Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide bài giảng môn công nghệ vi sinh ppt dành cho sinh viên chuyên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn công nghệ vi sinh bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
SẢN XUẤT VACCIN Bài giảng pptx môn ngành Y dược hay có “tài liệu ngành dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php? use_id=7046916 Yêu cầu: Phân biệt loại vaccin Nêu qui trình để sản xuất vaccin vi khuẩn Nêu qui trình để sản xuất vaccin virus Lịch sử Bệnh đậu mùa Chủng đậu • China/India 1% so với 25% chết • Miễn dịch kéo dài • UK: 1700’s • China 1950 • Pakistan/Afghanistan/Ethiopia 1970 Lịch sử Bệnh đậu mùa Vaccination • Jenner 1796 : Đậu bị/Đậu lợn • 1800’s Tiêm phòng phổ cập cho trẻ em Edward Jenner (1749-l823) • 1930’s Ca tự nhiên cuối Anh • 1940’s Ca tự nhiên cuối Mỹ • 1958 chương trình WHO • 10/1977: Ca cuối (Somalia) Vaccin • Thành cơng q khứ • Triển vọng cho tương lai Định nghĩa Vaccin chế phẩm chứa kháng nguyên nhiều loại vi sinh vật, dùng để gây miễn dịch chủ động dự phòng Vaccin lý tưởng Sinh miễn dịch Bắt chước nhiễm tự nhiên Cho bảo vệ kéo dài Khoảng cách liều xa Không gây tác dụng phụ nghiêm trọng Ổn định Phân loại vaccin Phân loại vaccin Phân loại vaccin truyền thống Vaccin bất hoạt (vaccin chết) Vaccin sống giảm hoạt lực Vaccin độc tố Vaccin đơn vị Một số vaccin Vaccin idiotyp Vaccin liên hợp Vaccin vector tái tổ hợp Vaccin DNA Vaccin tổng hợp Phân loại vaccin Vaccin bất hoạt (vaccin chết) Chứa vi sinh vật độc làm chết chất hóa học nhiệt độ, khơng cịn sinh sơi chủ thể Ưu: nói chung an tồn, khơng phải tuyệt đối Các nội độc tố bề mặt vaccin ho gà bất hoạt cảm ứng đáp ứng DTH virus cúm có gắn với phản ứng tương tự Nhược: Thường hiệu vaccin sống giảm độc lực Chỉ có cảm ứng miễn dịch thể dịch mầm bệnh chết vào tế bào chủ không tác dụng nhiễm nội bào Cần nhiều liều bảo vệ lâu dài Ví dụ vaccin chống lại cúm, tả, ho gà, dại, dịch hạch, viêm gan A vaccin bại liệt Salk Phân loại vaccin Vaccin sống giảm hoạt lực chứa vi sinh vật sống làm suy yếu độc lực vi sinh vật gần giống nguy hiểm hơn( BCG) Ưu: Kích thích kháng nguyên liên tục đủ lâu để sản xuất tế bào nhớ tạo đáp ứng miễn dịch bền Nhược chuyển lại thành dạng gây bệnh Ví dụ vaccin chống lại sốt vàng da, sởi, rubella, quai bị vaccin bại liệt Sabin, BCG 10 Phương pháp sản xuất vaccin Thu vi khuẩn tác nhân gây bệnh, nguy hiểm Hấp phụ Chất hấp phụ: tá chất khống, nhơm hydroxid, nhơm phosphat canxi phosphat tăng tính kháng nguyên giảm độc tính chỗ hệ thống vaccin Vaccin bạch hầu vaccin bạch hầu/uốn ván/ho gà Kết hợp Để tăng cảm ứng đáp ứng miễn dịch Polysaccharide nang H influenzae Type b + độc tố bạch hầu uốn ván + protein màng Neisseria