Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy nấm men rhodotorula sp trên môi trường bán rắn để thu nhận beta carotene

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NẤM MEN RHODOTORULA SP TRÊN MÔI TRƯỜNG BÁN RẮN ĐỂ THU NHẬN BETA CAROTENE CHUYÊN NGÀNH: KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÃ SỐ NGÀNH: 2.11.00 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO HVTH: TẠ ĐĂNG KHOA TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 07 NĂM 2008 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM  Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO Ký tên: Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG Ký tên: Cán chấm nhận xét 2: PGS.TS PHAN ĐÌNH TUẤN Ký tên: LUẬN VĂN THẠC SĨ ĐƯỢC BẢO VỆ TẠI HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày tháng năm 2008 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH -o0o - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc -o0o - NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TẠ ĐĂNG KHOA Ngày, tháng, năm sinh: 15/12/1983 Chuyên ngành: Khoa học Công Nghệ Thực Phẩm Phái: NAM Nơi sinh: ĐỒNG THÁP MSHV: 01106254 I TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NẤM MEN RHODOTORULA SP TRÊN MÔI TRƯỜNG BÁN RẮN ĐỂ THU NHẬN BETA CAROTENE II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Chọn mơi trường thích hợp nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh beta carotene nấm men Rhodotorula sp.CBS10104 - Tìm hiểu số phương pháp chiết tách beta carotene phù hợp - Nghiên cứu, tối ưu hóa yếu tố môi trường điều kiện nuôi cấy bán rắn - Tạo beta carotene theo thời gian sản xuất thử nghiệm sản phẩm bột màu từ canh trường nuôi cấy bán rắn nấm men Rhodotorula sp CBS1010 III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 06/02/2008 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 06/07/2008 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO PGS.TS LÊ VĂN VIỆT MẪN Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chun Ngành thơng qua TRƯỞNG PHỊNG ĐT-SĐH Ngày tháng năm 2008 TRƯỞNG KHOA QL NGÀNH TS PHẠM THÀNH QUÂN LỜI CẢM ƠN Để kết ngày hơm nay, với lịng biết ơn sâu sắc tơi xin chân thành gởi đến:  Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Đống Thị Anh Đào tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm sống quý báu cho em suốt thời gian học, trình thực luận văn  Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Minh Nguyệt quan tâm, hỗ trợ giúp đỡ tơi nhiều để hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp  Ban giám hiệu trường Đại Học Bách Khoa TpHCM, quý Thầy Cô môn Công Nghệ Thực Phẩm: giảng dạy, hướng dẫn để tơi có kiến thức ngày hơm  Q Thầy Cơ phụ trách phịng thí nghiệm môn Công Nghệ Thực Phẩm, môn Công Nghệ Sinh Học Đặc biệt Cô Nguyễn Thị Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình thực luận văn phịng thí nghiệm  Các anh chị, bạn học viên cao học niên khóa 2006 ngành Cơng Nghệ Thực Phẩm, Cơng Nghệ Sinh Học, bạn sinh viên trường Đại Học Cơng Nghiệp TpHCM giúp đỡ, đóng góp ý kiến cho thời gian thực luận văn  Lời cám ơn cuối xin dành cho gia đình tơi, ba mẹ, chị hai, anh Trương Văn Luật nguồn động viên, an ủi, chia sẻ giúp đỡ vật chất tinh thần giúp thêm nghị lực hết đoạn đường qua Xin chân thành cảm ơn ! TpHCM, Tháng 07 Năm 2008 TẠ ĐĂNG KHOA  TÓM TẮT -i- NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NẤM MEN RHODOTORULA SP TRÊN MÔI TRƯỜNG BÁN RẮN ĐỂ THU NHẬN BETA CAROTENE Quá trình lên men bán rắn từ nấm men Rhodotorula sp.CBS10104 tạo hướng việc tận dụng nguồn phụ phẩm rẻ tiền sản xuất nông nghiệp ngành công nghiệp thực phẩm thành chế phẩm