LÊ THỊ HOÀNG ANH KHẢO sát QUÁ TRÌNH tạo VI NANG đa lớp CHỨA LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS và SACCHAROMYCES BOULARDII

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI T T Đ Ớ C NG N TR N TẠ N NG Lactobacillus acidophilus Saccharomyces boulardii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆ DƯỢC Ĩ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI T NG N MÃ SINH VIÊN: 1501009 T Đ Ớ C TR N TẠ N NG Lactobacillus acidophilus Saccharomyces boulardii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆ DƯỢC Ĩ Người hướng dẫn: G T Đàm Thanh Xuân DS Ngô N u n u nh nh Nơi thực hiện: Bộ môn Công Nghiệp Dược HÀ NỘI – 2020 Ờ C N Trong thời gian thực khóa luận tổ Vi sinh Kháng sinh- Bộ môn Công nghiệp Dược, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ thầy cô, bạn bè gia đình Với tất kính trọng lịng biết ơn, xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Đàm Thanh Xuân S Ng Ngu u h h ln tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tơi từ ngày thực khóa luận Bên cạnh đó, xin cảm ơn thầy cô giáo anh chị kĩ thuật viên Bộ môn Công Nghiệp Dược Viện Công nghệ Dược phẩm quốc gia giúp đỡ tạo điều kiện tốt suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu tồn thể thầy giáo Trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt kiến thức quý báu suốt năm học tập trường Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè ln động viên, ủng hộ tơi suốt q trình học tập sống Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Th g h D N ỤC NG D N ỤC N D N ỤC C C Đ T N ĐỒ T Ệ C T TẮT NĐ NG T NG U N 1.1 Đ TIC Đ iotic .2 i Lactobacillus acidophilus 1.2 Đ G .7 Đ 1.2.2 1.2.3 1.2.4 10 1.2.5 11 NG Đ T NG V P NG P P NG N U 13 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 13 2.1.1 Ch ng vi sinh vật 13 2.1.2 Hố chất, thi t b 2.1.3 C 13 ng s d ng nghiên c u .14 2.1.4 Các dung d ch s d ng nghiên c u .15 2.2 N 16 .16 ấ 2.3 P Á 16 U 16 t khu n 16 ô thu hỗn d ch t bào 17 2.3.2 17 ô 2.3.4 ô 19 x 2.3.5 nh hình ả ấu trúc vi nang 19 ả 2.3.6 x 2.3.7 20 ã 2.3.8 NG T UẢ V x nh s ng vi sinh vật 20 N U N 22 Ế 3.1 N 20 Đ A L ACIDOPHILUS VÀ S BOULARDII 23 ả 23 ả 29 3.2 KẾ Đ Đ ả VI NANG 39 39 ả -AC14 42 ả s ổ c vi nang nhân AC1 vi nang bao AC1- AC14 43 3.2.4 V cấu trúc vi nang 44 ả nang 45 3.2.6 K t theo dõi hàm m s ng VSV s ng sót c a vi nang trình bảo quản 48 NG V 4.1 KẾ 4.2 Đ Ậ T U NV Đ UẤT 50 50 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO .51 DANH MỤC B NG Bảng Bảng 2.1 Các nguyên li u s d ng nghiên c u 13 Bảng 2.2 Các thi t b dùng nghiên c u 14 Bảng 3.1 Công th c bào ch vi nang nhân ch a L acidophilus 22 Bảng 3.2 Công th c bao vi nang v i hỗn d ch bao ch a S boulardii 23 Bảng ả Bảng 3.4 ả ô ô 25 ô ô ô ( = ) : 28 Bảng 3.5 ấ 33 ấ Bảng 3.6 37 Bảng 3.7 Hàm m c