760 3520 110 110 110 1760 3520 3520 110 110 110 3520 3520 3520 110 110 110 1760 3520 3520 110 110 110 1760 3520 3520 55 55 55 1760 3520 3520 55 110 110 1760 1760 3520 55 110 110 3520 3520 3520 110 110 110 Luận Văn Thạc Sĩ 94 Phụ Lục Bảng D: Kết thí nghiệm theo quy trình gây tối miễn dịch hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli DH5 (hệ số chuyển dương) Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B Thử KN E coli H29 Thử KN E coli DH5 Lấy máu lần (2) 0 0 0 0 1760 880 880 880 880 1760 1760 1760 880 3520 7040 3520 3520 7040 3520 Laáy máu lần (3) 0 0 0 0 1760 880 1760 1760 880 1760 1760 1760 880 3520 14080 7040 3520 7040 3520 (1) (2) (3) 0 0 0 0 110 55 55 110 55 110 110 55 55 110 110 110 110 110 55 0 0 0 0 220 55 110 110 110 110 110 110 55 110 110 110 110 110 55 0 0 0 0 220 110 110 220 110 110 110 110 55 110 110 110 110 110 55 14080 3520 7040 14080 3520 3520 55 55 110 110 110 110 110 110 110 Thoû Thoû Thoû Thoû 19 Thoû 20 Thoû 21 Thoû 37 Thoû 38 Thoû 39 Thoû Thoû Thoû Thoû 22 Thoû 23 Thoû 24 Thoû 40 Thoû 41 Thoû 42 Thoû Thoû Thoû Thỏ 25 Thỏ 26 Thỏ 27 ĐC ĐC ĐC ĐC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli Lấy máu lần (1) 0 0 0 0 880 440 880 880 880 880 880 880 440 1760 3520 3520 1760 3520 3520 Thoû 43 Thoû 44 Thoû 45 E.coli E.coli E.coli 7040 1760 3520 HVTH: Đào Thị Dư Luận Văn Thạc Sĩ 95 Phụ Lục Bảng E: Kết thí nghiệm theo quy trình không gây tối miễn dịch hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli K88 (hệ số chuyển dương) Thoû 10 Thoû 11 Thoû 12 Thoû 28 Thoû 29 Thoû 30 Thoû 46 Thoû 47 Thoû 48 Thoû 13 Thoû 14 Thoû 15 Thoû 31 Thoû 32 Thoû 33 Thoû 49 Thoû 50 Thoû 51 Thoû 16 Thoû 17 Thoû 18 Thoû 34 Thoû 35 Thoû 36 Thoû 52 Thỏ 53 Thỏ 54 HVTH: Đào Thị Dư Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B ĐC ĐC ĐC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M Lấy máu lần 0 0 0 0 624 156 624 624 156 312 624 156 312 2496 Lấy máu lần 0 0 0 0 624 312 624 624 312 624 624 624 312 2496 Lấy máu lần 0 0 0 0 1248 624 624 1248 312 1248 1248 624 624 2496 1248 1248 2496 1248 2496 2496 2496 2496 2496 1248 2496 2496 1248 2496 2496 E.coli +M E.coli +M E.coli +M 1248 2496 2496 1248 1248 2496 2496 2496 2496 Luận Văn Thạc Sĩ 96 Phụ Lục Bảng F: Kết thí nghiệm theo quy trình gây tối miễn dịch hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli K88 (hệ số chuyển dương) Thoû Thoû Thoû Thoû 19 Thoû 20 Thoû 21 Thoû 37 Thoû 38 Thoû 39 Thoû Thoû Thoû Thoû 22 Thoû 23 Thoû 24 Thoû 40 Thoû 41 Thoû 42 Thoû Thoû Thoû Thoû 25 Thoû 26 Thoû 27 Thoû 43 Thỏ 44 Thỏ 45 HVTH: Đào Thị Dư Lô thí nghiệm tiêm Lô A Lô B ĐC ĐC ĐC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC ÑC E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M E.coli +M Lấy máu lần 0 0 0 0 624 312 624 624 624 624 624 624 312 1248 Lấy máu lần 0 0 0 0 1248 624 624 624 624 1248 1248 1248 624 2496 Laáy máu lần 0 0 0 0 1248 624 1248 1248 624 1248 1248 1248 624 2496 2496 4992 9984 2496 2496 4992 1248 2496 2496 2496 4992 4992 2496 2496 2496 4992 9984 9984 1248 2496 2496 2496 4992 2496 Luận Văn Thạc Sĩ 97 Phụ Lục C XỬ LÝ SỐ LIỆU  Không Tối miễn dịch Two-way ANOVA: Hieu gia versus KTMD TG Source KTMD TG Interaction Error Total DF 16 54 80 SS 1167,76 504,26 236,40 39,04 1947,46 MS 583,881 63,033 14,775 0,723 S = 0,8502 R-Sq = 98,00% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia F 807,71 87,20 20,44 P 0,000 0,000 0,000 R-Sq(adj) = 97,03% All Pairwise Comparisons among Levels of KTMD KTMD = subtracted from: SE of Difference 0,2314 0,2314 T-Value 32,08 37,01 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 KTMD = subtracted from: Difference SE of KTMD of Means Difference 1,140 