giàu dinh dưỡng hàm lượng beta carotene Mục tiêu nghiên cứu: tìm hiểu điều kiện ni cấy nấm men Rhodotorula sp môi trường bán rắn để thu nhận beta carotene Bước đầu đạt số kết khả quan thu nhận 258,168 ppm beta carotene /g canh trường khô (bằng phương pháp đo quang UV Vis) sau ngày nuôi cấy với điều kiện sau:  Gạo phụ phẩm ngâm 24 giờ, pH 3,0 trước hồ hóa  Thành phần môi trường nuôi cấy gồm cơm : bã đậu nành : dầu ăn theo tỷ lệ 97% (w/w) : 3% (w/w) : 1% (v/w)  Nồng độ khống tối ưu (µg/100g chất): N = 3500, P = 1000, S = 841,3  Điều kiện nuôi cấy tối ưu với thông số ban đầu pH = 5.5, độ ẩm = 60% mật độ cấy giống = 7,225.x107 CFU/g chất  Phương pháp phá mẫu hiệu xác định kết hợp lạnh đơng chậm -2 ÷ 0oC, thời gian 24h; sốc nhiệt 50oC bể điều nhiệt với thời gian ÷ phút đánh siêu âm máy Vibra Cell VCX 500 thời gian 15 phút phút họat động 10 giây nghỉ (pulse 5, pulse off 10s) – có bổ sung bột thủy tinh với tỷ lệ 1:2 điều kiện giữ lạnh mẫu nước đá, tránh ánh sáng giấy bạc, nhiệt độ đánh mẫu 4oC, mức biên độ lượng (amplitude) 50%  Hệ dung môi dung môi chiết tách Acetonitrile : – propanol : ethyl acetate tỉ lệ : : bước sóng 454nm GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  TĨM TẮT - ii - Sau q trình nghiên cứu Thu toàn canh trường bước đầu tạo sản phẩm bột màu giàu beta carotene Sản phẩm thu có độ ẩm 12,81%, đạt hàm lượng beta-carotene 198,091 ppm/g chế phẩm khô GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  ABSTRACT - iii - STUDYING THE EFFECT OF CULTURE CONDITIONS ON COLLECTING BETA CAROTENE FROM THE RED YEAST RHODOTORULA SP IN SOLID - STATE FERMENTATION In this research, we have studied a new technique of solid - state fermentation from the red yeast Rhodotorula sp.CBS10104 which uses cheap residuals from agricultural production and food industry to make products with high nutrition and beta carotene The purpose of this research is to find out the effects of cultures on collecting beta carotene from the solid - state fermentation and achieving initial success We have collected 258,168 ppm beta carotene/ g dried culture (UV Vis method) after cultivating in days with these conditions:  The by-product broken rice is soaked in 24 hours, pH 3,0 before being starched  The composition of culture cultivating the red yeast Rhodotorula sp consists of starched broken rice, cooking oil, soybean residue They are chosen with the 97% (w/w) : 3% (w/w) : 1% (v/w) ratio  The optimal mineral content (µg/100g substances) is: N: 3500; P: 1000; S: 841.3  The optimal cultivating conditions which we achieved initially are pH: 5.5, the culture’s moisture: 60%, and the yeast density: 7.625x107 CFU/g substances  The effective cell-disrupting method is the combination between the slow freeze in 24 hours at -2 ÷ 0oC; thermal shock in the temperatue-controlling box at 50oC in to minutes and ultrasonic processing of Vibracell VCX 500 in 15 minutes at 4oC - pulse on in minutes and off in 10 seconds – with the amplitude 50%, the presence of glass beads of the 1:2 ratio in the sample to provide extra shearing action, keep the sample cold with ice and keep away from the light by the silver paper GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  ABSTRACT - iv -  To extract the beta carotene, we use the mixture of solvens with the ratio : : of Acetonitrile : – propanol : ethyl acetate at the wave length 454nm After the hard-working time of the research, we have made the raw pigment powder from the culture of the solid-state fermentation The red yeast Rhodotorula sp culture powder which we achieved has the content of 12.81% moisture and 