Mục tiêu của đề tài là xác định thành phần hóa học chủ yếu của ba loài T. baviensis, T. anguina và T. kirilowii ở Việt Nam; đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học.
Trang 1HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
-
Hoàng Thị Yến
NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH
SINH HỌC CỦA LOÀI Trichosanthes baviensis Gagnep (QUA LÂU BA VÌ), Trichosanthes anguina L (DƯA NÚI) VÀ Trichosanthes kirilowii Maxim (QUA LÂU NHÂN)
LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC
Hà Nội - 2019
VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM
Trang 2HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
-
Hoàng Thị Yến
NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH
SINH HỌC CỦA LOÀI Trichosanthes baviensis Gagnep (QUA LÂU BA VÌ), Trichosanthes anguina L (DƯA NÚI) VÀ Trichosanthes kirilowii Maxim (QUA LÂU NHÂN)
Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ
Mã số: 9 44 01 14
LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC
NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC
1 GS VS Châu Văn Minh
2 TS Nguyễn Xuân Nhiệm
Hà Nội - 2019
VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM
Trang 3LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan luận án này là công trình nghiên cứu của tôi dưới sự
hướng dẫn khoa học của GS.VS Châu Văn Minh và TS Nguyễn Xuân Nhiệm
Các số liệu, kết quả trong luận án là trung thực và chưa được công bố trong bất
kỳ công trình nào khác
Hà Nội, ngày tháng năm 2019
Tác giả luận án
Hoàng Thị Yến
Trang 4LỜI CẢM ƠN
Luận án này được hoàn thành tại Viện Hóa sinh biển - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam Trong quá trình nghiên cứu, tác giả đã nhận được nhiều sự giúp đỡ quý báu của các thầy cô, các nhà khoa học, các đồng nghiệp, bạn
bè và gia đình
Tôi xin trân trọng bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới Ban lãnh đạo Viện Hóa sinh biển cùng tập thể cán bộ của Viện, về sự quan tâm và ủng hộ to lớn tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu
Tôi xin trân trọng cảm ơn Học viện Khoa học và Công nghệ đã hết sức quan tâm và tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập tại Học viện
Tôi xin cảm ơn, sự cảm phục và kính trọng nhất tới GS.VS Châu Văn Minh người Thầy đã tận tâm hướng dẫn khoa học, động viên, khích lệ và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất cho tôi trong suốt thời gian thực hiện luận án
-Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS Nguyễn Xuân Nhiệm - người Thầy đã hướng dẫn tận tình, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi hoàn thành luận án
Tôi xin chân thành cảm ơn Phòng Nghiên cứu cấu trúc và Phòng Dược liệu biển - Viện Hóa sinh biển, về sự quan tâm giúp đỡ, với những lời khuyên bổ ích và những góp ý quý báu trong việc thực hiện và hoàn thiện luận án
Tôi xin trân trọng cảm ơn Khoa Dược, Trường Đại học Quốc gia Chungnam
và Khoa Dược, Trường Đại học Yonsei, Hàn Quốc đã giúp đỡ tôi trong việc thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính kháng viêm
Tôi xin chân thành cảm ơn Quỹ phát triển khoa học và công nghệ Việt Nam (NAFOSTED) đã tài trợ kinh phí theo mã số đề tài 104.01-2011.23
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới toàn thể gia đình, bạn bè và những người thân đã luôn luôn quan tâm, khích lệ, động viên tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu
Xin trân trọng cảm ơn!
Trang 5MỤC LỤC MỤC LỤC I DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT V DANH MỤC BẢNG VII DANH MỤC HÌNH VIII
MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3
1.1 Giới thiệu về chi Trichosanthes 3
1.1.1 Đặc điểm thực vật của chi Trichosanthes 3
1.1.2 Tình hình sử dụng trong y học cổ truyền các loài thuộc chi Trichosanthes 6
1.1.3 Tình hình nghiên cứu về thành phần hóa học của chi Trichosanthes 7
1.1.3.1 Các hợp chất triterpenoid 8
1.1.3.2 Các hợp chất steroid 14
1.1.3.3 Các hợp chất flavonoid 16
1.1.3.4 Các hợp chất lignan 18
1.1.3.5 Các hợp chất có chứa nitơ 18
1.1.4 Hoạt tính sinh học của chi Trichosanthes 20
1.1.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư 21
1.1.4.2 Hoạt tính kháng viêm 24
1.1.4.3 Tác dụng chống oxy hóa 25
1.1.4.4 Tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm 25
1.1.5 Tình hình nghiên cứu về chi Trichosanthes ở Việt Nam 26
1.2 Giới thiệu về loài T anguina, T baviensis và T kirilowii 26
1.2.1 Loài T baviensis 26
1.2.2 Loài T anguina 27
1.2.3 Loài T kirilowii 28
CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 30
2.1 Đối tượng nghiên cứu 30
2.1.1 Loài T baviensis 30
2.1.2 Loài T anguina 30
2.1.3 Loài T kirilowii 30
2.2 Phương pháp nghiên cứu 31
2.2.1 Phương pháp phân lập các hợp chất 31
2.2.1.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 31
2.2.1.2 Sắc ký cột (CC) 31
Trang 62.2.1.3 Tinh chế các hợp chất 31
2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc 31
2.2.2.1 Phổ khối lượng phân giải cao (HR-ESI-MS) 31
2.2.2.2 Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR) 32
2.2.2.3 Phổ lưỡng sắc tròn (CD) 33
2.2.2.4 Độ quay cực ([α]) 33
2.2.3 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học 33
2.2.3.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư 33
2.2.3.2 Phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase 34
2.3 Phân lập các hợp chất 36
2.3.1 Các hợp chất phân lập từ loài T baviensis 36
2.3.2 Các hợp chất phân lập từ loài T anguina 39
2.3.3 Các hợp chất phân lập từ loài T kirilowii 41
2.4 Thông số vật lý và dữ liệu phổ của các hợp chất đã phân lập được 43
2.4.1 Các thông số vật lý của các hợp chất phân lập được từ loài T baviensis 43
2.4.1.1 Hợp chất TB1: 9,26-epoxymultiflorenol (mới) 43
2.4.1.2 Hợp chất TB2: β-amyrin acetate 43
2.4.1.3 Hợp chất TB3: ergosta-6,22-dien-3β,5α,8α-triol 43
2.4.1.4 Hợp chất TB4: spinasterol 43
2.4.1.5 Hợp chất TB5: 4α,14α-dimethyl-9,19-cyclo-5α,9β-ergost-24(24ʹ)-en-3β-ol 43
2.4.1.6 Hợp chất TB6: lup-20(29)-en-3β-ol 44
2.4.1.7 Hợp chất TB7: (+)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside 44
2.4.1.8 Hợp chất TB8: (-)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside 44
2.4.1.9 Hợp chất TB9: demethoxybergenin 45
