Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide bài giảng môn công nghệ vi sinh ppt dành cho sinh viên chuyên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn công nghệ vi sinh bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
SẢN XUẤT KHÁNG SINH Bài giảng pptx môn ngành Y dược hay có “tài liệu ngành dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php? use_id=7046916 Mục tiêu Nắm qui trình chung sản xuất kháng sinh Xây dựng qui trình sản xuất benzylpenicillin Mở rộng triển khai qui trình sản xuất số kháng sinh khác Kháng sinh – Lịch sử phát triển 1928: phát nấm mốc xanh Penicillium có khả ức chế phát triển vi khuẩn Alexander Fleming ~ 1940: phát chủng Penicillium có khả sản xuất penicillin với số lượng lớn Howard Walter Florey Kháng sinh – Lịch sử phát triển 1944: phát streptomycin từ xạ khuẩn Streptomyces Salman Waksman Một số kháng sinh khác: Actinomycin, neomycin, streptothricin từ Streptomyces Polymyxin, chloramphenicol, tetracyclin, Từ 1970, kháng sinh có nguồn gốc bán tổng hợp Sản xuất kháng sinh – Các giai đoạn Sản xuất Chiết tách Tinh chế Đóng gói Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men Nguyên liệu thô Vi sinh vật Quá trình lên men Kháng sinh Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men Chất chống bọt Nguyên liệu thô Dầu thực vật, silicon Nguồn carbon Nguồn nitơ Lactose, glucose Muối amoni Rỉ đường, đậu nành Sulfat, hydrophosphat Khoáng chất, vitamin S, P, Cu, Zn, Mg Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men Nuôi cấy vi sinh vật bình lắc với mội trường tăng trưởng Vi sinh vật sản xuất kháng sinh Bình lên men Bình chứa môi trường trang bị đĩa khuấy để trộn môi trường bơm khơng khí vơ trùng Giai đoạn lên men Trong trình lên men, VSV tiếp tục tăng trưởng sản xuất lượng lớn kháng sinh http://www.madehow.com/Volume-4/Antibiotic.html Lên men kháng sinh – Các giai đoạn Lên men kháng sinh gồm giai đoạn: Giai đoạn chuẩn bị: Hoạt hóa vi sinh vật Chuẩn bị bình chứa mơi trường: • Mơi trường: nước nóng, chất dinh dưỡng (C, N,…), yếu tố tăng trưởng (vitamin, acid amin…) • Đĩa khuấy để trộn mơi trường • Bơm khơng khí lọc vơ trùng • Sau 24-48 h, chuyển mơi trường sang bình lên men Lên men kháng sinh – Các giai đoạn Giai đoạn lên men: • VSV tăng trưởng nhân đôi • Sản xuất lượng lớn kháng sinh Yêu cầu kỹ thuật Giữ nhiệt độ bình lên men khoảng 25 oC Khuấy mơi trường liên tục Bơm khơng khí lọc vô trùng Chọn giống, giữ giống lên men Chọn chủng S erythaea suất cao: - Chọn chủng từ ống thạch nghiêng, đông khô hay huyền phù bào tử - Nuôi cấy 30 ml môi trường lỏng V1 - Sau 48 h, pha loãng trải môi trường M1 hay CMAE-1 để thu khuẩn lạc riêng rẽ Chọn giống, giữ giống lên men Chọn chủng S erythaea suất cao: - Sau 10-14 ngày ủ 34 oC, khuẩn lạc mọc: • Giống ngơi • Đường kính ~ mm • Màu xám hồng, mặt màu nâu đậm • Chọn khuẩn lạc có hình thái khóm khác cấy ống thạch nghiêng Chọn giống, giữ giống lên men Giữ giống S erythaea: - Ống thạch nghiêng: • Ủ 10-14 ngày 34 oC • Bảo quản oC tháng - Huyền phù bào tử: • Thêm ml nước vơ trùng vào ống thạch nghiêng • Thêm 20% glycerol • Phân nhỏ thành ống 1,5 ml • Bảo quản -80 oC năm Chọn giống, giữ giống lên men Kiểm tra khả sản xuất erythromycin: - ml huyền phù bào tử pha 1,5 ml huyền phù bào tử đông khô + 30 ml môi trường V1 Ủ 40 34 oC máy lắc - Lấy ml dịch nuôi cấy + 27 ml môi trường F1, ni ngày bổ sung: • Ngày 0-6: dầu đậu nành, 0,2 ml/ngày • Ngày 0-5: n-propanol, 0,1 ml/ngày • Ngày 6-9: n-propanol, 0,15 ml/ngày Chọn giống, giữ giống lên men Kiểm tra khả sản xuất erythromycin: - Cân bình bổ sung lượng nước bay hàng ngày - Lấy mẫu, lọc định lượng erythromycin - Chọn chủng tốt để đông khô Chọn giống, giữ giống lên men Lên men: - Giai đoạn 