198.091 ppm beta-carotene/g of dried culture GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  MỤC LỤC -v- MỤC LỤC  MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Nấm men Rhodotorula 1.1.1 Tổng quan nấm men 1.1.1.1 Hình dạng kích thước tế bào nấm men 1.1.1.2 Dinh dưỡng nấm men 1.1.1.3 Sự sinh sản nấm men 1.1.2 Nấm men Rhodotorula 1.1.2.1 Giới thiệu 1.1.2.2 Hình dạng kích thước 10 1.1.2.3 Cấu tạo sinh sản nấm men Rhodotorula 12 1.1.2.4 Đặc điểm sinh hóa 15 1.2 Beta carotene (β-Carotene) 16 1.2.1 Giới thiệu Carotenoids 16 1.2.1.1 Tổng quan Carotenoids 16 1.2.1.2 Cơ chế Sinh tổng hợp carotenoids sinh vật 20 1.2.2 Giới thiệu β-Carotene 27 1.2.2.1 Giới thiệu β-Carotene 27 1.2.2.2 Tính chất 27 1.2.2.3 Sinh tổng hợp β-Carotene 29 1.2.2.4 Các phương pháp thu nhận tách chiết sắc tố beta carotene 31 1.2.2.5 Sinh tổng hợp vitamin A 35 1.2.2.6 Tầm quan trọng β-Carotene sức khỏe 36 1.3 Lên men bán rắn (Solid State Fermentation: SSF) 36 1.3.1 Khái quát lên men bán rắn 36 1.3.1.1 Các loại vi sinh vật sử dụng lên men bán rắn 37 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  MỤC LỤC - vi 1.3.1.2.Các chất thường dùng lên men bán rắn 37 1.3.1.3.Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy bề mặt 38 1.3.2 Các ứng dụng yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni bán rắn với nấm men Rhodotorula sp 39 1.3.2.1 Ảnh hưởng nguồn nitrogen 40 1.3.2.2 Ảnh hưởng nguồn carbon 41 1.3.2.3 Vai trò muối 41 1.3.2.4 Ảnh hưởng chất tự nhiên dầu bổ sung vào 42 1.3.2.5 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến trình lên men bán rắn 42 1.3.2.6 So sánh SSF với q trình lên men mơi trường lỏng 44 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.1 Nguyên liệu – giống vi sinh vật môi trường 45 2.1.1 Nguyên liệu 45 2.1.2 Giống vi sinh vật môi trường 46 2.1.2.1 Nguồn giống 46 2.1.2.2 Môi trường giữ giống nấm men 47 2.1.2.3 Môi trường hoạt hóa nấm men 47 2.1.2.4 Môi trường nuôi cấy bán rắn 48 2.1.3 Hóa chất, thiết bị dụng cụ 48 2.1.3.1 Hóa Chất 48 2.1.3.2 Thiết bị dụng cụ 48 2.2.Phương pháp nghiên cứu 50 2.2.1 Các phương pháp phân tích, thu nhận, xử lí tiêu dùng nghiên cứu 50 2.2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 51 2.2.2.1 Sơ đồ nuôi cấy bán rắn nấm men Rhodotorula sp.CBS10104 51 2.2.2.2 Thuyết minh quy trình ni cấy 52 2.2.3 Các thí nghiệm tiến hành 53 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 26 - PL 48-2 - 48-3 4.0 4.49647 48-2 - 48-4 *26.8082 4.49647 48-2 - 48-5 *26.1124 4.49647 48-2 - 48-6 *28.0781 4.49647 48-2 - 6-2 *24.8744 4.49647 48-2 - 6-3 *26.2104 4.49647 48-2 - 6-4 *23.6881 4.49647 48-2 - 6-5 *27.3066 4.49647 48-2 - 6-6 *39.9367 4.49647 48-3 - 48-4 *22.8082 4.49647 48-3 - 48-5 *22.1124 4.49647 48-3 - 48-6 *24.0781 4.49647 48-3 - 6-2 *20.8744 4.49647 48-3 - 6-3 *22.2104 4.49647 48-3 - 6-4 *19.6881 4.49647 48-3 - 6-5 *23.3066 4.49647 48-3 - 6-6 *35.9367 4.49647 48-4 - 48-5 -0.6958 4.49647 48-4 - 48-6 1.26993 4.49647 48-4 - 6-2 -1.93373 4.49647 48-4 - 6-3 -0.597767 4.49647 48-4 - 6-4 -3.1201 4.49647 48-4 - 6-5 0.4984 4.49647 48-4 - 6-6 *13.1285 4.49647 48-5 - 48-6 1.96573 4.49647 48-5 - 6-2 -1.23793 4.49647 48-5 - 6-3 0.0980333 4.49647 48-5 - 6-4 -2.4243 4.49647 48-5 - 6-5 1.1942 4.49647 48-5 - 6-6 *13.8243 4.49647 48-6 - 6-2 -3.20367 4.49647 48-6 - 6-3 -1.8677 4.49647 48-6 - 6-4 -4.39003 4.49647 48-6 - 6-5 -0.771533 4.49647 48-6 - 6-6 *11.8586 4.49647 6-2 - 6-3 1.33597 4.49647 6-2 - 6-4 -1.18637 4.49647 6-2 - 6-5 2.43213 4.49647 6-2 - 6-6 *15.0622 4.49647 6-3 - 6-4 -2.52233 4.49647 6-3 - 6-5 1.09617 4.49647 6-3 - 6-6 *13.7263 4.49647 6-4 - 6-5 3.6185 4.49647 6-4 - 