0,2314 T-Value 4,926 Adjusted P-Value 0,0000 KTMD Difference of Means 7,424 8,564  Tối miễn dịch Two-way ANOVA: Hieu gia versus TMD TG Source TMD TG Interaction Error Total DF 16 54 80 SS 1283,26 601,26 296,91 40,44 2221,87 S = 0,8653 R-Sq = 98,18% MS 641,632 75,157 18,557 0,749 F 856,88 100,37 24,78 P 0,000 0,000 0,000 R-Sq(adj) = 97,30% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of TMD TMD = subtracted from: Difference SE of TMD of Means Difference 7,835 0,2355 8,942 0,2355 T-Value 33,27 37,97 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 TMD = subtracted from: Difference SE of TMD of Means Difference 1,107 0,2355 T-Value 4,700 Adjusted P-Value 0,0001 HVTH: Đào Thị Dư Luận Văn Thạc Sĩ 98 Phụ Lục  Quy trình gây tối miễn dịch khơng Two-way ANOVA: Hieu gia versus QT TG Source QT TG Interaction Error Total DF 3 40 47 SS 8,3333 31,9346 1,1667 23,4444 64,8790 S = 0,7656 R-Sq = 63,86% QT=1 không tối miễn dịch MS 8,3333 10,6449 0,3889 0,5861 F 14,22 18,16 0,66 P 0,001 0,000 0,579 R-Sq(adj) = 57,54% QT =2 tối miễn dịch All Pairwise Comparisons among Levels of QT QT = subtracted from: QT Difference of Means 0,8333 SE of Difference 0,2210 T-Value 3,771 Adjusted P-Value 0,0005 Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of TG TG = subtracted from: Difference SE of Adjusted TG of Means Difference T-Value P-Value 1,528 0,3125 4,888 0,0001 2,000 0,3125 6,399 0,0000 1,972 0,3125 6,310 0,0000 TG = subtracted from: Difference SE of TG of Means Difference 0,4722 0,3125 0,4444 0,3125 T-Value 1,511 1,422 TG = subtracted from: Difference SE of TG of Means Difference -0,02778 0,3125 T-Value -0,08889 Adjusted P-Value 0,4407 0,4934 Adjusted P-Value 0,9997  Có trợ chất khơng có trợ chất Two-way ANOVA: Hieu gia versus TG Khoi Source DF SS MS F P TG 671,568 95,9383 556,31 0,000 Khoi 33,844 33,8441 196,25 0,000 Interaction 1,388 0,1982 1,15 0,341 Error 80 13,796 0,1725 Total 95 720,596 S = 0,4153 R-Sq = 98,09% R-Sq(adj) = 97,73% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of Khoi Khoi = subtracted from: Difference SE of Adjusted Khoi of Means Difference T-Value P-Value 1,188 0,08477 14,01 0,0000 HVTH: Đào Thị Dư Luận Văn Thạc Sĩ  99 Phụ Lục So sánh trợ chất quy trình gây miễn dịch (khối =1 khơng trợ chất, khối = có trợ chất, QT =1 khơng tối miễn dịch, QT= tối miễn dịch) General Linear Model: Hieu gia versus Khoi QT TG Factor Type Levels Values Khoi fixed 2 QT fixed 2 TG fixed 8 Analysis of Variance for Hieu gia, using Adjusted SS for Tests Source Khoi QT TG Khoi*QT QT*TG Khoi*TG Error Total DF 1 7 71 95 Seq SS 33,844 6,862 671,568 0,057 3,666 1,388 3,212 720,596 S = 0,212688 Adj SS 33,844 6,862 671,568 0,057 3,666 1,388 3,212 R-Sq = 99,55% Adj MS 33,844 6,862 95,938 0,057 0,524 0,198 0,045 F 748,17 151,70 2120,84 1,25 11,58 4,38 P 0,000 0,000 0,000 0,267 0,000 0,000 R-Sq(adj) = 99,40% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of Khoi*QT Khoi = QT = subtracted from: Difference SE of QT of Means Difference 0,5833 0,06140 1,2361 0,06140 1,7222 0,06140 T-Value 9,501 20,133 28,050 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 0,0000 Khoi = QT = subtracted from: Difference SE of Khoi QT of Means Difference 0,6528 0,06140 2 1,1389 0,06140 T-Value 10,63 18,55 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 Khoi = QT = subtracted from: Difference SE of Khoi QT of Means Difference 2 0,4861 0,06140 T-Value 7,917 Adjusted P-Value 0,0000 Khoi 2  Quy trình hấp phụ kháng thể không đặc hiệu E coli DH5 General Linear Model: Hieu gia versus Khoi TG Factor Khoi TG Type fixed fixed Levels 3 Values 3 Analysis of Variance for Hieu gia, using Adjusted SS for