a vi nang nhân AC1 vi nang bao AC1-AC14 .42 Bảng bao AC1-AC14 48 Bảng 3.9 Hàm m s ng VSV s ng sót 1g vi nang bao th i gian bảo 48 DANH MỤC HÌNH N ĐỒ T ĐỒ ảnh nấm men Saccharomyces boulardii [20] Hình Hình 1.2 Hình ảnh vi khu n Lactobacillus acidophilus [14] .6 ảnh mô tả cấu trúc c a alginat [31] 10 Hình Hình 1.4: Cấu trúc hóa h c c a chitosan [19] .10 ả Hình ả ô 24 ả Hình ả Hình ả .26 ả Hình ( ) ( ) ( ) ( ) ô 28 ả Hình 25 ấ Hình 3.6 So sánh lo .30 ả ả ấ ô 30 ả Hình ổi tỷ l alginat (0,1%;0,25%; 0,5%; 0,75%, 1% hỗn d ch bao 32 Hình ả ả boulardi 34 ả Hình ổi tỷ l tinh b t hỗn d ch bao .36 Hình ả ả S boulardii 38 Hình 3.11 Hình ả -AC14 40 Hình ả -AC14 .41 Hình ả u cắt ngang b m ã x .42 Hình Đ th th hi ng kính phân b c vi nang nhân AC1 43 Hình Đ th th hi ng kính phân b c vi nang bao AC1-AC14 .43 Hình 3.16 Các hình ảnh m t cắt ngang vi na i kính hi n vi soi kính hi -AC14 n t quét .45 ảnh L acidophilus Hình S boularrdi 46 ả Hình hi bào VSV bám dính vi nang bao quan sát kính n t quét SEM 46 Hình ả L acidophilus vi nang nhân AC1 S boulardii -AC14 47 Hình 3.20 S ng VSV s ng sót hàm m c a vi nang q trình bảo quản .49 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CH ATCC VI T TẮT : Trung tâm giữ giống quốc gia Mỹ (American Type Culture Collection) CFU : Số đơn vị khuẩn lạc (Colony - Forming Units) ISAPP : Hiệp hội khoa học quốc tế Probiotics Prebiotics (International sciencific association Probiotics Prebiotics) kl/tt : Khối lượng/thể tích L a : Lactobacillus acidophilus S b : Saccharomyces boulardii SL : ố lượng MRS : Môi trường nuôi cấy vi khuẩn (de Man, Rogosa, Sharpe) MT : Môi trường TB : Tinh bột CT : ông thức VK : Vi khuẩn VSV : Vi sinh vật WHO : Tổ chức y tế giới (World Health Organization) P : Phút Đ T NĐ Probiotic từ lâu biết đến sử dụng phổ biến lĩnh vực Dược phẩm với tác dụng chủ yếu: ngăn ngừa nhiễm khuẩn đường ruột, cải thiện khả dung nạp lactose giúp trẻ tránh khỏi tình trạng đầy khó tiêu hấp thu lactose, tăng cường miễn dịch, cân hệ thống vi sinh vật đường ruột…… ngồi c n có tác dụng ph ng bệnh giúp chống ung thư, giảm cholesterol máu [1;25;30;40] Probiotic có sẵn chế phẩm sữa chua, mát…và bổ sung vào thực đơn hàng ngày, nhiên người tiêu dùng tìm đến sản phẩm men vi sinh để có để bổ sung lượng lớn probiotic vào thể gặp vấn đề sức khỏe đường tiêu hóa, đặc biệt trẻ nhỏ Chính chế phẩm từ probiotic thập kỷ gần nghiên cứu sâu rộng rãi ngành Dược phẩm Tuy nhiên thách thức đặt probiotic ổn định khơng hệ thống tiêu hóa pH, nhiệt độ, lực co bóp…mà c n bị tác động yếu tố mơi trường q trình sản xuất bảo quản: nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, vi sinh vật nhiễm … [18, 25] Vi nang hóa phương pháp gần sử dụng chủ yếu để hạn chế tác động bất lợi tới ổn định probiotic Kết hợp nghiên cứu