2.4.1.10 Hợp chất TB10: bergenin 45
2.4.1.11 Hợp chất TB11: icariside F2 45
2.4.1.12 Hợp chất TB12: nicotiflorin 45
2.4.1.13 Hợp chất TB13: (6S,9S)-roseoside 45
2.4.1.14 Hợp chất TB14: thymidine 45
2.4.2 Các thông số vật lí của các hợp chất phân lập được từ loài T anguina 46
2.4.2.1 Hợp chất TA1: tricanguina A (mới) 46
2.4.2.2 Hợp chất TA2: tricanguina B (mới) 46
2.4.2.3 Hợp chất TA3: corchoionoside B 46
2.4.2.4 Hợp chất TA4: icariside B 5 46
2.4.2.5 Hợp chất TA5: (3R,9S) 3,9-dihydroxymegastigman-5-ene 9-O-β-D-glucopyranoside 47
Trang 72.4.2.6 Hợp chất TA6: icariside B 1 47
2.4.2.7 Hợp chất TA7: kaemferol 3-O-β-D-glucopyranoside (1→3) O-β-D-glucopyranoside 47
2.4.2.8 Hợp chất TA8: isopentyl 1-O-β-D-glucopyranoside 47
2.4.3 Các thông số vật lí của các hợp chất phân lập được từ loài T kirilowii 47
2.4.3.1 Hợp chất TK1: trichobenzolignan (mới) 47
2.4.3.2 Hợp chất TK2: ligballinol 48
2.4.3.3 Hợp chất TK3: (-)-pinoresinol 48
2.4.3.4 Hợp chất TK4: ehleticanol C 48
2.4.3.5 Hợp chất TK5: luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside 48
2.4.3.6 Hợp chất TK6: chrysoeriol 7-O-β-D-glucopyranoside 48
2.4.3.7 Hợp chất TK7: 10α-cucurbita-5,24-dien-3β-ol 49
2.4.3.8 Hợp chất TK8: arvenin I 49
2.4.4 Hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ T baviensis 50
2.4.5 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập được từ T kirilowii 51
CHƯƠNG 3 THẢO LUẬN KẾT QUẢ 52
3.1 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được 52
3.1.1 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ loài T baviensis 52
3.1.1.1 Hợp chất TB1: 9,26-epoxymultiflorenol (mới) 52
3.1.1.2 Hợp chất TB2: β-amyrin acetate 58
3.1.1.3 Hợp chất TB3: ergosta-6,22-dien-3β,5α,8α-triol 60
3.1.1.4 Hợp chất TB4: spinasterol 62
3.1.1.5 Hợp chất TB5: 4α,14α-dimethyl-9,19-cyclo-5α,9β-ergost-24(28)-en-3β-ol 62
3.1.1.6 Hợp chất TB6: lup-20(29)-en-3β-ol 63
3.1.1.7 Hợp chất TB7: (+)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside 64
3.1.1.8 Hợp chất TB8: (-)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside 66
3.1.1.9 Hợp chất TB9: demethoxybergenin 67
3.1.1.10 Hợp chất TB10: bergenin 69
3.1.1.11 Hợp chất TB11: icariside F2 70
3.1.1.12 Hợp chất TB12: nicotiflorin 71
3.1.1.13 Hợp chất TB13: (6S,9S)-roseoside 73
3.1.1.14 Hợp chất TB14: thymidine 75
3.1.2 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ loài T anguina 77
3.1.2.1 Hợp chất TA1: tricanguina A (mới) 77
3.1.2.2 Hợp chất TA2: tricanguina B (mới) 82
3.1.2.3 Hợp chất TA3: corchoionoside B 88
Trang 83.1.2.4 Hợp chất TA4: icariside B 5 89
3.1.2.5 Hợp chất TA5: (3R,9S) 3,9-dihydroxymegastigman-5-ene 9-O-β-D-glucopyranoside 91
3.1.2.6 Hợp chất TA6: icariside B 1 92
3.1.2.7 Hợp chất TA7: kaemferol 3-O-β-D-glucopyranoside-(1→3)-O-β-D-glucopyranoside 94 3.1.2.8 Hợp chất TA8: isopentyl 1-O-β-D-glucopyranoside 95
3.1.3 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ loài T kirilowii 96
3.1.3.1 Hợp chất TK1: trichobenzolignan (mới) 96
3.1.3.2 Hợp chất TK2: ligballinol 101
3.1.3.3 Hợp chất TK3: (-)-pinoresinol 102
3.1.3.4 Hợp chất TK4: ehletianol C 103
3.1.3.5 Hợp chất TK5: luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside 105
3.1.3.6 Hợp chất TK6: chrysoeriol 7-O-β-D-glucopyranoside 106
3.1.3.7 Hợp chất TK7: 10α-cucurbita-5,24-dien-3β-ol 108
3.1.3.8 Hợp chất TK8: arvenin I 109
3.2 Tập hợp danh sách các hợp chất phân lập từ các loài thuộc chi Trichosanthes 112
3.3 Hoạt tính của các hợp chất phân lập được 115
3.3.1 Hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ T baviensis 115
3.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập được từ loài T kirilowii 116
KẾT LUẬN 118
KIẾN NGHỊ 120
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ 121
TÀI LIỆU THAM KHẢO 122
Trang 9DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
13C-NMR Carbon -13 nuclear magnetic
A-549 Lung carcinoma cell Tế bào ung thư phổi
B16F1 Mouse melanoma cell Tế bào ung thư hắc tố ở
chuột BV2 Mouse microglial cell Tế bào tiểu thần kinh đệm ở
chuột Caco-2 Colon carcinoma cell Tế bào ung thư ruột kết CCRF-CEM Leukaemia cell Tế bào ung thư bạch cầu
CD Circular dichroism spectroscopy Phổ lưỡng sắc tròn
COSY 1H-1H correlation spectroscopy Phổ 1H-1H COSY
DEPT Distortionless enhancement by
polarization transfer
Phổ DEPT DMSO Dimethyl sulfoxide
DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
EBV-EA Epstein-Barr virus
ESI-MS Electrospray ionization mass
HIF-1 Hypoxia inducible factor-1
HT-29 Colon carcinoma cell Tế bào ung thư ruột kết
HT-29 HCT-15 Colon carcinoma cell Tế bào ung thư ruột kết
HCT-15 HCT-116 Colon carcinoma cell Tế bào ung thư ruột kết
HCT-116 HMBC Heteronuclear mutiple bond
HR-ESI-MS High resolution electrospray
ionization mass spectrum
Phổ khối lượng phân giải cao phun mù điện tử
HSQC Heteronuclear single quantum
Trang 10Kí hiệu Tiếng Anh Diễn giải
người
LU-1 Lung carcinoma cell Tế bào ung thư phổi
MCF-7 Breast carcinoma cell Tế bào ung thư vú
MDA-MB-435 Melanoma cell Tế bào ung thư vú ác tính
concentration
Nồng độ ức chế tối thiểu
MTT
3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide
NCI-H460 Lung cancer cell Tế bào ung thư phổi
NCI-H522 Lung cancer cell Tế bào ung thư phổi
enhancement spectroscopy
Phổ NOESY
NF-B Nuclear factor-kappa B Yếu tố nhân kappa B
OVCAR-3 Ovarian cancer cell Tế bào ung thư buồng trứng OVCAR-6 Ovarian cancer cell Tế bào ung thư buồng trứng OVCAR Ovarian cancer cell Tế bào ung thư buồng trứng PARP Poly (ADP-ribose) polymerase Protein PARP
SK-LU-1 Lung cancer cell Tế bào ung thư phổi
SK-OV-3 Ovarian cancer cell Tế bào ung thư buồng trứng
SR-BR-3 Breast carcinoma cell Tế bào ung thư vú
T47D Breast carcinoma cell Tế bào ung thư vú
TLC Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng
TMS Tetramethylsilane
TNF Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u
TPA Tissue polypeptide antigen
U-251 Brain carcinoma cell Tế bào ung thư thần kinh
trung ương UO-31 Renal carcinoma cell Tế bào ung thư biểu mô tế
bào thận
Trang 11DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1 Danh sách các loài thuộc chi Trichosanthes ở Việt Nam 3
