Sau khi nuôi cay trên môi trường long tiến hành cấy chuyển sang môi trường giá thề nhân tạo để tiếp tục phát triển thành quả thề.. Ảnh hưởng của môi trường giá thể đến năng suấỉ sinh họ[r]
(1)TÀI LIỆU THAM KHẢO Dược điển Việt Nam IV (2010)
2 Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2005
3 Korean Pharmacopoeia, 2007 The Japanese Pharmacopoeia, 2001
5 Okamura, Nobuyuki; Abo, Naomi; Aono, Mio; Eguchi, Tomoyori; Yoshii, Hisano; Ono, Yukio; Yagi, Akira Variation of sennoside A content and purgative activity during preparation of rhubarb decoction Wakan iyakugaku Zasshi (2002), 19(3), 114-118
6 Li 2, Li LJ, Sun Y, Li J, Identification of natural compounds with anti-hepatitis B virus activity from Rheum palmatum L ethanol extract, Chemotherapy 53 (5): 320-6 (2007)
7 Chang CH, Lin c c , Yang JJ, Namba T, Hatton M
Anti-inflammatory effects of emodin from ventilago ieiocarpa Am J Chin Med 1996; 24:139-42
8 Yoshiki Kashiwada, Gen-ichiro Nonaka, and Itsuo Nishioka, Studies on Rhubarb (Rhei Rhizoma) XV Simultaneous Determination of Phenoiic Constituents by High-Performance Liquid Chromatography, Chem, Pharm Bull 37(4), 999-1004(1989)
9 Komatsu K, Nagayama Y, Tanaka K, Ling Y, Cai SQ, Omoíe T, Meseihy MR, Comparative study of Chemical Constituents of Rhubarb from Different Origins, Chem Pharm Bull 54(11): 1491-1499 (2006)
10 Hu, Cunhua; Ye, Shaojian; Zhao, Libo; Wang, Jiaiing Effects of five stilbene compounds on NO mediated vasodilation and their structure-activity relationship Zhongguo Yiyuan Yaoxue Zazhi (2006), 26(7), 826-829
n g h iê n c ứ u x â y d ự n g q u y t r ì n h n u ô i c ấ y q u ả t h è ĐÔNG TRÙNG HẠ THÀO (CORDYCEPS MILITARIS) VA BAO CHÉ
VIÊN NANG MÈM SÂM NGỌC LINH - ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO
ThS.Đặng Trường Giang, DS.Bùi Thị Thu Hà
(Trung tâm Nghiên cứu Y Dược học quân sự, Học viện Quân y)
SV.Trỉệu Bạch Liên (Sinh viên năm th ứ 4, Học viện Quân ý) Hướng dẫn: TS.VŨ Tuân Anh
(Trung tâm Nghiên cứu Y Dược học quân sự, Học viện Quân y)
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Đơng trùng hạ thảo (ĐTHT) dược liệu q có nhiều tổc dụng việc bồi bổ sức khỏe hỗ trự điều trị bệnh ung thư, kháng virus, khống khuẩn Nhu cảu thị trường ĐTHT lớn Việc két hợp sâm Ngọc Linh sinh khối (NLSK) ĐTHT sẩn phầm giải oháp hiệu chưa có thị trường thị trường Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu ni cấy thể ĐTHỶ (C.militarís) Nghiên cứu bào chế viên nang mềm sâm Ngọc linh-Đông trùng hạ thào (SNL-ĐTHT) Đối tuựng phương phốp nghiên cứu: Chủng c.militarís (NBRC 9787), Cao khơ sâm NLSK, vitamin, khống chất Ni cấy thể c.milltaris giá thể nhân tạo Bào ché viên nang mềm có thành phần cao sâm NLSK thể ĐTHT theo phương phâpep khuôn Kết quả: Nuôi cấy thể c.militarìs qua giai đoạn (thạch, lỏng, giá thể nhân tạo), sấy khô thể phương pháp thích hợp Xây dựng cơng thức, qui trình bào chế viên nang mềm với cac thàn phần cao sâm NLSK, ĐTHT, vitamin, khống chất Bàn luận: Hệ sợi c.militarìs phát triền nhanh môi trường MYPS(+casein); CTL1 hệ sợi có tỷ lệ sinh trưởng 3,25±0,24 lần; sau 60 ngày nuôi cấy GT5 cho BE% vá hàm lượng hoạt chất lớn nhất, sấy quà thể 40°c_bằng sóng viba (dưới âp suẩt giảm) la phù hợp CT6 cho tỷ lệ tạo hôn dịch cắc thời đ ề m thử cao vá CTV8 cho màng gelatin mềm, dẻo, ơái dễ dàng cho việc tạo viên nang.