trước vi nang sử dụng nguyên liệu alginat, tinh bột chitosan [7; 8; 13] xu hướng kết hợp nhiều chủng lợi khuẩn để gia tăng hiệu sản phẩm vi nang đa lớp: Lactobacillus, Bacillus, Bifidobacterium, Saccharomyces boulardii Lactobacillus acidophilus… vi sinh vật quan trọng hệ cân đường ruột, sử dụng chủ yếu chế phẩm probiotic Tiếp nối nghiên cứu vi nang probiotic, đề tài: “ hảo sát trình tạ vi g t b i us id hi us S h r m es b u rdii” thực với mục tiêu sau: - hảo sát số thơng số ảnh hưởng tới q trình tạo vi nang bao đa lớp chứa Lactobacillus acidophilus Saccharomyces boulardii - Đánh giá số đặc t nh vi nang bao A Hình ả h b m t vi AC1 tr h s i ổi ại g h h g h ả h b m t vi nang bao AC1-AC14 tr h s i ổi h g ại h ả h b m t vi g bao AC1-AC14 tr h hi vi iệ t quét h g ại Hình 3.12 Nh nh nh mặt vi nang nhân AC1 v nan ao AC1-AC14 x t Vi nang thu sau đông khô chất khơ, r n ch c, cầu ề mặt soi vi nang nhân AC1 vi nang bao AC1-AC14 k nh núp soi mịn, màu, chitosan bao phủ Vi nang sau bao có màu s c đậm vi nang nhân Điều l giải sau vi nang đa lớp bao phủ thêm lớp alginat-tinh bột bên nên màu s c đậm Hình ảnh chụp bề mặt vi nang qua kính hiển vi điện tử độ phóng đại 50X cho thấy bề mặt vi nang nhẵn, lớp chitosan phủ lên lớp áo bảo vệ vi nang VSV Hình ảnh 3.13 vi phẫu c t ngang bề mặt vi nang tươi nhuộm 41 xanh methylen, quan sát vi phẫu đánh giá bước đầu cấu trúc bề dày lớp bao lớp phủ CHI bên nh nh vi ph u cắt ngang b mặt v nan tư nhuộm xanh methylen mặt nh h ển v độ ph n đ 0X Hình 3.13 Có thể quan sát thấy rõ bề dày lớp bao lớp phủ chitosan bề mặt vi nang bao Bề dày lớp bao quan sát kính hiển vi độ phóng đại 100X đo khoảng 0,5 – 0,6 mm Lớp phủ chitosan mỏng, độ dày khoảng 0,01mm 3.2.2 s t hàm m vi Hàm ẩm vi nang nhân g nh vi gb -AC14 vi nang bao AC1-AC14 sau đông khô đo theo phương pháp mục 2.3.5 au đông khô, vi nang theo dõi hàm ẩm Các vi nang nhân vi nang bao bào chế mẻ M i mẻ lấy ngẫu nhiên 0,5g vi nang, đo hàm ẩm m i mẻ Từ suy hàm ẩm trung bình mẻ thể b ng 3.7 đây: B ng 3.7 Hàm ẩm vi nang nhân AC1 vi nang bao AC1-AC14 o n àm ẩm (%) vi nang Vi nang nhân AC1 Vi nang bao AC1-AC14 Mẻ 2,50 3,30 Mẻ 2,89 3,62 Mẻ 2,86 3,80 2,75 ± 0,17 3,57 ± 0,17 t o v nan Hàm ẩm trung bình 42 Nh n xét: Hàm ẩm vi nang nhân vi nang bao có giá trị từ 2-4% nhỏ 5%, đạt yêu cầu giới hạn hàm ẩm vi nang chứa probiotic sau đông khô Hàm ẩm vi nang nhân đạt 2,75 ± 0,17 (%) thấp so với vi nang bao đạt 3,57 ± 0,17 (%) u : Hàm ẩm vi nang bao lớn ph hợp với cơng bố trước có thêm lớp bao alginat chitosan có chất hút ẩm hơn, nên hàm ẩm cao tiếp xúc ngồi khơng kh [28] s t v th ổi h thước vi nang nhân AC1 vi nang bao AC1-AC14 Vi nang nhân vi nang bao đo đường k nh máy đo v ng vơ khuẩn Caliper độ phóng đại 2,5X), thực đo ngẫu nhiên 30 vi nang xác định giá trị