Bảng 1.2 Các hợp chất triterpenoid 1-64 từ chi Trichosanthes 8
Bảng 1.3 Các hợp chất steroid 65-90 từ chi Trichosanthes 14
Bảng 1.4 Các hợp chất flavonoid 91-110 từ chi Trichosanthes 16
Bảng 1.5 Các hợp chất lignan 110-114 từ chi Trichosanthes 18
Bảng 1.6 Các hợp chất có chứa nitơ 115-131 từ chi Trichosanthes 19
Bảng 2.1 Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của TB1-TB10 50
Bảng 2.2 Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của TA1-TA8 51
Bảng 2.3 Kết quả đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư của TK1-TK8 51
Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB1 54
Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB2 và hợp chất tham khảo 59
Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB3 và hợp chất tham khảo 61
Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB7 và hợp chất tham khảo 65
Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB8 và hợp chất tham khảo 67
Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB9 và hợp chất tham khảo 68
Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB10 và hợp chất tham khảo 70
Bảng 3.8 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB11 và hợp chất tham khảo 71
Bảng 3.9 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB12 và hợp chất tham khảo 72
Bảng 3.10 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB13 và hợp chất tham khảo 74
Bảng 3.11 Số liệu phổ NMR của hợp chất TB14 và hợp chất tham khảo 75
Bảng 3.12 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA1 78
Bảng 3.13 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA2 và phần hợp chất tham khảo TA1 83
Bảng 3.14 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA3 và hợp chất tham khảo 89
Bảng 3.15 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA4 và hợp chất tham khảo 90
Bảng 3.16 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA5 và hợp chất tham khảo 92
Bảng 3.17 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA6 và hợp chất tham khảo 93
Bảng 3.18 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA7 94
Bảng 3.19 Số liệu phổ NMR của hợp chất TA8 và hợp chất tham khảo 96
Bảng 3.20 Số liệu phổ NMR của TK1 và phần cấu trúc tham khảo 97
Bảng 3.21 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK3 và hợp chất tham khảo 103
Bảng 3.22 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK4 và hợp chất tham khảo 104
Bảng 3.23 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK5 và hợp chất tham khảo 106
Bảng 3.24 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK6 và hợp chất tham khảo 107
Bảng 3.25 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK7 và hợp chất tham khảo 108
Bảng 3.26 Số liệu phổ NMR của hợp chất TK8 và hợp chất tham khảo 111
Trang 12DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1 Các dạng lá của chi Trichosanthes 4
Hình 1.2 Hoa của một số loài thuộc chi Trichosanthes 5
Hình 1.3 Quả của một số loài thuộc chi Trichosanthes 5
Hình 1.4 Các dạng hạt trong chi Trichosanthes 6
Hình 1.5 Cấu trúc của các steroid 65-90 16
Hình 1.6.Cấu trúc các hợp chất flavonoid 91-109 18
Hình 1.7 Cấu trúc các hợp chất lignan 110-114 18
Hình 1.8 Cấu trúc các hợp chất có chứa nitơ 115-131 20
Hình 2.1 Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym tyrosinase 35
Hình 2.2 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T baviensis 38
Hình 2.3 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T anguina 40
Hình 2.4 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T kirilowii 42
Hình 3.1 Cấu trúc hóa học của TB1 52
Hình 3.2 Các tương tác HMBC, COSY và NOE chính của TB1 53
Hình 3.3 Phổ HR-ESI-MS của TB1 55
Hình 3.4 Phổ 1 H-NMR của TB1 55
Hình 3.5 Phổ 13 C-NMR của TB1 56
Hình 3.6 Phổ HMQC của TB1 56
Hình 3.7 Phổ HMBC của TB1 57
Hình 3.8 Phổ COSY của TB1 57
Hình 3.9 Phổ NOESY của TB1 58
Hình 3.10 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB2 58
Hình 3.11 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB3 60
Hình 3.12 Cấu trúc hóa học của TB4 62
Hình 3.13 Cấu trúc hóa học của TB5 62
Hình 3.14 Cấu trúc hóa học của TB6 63
Hình 3.15 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TB7 64
Hình 3.16 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TB8 66
Hình 3.17 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TB9 67
Hình 3.18 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TB10 69
Hình 3.19 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB11 70
Hình 3.20 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB12 71
Hình 3.21 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB13 73
Hình 3.22 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TB14 75
Hình 3.23 Cấu trúc hóa học của TA1 và hợp chất tham khảo 77
Hình 3.24 Các tương tác HMBC và COSY chính của TA1 78
Hình 3.25 Phổ CD của TA1 79
Hình 3.26 Phổ HR-ESI-MS của TA1 79
Hình 3.27 Phổ 1 H-NMR của TA1 80
Hình 3.28 Phổ 13 C-NMR của TA1 80
Hình 3.29 Phổ HSQC của TA1 81
Hình 3.30 Phổ HMBC của TA1 81
Hình 3.31 Phổ COSY của TA1 82
Hình 3.32 Cấu trúc hóa học của TA2 và hợp chất tham khảo 82
Hình 3.33 Các tương tác HMBC, COSY và NOE chính của TA2 84
Hình 3.34 Phổ HR-ESI-MS của TA2 84
Hình 3.35 Phổ 1 H-NMR của TA2 85
Trang 13Hình 3.36 Phổ 13 C-NMR của TA2 85
Hình 3.37 Phổ HSQC của TA2 86
Hình 3.38 Phổ HMBC của TA2 86
Hình 3.39 Phổ COSY của TA2 87
Hình 3.40 Phổ ROESY của TA2 87
Hình 3.41 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TA3 88
Hình 3.42 Phổ CD của TA3 89
Hình 3.43 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TA4 89
Hình 3.44 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TA5 91
Hình 3.45 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC, COSY chính của TA6 92
Hình 3.46 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TA7 94
Hình 3.47 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TA8 95
Hình 3.48 Cấu trúc hóa học của TK1 và hợp chất tham khảo (TK1a) 96
Hình 3.49 Các tương tác HMBC chính của TK1 98
Hình 3.50 Phổ HR-ESI-MS của TK1 98
Hình 3.51 Phổ 1 H-NMR của TK1 99
Hình 3.52 Phổ 13 C-NMR của TK1 99
Hình 3.53 Phổ HSQC của TK1 100
Hình 3.54 Phổ HMBC của TK1 100
Hình 3.55 Phổ CD của TK1 101