Từ khóa: Đơng trùng hạ thảo, sâm Ngọc Linh. SUMMARY
STUDY ON CORDYCEPS (CORDYCEPS MILITARIS) FRUITING-BODY CULTURE PROCEDURE AND MANUFACTURING SAM NGOC LINH - DONG TRUNG HA THAO SOFT CAPSULE
(2)appropiate method Constructing formula and the process o f manufacturing soft capsule contain Ngoe Linh ginseng biomass, Cordyceps, vitamines, minerals Conclusion: In the MYPS(+casein) medium, the mycelium developed faster; In CTL1 medium the mycelium grew with the highest growth rate (3.25±0.24); after 60 days culturing in the GT5 medium the result is a highest BE% and the largest concentration o f active ingredients; drying by microwave at 40°c (under reduced pressure) is appropiate CT6 fo r highest suspending rate and CTV8 for gelatin were soft, flexible, and easy to create capsule.
//->£>r\o A Í/ỊẠ/1 / i n h POM Ạ f u d * V / U / u y i / o p o , i v y u u i - i i i i i y i i / C j C / / y
ĐẬT VẤN ĐỀ
Đông trùng hạ thảo (ĐTHT) íoại đơng q có chất lồi ký sinh côn trùng, thuộc họ Cordycipitaceae, nhà khoa học thể giới quan tâm nghĩên cứu Một sổ nước thành công việc ni cấy loại Cordyceps sp có giá trị sản xuất với quy mô công nghiệp diện rộng Trung Quốc, Nhật, Hàn Quốc, Mỹ, Malaysia Hiện có khoảng 400 lồi Cordyceps spp ghi nhận Tuy nhiên, có vài lồi Cordyceps khai thác hoạt tính sinh học đề sử dụng cho mục đích thương mại (trong có c.militaris) Việt Nam có nhiều sở ni cấy thành công cung cấp thị trường ĐTHT, nhiên thực tể chưa cung cấp đù cho nhu cầu thị trường lớn
Việc sử dụng kết hợp ĐTHT nhân sâm có từ lâu đời nhiều dạng rượu trà trùng thảo-nhân sâm để bồi bổ sức khỏe Tuy nhiên việc kết hợp nguyên liệu sâm Ngọc Linh SK ĐTHT cung sản phẩm chưa có thị trường Việt Nam Vì vậy, việc kết hợp thành phần vitamin khống chắt góp phần tạo sản phẳm để phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng Mặí khác, việc phát triển sản phẩm cịn góp phần tận dựng phát huy nguồn nguyên liệu sẵn có nước, giảm giá thành sản phẩm có khả cạnh tranh với sản phẩm ngoại nhập
Mục tiêu nghiên cứu nhằm xây dựng qui trình ni cấy thể ĐTHT bào chẻ viên nang mềm sâm Ngọc Linh - Đông trùng hạ thảo (SNL- ĐTHT)
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu
1 Đối tữợng nghiên cứu
Cao khô sâm NLSK HVQY sản xuất Chủng c.militaris (Fries) Link (NBRC 9787) cung cấp Trung tâm Chủng Vi Sinh/Công ty TNHH Công nghệ sinh học Quốc tế HVBIOTEK Các vitamin, khoáng chất đạt tiêu chuẩn bào chế, hỏa chất đạt tiêu chuẩn phân tích
2 Phương pháp nghiên cửu
2.1 Nghiên cứu xây dựng qui trình ni cắy quả thể Cordyceps militaris
Nuôi cấy môi trường thạch [3]: MYPS + casein PDA + pepton Quan sát màu sắc, phát triển sợi cồ mặí trước mặt sau khuẩn lạc để xác định sằctố