6-6 *16.2486 4.49647 6-5 - 6-6 *12.6301 4.49647 -* denotes a statistically significant difference GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 27 - PL Bảng phân tích ANOVA tương tác đơn yếu tố pH nước ngâm thời gian ngâm đến khả sinh beta carotene nấm men Rhodotorula CBS10104 Analysis of Variance for Beta Carotene - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:pH 4029.44 1007.36 22.87 0.0000 B:Thoi Gian 3314.61 1657.3 37.63 0.0000 RESIDUAL 1673.61 38 44.0423 -TOTAL (CORRECTED) 9017.65 44 -All F-ratios are based on the residual mean square error Analysis of Variance for Beta Carotene - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:pH 4029.44 1007.36 138.54 0.0000 B:Thoi Gian 3314.61 1657.3 227.93 0.0000 INTERACTIONS AB 1455.47 181.934 25.02 0.0000 RESIDUAL 218.135 30 7.27118 -TOTAL (CORRECTED) 9017.65 44 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for Beta Carotene with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 45 49.8175 pH 61.9523 2.21215 57.4741 66.4306 59.1024 2.21215 54.6241 63.5806 48.7891 2.21215 44.3108 53.2673 41.2486 2.21215 36.7703 45.7269 37.9951 2.21215 33.5169 42.4734 Thoi Gian 15 39.0175 1.71352 35.5486 42.4863 24 15 60.014 1.71352 56.5452 63.4829 48 15 50.421 1.71352 46.9521 53.8898 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 28 - PL Multiple Range Tests for Beta Carotene by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -6 37.9951 X 41.2486 X 48.7891 X 59.1024 X 61.9523 X -Contrast Difference +/- Limits -2 - 2.84996 6.33322 - *13.1633 6.33322 - *20.7037 6.33322 - *23.9572 6.33322 - *10.3133 6.33322 - *17.8538 6.33322 - *21.1072 6.33322 - *7.54047 6.33322 - *10.7939 6.33322 - 3.25347 6.33322 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Beta Carotene by Thoi Gian -Method: 95.0 percent LSD Thoi Gian Count LS Mean Homogeneous Groups -6 15 39.0175 X 48 15 50.421 X 24 15 60.014 X -Contrast Difference +/- Limits -6 - 24 *-20.9966 4.90569 - 48 *-11.4035 4.90569 24 - 48 *9.59305 4.90569 -* denotes a statistically significant difference 4.4 Bảng phân tích ANOVA thí nghiệm 4: ảnh hưởng phương pháp chiết đến khả chiết màu beta carotene từ nấm men Rhodotorula CBS10104 ANOVA Table for Beta Carotene by Phuong Phap Chiet Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 40693.2 18 2260.73 311.22 0.0000 Within groups 276.038 38 7.26417 Total (Corr.) 40969.3 56 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 29 - PL Table of Means for Beta Carotene by Phuong Phap Chiet with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error Phuong Phap ChietCount Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -PP 39.0117 1.55608 36.7842 41.2391 PP 10 77.1477 1.55608 74.9202 79.3751 PP 11 48.1546 1.55608 45.9271 50.3821 PP 12 54.1257 1.55608 51.8982 56.3532 PP 13 118.189 1.55608 115.962 120.417 PP 14 3.73597 1.55608 1.50849 5.96344 PP 15 48.6975 1.55608 46.47 50.925 PP 16 85.1646 1.55608 82.9371 87.3921 PP 17 53.1564 1.55608 50.9289 55.3839 PP 18 89.1546 1.55608 86.9271 91.3821 PP 19 98.5184 1.55608 96.2909 100.746 PP 77.1477 1.55608 74.9202 79.3752 PP 3 62.8568 1.55608 60.6293 65.0843 PP 18.2549 1.55608 16.0274 20.4823 PP 43.5896 1.55608 41.3621 45.8171 PP 78.5478 1.55608 76.3203 80.7753 PP 79.5486 1.55608 77.3211 81.7761 PP 53.1245 1.55608 50.897 55.352 PP 64.4521 1.55608 62.2246 66.6796 -Total 57 62.7673 Multiple Range Tests for Beta Carotene by Phuong Phap Chiet -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -PP 14 3.73597 X PP 18.2549 X PP 39.0117 X PP 43.5896 X PP 11 48.1546 X PP 15 48.6975 XX PP 53.1245 XX PP 17 53.1564 X PP 12 54.1257 X