Hình 3.56 Cấu trúc hóa học của TK2 101
Hình 3.57 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK3 102
Hình 3.58 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK4 103
Hình 3.59 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK5 105
Hình 3.60 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK6 106
Hình 3.61 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK7 108
Hình 3.62 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của TK8 109
Hình 3.63 Cấu trúc hóa học các hợp chất được phân lập từ loài T baviensis 112
Hình 3.64 Cấu trúc hóa học các hợp chất được phân lập từ loài T anguina 113
Hình 3.65 Cấu trúc hóa học các hợp chất được phân lập từ loài T kirilowii 114
Trang 14MỞ ĐẦU
Việt Nam có vị trí địa lý nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, địa hình nhiều đồi núi chia cắt nên điều kiện khí hậu cũng rất đa dạng, có nhiều tiểu vùng khí hậu khá đặc trưng Những yếu tố trên đã tạo nên những điều kiện sinh thái, những thảm thực vật nhiệt đới rậm, ẩm, thường xanh, hoặc thưa, nửa rụng lá và cả các thảm thực vật mang tính cận nhiệt đới ở các khu vực núi cao
Theo ước tính của các nhà thực vật Việt Nam, nước ta có khoảng 12.000 loài, trong đó có khoảng 1/3 trên tổng số loài được nhân dân dùng làm thuốc Rất nhiều loài trong số đó từ xa xưa đến nay đã được sử dụng trong y học cổ truyền và
các mục đích khác phục vụ đời sống của con người như mật nhân Eurycoma longifolia, bạc hà Mentha arvensis, khổ qua Momordica charantia, ngũ da bì hương Acanthopanax trifoliatus, đương quy Angelica sinensis, sâm Ngọc Linh Panax vietnamensis, thìa canh Gymnema sylvestre,… đã trở nên rất quen thuộc Ngày nay,
thế giới đang phải đối mặt với hàng loạt căn bệnh nguy hiểm, như: HIV-AIDS, cúm
A H5N1, sốt rét, các căn bệnh liên quan đến nhiễm virus,… ngày một gia tăng Mặc dù khoa học ngày nay đã và đang gặt hái được nhiều tiến bộ mới, cải thiện đáng kể các điều kiện sống của con người nhưng chúng ta ngày càng phải đối phó với các căn bệnh, dịch bệnh mới diễn biến một cách phức tạp và là những mối đe dọa thường trực đối với sức khỏe
Ngoài sự phong phú về thành phần chủng loại, nguồn dược liệu Việt Nam còn có giá trị to lớn trong việc điều trị các căn bệnh khác nhau trong dân gian Các cây thuốc được sử dụng dưới hình thức độc vị hay phối hợp với nhau tạo nên các bài thuốc cổ phương, đang tồn tại phát triển đến ngày nay Ngoài ra, hàng trăm cây thuốc đã được khoa học y - dược hiện đại chứng minh về giá trị chữa bệnh của chúng Xu hướng đi sâu nghiên cứu các cây thuốc và động vật làm thuốc để tìm kiếm các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao nhằm sản xuất các loại thuốc
có giá trị cao phục vụ cuộc sống ngày càng được thế giới quan tâm
Ở một số nước châu Á và châu Phi, 80% dân số phụ thuộc vào y học cổ truyền trong việc chăm sóc sức khỏe cơ bản Thêm vào đó, ở nhiều nước phát triển, 70% đến 80% dân số đã sử dụng các cây thuốc hoặc chế phẩm của nó Các loài thảo mộc đã được sử dụng trong dân gian và được bổ sung bởi các nghiên cứu dược lý
Trang 15đã tạo ra nhiều loại thuốc Tây có nguồn gốc từ thực vật Trong vài thập kỉ qua, y học cổ truyền đã cung cấp cho thuốc Tây với hơn 40% tổng các loại thuốc Do đó, các nghiên cứu đã tập trung vào việc đánh giá khoa học của các loại thuốc truyền thống có nguồn gốc thực vật Trong số các loài thực vật kể trên, nhiều loài thuộc chi
Qua lâu (Trichosanthes) được trồng rộng rãi và nhiều loài mọc tự nhiên ở nước ta
và các nước trong khu vực Trong dân gian, một số loài thuộc chi Qua lâu được sử dụng làm rau ăn, một số loài được sử dụng làm thuốc chữa bệnh như: làm thuốc giải nhiệt, lợi tiểu, lợi sữa, giảm đường huyết hoặc chữa bệnh ngoài da, chữa bệnh đau đầu Nhằm mục đích nghiên cứu làm rõ thành phần hóa học và hoạt tính sinh học
của một số loài thuộc chi Qua lâu (Trichosanthes), tôi đã lựa chọn tên luận án:
‘‘Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của loài Trichosanthes baviensis Gagnep (Qua lâu Ba Vì), Trichosanthes anguina L (Dưa núi) và Trichosanthes kirilowii Maxim (Qua lâu nhân)”
Mục tiêu của luận án:
Xác định thành phần hóa học chủ yếu của ba loài T baviensis, T anguina và
T kirilowii ở Việt Nam
Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học
Nội dung luận án bao gồm:
1 Phân lập các hợp chất từ ba loài thuộc chi Trichosanthes (T baviensis, T anguina và T kirilowii) bằng các phương pháp sắc ký
2 Xác định cấu trúc hoá học các hợp chất phân lập được bằng các phương pháp hoá lý
3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các chất phân lập được
Trang 16CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN
1.1 Giới thiệu về chi Trichosanthes
1.1.1 Đặc điểm thực vật của chi Trichosanthes
Phân loại thực vật học của chi Trichosanthes được xác định như sau:
Chi Qua lâu (Trichosanthes) là một chi lớn trong họ Bầu bí (Cucurbitaceae),
bao gồm khoảng 100 loài và đang được các nhà khoa học trên thế giới rất quan tâm Theo thống kê và mô tả sơ bộ của GS Phạm Hoàng Hộ, Việt Nam có khoảng 12
loài Trichosanthes trong đó có 2 loài đặc hữu của Việt Nam là qua lâu Ba Vì (T baviensis) và qua lâu Pierre (T pierrei) [1]
Bảng 1.1 Danh sách các loài thuộc chi Trichosanthes ở Việt Nam
STT Tên thường
gọi
1 Mướp tây Trichosanthes anguina L Hà Giang, Khánh Hoà,
Đồng Nai, Hồ Chí Minh
2 Qua lâu Ba Vì Trichosanthes baviensis
Gagnep
Ba Vì (Hà Nội)
3 Dưa núi Trichosanthes cucumerina L Đồng Nai đến An Giang
4 Qua lâu nhiều
Trang 179 Qua lâu pierre Trichosanthes pierrei
Các loài thuộc chi Trichosanthes L hầu hết là những cây sống lâu năm trừ một số ít là cây hàng năm như loài T cucumerina
Các loài thuộc chi Trichosanthes L đều là những loài thân thảo, leo quấn
Trên thân thường có khía sọc, có thể có lông hoặc không lông Hơi rỗng phía trong lõi
Lá: Cuống lá thường có lông măng, đôi khi nhẵn (T truncata; T
tricuspidata; T pedata) Lá đơn; phiến lá nguyên (T baviensis; T truncata) hoặc phân 3-7 thùy, trong đó có loài T pedata Merr & Chun có lá xẻ sâu đến tận gốc tạo
thành dạng lá kép giả, với 3-5 lá phụ; các thùy lá thường hình trứng, thuôn dài hay hình mác Phiến lá thường mỏng, bề mặt nhẵn hoặc có lông tơ hay lông măng Mép