Nuôi cấy môi trường lỏng (MT) [8]: Nuôi cầy 05 MT lỏng gồm casein 10g, peptone 8g, cao nấm men 5g, khác thêm vào CTL1 đến CTL5 khoảng 2g
lần lượt succrose, maltose, glucose, fructose, lactose Cho 200 ml mơi trường vào bình, chỉnh pH=6, hấp tiệt khuẩn 121°c trong 30 phút, sau để nguội cấy hệ sợi vào bình; lắc với tốc độ 90 vòng/phút Vào ngày thứ 2,4,6,8,10,12 tiến hành thu hoạch Đánh giá dựa tỷ lệ tăng trưởng = m1/m2 (m1: khối lượng hệ sợi khô thu hoạch (gam); m2: khối íượng tể hệ sợi ni cẩy ban đầu (gam))(sấy khô hệ sợi 50°c đến khối lượng không đồi)
Nuôi cấy giá thể nhân tạo [9][11Ị gồm: GT1 (100% bột nhộng tằm); GT2 (40% cơm, 10% nước dừa, 50% nhộng tằm); GT3 (40% cơm, 40% nước dừa, 20% nhộng tằm); GT4 (40% cơm, 50% nước dừa, 10% nhộng tằm); GT5 (40% cơm, 55% nước dừa, 5% nhộng tằm, 5% casein) Nuôi binh thủy tinh dung tích 350ml (10g giá thể/bình), khử trùng
121°c, thời gian 60 phút với tỳ lệ 0,1g hệ sợi tươi/giá
thể Nuôi cấy theo quy trình [12]: điều kiện tối, khơng chiếu sáng, nhiệt độ 20°c từ 05-07 ngày Sau để 25°c,85 ± 5%, 500 íux, chu kỳ chiếu sáng/tối: 14/10 Tiến hành cơng thức 10 bình giá thể, lần lặp lại Vào ngày thứ 20,40,60,70 thu hoạch thể Đánh giá dựa suất sinh học (BE%) [10], hàm lượng Adenosine Cordycepin thể BE% = (khối lượng thể khô X 100)/khoi iượng giá thể (Quả sấy 50°c trong tủ sẩy tĩnh đến khối lượng không đổi)
Nghiên cứu sấy khô thể c.militaris: sấy tĩnh 60°c (PP1); sẩy vi sóng (ở 40°c, áp suất giảm) (PP2); sấy động khô (-10°C) (PP3) Xác n h thời gian sấy sần phẩm đạt độ ẩm tứờng đổi 5% hàm lượng hoạt chất đạt tốt
2.2 Nghiên cứu bào chế Viên nang mềm sâm Ngọc Linh - Đông trùng hạ thảo
(3)2.3 X lý số liệu
Xừ íý kết theo phương pháp thống kê sinh y học, sử dụng phần mềm Microsoft exèl 2010
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
1 Kết xây dựng qui trình ni ni cấy q thể C ordyceps m ilitaris
1.1 Kết quà nghiên cứu nuôi cấy phân lập môi trường thạch
Tiến hành phân lập từ chủng NBRC 9787 hai môi trường MYPS (+casein) PDA (+peptone) [3] Duy trỉ nhiệt độ 23°C-25°C, độ ẩm 80%-85% 25 ngày Trên rnôi trường PDA(+peptone) mặt sau khuẩn lạc môi trường có sắc tố màu vàng trắng ngà với nhiều múi khía Trên mơi trường MYPS(+casein) mặt sau khuần !ạc mơi trường có sắc tố màu vàng sáng, có múi khía màu vàng đậm Khuẩn lạc phát triển mạnh 20 ngày đầu tien sau ngày 20 bẳt đầu phát triển chậm lại Như hệ sợi c.militaris phát triển mơi trường MYPS (+ casein) thích hợp (hinh 1)
\ l \ PS
m m s s m m m m m ẫ B s m ể ể Ẽ Ề m ' h r L Hình Sự phát ỉriễn c.miíitaris PDA(+peptone)
và MYPS(+casein)
1.2 Kết quà nghiên cứu nuôi cấy tăng sinh hệ sợi môi trường lỏng
Sau nuôi cấy, phân iập hệ sợi môi trường thạch Tiến hành nuôi cấy tang sinh khối hệ sợi moi trường lịng (hình 2)