PP 3 62.8568 X PP 64.4521 X PP 10 77.1477 X PP 77.1477 X PP 78.5478 X PP 79.5486 X PP 16 85.1646 X PP 18 89.1546 X PP 19 98.5184 X PP 13 118.189 X GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 30 - PL Contrast Difference +/- Limits -PP - PP 10 *-38.136 4.45495 PP - PP 11 *-9.14293 4.45495 PP - PP 12 *-15.114 4.45495 PP - PP 13 *-79.1774 4.45495 PP - PP 14 *35.2757 4.45495 PP - PP 15 *-9.68583 4.45495 PP - PP 16 *-46.1529 4.45495 PP - PP 17 *-14.1447 4.45495 PP - PP 18 *-50.1429 4.45495 PP - PP 19 *-59.5067 4.45495 PP - PP *-38.136 4.45495 PP - PP *-23.8451 4.45495 PP - PP *20.7568 4.45495 PP - PP *-4.57793 4.45495 PP - PP *-39.5361 4.45495 PP - PP *-40.5369 4.45495 PP - PP *-14.1128 4.45495 PP - PP *-25.4404 4.45495 PP 10 - PP 11 *28.9931 4.45495 PP 10 - PP 12 *23.022 4.45495 PP 10 - PP 13 *-41.0414 4.45495 PP 10 - PP 14 *73.4117 4.45495 PP 10 - PP 15 *28.4502 4.45495 PP 10 - PP 16 *-8.01693 4.45495 PP 10 - PP 17 *23.9913 4.45495 PP 10 - PP 18 *-12.0069 4.45495 PP 10 - PP 19 *-21.3707 4.45495 PP 10 - PP -0.0000333333 4.45495 PP 10 - PP *14.2909 4.45495 PP 10 - PP *58.8928 4.45495 PP 10 - PP *33.5581 4.45495 PP 10 - PP -1.40013 4.45495 PP 10 - PP -2.40093 4.45495 PP 10 - PP *24.0232 4.45495 PP 10 - PP *12.6956 4.45495 PP 11 - PP 12 *-5.9711 4.45495 PP 11 - PP 13 *-70.0345 4.45495 PP 11 - PP 14 *44.4186 4.45495 PP 11 - PP 15 -0.5429 4.45495 PP 11 - PP 16 *-37.01 4.45495 PP 11 - PP 17 *-5.0018 4.45495 PP 11 - PP 18 *-41.0 4.45495 PP 11 - PP 19 *-50.3638 4.45495 PP 11 - PP *-28.9931 4.45495 PP 11 - PP *-14.7022 4.45495 PP 11 - PP *29.8997 4.45495 PP 11 - PP *4.565 4.45495 PP 11 - PP *-30.3932 4.45495 PP 11 - PP *-31.394 4.45495 PP 11 - PP *-4.9699 4.45495 PP 11 - PP *-16.2975 4.45495 PP 12 - PP 13 *-64.0634 4.45495 PP 12 - PP 14 *50.3897 4.45495 PP 12 - PP 15 *5.4282 4.45495 PP 12 - PP 16 *-31.0389 4.45495 PP 12 - PP 17 0.9693 4.45495 PP 12 - PP 18 *-35.0289 4.45495 PP 12 - PP 19 *-44.3927 4.45495 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 31 - PL PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP 12 12 12 12 12 12 12 12 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 13 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 - PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP PP 14 15 16 17 18 19 15 16 17 18 19 16 17 18 19 17 18 19 *-23.022 *-8.7311 *35.8708 *10.5361 *-24.4221 *-25.4229 1.0012 *-10.3264 *114.453 *69.4916 *33.0245 *65.0327 *29.0345 *19.6707 *41.0414 *55.3323 *99.9342 *74.5995 *39.6413 *38.6405 *65.0646 *53.737 *-44.9615 *-81.4286 *-49.4204 *-85.4186 *-94.7824 *-73.4117 *-59.1208 *-14.5189 *-39.8536 *-74.8118 *-75.8126 *-49.3885 *-60.7161 *-36.4671 *-4.4589 *-40.4571 *-49.8209 *-28.4502 *-14.1593 *30.4426 *5.1079 *-29.8503 *-30.8511 -4.427 *-15.7546 *32.0082 -3.99 *-13.3538 *8.0169 *22.3078 *66.9097 *41.575 *6.6168 *5.616 *32.0401 *20.7125 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495 4.45495  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 32 - PL PP 17 - PP 18 *-35.9982 4.45495 PP 17 - PP 19 *-45.362 4.45495 PP 17 - PP *-23.9913 4.45495 PP 17 - PP *-9.7004 4.45495 PP 17 - PP *34.9015 4.45495 PP 17 - PP *9.5668 4.45495 PP 17 - PP *-25.3914 4.45495 PP 17 - PP *-26.3922 4.45495 PP 17 - PP 0.0319 4.45495 PP 17 - PP *-11.2957 4.45495 PP 18 - PP 19 *-9.3638 4.45495 PP 18 - PP *12.0069 4.45495 PP 18 - PP *26.2978 4.45495 PP 18 - PP *70.8997 4.45495 PP 18 - PP *45.565 4.45495 PP 18 - PP *10.6068 4.45495 PP 18 - PP *9.606 4.45495 PP 18 - PP *36.0301 4.45495 PP 18 - PP *24.7025 4.45495 PP 19 - PP *21.3707 4.45495 PP 19 - PP *35.6616 4.45495 PP 19 - PP *80.2635 