lá thường có răng cưa nhọn, hiếm khi nguyên Phiến lá của một số loài có nhiều
điểm trắng nhỏ, có thể ở cả gân lá (T rubriflos; T tricuspidata; T pedata); một số loài lá có điểm tuyến (T tricuspidata; T rubriflos) Tua cuốn thường 2 – 5 tua, ít
khi đơn độc
1 T baviensis; 2 T truncata; 3 T pilosa; 4-5 T tricuspidata;
6 T cucumerina; 7 T rubriflos; 8 T pedata [1]
Hình 1.1 Các dạng lá của chi Trichosanthes
Trang 18Cụm hoa: Cây thường mang hoa phân tính khác gốc, riêng loài T
cucumerina có hoa phân tính cùng gốc
Cụm hoa đực: Hoa đực thường mọc thành cụm, thường ở đỉnh cành ít khi ở nách lá
Có cuống dài Hoa đực nở từng hoa một đến khi hết, ít khi nở nhiều hoa trên cùng
một cụm Lá bắc hình trứng (T rubriflos, T tricuspidata) hoặc hình thoi (T pedata); kích thước thường từ 1-6,5 cm, hiếm khi là rất nhỏ hoặc tiêu biến (T cucumerina); ống đài hình trụ, thường xòe ra ở đỉnh, chia 5 thùy, nguyên hoặc có
răng cưa hoặc có khía; tràng phân 5 thùy, thường có tua dài ở mép; nhị 3, đính trên ống đài; chỉ nhị rất ngắn, tự do; bao phấn hợp sinh
1 T rubriflos (màu đỏ hồng) 2 T villosa (màu trắng) [1]
Hình 1.2 Hoa của một số loài thuộc chi Trichosanthes Hoa cái: Mọc đơn độc; đài và tràng giống với hoa đực; bầu hạ, hình trứng hay hình
thuôn dài, 1 ô với 3 giá noãn; noãn nhiều; đầu nhụy 3 thùy, các thùy nguyên hoặc chẻ đôi
1 Hình trứng (T truncata); 2-3 Hình gần cầu, có núm (2 T tricuspidata; 3.T pedata); 4 Hình cầu (T vilosa); 5 Hình trứng thuôn dài (T pilosa); 6 Quả rất dài (T cucumerina var anguina) [1]
Hình 1.3 Quả của một số loài thuộc chi Trichosanthes
Quả: Quả hình cầu hoặc có dạng gần cầu (T villosa; T pedata, T tricuspidata),
hình trứng (T truncata, T pilosa) hay dạng quả dài (T cucumerina) Quả chín màu đỏ (T rubriflos, T villosa, T tricuspidata), màu vàng đến đỏ cam (T pedata) hoặc
có sọc (T baviensis; T cucumerina) Quả dạng thịt, vỏ quả nhẵn, mịn, hạt nhiều
Trang 19Hạt: Hạt được bao bởi thịt quả, nhiều hình dạng khác nhau Hạt thường 1 ô, hoặc 3
ô với 2 ô phụ rỗng (T baviensis; T pilosa); hạt dẹt (T rubriflos, T vilosa, T tricuspidata; T baviensis) hoặc phồng (T pilosa, T pedata) Vỏ hạt nhẵn hoặc xù
xì, màu nâu vàng đến nâu đất Mép hạt nhẵn hoặc đôi khi uốn lượn (T cucumerina)
Một số có gờ nổi sát mép hạt hoặc ở giữa hạt [1]
1 Hạt thuôn dài (T rubriflos); 2 Hạt hình trứng-tam giác (T tricuspidata); 3 Hạt hình trứng phồng (T pedata); 4-5 Hạt hình tam giác, có 2 đường gân nổi (4 T baviensis; 5 T pilosa); 6 Hạt
gần hình trứng (T truncata) [1]
Hình 1.4 Các dạng hạt trong chi Trichosanthes
1.1.2 Tình hình sử dụng trong y học cổ truyền các loài thuộc chi Trichosanthes
Một số loài trong chi Qua lâu (T ovigera Blume, T cucumerina L.) đã được
trồng rộng rãi và sử dụng quả làm rau ăn Nhiều loài được dùng làm thuốc giải nhiệt, lợi tiểu, lợi sữa, giảm đường huyết hoặc chữa bệnh ngoài da như Qua lâu
nhân (T kirilowii Maxim.), Dây đỏ mỏ (T villosa Blume) Nước ép từ quả của loài
T borneensis Cogn được dùng để chữa bệnh đau đầu Quả Dưa núi (T cucumerina
L., mọc hoang dại) được sử dụng làm thuốc tẩy và xổ giun Củ của loài Qua lâu
trứng (T ovigera Blume) được coi là vị thuốc có hiệu quả đối với các bệnh kí sinh
trùng đường ruột
Trang 20Tại Bắc Kạn, Hoà Bình rễ củ của Qua lâu được sử dụng để phá thai Củ Qua lâu sau khi cạo sạch vỏ, phơi khô, đồng bào tại Sa Pa sử dụng để điều trị một số bệnh liên quan tới thần kinh Thân và lá Qua lâu được người dân tại Thừa Thiên -Huế, Hoà Bình dùng để điều trị bệnh đau dạ dày hoặc hòa giã nhỏ, trộn lẫn với nước tiểu chữa chứng đau lưng (thân, lá, rễ đem giã nhỏ, trộn với nước tiểu của trẻ
em, gói trong lá chuối và dùng bếp than để xông lên chỗ lưng bị đau) Y học cổ truyển Việt Nam sử dụng rễ Qua lâu chữa trị bệnh vàng da ở trẻ em, bệnh người bị đen xạm, chữa tắc sữa, viêm tuyến vú Rễ Qua lâu kết hợp với một số vị thuốc khác như Sài hồ, Hạ khô thảo, Huyền sâm để chữa viêm màng phổi do lao Qua lâu nhân cùng với củ Hẹ, nhân hạt Đào, Xuyên khung, Sinh địa, Đương quy, Hồng hoa, Hà thủ ô, Trinh nữ, Thiên ma, Câu đằng dùng để chữa những cơn đau vùng tim, chữa
xơ cứng động mạch vành hoặc sau nhồi máu cơ tim Rễ Qua lâu kết hợp với Thục địa, Hoài sơn, Kỷ tử, Thạch hộc chữa đái tháo đường Cùng với Quế chi, Cam thảo, Xuyên tiêu, Thảo quả, Qua lâu được sử dụng để điều trị sốt rét Kết hợp với Trầm hương, Uất kim, Xích thược, Hẹ, Xuyên quy vĩ, sắc uống cùng Qua lâu dùng chữa đau thắt ngực rất có hiệu quả Đồng bào Cà Tu ở Quảng Nam đôi khi sử dụng ngọn non của một số loài Qua lâu luộc ăn thay rau
Tại Khánh Hoà, Qua lâu được phối hợp với một số vị thuốc khác để chữa trị bệnh cúm gà và sử dụng cho các chủ chăn nuôi tiếp xúc hàng ngày với gia cầm rất
có hiệu quả Thuốc được tán thành bột mịn
Trong những năm gần đây, ở nhiều nước trên thế giới và các nước trong khu vực, đặc biệt là Nhật Bản, xuất hiện nhiều công trình công bố về các kết quả nghiên cứu tách chiết và thử nghiệm tác dụng dược lý của các hoạt chất tự nhiên từ một số
loài trong chi Trichosanthes
1.1.3 Tình hình nghiên cứu về thành phần hóa học của chi Trichosanthes
Khảo sát về thành phần hóa học trong mối liên hệ với hoạt động sinh - dược
học của các loài thuộc chi Trichosansthes cũng đã được nhiều nhà khoa học trên thế
giới tập trung nghiên cứu Trong những năm gần đây, cũng đã có nhiều nghiên cứu
về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học một số loài thuộc chi Trichosanthes
Theo những công trình đã được công bố cho thấy, thành phần hóa học của chi
Trichosanthes, bao gồm các nhóm chất chính như: triterpenoid, steroid, flavonoid,
lignan, các hợp chất có nitơ và một số hợp chất khác Trong đó lớp chất
Trang 21triterpenoid, đặc biệt là các hợp chất khung cucurbitane là các hợp chất khá phổ
biến trong các loài thuộc chi Trichosanthes đã được nghiên cứu Các nghiên cứu thành phần hóa học chủ yếu tập trung ở 8 loài: T anguina, T cucumerina, T cucumeroides, T dioica, T fructus, T kirilowii, , T pericarpium và T tricuspidata
1.1.3.1 Các hợp chất triterpenoid
Theo các công trình đã công bố, có 64 hợp chất triterpenoid 1-64 đã phân lập
được từ bốn loài T cucumerina, T kirilowii, T tricuspidata, và T anguina (Xem