meningitidis 41 Phương pháp sản xuất vaccin Sản xuất virus thành phần virus vaccin virus Nuôi virus Thu virus 42 Phương pháp sản xuất vaccin Nuôi virus Nuôi virus phôi gà, vịt ni cấy mơ - Chọn mơ thích hợp cho virus - Cần tuyệt đối vơ trùng q trình ni cấy, kiểm nghiêm ngặt động vật tuyệt đối KHƠNG để nhiễm virus lạ vào phôi Trứng gà có phơi Virus cúm tích tụ dịch túi niệu trứng Virus sốt vàng da tích tụ hệ thống thần kinh phơi Ni cấy chìm 43 Phương pháp sản xuất vaccin Thu virus Lọc thu dịch có chứa virus Vaccin cúm: ly tâm dịch túi niệu huyền trọc virus tinh khiết phần đậm đặc xử lý với ete với tác nhân phá vỡ khác để cắt virus thành thành phần muốn có vaccin virion kháng nguyên bề mặt Vaccin sốt vàng da: đồng hóa phơi gà nước thành bột nhuyễn chứa virus ly tâm kết tủa hầu hết mảnh vỡ phôi virus sốt vàng da 44 Phương pháp sản xuất vaccin Thu virus Khơng có giai đoạn bất hoạt hầu hết vaccin làm từ nuôi cấy tế bào chứa virus sống suy yếu Ngoại trừ trường hợp Vaccin virus bại liệt bất họat bất hoạt với formalin loãng β 3-propiolactone hấp phụ rửa Vaccin dại bất hoạt với β 3-propiolactone siêu lọc Khi hoàn tất, khối nguyên liệu bảo quản nhiệt độ -700C đến trộn thành vaccin cuối 45 Kiểm soát chất lượng Nhằm để đảm bảo hiệu độ an tồn lơ sản phẩm Thực theo ba cách: (1) kiểm sốt q trình; (2) kiểm sốt sản phẩm cuối (3) yêu cầu phù hợp cho nguyên liệu sản xuất ban đầu, trung gian, sản phẩm cuối phương pháp xử lý Các kết kiểm tra kiểm sốt chất lượng ln ghi chi tiết Kiểm tra độ an toàn gồm kiểm tra tổng quát là: (1) Độ vơ trùng, (2) Khơng có độc tố bất thường, (3) Sự diện nhôm calci, (4) Formalin tự (5) Nồng độ phenol 46 Phương pháp sản xuất vaccin Ví dụ 47 Sản xuất vaccin vi khuẩn thương hàn Nhân giống Nuôi Salmonella typhi thạch / 18 Hòa 5x108 vi khuẩn /1ml NaCl đẳng trương Nuôi cấy Môi trường lỏng casein Cấy giống 5%-10% V Ni cấy liên tục có hệ thống khuấy 180-300 vịng/1 phút Sục khí vơ trùng 1lít/1phút; Thêm dung dịch glucose 40% pH 7,6-7,8 10-12h Làm bất hoạt 6x1010 vi khuẩn/ 1ml Trộn sinh khối với EtOH 960 lần 1- 1:4 , lần 2- 1:10 Kiểm tra độ tinh khiết đáp ứng miễn dịch Bào chế Đưa dung dịch điểm đẳng điện NaCl có chứa 0,25% phenol, 1ml vaccin cồn chứa 5x109 vi khuẩn Đóng ống đơng khơ -40 -500C Đóng gói 48 Sản xuất kháng nguyên Vi (vỏ) tinh khiết từ vi khuẩn thương hàn Salmonella typhi Nuôi cấy Vi = virulence Làm khô sinh khối cồn Chiết nước cất (3 lần) Tủa cồn Lần 1: cồn + NaCl bão hòa Lần 2: cồn pH 3,5 – 3,8 Lần 3: cồn 46-52% Đơng khơ Bào chế Hịa kháng nguyên Vi NaCl đẳng trương 40 µg/ml Kháng nguyên Vi dùng dạng mono vaccin chung với vaccin vi khuẩn phối hợp với antigen O (= màng) 49 Vaccin ngừa uốn ván Giống Nuôi cấy Clostridium tetani Môi trường lỏng casein + dịch men bia thủy phân Ni cấy kỵ khí Thu exotoxin hấp phụ với Al(OH)3 Làm bất hoạt formalin exotoxcin Tinh khiết hóa hấp phụ lại với Al(OH)3 anatocin Kiểm tra độ tinh khiết đáp ứng miễn dịch Bào chế ml vaccin chứa 20 đơn vị ngưng kết, pH 6,8-7,6 50 Sản xuất vaccin chống viêm gan B Nguyên nhân: HBV, truyền qua đường tiêm chích, tình dục Mỹ: 200.000 người nhiễm/năm, 20.000 người mang mầm bệnh 1/5 số chết xơ gan, 1/20 bị ung thư gan 1963: phát kháng thể HBV máu bệnh nhân ưa chảy máu 1968: HBsAg ni HBV tế bào gan - KHĨ 1970: huyết người nhiễm HBV mãn 51 Sản xuất vaccin chống viêm gan B Nguyên tắc: trích kháng nguyên bề mặt HBsAg virus từ máu người bị nhiễm virus hepatitis B mãn tính Khơng dùng phương pháp ni cấy mô virus gan mà tế bào gan ngun thủy lại khó ni cấy Các bước Máu người nhiễm viêm gan siêu vi B mãn tính Bất hoạt permalin, To hydroxyt nhôm pepsin, urease formalin Tinh chế kháng nguyên Thử độc tính đáp ứng miễn dịch Thử độc tính tinh tinh / 65 tuần cho lô vaccin Thử hoạt tính kháng nguyên vaccin chuột lang chuột nhắt LÂU NHẤT, ĐẮT TIỀN NHẤT 52 Sản xuất vaccin chống viêm gan B tái tổ hợp Đi từ tế bào vi khuẩn nấm men • phân lập gen mã hóa HBsAg • đưa gen vào E coli S cerevisae • sản xuất HBsAg ni cấy vi khuẩn nấm men • tách kháng nguyên từ tế bào 1-3 µg/1ml dịch ni cấy 53 Sản xuất vaccin chống viêm gan B tái tổ hợp Đi từ tế bào động vật đưa gen mã hóa kháng nguyên vào tế bào động vật có vú vector adenovirus, virus SV40 virus gây u vú bị Ưu điểm • Các virus chép độc lập tế bào plasmid vi khuẩn • Các tế bào động vật có vú có khả khuyếch đại lớn kháng nguyên: ml dch nuụi cy cho 24 àg khỏng nguyờn ã T lệ glycozyl hóa cao, dễ tách kháng nguyên từ dịch kháng nguyên sản xuất liên tục 54 Sản xuất vaccin chống viêm gan B n xuất vaccin chống HBV: so sánh pp truyền thống tái tổ Pp truyền thống huyết người mang HBV Bất hoạt (formaldehyde) Tinh chế kháng nguyên Thư độc tính đáp ứng miễn dịch (tinh tinh/ 65 tuần cho lô) Thử hoạt tính (chuột lang chuột nhắt) 40 lít liều văc-xin Pp 40 lít dịch ni cấy S cereviseae tái tổ hợp mang gen mã hóa protein S từ HBV nhiều liều văc-xin 55 ... pháp sản xuất vaccin Sản xuất virus thành phần virus vaccin virus Nuôi virus Thu virus 42 Phương pháp sản xuất vaccin Nuôi virus Nuôi virus phôi gà, vịt ni cấy mơ - Chọn mơ thích hợp cho virus... vaccin 34 Phương pháp sản xuất vaccin Sản xuất vi khuẩn thành phần vi khuẩn vaccin vi khuẩn Lên men Thu vi khuẩn 35 Phương pháp sản xuất vaccin Lên men vi khuẩn - Hoạt hóa giống vi khuẩn từ -700C... phần vi khuẩn vaccin vi khuẩn Sản xuất virus thành phần virus vaccin virus Phối trộn Đóng ống làm khơ Kiểm sốt chất lượng 33 Phương pháp sản xuất vaccin Hệ thống giống Phân lập vi sinh vật thích