4.45495 PP 19 - PP *54.9288 4.45495 PP 19 - PP *19.9706 4.45495 PP 19 - PP *18.9698 4.45495 PP 19 - PP *45.3939 4.45495 PP 19 - PP *34.0663 4.45495 PP - PP *14.2909 4.45495 PP - PP *58.8928 4.45495 PP - PP *33.5581 4.45495 PP - PP -1.4001 4.45495 PP - PP -2.4009 4.45495 PP - PP *24.0232 4.45495 PP - PP *12.6956 4.45495 PP - PP *44.6019 4.45495 PP - PP *19.2672 4.45495 PP - PP *-15.691 4.45495 PP - PP *-16.6918 4.45495 PP - PP *9.7323 4.45495 PP - PP -1.5953 4.45495 PP - PP *-25.3347 4.45495 PP - PP *-60.2929 4.45495 PP - PP *-61.2937 4.45495 PP - PP *-34.8696 4.45495 PP - PP *-46.1972 4.45495 PP - PP *-34.9582 4.45495 PP - PP *-35.959 4.45495 PP - PP *-9.5349 4.45495 PP - PP *-20.8625 4.45495 PP - PP -1.0008 4.45495 PP - PP *25.4233 4.45495 PP - PP *14.0957 4.45495 PP - PP *26.4241 4.45495 PP - PP *15.0965 4.45495 PP - PP *-11.3276 4.45495 -* denotes a statistically significant difference GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 33 - PL BẢNG SỐ LIỆU THƠ TRONG CÁC THÍ NGHIỆM TỐI ƯU 4.5 Số liệu đường chuẩn sinh khối nấm men Số khuẩn lạc đếm trang đĩa ĐĨA 51 145 161 94 252 SỐ KHUẨN LẠC ĐĨA ĐĨA 0 43 41 129 132 149 158 89 100 238 241 ĐĨA 47 142 154 95 249 KL TB 0.0 45.5 137.0 155.5 94.5 245.0 OD mẫu đo OD1 0.000 0.167 0.269 0.312 0.341 0.374 OD2 0.000 0.154 0.255 0.301 0.337 0.363 OD3 0.000 0.152 0.258 0.310 0.348 0.367 OD4 0.000 0.162 0.271 0.306 0.343 0.371 OD TB 0.000 0.159 0.263 0.307 0.342 0.369 4.6 Số liệu kết tính tối ưu nồng độ khoáng N, P S Khối lượng mẫu ướt đo beta carotene TN KL MẪU TN1 (g) KL MẪU TN2 (g) KL MẪU TN3 (g) KL TB (g) 10 11 12 13 14 15 1.18 1.00 0.97 1.18 1.15 1.21 0.96 1.35 1.22 1.25 0.96 1.08 1.00 1.21 1.04 1.20 1.04 1.01 1.22 1.14 1.20 0.93 1.34 1.21 1.26 0.98 1.07 1.03 1.26 1.05 1.16 1.02 0.99 1.17 1.16 1.22 0.96 1.23 1.26 1.30 1.03 1.09 1.05 1.22 1.05 1.18 1.02 0.99 1.19 1.15 1.21 0.95 1.31 1.23 1.27 0.99 1.08 1.03 1.23 1.05 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 34 - PL 16 17 18 19 20 1.07 1.05 1.11 1.20 1.12 1.06 1.06 1.11 1.20 1.13 1.06 1.04 1.11 1.17 1.05 1.06 1.05 1.11 1.19 1.10 Độ ẩm mẫu canh trường đo beta carotene TN ĐỘ ẨM TN L1 (%) ĐỘ ẨM TN L2 (%) ĐỘ ẨM TN L3 (%) ĐỘ ẨM TB (%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 63.7736 65.6178 62.6695 64.5318 66.1027 65.5224 65.7683 65.4797 64.6781 63.2967 62.0924 65.7037 63.9817 65.0633 63.1638 64.5637 63.7111 64.7708 66.0212 65.6225 64.8417 67.9578 64.9566 66.9599 65.3644 64.9433 63.3955 65.0058 63.9697 63.9723 63.1564 65.1276 65.6657 67.6686 63.9428 64.0704 64.3807 64.9621 65.8602 66.3314 62.7589 66.6231 63.8904 64.4709 66.7394 65.7473 65.9928 59.7089 66.9639 65.9872 66.6089 66.5558 67.1627 65.2736 63.9733 64.1233 63.2710 64.8849 64.6751 61.6565 63.7914 66.7329 63.8388 65.3209 66.0688 65.4043 65.0522 63.3981 65.2039 64.4187 63.9526 65.7957 65.6034 66.0018 63.6933 64.2525 63.7876 64.8726 65.5188 64.5368 Hàm lượng beta carotene đo HL Beta carotene HL Beta carotene STT OD1 OD OD 3 0.082 0.062 0.059 0.078 0.126 0.141 0.102 0.083 0.065 0.061 0.082 0.124 0.142 0.103 0.079 67.9013 68.7293 0.063 64.6076 67.7729 0.066 58.3085 60.2851 0.084 66.8709 70.3002 0.131 114.2435 112.4301 0.138 119.1708 120.0160 0.106 108.6962 109.7619 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO HL Beta carotene 65.7276 65.9212 65.5176 72.2544 118.5145 116.8999 112.8424 HL Beta carotene TB 67.4527 66.1006 61.3704 69.8085 115.0627 118.6956 110.4335  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 35 - PL 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 0.193 0.071 0.089 0.062 0.110 0.036 0.158 0.259 0.198 0.109 0.201 0.237 