bảng và hình dưới)
Bảng 1.2 Các hợp chất triterpenoid 1-64 từ chi Trichosanthes
1 7-oxo-10α-cucurbitadienol Hạt T kirilowii [2]
2 10α-cucurbitadienol Hạt T kirilowii [2]
3 23,24-dihydrocucurbitacin D Quả T cucumerina [3]
5 23,24-dihydrocucurbitacin B Quả T cucumerina [3]
7 isocucurbitacin B Quả T cucumerina [3, 4]
8 23,24-dihydroisocucurbitacin B Quả T cucumerina [3]
9 23,24-dihydrocucurbitacin E Quả T cucumerina [3]
12 cyclotricuspidosideA Lá, thân T tricuspidata [6]
13 cyclotricuspidoside B Lá, thân T tricuspidata [6]
14 cyclotricuspidoside C Lá, thân T tricuspidata [6]
Trang 22KH Tên chất Bộ phận Loài TLTK
32 25-O-acetyl-bryoamaride Quả T tricuspidata [7]
34 2-O-glucocucurbitacin J Quả T tricuspidata [8]
43 7-oxodihydrokarounidiol Hạt T kirilowii [12-15]
44 dihydroisocucurbitacin B Rễ T cucumerina [16]
46 5-dehydrokarounidiol Hạt T kirilowii [14, 17]
49 7-oxoisomultiflorenol Hạt T kirilowii [19]
50
7-oxo-8β-D:C-friedo-olean-9(11)-ene-3α,29-diol
Hạt T kirilowii [19]
Trang 23KH Tên chất Bộ phận Loài TLTK
57 kaorunidiol 3-benzoate Hạt T kirilowii [14]
58 7,11-dioxodihydrokarounidiol Hạt T cucumerina [15]
Trang 271.1.3.2 Các hợp chất steroid
Theo các công trình đã công bố, có 26 hợp chất steroid 65-90 đã phân lập
được từ bốn loài T dioica, T kirilowii, T rosthornii và T tricuspidata (Xem bảng và
hình dưới )
Bảng 1.3 Các hợp chất steroid 65-90 từ chi Trichosanthes
75 porifesta-5,25-diene-3β,4β-diol Hạt T kirilowii [25]
78 stigmasta-7,22-dien-3β-ol Lá, thân T cucumeroides [26]
79 stigmastane-3β,6α-diol Lá, thân T cucumeroides [26]
Trang 28KH Tên chất Bộ phận Loài TLTK
80
(3α,5α,22E)-24-ethylcholesta-7,22,25(27)-trien-3-ol
Hạt T kirilowii [21]
85 3-O-β-D-glucopyranosyl-α-spinosterol Quả T kirilowii [10]
86 3-O-β-D-glucopyranosyl-stigmasterol Quả T kirilowii [10]
Trang 29Hình 1.5 Cấu trúc của các steroid 65-90
1.1.3.3 Các hợp chất flavonoid
Theo các công trình đã công bố, có 20 hợp chất flavonoid 91-110 đã phân lập
được từ 2 loài T kirilowii và T pericarpium (xem Bảng và hình dưới)
Bảng 1.4 Các hợp chất flavonoid 91-110 từ chi Trichosanthes
100 diosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside Vỏ T kirilowii [32]
Trang 30KH Tên chất Bộ phận Loài TLTK
104
2-(4-hdroxy-3-methoxyphenyl)-3-oxo-1-propanol
105 quercetin-3-O-β-D-glucoside Quả T pericarpium [33]
106 chrvsoeriol-7-O-β-D-glucoside Quả T pericarpium [33]
107 luteolin-7-O-β-D-glucoside Quả T pericarpium [33]
Trang 31Hình 1.6 Cấu trúc các hợp chất flavonoid 91-109
1.1.3.4 Các hợp chất lignan
Theo các công trình đã công bố, có 5 hợp chất lignan 110-114 đã phân lập
được từ loài T kirilowii (Xem bảng và hình dưới)
Bảng 1.5 Các hợp chất lignan 110-114 từ chi Trichosanthes
111 (–)-secoisolariciresinol Hạt T kirilowii [34]
112 1,4-O-diferuloylsecoisolariciresinol Hạt T kirilowii [34]
Hình 1.7 Cấu trúc các hợp chất lignan 110-114
1.1.3.5 Các hợp chất có chứa nitơ
Theo các công trình đã công bố, có 17 hợp chất có chứa nitơ 115-131 đã
phân lập được từ loài T kirilowii (Xem bảng và hình dưới)
Trang 32Bảng 1.6 Các hợp chất có chứa nitơ 115-131 từ chi Trichosanthes
Trang 33Hình 1.8 Cấu trúc các hợp chất có chứa nitơ 115-131
Qua tổng quan tài liệu về thành phần hóa học các loài thuộc chi
Trichosanthes cho thấy thành phần hóa học của các loài thuộc chi Trichosanthes rất
đa dạng với hơn 130 hợp chất, trong đó chủ yếu là các chất mới, đặc trưng cho chi
Trichosanthes Bên cạnh các lớp chất quen thuộc như các hợp chất steroid,
flavonoid, lignan, các hợp chất có nitơ, còn xuất hiện lớp chất có tính đặc trưng cho
chi Trichosanthes như lớp chất triterpenoid, đặc biệt là các hợp chất khung cucurbitane là các hợp chất phổ biến trong các loài thuộc chi Trichosanthes đã được
nghiên cứu Hơn nữa, mỗi lớp chất chứa đựng nhiều đặc điểm hay và ý nghĩa về mặt cấu trúc do xuất hiện nhiều trung tâm lập thể, nhiều cấu dạng và sự đa dạng các
loại nhóm thế Do vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học của chi Trichosanthes
hứa hẹn mang lại nhiều thông tin quan trọng, đóng góp vào kho tàng tri thức về cấu trúc các hợp chất thiên nhiên nói riêng và hợp chất hữu cơ nói chung
1.1.4 Hoạt tính sinh học của chi Trichosanthes
Các nghiên cứu trên thế giới chủ yếu tập trung vào 8 loài thuộc chi
Trichosanthes và cho thấy các hợp chất phân lập từ các loài thuộc chi Trichosanthes
có hoạt tính mạnh Một số hoạt tính đáng quan tâm như gây độc tế bào ung thư,
Trang 34kháng viêm, kháng khuẩn, kháng nấm, chống oxy hoá …trong đó, nổi bật là hoạt tính gây độc tế bào ung thư với khả năng ức chế mạnh trên nhiều dòng tế bào ung thư khác nhau
1.1.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư
Hoạt tính sinh học của một số hợp chất được phân lập từ các loài thuộc chi
Trichosanthes có hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro trên các dòng tế bào ung
thư phổi (A-549), ung thư buồng trứng (SK-OV-3), ung thư da (SK-MEL-2), ung thư ruột kết (HCT-15), ung thư biểu mô (KB),
Năm 1994, theo nghiên cứu của Ryu và cộng sự, 8 hợp chất khung
cucurbitane: cucurbitacin B (4), 23,24-dihydrocucurbitacin B (5), isocucurbitacin B (7), 23,24-dihydroisocucurbitacin B (8), 23,24-dihydrocucurbitacin E (9),
cucurbitacin D (35), isocucurbitacin D (36), 3-epi-isocucurbitacin B (37) được đánh
giá hoạt tính gây độc tế bào trên một số dòng tế bào ung thư người: A-549,
SK-OV-3, SK-MEL-2, XF-498 và HCT-15 Kết quả của nghiên cứu cho thấy, tất cả các hợp chất này đều thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trên các tế bào ung thư thử nghiệm
Đặc biệt, các hợp chất 4, 7, 35 và 36 thể hiện hoạt tính mạnh hơn chất đối chứng,
adriamycin [4]
Năm 1995, từ rễ của loài T kirilowii, Kondo và cộng sự đã phân lập được
acid bryonolic (53) Hợp chất này được phát hiện có tác dụng gây độc tế bào ung
thư bạch cầu HL-60 in vitro, và không gây chết các tế bào thường [20]
Năm 1996, nhóm nghiên cứu của Ricky đã phân lập được một protein bất
hoạt mới α-kirilowin từ hạt của loài T kirilowii và protein này có khả năng ức chế
sự tổng hợp protein, ức chế sự tổng hợp [3H]-thymidine trong tế bào u ác tính,
tương tự β-kirilowin [36].