SB 20.00
2 4 6
C T ll« H H * C T t2 « * - C T Ỉ3 € fh Ìig k iơ M Ơ ) Cấy (ngày)
W)
mm+
‘ Q Ặ ù í ’S
ẳ
1
^ - # - C T L l - * - a L -*#-ôã CTL3 — C T Ĩiiièii#aO 'm eôi cấy (ngày)
Hình Ảnh hường mơi trường ni cấy ổến khối lượng hệ sợi tươi, khô
Sạu 8 ngày nuôi cấy môi trường lỏng thi hệ sựi phát triển mạnh Tuy nhiên sau 8 ngày thi khối lượng hệ sợi giảm dần nguyên nhân có thề nguồn dinh dưỡng gần hết cạnh tranh bình ni cấy lỏng, mơi trường CTL1 jjchứa sucrrose) hệ sợi phát triển mạnh có tỷ lệ sinh trường cao (3,25 ± 0,24 lần) phù hợp để nuôi cay tăng sinh hệ sựi c.militaris
1.3 Kết nghiên cứu nuôi cẩy thể giá thể nhân tạo
Sau nuôi cay môi trường long tiến hành cấy chuyển sang môi trường giá thề nhân tạo để tiếp tục phát triển thành thề Mỗi cơng thức tiến hành ni 20 binh (hình 3, hình 4)
500.00 M - M
20 40 70
6T2 - Ì - T ■ ! # ể w § i cấy (ngày)
ạ* Xí ìã ! £ 0 '■*"
5.00
20 40 60 70
GT1 (3Ĩ2H H G T3
ŨJ 20.00%
20 40 60 70
‘GT1HHGT2- 6T3
{ngày)j I i cấy (ngày)
(4)Sau 60 ngày nuôi cấy, thể mọc kín giá thể không mọc phát triển thêm Tại GT5 thu BE% hàm lứợng hoạt chất lớn nhẳt
Hỉnh Sự phát triển thể ĐTHT môi trường giá thể nhân tạo sau 7; 20; 40; 60 ngày nuôi cắy
* Từ kết nghiên cứu môi trường Tiến hành xây dựng qui trình ni cấy thể c.militaris sau:
- Chuẩn bị: Môi trường MYPS + casein: agar 20g, peptone 6g, Cao men 4g, glucose 4g, casein 10g Môi trường CTL1: casein 10g, succrose 2g, peptone 8g, cao nấm men 5g, nước cất vừa đủ 1.000ml Điều chình pH = 6 Môi trường GT5 (trong 1g giá thể): Cơm 40%, Nước dừa 55%, Bột nhọng tam 5%, Casein 5% Cốc môi trường hấp tiệt khuẩn 121°c 30 phút, sau đễ nguội
- Tiến hành: chung c.m ilitaris (NBRC 9787) tiến hành nuôi cấy mơi trường MYPS + casein Duy trì điều kiện ni cấy nhiệt độ 23-25°C, độ ẩm khơng khí 80-85% Sau thời gian nuôi cấy phân lập, thu lấy hệ sợi c.m iiitaris cấy chuyền sang môi trường lỏng CTL1 Đặt binh vào máy iắc lắc với tốc độ 90 vịng/phút Sau 7-9 ngày ni cấy chuyển hỗn dịch cấy sang giá the GT5 Nuôi cấy điều kiện tổi, nhiệt độ °c 07 ngày Tiếp tục nuôi cấy nhiệt độ 25°c với chu kỳ chiếu sáng/tối 14/10, cường độ ánh sáng 500 lux, độ ẩm khơng khí khoảng 85±5% Sau khoảng 60 ngày nuôi cấy tiến hành thu hoạch thề
1.4 Kết quà nghiên cứu sấy khô thể
ở PP1 sau thời gian sấy 300 phút, hàm ẩm 4,62 ± 0,31%, hàm ỉượng Adenosine Cordycepin 0,44 ± 0,01 mg/g 3,09 ± 0,09mg/g; PP2 sau thời gian sấy 02 phút, hàm ẩm 4,24 ± 0,27%, hàm lượng Adenosine Cordycepin iần lượt 0,51 ± 0,02mg/g 3,12 ± 0,11mg/g; PP3 sau thời gian sấy 180 phút, hàm ẩm 3,36 ± 0,22%, hàm lượng Adenosine Cordỵcepin lần lượí 0,55 ± 0,02mg/g 3,13 ± 0,12mg/g Vởi phương pháp sấy viba thời gian !àm kho thể nhanh hơn, tiết kiệm điện Do vậy, thể sau thu hoạch sáy khơ sóng viba (dưới áp suất giảm)