0.198 0.195 0.077 0.085 0.064 0.106 0.035 0.152 0.261 0.189 0.112 0.195 0.206 0.192 0.199 0.080 0.088 0.078 0.105 0.046 0.163 0.034 0.183 0.114 0.186 0.185 0.193 142.4101 58.6922 69.6823 61.4667 105.3528 35.9507 133.6763 240.3707 184.8720 101.4233 182.3832 204.3513 179.5777 143.8858 63.6521 66.5505 63.4495 101.5218 34.9521 128.6000 242.2268 176.4688 104.2147 176.9390 177.6218 174.1360 146.9813 66.1045 68.8458 77.3860 100.8316 46.1194 138.2605 31.8474 170.7219 106.2022 168.9653 159.8974 175.2030 144.4257 62.8163 68.3596 67.4341 102.5687 39.0074 133.5123 171.4816 177.3542 103.9467 176.0958 180.6235 176.3056 Số liệu kết tính Sdư TN 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 yi (β carotene/g CK) 67.4527 66.1006 61.3704 69.8085 115.0627 128.6956 120.4335 144.4257 62.8163 68.3596 67.4341 102.5687 39.0074 133.5123 171.4816 177.3542 103.9467 176.0958 180.6235 176.3056 Σyi = 2233 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO (yi – ŷi) (yi – ŷi)2 -44.1900 -45.5422 -50.2724 -41.8343 3.4200 17.0528 8.7907 32.7830 -48.8265 -43.2832 -44.2087 -9.0741 -72.6354 21.8695 59.8389 65.7115 -7.6960 64.4530 68.9807 64.6628 1952.7605 2074.0926 2527.3128 1750.1069 11.6961 290.7973 77.2773 1074.7223 2384.0257 1873.4379 1954.4079 82.3385 5275.8992 478.2738 3580.6897 4317.9965 59.2290 4154.1956 4758.3399 4181.2758 Sdư = 42858.8752  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 36 - PL Số liệu kết tính Sth TN yu0 (ppm/g CK) 15 16 17 18 19 20 171.4816 177.3542 103.9467 176.0958 180.6235 176.3056 ( yu0 - y ) ( yu0 - y )2 7.180 51.558 13.053 170.381 -60.355 3642.667 11.795 139.112 16.322 266.416 12.004 144.103 Sth = 4414.23667 Σ yu0 = 986 Số liệu kết tính stt2 stt2  s du  s th 42858.8752  4414.23667   3844.46385 N  l  (n0  1) 20   (6  1) Số liệu kết tính sth2  y n0 s th2  u 1 u  y0 n0    4414.23667  882.847 (  1) Giá trị tính tiêu chuẩn F s tt2 3844.46385 F   4.355 882.847 s th 4.7 Số liệu kết tính tối ưu pH, độ ẩm mật độ cấy giống ban đầu Khối lượng mẫu ướt đo beta carotene TN KL MẪU TN1 (g) 10 1.06 0.99 1.07 1.00 1.11 1.11 1.12 1.07 1.16 1.16 KL MẪU TN2 (g) GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO 1.04 1.03 1.06 1.04 1.07 1.10 1.08 1.09 1.17 1.15 KL MẪU TN3 (g) KL TB (g) 1.08 0.95 1.10 0.98 1.07 1.16 1.11 1.08 1.19 1.13 1.06 0.99 1.08 1.01 1.08 1.13 1.10 1.08 1.17 1.15  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 37 - PL 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 1.03 1.11 1.04 1.05 1.19 0.98 1.12 1.08 1.12 1.03 0.95 1.14 1.02 1.07 1.18 0.93 1.20 1.06 1.12 1.02 0.99 1.13 1.03 1.10 1.21 0.94 1.15 1.09 1.13 1.05 0.99 1.13 1.03 1.07 1.19 0.95 1.16 1.08 1.12 1.03 Độ ẩm mẫu canh trường đo beta carotene TN ĐỘ ẨM TN L1 (%) ĐỘ ẨM TN L2 (%) ĐỘ ẨM TN L3 (%) ĐỘ ẨM TB (%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 65.6188 65.463 65.5147 64.377 65.9479 65.3676 65.6135 65.3249 64.5233 65.1419 68.9376 65.5489 65.5178 63.5207 64.7949 67.9225 64.2328 65.8142 65.7123 66.1835 64.6938 67.8099 64.8087 66.812 63.2165 64.7954 63.2476 66.8579 64.8218 64.8244 64.0085 66.9797 63.8269 64.9085 64.009 64.4089 68.5563 64.616 65.8664 65.4677 67.3331 62.8945 66.9012 63.0648 63.2575 68.4107 65.3052 65.9666 65.8821 63.9240 66.5965 66.3906 64.5908 66.4942 65.7510 65.6064 65.8321 66.3210 66.7370 67.1209 65.8819 65.3891 65.7415 64.7513 64.1406 66.1912 64.7221 66.0498 65.0757 64.6301 66.5142 66.3064 64.6452 64.9745 64.8516 65.9793 66.2071 65.5837 66.1052 66.2574 Hàm lượng beta carotene đo STT OD1 OD OD 0.120 0.101 0.108 0.102 0.105 0.105 HL Beta carotene HL Beta carotene 117.3947 105.6552 104.1177 108.2412 