1: nuôi cấy giống 35 ml MT V1 - Giai đoạn 2: sau 48 giờ: • Cấy vào 3,5 l môi trường V2 • Tốc độ thơng khí 0,6 vvm • Nhiệt độ 34 oC Theo dõi lượng oxy hịa tan, pH, q trình oxy hóa khử, nồng độ khí thải CO2 Theo dõi tăng trưởng: ly tâm đo thể tích hệ sợi cân sinh khối Chọn giống, giữ giống lên men Lên men: - Giai đoạn 3: sau ~ 40 giờ, chuyển 1,5 l dịch nuôi cấy vào bình lên men 20 l chứa 10 l mơi trường F1 • Nhiệt độ 34 oC • Chỉnh pH ≤ 7,2 H2SO4 • Tốc độ khuấy 700 vịng/phút • Tốc độ thơng khí 0,37 vvm 12 đầu, sau tăng lên 0,83 vvm • Duy trì dinh dưỡng: dầu đậu nành, n-propanol, Chọn giống, giữ giống lên men Lên men: - Giai đoạn 3: Theo dõi q trình oxy hóa khử, nồng độ khí thải CO2, glucose tự Hàng ngày lấy 50-100 ml dịch nuôi cấy để định lượng erythromycin Soi kính hiển vi để kiểm tra ngoại nhiễm hình thái VSV Chiết tách erythromycin Tách erythromycin gồm bước chính: Tách erythromycin-isothiocyanat Tạo erythromycin base Kiểm tra độ tinh khiết hoạt tính erythromycin Chiết tách erythromycin Tách erythromycin-isothiocyanat - Chỉnh pH 8,5 NaOH 20% - Ly tâm với vận tốc 3.000 g oC để loại bỏ sinh khối Dịch tiếp tục lọc sợi thủy tinh - Chỉnh pH 9,5 ± 0,1 - Thêm 1,5% methylisobutylketon khuấy 10 phút oC - Ly tâm với vận tốc 2.000 g phút - Thu pha hữu định lượng erythromycin HPLC Chiết tách erythromycin Tách erythromycin-isothiocyanat - Đun pha hữu đến 30 oC, thêm 0,63 l dung dịch Na isothiocyanat 33% cho gam erythromycin - Chỉnh pH 5,8 acid acetic 10% - Làm nguội hỗn hợp đến 10 oC, ủ khuấy nhẹ để kết tinh erythromycin, trì pH 5,8 - Lọc rửa tủa nước cất - Sấy chân không 50 oC - Hiệu suất giai đoạn khoảng 83% Chiết tách erythromycin Tạo erythromycin base - Hòa tan cách khuấy nhẹ erythromycin – isothiocyanat dichloromethan 33 oC, chỉnh pH 9,5-10 NaOH 15% - Lọc huyền dịch với chất trợ lọc, than hoạt Rửa lại lượng nhỏ dichloromethan - Tách pha hữu (dịch lọc) với nước khử ion 33 oC, khuấy nhẹ - Cô quay dịch chiết để tăng nồng độ erythromycin dễ dàng kết tinh Chiết tách erythromycin Tạo erythromycin base - Kết tinh erythromycin oC 3-5 - Phục hồi erythromycin ly tâm hay lọc, rửa lại dichloromethan, sấy khô 50 oC - Hịa tan erythromycin base thơ nước khử ion đun 50-60 oC - Thêm lauryl sulfat Ly tâm hay lọc, rửa với nước khử ion (60 oC) để thu erythromycin base tinh khiết - Erythromycin base chuyển thành dạng ester, muối hay dẫn chất bán tổng hợp Chiết tách erythromycin Thử hoạt tính sinh học độ tinh khiết Thử hoạt tính sinh học eruthromycin phương pháp sinh học thực song song với erythromycin chuẩn, gồm bước: - Đổ 35 ml môi trường TSB vào hộp petri (12x12 cm) - Khi môi trường đông đặc, thêm lớp thứ hai gồm 35 ml TSB 35 μl dịch nuôi cấy Micrococcus luteus ( nuôi 18 giờ, 30 oC mơi trường LB) Chiết tách erythromycin Thử hoạt tính sinh học độ tinh khiết - Nhỏ 10 μl phần dịch ni cấy (hoặc dạng hịa tan methanol) lên đĩa thử kháng sinh đặt bề mặt hộp thạch Ủ 30 oC 48 giờ, đo vùng ức chế tăng trưởng M luteus tính lượng erythromycin dựa vào đường cong chuẩn - Thử độ tinh khiết HPLC: định lượng erythromycin A, B, C ... sinh – Các giai đoạn Sản xuất Chiết tách Tinh chế Đóng gói Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men Nguyên liệu thơ Vi sinh vật Q trình lên men Kháng sinh Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men... hồi kháng sinh chất hữu Kháng sinh thu dạng bột tinh khiết Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn hoàn chỉnh Sản xuất kháng sinh với dạng bào chế khác nhau: • Dạng tiêm truyền tĩnh mạch: kháng sinh. .. hydrophosphat Khoáng chất, vitamin S, P, Cu, Zn, Mg Sản xuất kháng sinh – Giai đoạn lên men Ni cấy vi sinh vật bình lắc với mội trường tăng trưởng Vi sinh vật sản xuất kháng sinh Bình lên men Bình