Theo nghiên cứu của Akahasi và cộng sự, 11 hợp chất triterpenoid:
7-oxodihydrokarounidiol (43), karounidiol (45), 5-dehydrokarounidiol (46), isokarounidiol (47), 3-epikarounidiol (48), 3-epibryonolol (51), acid bryonolic (53), multiflorenol (54), isomultiflorenol (55), acid bryononic (56) và kaorunidiol 3-
benzoate (57) được phân lập từ hạt loài T kirilowii đã được đánh giá khả năng ức
chế chống lại sự kích hoạt EBV-EA in vitro do TPA gây ra ở tế bào Raji Kết quả
nghiên cứu cho thấy, tất cả các hợp chất nghiên cứu đều thể hiện khả năng ức chế hoạt hóa EBV-EA mạnh hơn so với chất đối chứng dương acid glycyrrhetic, một
Trang 35promoter chống ung thư tự nhiên được biết đến Trong đó, các hợp chất 45, 46, 48
và 55 thể hiện khả năng ức chế hoạt hóa EBV-EA mạnh nhất Từ kết quả hoạt tính
của các hợp chất gợi ý mối quan hệ giữa cấu trúc-hoạt tính của các multiflorane như sau: sự benzoyl hóa nhóm hydroxy tại C-3 và sự có mặt của nhóm oxo ở C-7 làm giảm đáng kể hoạt động của hợp chất Thay thế nhóm methyl (C-29) tại C-20 bởi nhóm hydroxymethylene hydroxy có ít ảnh hưởng đến hoạt động trong khi thay thế bởi nhóm aldehyde tăng cường hoạt động Sự carboxyl hóa của nhóm methyl C-29
và sự acetyl hóa của nhóm methyl hydroxy ở C-20 dẫn đến giảm hoạt động Quá trình este hóa bằng nhóm benzoyl vào nhóm hydroxy methylene làm giảm đáng kể
hoạt động như đã quan sát thấy trong nhóm hydroxy ở C-3 Hợp chất 45 còn thể
hiện khả năng ức chế ung thư biểu mô tế bào thận (UO-31 với IC50 là 1,98 μM; IC50
là 6,63 μM), bệnh bạch cầu (CCRF-CEM với giá trị IC50 1,63 μM; SR với giá trị
IC50 1,75 μM), ung thư phổi (A-549 với giá trị IC50 1,76 μM; NCI-H460 với giá trị
IC50 1,91 μM, NCI-H522 với giá trị IC50 3,56 μM), ung thư đại tràng (HCT-116 với giá trị IC50 2,01 μM), ung thư thần kinh trung ương (U251 với giá trị IC50 2,02 μM), ung thư buồng trứng (OVCAR-3 với giá trị IC50 1,79 μM; OVCAR-6 với giá trị
IC50 2,06 μM) và ung thư thận (SN12C với giá trị IC50 2,36 μM) [14]
Theo nghiên cứu của nhóm tác giả Oh và cộng sự, từ rễ của loài T kirilowii
đã phân lập được 2 hợp chất triterpene khung cucurbitane:
23,24-dihydrocucurbitacin D (3) và cucurbitacin D (35) Hai hợp chất này thể hiện khả
năng ức chế hoạt động của tyrosinase với IC50 lần lượt là 6,70 μM và 0,18 μM và tổng hợp melanin với IC50 lần lượt là 7,50 μM và 0,16 μM trong tế bào u ác tính B16/F10 [37]
Năm 2007, từ cặn chiết hạt của loài T kirilowii, Rahman và Moon đã phân
lập được 3 hợp chất, trong đó có hợp chất mới isoetin 5'-methyl ether (93) cùng 2 hợp chất cũ 7-hydroxychromone (91) và tricin (92) Trong số các hợp chất phân lập được, hợp chất 93 đã thể hoạt tính gây độc tế bào trên các dòng ung thư phổi A-549,
ung thư da ác tính SK-Mel-2 và ung thư da ác tính ở chuột B16F1 với giá trị IC50
lần lượt là 0,92, 8,00, 7,23 µg/mL [29]
Theo nghiên cứu của Shin và cộng sự, cặn chiết methanol của rễ loài T kirilowii thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trên dòng ung thư gan người HepG2 với
Trang 36giá trị IC50 là 25 μg/mL Mặt khác cơ chế gây độc tế bào ung thư của rễ loài T kirilowii đã được chứng minh là có tác dụng ức chế sự trùng hợp của tubulin thông
qua việc giữ các tế bào trong vòng tuần hoàn tại pha G2/M của dòng tế bào ung thư gan [38]
Năm 2008, Youn và cộng sự đã tìm thấy cặn chiết methanol của hạt loài T kirilowii thể hiện tác dụng ức chế sự kích hoạt yếu tố nhân NF-κB [39]
Cũng trong năm 2008, theo nghiên cứu của Moon và cộng sự từ cặn chiết hạt
của loài T kirilowii, đã phân lập được một chất mới: hanutarin (110) và 4 hợp chất
đã biết: secoisolariciresinol (111), 1,4-O-diferuloylsecoisolariciresinol (112),
(-)-pinoresinol (113) và 4-keto(-)-pinoresinol (114) Hai hợp chất 110 và 111 đã thể hiện
hoạt tính gây độc tế bào mạnh trên các dòng tế bào ung thư người: ung thư biểu mô phổi A-549, u ác tính SK-Mel-2 và ung thư da trên chuột B16F1 với giá trị IC50
trong khoảng 3-13 μg/mL [34]
Năm 2009, một nhóm các nhà khoa học Nhật Bản đã tách được cucurbitacin
D (35) từ loài T kirilowii và chứng minh hợp chất 35 thể hiện hoạt tính gây độc tế
bào thông qua gây chết tế bào theo chương trình do kích hoạt caspase-3 và phosphoryl hóa JNK (enzym c-Jun N-terminal kinase) trong tế bào ung thư biểu mô gan Hep3B[40]
Theo công bố của nhóm nghiên cứu Kongtun và cộng sự, từ rễ của loài T
kirilowii đã phân lập được bốn hợp chất: cucurbitacin B (4), dihydrocucurbitacin B
(5), bryonolic acid (19), và bryononic acid (21) Hai hợp chất 4, 19, cặn chiết rễ và
nước ép của quả T kirilowii được đánh giá hoạt tính gây độc tế bào trên các dòng tế
bào ung thư người: ung thư phổi (A-549 và SK-LU-1), ung thư vú (MCF-7, T47D, MDA-MB-435 và SR-BR-3) và ung thư ruột kết (Caco-2) Kết quả nghiên cứu cho
thấy, cặn chiết rễ của loài T kirilowii thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trên 3 dòng
tế bào ung thư vú (MCF-7, T47D, MDA-MB-435), dòng tế bào ung thư phổi
(A-549) yếu hơn hợp chất 19 với giá tri IC50 lần lượt là 267; 316; 140; 106 L/mL so với 121; 124; 90; 100 L/mL Nước ép của quả thể hiện hoạt tính yếu hơn hợp chất
4 trên 4 dòng tế bào ung thư vú (SR-BR-3, MCF-7, T47D và MDA-MB-435), dòng
tế bào ung thư phổi (A-549) và ung thư ruột kết (Caco-2) với giá tri IC50 lần lượt là 131; 375; 249; 156; 141; 101 so với 73; 35; 60; 26; 41; 1,5 [16]
Trang 37Theo nghiên cứu năm 2012 của nhóm tác giả Dakeng, hợp chất cucurbitacin
B (4) thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trên các dòng tế bào ung thư vú SR-BR-3 và
MCF-7 với giá trị IC50 lần lượt là 4,60 và 88,75 μg/mL [41]
Năm 2014, theo nghiên cứu của Ma và cộng sự, hợp chất cucurbitacin B (4)
có khả năng ức chế mạnh chống lại sự kích hoạt HIF-1 gây ra bởi sự thiếu oxy trong các dòng tế bào ung thư người [42]
1.1.4.2 Hoạt tính kháng viêm
Năm 1994, Akihisa và các cộng sự đã công bố về hoạt tính kháng viêm của
3-epikarounidiol (48), 7-oxoisomultiflorenol (49),
7-oxo-8β-D:C-friedo-olean-9(11)-ene-3α,29-diol (50), 3-epibryonolol (51) và bryonolol (52), các hợp chất này
đều thể hiện hoạt tính kháng viêm rất mạnh với giá trị IC50 trong khoảng 0,2-0,6 mg/tai; gây viêm bởi TPA (1μg) [19]