40°c, sau nghiền thành bột *
2 Kết nghiên cửu bào chế viên nang mềm SNL-ĐTHT
2.1 Kết nghiên cứu công thửc bào chế Viên nang mềm SNL-ĐTHT
2.1.1 Kết thiết kế công thức dược chất, tá dược khảo sàt
Căn vào nghiên cứu sâm Ngọc Linh sinh khối [2], Đông trùng hạ thảo, nhu cầu hàng ngày vitamin chất vi lượng người [4J, chứng lựa chọn dược chất chung cho công thức từ CT1 đến CT6 (Cao sâm NLSK 200mg; bột ĐTHT 100mg; vitamin A/E/B1/B5/B2/B6/PP - 0,3mg/ 15mg/ 01 mg/ 3mg/ 01 mg/ 01 m g /10mg; Kẽm 1,25mg; Selen 0,01 mg) tá dược để khảo sát hồn thiện cơng thức: CT1 (tweenéo 25mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vđ), CT2 (Lecithin 18,25mg; tween80 25mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vđ), CT3 (Lecithin 36,5mg; tween80 25mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vđ), CT4 (Lecithin 73mg; tween80 25mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vđ), CT5 (Lecithin 36,5mg; sáp ong trắng 18,25mg; twéen80 25mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vđ)7 OT6 (Lecithin 36,5mg; sáp ong trắng 36,5mg; tweén80 25mg; dầu cọ 25mg; dầu đậu nành vđ)
2 1.2 Kết khảo sát lựa chọn công thức dược chất, tá dược
(5)(tác nhân íreo) làm giảm tỷ lệ thời gian tách lớp hỗn dịch đóng nang (CT5 CT6) [5][6J Thêm dầu cọ (10%) nhằm làm tăng nhiệt độ nóng chảy độ ổn định cho nhũ tương Kếỉ cho thay CT6 co tỷ lệ tạo hỗn dịch thời điểm thử cao nhất, nghĩa ià hỗn dịch bền
2.1.3 Kết nghiên cứu công thức vỏ nang * Ảnh hường tỷ iệ gelatin/nước dịch vỏ nang: Đun nước cách thủy tới nhiệt độ khoảng 750C, trì nước nhiệt độ này, cho gelatin vào khuấy đến trương nờ hồn íồn Trải dịch gelatin thành lớp mịng, để nguội quan sát tính chất màng Tiến hành với tỷ lệ gelatiirnước khác nhau; CTV1 (1:0,55); CTV2 (1:0,75); CTV3 (1:0,9) Thời gian trương nở hoàn toàn CTV1, CTV2 CTV3 là: 25, 28 35_phút CTV1 màng gelatin mềm bền, dễ đứí khl kéo, CTV3 màng gelatin cứng, bền, dễ dứt kéo, CTV2 màng gelatin mềm, dẻo Do lựa chọn CTV2 với tỷ lệ gelatin:nước 1:0,75 cho nghiên cứu
* Ảnh hưởng tỷ lệ chất hóa dẻo tới chất lượng vỏ nang: Pha chế dịch vỏ nang với công thức từ CTV4 đến CTV12 gồm thành phần chung Gelatin 500mg; nước cất 375mg; ethyl vanillin 1,2mg; nipagin 0,84mg; nipasoi 0,216mg; màu socola 3,4mg; titan dioxyd 4,8mg Thay đổi tỷ lệ giycerin/sorbitol 70% từ CVT4 đen CTV12 là: 0,26/130; 0,26/180; 0,26/230; 140/130; 140/180; 140/230; 215/130; 215/180; 215/230 Kết cho tháy CTV8 vỏ nang mềm dai, màu bóng đẹp cơng íhức khác phù hợp đề điều chế vỏ nang
Từ kết qua nghiên cứu xây dựng công thức Viên nang mềm SNL-ĐTHT gồm:
Dược chất (cao khô sâm NLSK 200mg; bột ĐTHT 100mg;;vitamin A/E/B1/B5/B2/B6/PP - r3mg/ I5m g/ 01m g/03m g/ 01 mg/ 01 mg/ 10mg, kẽm 1,25mg; selen 0,01 mg); Tá dược (Lecithin 36,5mg; Tween80 25mg; Sáp ong trắng 36,5mg; dầu cọ 73mg; dầu đậu nành vừa đủ 730mg); v ỏ nang (gelatin 500mg; glycerin 140mg; sorbitoi 70% 180mg; ethyl vaniiin 1,2mg; titan dioxid 4,8mg; màu socola 3,4mg; nưởc cất 375mg; nípagin 0,84mg; nipasoí 0,216mg)
2.2 Kết xây dựng qui trình bào chế viên nang mềm SNL-ĐTHT
Bước 1: Chuẩn bị nguyên liệu theo công thức, chuẩn bị phòng sản xuất (22±5°C; 40±15%), kiểm tra dụng cụ liên quan đến sản xuất
Bước 2: Cho Nipazil, Nipasol, chất màu socoia ethyl vaniiin hòa tan phần lớn lượng nước cấỉ có cơng thức Khuấy khoảng 30 phút đến tan hết Cho geltatin vào dung dịch ngâm đến trương nở hồn tồn Đun nóng glycerin, sorbitol 70% cho vào dung dịch Duy trì 60°c, khuấy với tốc độ 200 vòng/phút 6 Nghiến mịn T i02 vào dung dịch trên, trộn đồng Duy trì tốc độ khuấy 30-50 vịng/phút Hút chân khong để loại bọt khí Kiểm tra màu vỏ nang cảm quan độ đục so sánh với màu chuẩn Sau
khi kiểm ira đạt yêu cầu, chuyển dịch vào phịng đóng nang
Bước 3: Nghiền mịn riêng dược chẳt, trộn íheo nguyên tắc đồng iượng thành hỗn hợp dược chất đong Cho lecithin tween 80 vào nghiền trộn kỹ đề tạo bột nhão mịn Pha dầu: Đun chảy Sáp ong trắng 65°c Cho tiếp tá dược pha dầu !ại vào, đun nóng nhiệt độ 65°c Trộn thành hỗn hợp đồng nhat Cho pha dầu vào hỗn hợp dược chất, khuấy trộn kỹ thành hỗn hợp đồng Cho hỗn dịch máy đồng hóa tạo hỗn dịch mịn Kiểm nghiệm bán thành phẩm Chuyển hỗn dịch vào phịng đóng nang
Bước Điều chình thơng số máy đóng nang: Nhiệt độ tạo dịch vỏ nang 65°c, Nhiệt độ trống ỉạo vỏ 15°c, Nhiệt độ hàn vỏ nang 40-45°C, Nhiệỉ độ hỗn dịch đóng nang 38°c, Nhiệt độ lồng quay 20-
25°c, Độ dày vỏ nang 0,30mm, Khối iượng thuốc đóng nang 730±15mg Thời gian viên khỏi iồng quay 45 phút Bật máy đóng nang Lấy mẫu gửi kiểm nghiệm bán thành phẩm
Bước 5: Nang khỏi lồng quay ỉau hết dầu, giàn khay sấy chuyền vào phòng sấy nang, sấy sơ giờ, sau sấy lạnh 24 đến độ ẩm 8-10% Sau ép vỉ, đóng túi nhơm, đóng hộp Nhập kho kiểm nghiệm thành phẩm
2.3 Đảnh giá độ ổn định qui trình bào chế
Tiến hành bào chế lô Viên nang mềm SNL- ĐTHT theo quy trình với quy mơ 100.000 vỉên/ỉơ Kiểm trá số tiêu chất íượng chế phẩm (bảng 6)
Bảng 6Ĩ Kết đánh giá chất lưựng Viên nang mềm SNL-ĐTHT !ô khác
Kết cho thấy qui trỉnh bào chế ổn định, đồng lô
KẾT LUẬN VÀ KiẾN NGHỊ
Đã xây dựng qui trinh nuôi cấy thể c.miiitaris MT MYPS+casein, MT lỏng CTL1 giá thề GT5 Đã xây dựng công thức Viên nang mềm SNL-ĐTHT vơi bột cao khô sâm NLSK !à 200mg/viên, bột ĐTHT 100mg/viên, bồ sung vitamin (A, E, B1, B2, B5, B6 PP) khống chất (Zn, Selen) Qui trình bào chế viên nang mềm theo phương pháp ép khuôn ổn định Sản phầm viên nang mềm SNL-ĐTHT đâ Cục An toàn thực phẩm/BỘ Y tế cấp phép lưu hành tồn quốc số