Tests Source Khoi TG Khoi*TG Error DF 2 27 HVTH: Đào Thị Dư Seq SS 278,840 2,653 0,213 22,157 Adj SS 278,840 2,653 0,213 22,157 Adj MS 139,420 1,326 0,053 0,821 F 169,89 1,62 0,06 P 0,000 0,217 0,992 Luận Văn Thạc Sĩ 100 Total 35 303,863 S = 0,905894 R-Sq = 92,71% Phụ Lục R-Sq(adj) = 90,55% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of Khoi Khoi = subtracted from: SE of Difference 0,3698 0,3698 T-Value 11,14 18,29 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 Khoi = subtracted from: Difference SE of Khoi of Means Difference 2,643 0,3698 T-Value 7,147 Adjusted P-Value 0,0000 Khoi Difference of Means 4,120 6,764  Quy trình hấp phụ kháng thể không đặc hiệu E coli K88 E coli DH5 so với kháng thể nguyên General Linear Model: Hieu gia versus Khoi TG Factor Khoi TG Type fixed fixed Levels 3 Values 3 Analysis of Variance for Hieu gia, using Adjusted SS for Tests Source Khoi TG Khoi*TG Error Total DF 2 27 35 S = 0,909481 Seq SS 1186,06 1,25 0,76 22,33 1210,40 Adj SS 1186,06 1,25 0,76 22,33 R-Sq = 98,15% Adj MS 593,03 0,63 0,19 0,83 F 716,95 0,76 0,23 P 0,000 0,479 0,920 R-Sq(adj) = 97,61% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of Khoi Khoi = subtracted from: Difference Khoi of Means 10,28 13,44 SE of Difference 0,3713 0,3713 Khoi = subtracted from: Difference SE of Khoi of Means Difference 3,159 0,3713 Adjusted T-Value P-Value 27,70 0,0000 36,21 0,0000 T-Value 8,509 Adjusted P-Value 0,0000  Quy trình hấp phụ kháng thể khơng đặc hiệu E coli K88 General Linear Model: Hieu gia versus Khoi TG Factor Type Levels Values Khoi fixed 3 TG fixed 3 Analysis of Variance for Hieu gia, using Adjusted SS for Tests Source Khoi TG DF 2 HVTH: Đào Thị Dư Seq SS 68,940 3,400 Adj SS 68,940 3,400 Adj MS 34,470 1,700 F 26,24 1,29 P 0,000 0,291 Luận Văn Thạc Sĩ Khoi*TG Error 27 Total 35 S = 1,14625 101 0,207 0,207 35,475 35,475 108,022 R-Sq = 67,16% 0,052 1,314 Phụ Lục 0,04 0,997 R-Sq(adj) = 57,43% Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hieu gia All Pairwise Comparisons among Levels of Khoi Khoi = subtracted from: SE of Difference 0,4680 0,4680 T-Value -1,103 5,648 Adjusted P-Value 0,5204 0,0000 Khoi = subtracted from: Difference SE of Khoi of Means Difference 3,159 0,4680 T-Value 6,752 Adjusted P-Value 0,0000 Khoi Difference of Means -0,5162 2,6432 HVTH: Đào Thị Dư Cơng trình cơng bố Đào Thị Dư, Nguyễn Ngọc Hải (2008), Ảnh hưởng trợ chất việc gây tối miễn dịch đáp ứng miễn dịch E coli thỏ, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Nông Lâm Nghiệp, 2008, trang 171 – 176 Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc LÝ LỊCH CÁ NHÂN Em tên là: Đào Thị Dư, Ngày sinh 18 tháng 11 năm 1981 Bắc Ninh Tốt nghiệp Đại Học Mở Tp HCM năm 2004, Khoa Công Nghệ Sinh Học Từ năm 2005 – 2007 làm cơng ty Hóa Chất Tây Nam Năm 2007 học cao học trường Đại Học Bách Khoa Tp HCM Năm 2007 đạt chứng lý luận dạy Đại Học chứng Triết Học Sau Đại Học Công việc: Hiện không Địa liên lạc: C8 - QL 1K, Ấp Cầu Hang, Xã Hóa An, TP Biên Hịa, Tỉnh Đồng Nai ... gồm: Đáp ứng miễn dịch quy trình gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy trình khơng gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy trình tiêm E coli khơng có trợ chất Đáp ứng miễn. .. kháng huyết thỏ vi khuẩn E coli 1.3 Nội dung nghiên cứu Đáp ứng miễn dịch quy trình gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy trình khơng gây tối miễn dịch thỏ E coli Đáp ứng miễn dịch quy... gen có khả gây đáp ứng miễn dịch 2.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả đáp ứng miễn dịch thú 2.2.1.1 Loài thú Đáp ứng miễn dịch tăng có khác biệt di truyền thú gây miễn dịch (túc chủ) với loài sử dụng