Tiếp đó, Akihisa và các cộng sự đã nghiên cứu thấy hợp chất
7-oxo-10α-cucurbitadienol (1) đươc phân lập từ loài T kirilowii đã thể hiện hoạt tính kháng
viêm rất mạnh trên chuột với giá trị IC50 trong khoảng 0,4-0,7 mg/tai với tác nhân gây viêm là TPA với nồng độ 1μg/tai [2]
Năm 1996, trong một nghiên cứu về khả năng kháng viêm của loài T kirilowii, Ozaki và các cộng sự đã phát hiện ra cặn chiết của quả và lá của loài này
có tác dụng kháng viêm mạnh [43]
Năm 2001, trong một nghiên cứu của một nhóm nhà khoa học Trung Quốc
cho thấy trichosanthin, một protein bất hoạt ribosome từ T kirilowii có khả năng làm tăng đại thực bào interleukin-10, làm giảm interleukin-12 và sự tiết TNF-α [44]
Năm 2009, trong một nghiên cứu của các nhà khoa học Đài Loan cho thấy
phân đoạn n-hexane, phân đoạn chloroform và phân đoạn ethyl acetate của vỏ quả
T kirilowii có khả năng kháng khuẩn cao với giá trị MIC trung bình là 1,9 mg/mL
Các thành phần kháng khuẩn chính thu được từ vỏ quả của loài này có tiềm năng ứng dụng tốt trong việc sử dụng như thuốc kháng sinh tự nhiên [45]
Năm 2010, một nhóm nhà khoa học Mỹ đã nghiên cứu loài T cucumerina,
một trong những cây thuốc được sử dụng phổ biến ở Sri Lanka, loài này thường được sử dụng để điều trị bệnh viêm, kết quả nghiên cứu cho thấy cặn chiết nước nóng của loài này đã thể hiện khả năng ức chế mạnh tương đương indomethacin tại
Trang 38nồng độ 750 mg/kg sau khoảng thời gian 5 h, gây viêm trên chân chuột bằng carrageenan [46]
1.1.4.3 Tác dụng chống oxy hóa
Năm 2007, trong một nghiên cứu của Jang và các cộng sự cho thấy chất
1-C-(p-hydroxyphenyl)-glycerol từ T kirilowii thể hiện hoạt tính chống oxy hóa mạnh
bằng phương pháp gốc tự do 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) với giá trị IC50
là 56,0 ppm [47]
Năm 2011, nhóm nghiên cứu của Alam cho biết phân đoạn ethyl acetate của
quả T dioica thể hiện khả năng thu dọn gốc tự do DPPH mạnh với giá trị IC50 là 12,32 μg/mL [48] Theo nghiên cứu của nhóm tác giả Arawwawala cho thấy: cặn
chiết nước nóng và cặn chiết ethanol của thân lá của loài T cucumerina thể hiện
hoạt tính chống oxy hóa mạnh trên cơ thể chuột [49] Năm 2013, nhóm nghiên cứu
của Saboo cho biết phân đoạn chloroform của T tricuspidata đã thể hiện hoạt tính
chống oxy hóa mạnh [50]
Trong năm 2017, theo nghiên cứu của Zou và cộng sự cho thấy các phân
đoạn nước, ethanol và dichloromethane của T fructus làm giảm quá trình oxy hóa
gốc tự do DPPH [51]
1.1.4.4 Tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm
Năm 2007, trong một nghiên cứu của Jang và cộng sự cho thấy chất hydroxyphenyl)-glycerol được phân lập từ rễ T kirilowii thể hiện khả năng ức chế mạnh sự tăng trưởng của 5 loại vi khuẩn (Bacillus cereus, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis và Vibrio parahaemolyticus) ở nồng độ 10 ppm Hợp chất này cũng trì hoãn sự phát triển của 3 vi khuẩn (Bacillus substilis, Staphylococcus aureus và Pseudomonas aeroginosa) ở nồng độ 25 ppm
1-C-(p-trong 60 h [47]
Năm 2013, nhóm nghiên cứu của Saboo cho biết phân đoạn chloroform của
T tricuspidata đã thể hiện hoạt tính kháng khuẩn và kháng nấm mạnh [50]
Như vậy, các nghiên cứu về hoạt tính sinh học của chi Trichosanthes cho
thấy các loài trong chi này thể hiện nhiều loại hoạt tính đa dạng như gây độc tế bào ung thư, chống oxy hóa, kháng viêm và kháng khuẩn Những kết quả này góp phần định hướng quan trọng trong việc tiến hành các nghiên cứu tiếp theo về hoạt tính
sinh học các loài Trichosanthes
Trang 391.1.5 Tình hình nghiên cứu về chi Trichosanthes ở Việt Nam
Theo các tài liệu đã công bố, chi Trichosanthes ở Việt Nam có 2 loài là T kirilowii và T tricuspidata đã được nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính
sinh học
Năm 2002, Lê Phương Mai và nhóm các nhà khoa học thuộc Viện Hóa học các hợp chất tự nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam; Trung tâm
nghiên cứu khoa học quốc gia Pháp đã phân lập được 2 hợp chất tricuspidatin (33)
và 2-O-glucocucurbitacin J (34) từ loài T tricuspidata ở Nghệ An, Việt nam 2 hợp
chất này được đánh giá hoạt tính gây độc tế bào trên dòng tế bào KB Kết quả
nghiên cứu cho thấy: hợp chất 33 thể hiện hoạt tính gây độc tế bào ung thư với giá
trị IC50 là 0,4 μM [8]
Năm 2010, từ cặn chiết methanol của hạt loài T kirilowii, Nguyễn Tiến Đạt
và các nhà khoa học Hàn Quốc đã phân lập được bốn hợp chất bao gồm
cucurbitacin B (4), 2(3H)-furanone (94), 6-(3-hydroxy-4-methoxystyryl)-4-methoxy-2H-pyran-2-one
(E)-3-(4-hydroxybenzylidene)-6-hydroxy-4-methoxybenzo-(95) và blumenol A Các hợp chất phân lập được thể hiện hoạt tính ức chế yếu tố
phiên mã cảm ứng giảm oxy (HIF) và yếu tố nhân (NF-κB) [30]
1.2 Giới thiệu về loài T baviensis, T anguina và T kirilowii
1.2.1 Loài T baviensis
Tên khoa học: Trichosanthes baviensis Gagnep
Tên thường gọi: Qua lâu Ba Vì
Loài T baviensis là cây thảo leo, thân mảnh, có cạnh Lá có phiến mỏng, hình trái xoan, hình tim rộng ở gốc, nhọn ở đầu, dài khoảng 7-14 cm, rộng 5-9 cm, mặt trên nhẵn, mặt dưới có lông ở trên các gân nhỏ; gân 5-7 tỏa hình bàn đạp; cuống lá dài 3-4 cm Tua cuốn chẻ 2 Cụm hoa đực thành ngù nhiều hoa, dài 2 cm; cuống hoa nhẵn, dài 10-15 mm; nụ hoa hình cầu; lá đài hình răng, cao 1 mm; cánh hoa hình dải nhọn, dài 17-20 mm, kể cả vòi; nhị 3 có chỉ nhị rời và bao phấn dính thành đầu [52]
Phân bố
Trang 40Loài T baviensis không ưa nắng, mọc dưới tán rừng lá rộng thường xanh, ở hẻm núi, trong các lùm bụi, trảng cỏ ở độ cao tới trên 600 m Loài T baviensis phân bố
ở Ba Vì, Hà Nội [52]
Công dụng
Toàn cây được dùng làm thuốc thanh nhiệt và lợi tiểu [52]
1.2.2 Loài T anguina
Tên khoa học: Trichosanthes anguina L
Tên thường gọi: Mướp hỗ, Mướp tây, Bí con rắn
Phân bố
Loài T anguinaphân bố ở Hà Giang, Khánh Hòa, Đồng Nai, Thành phố Hồ Chí Minh Ngoài ra còn có ở Ấn Độ, Trung Quốc, Triều Tiên, Nhật Bản và nhiều nước khác [52]
Tính vị, tác dụng
Quả có vị ngọt dịu, tính mát; có tác dụng thanh nhiệt, nhuận phế, chỉ khái tiêu đờm Rễ có tác dụng thanh nhiệt hóa đàm, tán kết tiêu thũng Rễ và lá có tác dụng chỉ tả sát trùng
Ở Philippin, quả được xem như có tác dụng tẩy xổ, trừ giun, gây nôn
Hạt có tính giải nhiệt, nhuận tràng [52]
Công dụng