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO HL Beta carotene 99.7439 108.4251 HL Beta carotene TB 107.5979 106.9280  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 38 - PL 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 0.096 0.097 0.185 0.186 0.171 0.198 0.073 0.070 0.076 0.119 0.063 0.145 0.268 0.214 0.159 0.241 0.272 0.229 0.091 0.101 0.186 0.184 0.168 0.201 0.069 0.070 0.071 0.115 0.068 0.147 0.267 0.214 0.152 0.251 0.274 0.231 0.085 0.101 0.183 0.188 0.170 0.200 0.068 0.077 0.087 0.116 0.055 0.141 0.275 0.215 0.158 0.243 0.280 0.230 91.9137 96.3721 168.7315 172.9743 155.8463 191.2933 63.1045 61.0442 80.9783 111.0445 61.2731 136.5747 225.9980 234.7343 143.5717 229.6838 253.0087 232.6616 87.1265 100.3462 169.6436 171.1144 153.1121 194.1916 59.6467 61.0442 75.6508 107.3119 66.1361 138.4585 225.1547 234.7343 137.2509 239.2142 254.8691 234.6935 81.4337 99.9416 166.9571 174.5124 154.9615 193.4262 58.9175 66.8166 92.5870 108.0565 53.4859 132.3502 231.4917 235.6917 142.8906 231.4374 260.2717 233.7844 86.8246 98.8866 168.4441 172.8670 154.6400 192.9704 60.5562 62.9683 83.0720 108.8043 60.2984 135.7945 227.5481 235.0534 141.2377 233.4451 256.0498 233.7132 Số liệu kết tính Sdư TN yi (β carotene/g CK) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 107.598 106.928 86.825 98.887 168.444 172.867 154.640 192.970 60.556 62.968 83.072 108.804 60.298 135.794 227.548 235.053 141.238 233.445 256.050 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO (yi – ŷi) -38.787 -39.457 -59.560 -47.498 22.059 26.482 8.255 46.585 -85.829 -83.417 -63.313 -37.581 -86.087 -10.591 81.163 88.668 -5.147 87.060 109.665 (yi – ŷi)2 1504.436 1556.854 3547.436 2256.092 486.604 701.298 68.145 2170.198 7366.573 6958.343 4008.534 1412.308 7410.907 112.159 6587.459 7862.088 26.494 7579.469 12026.372  TẠ ĐĂNG KHOA  PHỤ LỤC 39 - PL 233.713 Σyi = 2928 20 87.328 7626.213 Sdư = 81267.981 Số liệu kết tính Sth TN 15 16 17 18 19 20 yu0 (ppm/g CK) ( yu0 - y ) 227.5481 235.0534 141.2377 233.4451 256.0498 233.7132 Σ yu = 1327 ( yu0 - y )2 6.374 40.623 13.879 192.622 -79.937 6389.898 12.271 150.567 34.875 1216.282 12.539 157.217 Sth = 8147.20883 Số liệu kết tính stt2 stt2  s du  s th 81267.981  8147.20883   7312.07718 N  l  (n0  1) 20   (6  1) Số liệu kết tính sth2  y n0 s th2  u 1 u  y0 n0    8147.20883  1629.442 (  1) Giá trị tính tiêu chuẩn F F stt2 7312.07718   4.487 1629.442 sth2 GVHD: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO  TẠ ĐĂNG KHOA LÝ LỊCH CÁ NHÂN Họ tên: TẠ ĐĂNG KHOA Phái: NAM Ngày, tháng, năm sinh: 15/12/1983 Nơi sinh: ĐỒNG THÁP Địa liên lạc: 731 Trần Xuân Soạn, Phường Tân Hưng, Q7 Tp Hồ Chí Minh Điện thoại: 0909.367897 Q TRÌNH ĐÀO TẠO - Năm 2005, tốt nghiệp kỹ sư ngành Công Nghệ Thực Phẩm, Khoa NN – TNTN, Trường ĐH An Giang - Năm 2006 – Nay: Học Viên Cao Học K2006, ngành Khoa học Công Nghệ Thực Phẩm, Trường Đại Học Bách Khoa, Tp Hồ Chí Minh Q TRÌNH CÔNG TÁC ... β -carotene từ chủng nấm men sinh sắc tố, hướng nghiên cứu đặt ra: ? ?Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy nấm men Rhodotorula sp môi trường bán rắn để thu nhận β -carotene? ?? Phương pháp nuôi cấy nấm men Rhodotorula. .. ĐĂNG KHOA  TĨM TẮT -i- NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NI CẤY NẤM MEN RHODOTORULA SP TRÊN MÔI TRƯỜNG BÁN RẮN ĐỂ THU NHẬN BETA CAROTENE Quá trình lên men bán rắn từ nấm men Rhodotorula sp. CBS10104 tạo hướng... lượng beta carotene Mục tiêu nghiên cứu: tìm hiểu điều kiện nuôi cấy nấm men Rhodotorula sp môi trường bán rắn để thu nhận beta carotene Bước đầu đạt số kết khả quan thu nhận 258,168 ppm beta carotene