T T Lơ sx Độ đồng khối ỉượng Độ rả (Phút) Gìnse nosiđ (mg/viên) (Rbl, Rgí,
Rd) Adenosin e (Mg/vỉên) Cordycepi n (mg/viên)
Lơ 1,
n=5 Đạí 9,2
13,28 ± 0,43
53,69 ± 1,14
0,311 ± 0,010 Lô 2,
n=5 Đạt 8,6
13,41 ± 0,52
52,64 ± 1,08
0,310 ± 0,009 Lô 3,
n=5 Đạt 7,8
13,44 ± 0,51 54,85 ± 1,11 0,312 ± 0,011
(6)1125/2015/ATTP-XNCB vả Công ty TNHH TM&DV Phương Linh phân phổi độc quyền
Tỉếp tục mờ rộng nâng cầp qui mơ ni cấy thề c.miiỉíaris Học viện Qn y Tiến tới cung cấp thị trường dạng thể khô
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Công ty cổ phần Dược phẩm Vĩnh Phức (2012) ’’Nghiên cưu quy trình cơng nghệ sản xuất thuốc nang
mem so chế phẩm Viên nén chứa dược chất
ổn định” Đề tài Nghiên cửu khoa học đổi cônẹ nghệ doanh nghiệp thực th80 Nghị định so 119/1999/NĐ-CP cua Chính phủ
2 Học viện Quân y (2007) “Hợp tác nghiên cứu xây dựng qui trình tạo khối sâm Ngọc Linh !àm nguyên liệu sản xuat chế phẩm phục vụ sức khỏe cộng đồng
3 Phạm Quang thu, Le Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà “Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết cốc chủng Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L:Fr) Link.” Kết nghiên cứu khoa học công nghệ Lâm nghiệp giai đoạn 2006 -2010, trang 400-408 Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam
4 Thông tư 08 ngậy 23/8/2004 Bộ trưởng Bộ Y tế “Khuyến nghị nhu cầu dinh dưỡng RNỈ-2002”
5 Trường Đại học Dược Hà Nội (2006) “Kỹ thuậỉ bào chế sinh dược học dạng thuốc”, Tập i NXB Y học, Hà Nội
6 Trường Đại học Dược Hả Nội (2006) “Kỹ thuật sồn xuất dược phẩm NXB Y học
7 J.p Park, s.w Kim, H.J Hwang and J.W Yun (2001) "Optimization of submerged culture conditions for the the myceliuml growth and exo-biopolymer production by Cordyceps militaris” Letters in Applied Microbiology 33, 76-81
8 James Swsrbfick “Encyciopsdis of pharmaceutical technology” Third Edition, pages: 13; 1548-1566
9 Li sz, Xia FN, Yang XB (2006) “Comparative studies on the cultivation of selected strains of Cordyceps militaris” Edible Fungi China, 25(6):15 -16
10 Shrestha B, Han SK, Sung JM arid Sung GH (2012) “Fruiting Body Formation of Cordyceps militaris from Multi-Ascospore Isolates and Their Single Ascospore Progeny Strains” Mycobioiogy, 40(2): 100- 106
11 Wen TC, Kang JC, Li GR (2008) “Effects of different soiid culture condition on fruit body and cordycepin output of Cordyceps militaris” Guizhou Agric Sci., 36(4): 92 -94
12 Wen TC, Li, Kang c and He J (2012) "A molecular genetic study on fruiting-body formation of Cordyceps militaris” African Journal of Microbiology Research, 6(24): 5215-5221
PHỤ LỤC ÀNH
Quả thể bột ĐTHT I
<; *
XNCB sản phẩm
■ K m