trung bình, tỷ lệ phân bố m i loại Kết h nh 3.15 đây: Hình 3.14 Đồ thị thể đường kính phân bố Hình 3.15 Đồ thị thể đường kính phân bố 43 h thước vi nang nhân AC1 h thước vi nang bao AC1-AC14 Nhận xét: Vi nang nhân có k ch thước trung bình ~ 2,60 mm, vi nang bao có đường kính trung bình ~ 3,16 mm Mức độ gia tăng k ch thước vi nang bao so với vi nang nhân 17,84% Khoảng phân bố k ch thước vi nang nhân (từ 2,2 mm đến 2,8mm) hẹp so với vi nang bao (từ 2,6 mm đến 3,4 mm , đường biểu diễn mật độ xác suất loại vi nang tương đối cân đối, gần phân bố chuẩn Sự thay đổi k ch thước vi nang thể lớp màng bao bám ch c, ổn định bền vững Sự thay đổi k ch thước vi nang thể lớp màng bao làm gia tăng k ch thước vi nang nhân bao gồm lớp bao chứa S boulardii lớp phủ CHI 3.2.4 V cấu trúc vi nang ác vi nang sau đông khô quan sát kính lúp soi kính hiển vi điện tử quét với độ phóng đại khác Kết cấu trúc bên vi nang nhân vi nang bao AC1-AC14 thu hình nh 3.16 đây: A Hình ảnh c t lớp vi nang nhân AC1 kính hi n vi soi phóng ại 10X 44 B Hình ảnh m t c t vi nang bao AC1-AC14 kính hi n vi soi h g ại 10X C Hình ảnh m t c t vi nang bao AC1-AC14 kính hi n vi iện t u t h g ại 30X h ảnh tinh b t xe gi a khoang tr ng mạ g ưới alginat h g ại 0X Hình 3.16 Các hình nh mặt cắt ngang vi nan nhân C1 v nan ao C1C1 quan s t ưới kính hiển vi soi kính hiển v đ ện tử quét Hình ảnh c t lớp vi nang nhân vi nang bao kính hiển vi soi cho thấy, cấu trúc bên vi nang nhân vi nang bao tương đối đặc khít, nhiên cịn khoảng trống vi nang Có thể thấy tinh bột xen vào mạng lưới gel alginat tạo thành lớp đồng tâm dày đặc, thăng hoa nước q trình đơng khơ để lại khoảng trống lịng vi nang [19] Hình ảnh mẫu kính hiển vi điện tử quét SEM cho thấy cấu trúc vi nang có dạng phân lớp, lớp vỏ bên dày bao bọc lớp bên tạo nên vòng tròn gần đồng tâm hình 3.16) Một nghiên cứu vi nang cho hình ảnh tương tự phía lịng vi nang mạng lưới đan ch o gồm hạt T liên kết với tạo nên cấu trúc xốp bọt biển [10] Hình ảnh độ phóng đại 150X cho thấy lớp vi nang gồm hạt tinh bột liên kết với h ả h s g VSV thu tr a, Hình ảnh vi sinh vật 45 g vi nang h mà g b vi g Phá vi nang dung dich Na citrat theo phương pháp nêu mục 2.1.4: cho khoảng 510 hạt vi nang 10ml dung dịch Na citrat, l c đến vi nang rã hồn tồn, sau lấy dung dịch phá nang làm tiêu phiến k nh soi k nh hiển vi độ phóng đại 40X thu h nh nh sau: h ả h L acidophilus vi nang nhân AC1 thu tr h hi vi h g ại 00X Hình 3.17 nh nh L acidophilus S boularrdi thu đượ ph n đ 0X A Hình ảnh L acidophilus bám b m t hạt tinh b t nhân vi g h g ại 10.000X) Hình 3.18 h ả h S b u rdii mà g b -AC14 thu tr h hi vi g h g ại 00X nh nh nh h ển v độ B Hình ảnh S boulardii bám tinh b t tr g v vi gb AC1h g ại 5000X) t bào VSV bám dính vi nang bao quan sát kính hiển v đ ện tử quét SEM 46 Ở độ phóng đại 5000 - 10.000X thấy rõ tế bào VSV bám dính bề mặt hạt tinh bột Tế bào nấm men có hình bầu dục, s p xếp gần với giống chu i hạt quan sát r vi trường độ phóng đại 5000X Ở độ phóng đại lớn 10.000X thấy tế bào vi khuẩn L acidophilus có hình que, tập trung thành đám bề mặt hạt tinh bột Một số tác giả chứng minh tinh bột cung cấp vị trí bám ch c ch n ổn định cho tế bào lợi khuẩn [2] b S g VSV tr g vi g h v vi ố lượng V V vi nang nhân g vi nang bao AC1- 14 sau đông khô đánh giá phương pháp pha loãng liên tục để xác định số lượng V V theo phương pháp mục 2.3.7 Vi nang nhân vi nang bao bào chế mẻ khác au đông khô m i mẻ lấy ngẫu nhiên 1,0g vi nang, tiến hành pha loãng liên tục để xác định số lượng VSV L acidophilus S boulardii m i mẻ Trong tiến hành cấy khuẩn lạc L acidophilus môi trường thạch M , cấy khuẩn lạc S boulardii môi trường thạch nhân giống nấm men) Từ suy số lượng m i lồi V V trung bình mẻ Hình ảnh khuẩn lạc L acidophilus S boulardii thể h nh số lượng V V vi nang nhân và vi nang bao AC1-AC17 thể b ng 3.8 đây: A.Khu n lạc Lactobacillus acidophilus B.Khu n lạc Saccharomyces nuôi cấy sau thời gian 48h bourladii ni cấy sau thời gian 48h Hình 3.19 nh nh huẩn L acidophilus vi nang nhân AC1 S boulardii v v nang bao AC1-AC14 47 Đ i m Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Lactobacillus acidophilus hình trịn, màu tr ng đục, bìa diềm, k ch thước từ 1,5 – 3,5mm Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Saccharomyces bourladii hình trịn, màu tr ng, khuẩn lạc nổi, bóng, bìa ngun, k ch thước từ 0,5 – 1,5mm ố ượn L acidophilus tron v nan nhân C1 S boulardii v v nang bao AC1-AC14 B ng 3.8 o Số ượn o C n L acidophilus S boularrdii Mẻ 9,83 9,08 Mẻ 9,15 8,50 Mẻ 9,45 8,86 Trung bình 9,48 ± 0,24 8,81 ± 0,21 t o v nan Nh x t ượng V V bao gói vi nang đạt 109 CFU/g, số lượng L acidophilus vi nang nhân đạt ~ 9,5 log CFU/g, số lượng S boulardii đạt ~ 9,0 log CFU/g đáp ứng tốt yêu cầu chế phẩm probiotic 3.2.6 K t theo dõi hàm m s ng VSV s ng sót c a vi nang trình bảo quản Vi nang bao bảo quản nhiệt độ - 8oC ngăn đá tủ lạnh, sau thời gian m i tháng đo lại số lượng vi sinh vật hàm ẩm Kết thu trình bày b ng 3.9 đây: B ng 3.9 Hàm ẩm số ượng VSV sống sót 1g vi nang bao thời gian b o qu n đ u ện n n đ tủ nh Thờ t qu an n 30 60 90 120 L.a 9,91 9,75 9,55 9,31 9,10 S.b 8,95 8,83 8,69 8,58 8,37 2,31 2,38 2,43 2,52 2,71 Số ượng VSV (CFU/g) Hàm ẩm (%) 48 Hình 3.20 Số ượng VSV sống sót hàm ẩm vi nang trình b o qu n Theo dõi nhiệt độ bảo quản 8o , số lượng S boulardii, L acidophilus vi nang giảm dần theo thời gian bảo quản 120 ngày S boulardii giảm từ 8,95 log FU g xuống 8,37 log CFU/g L acidophilus giảm từ 9,91 log FU g xuống 9,10 log CFU/g Hàm ẩm tăng dần theo thời gian từ 2,31% lên 2,71 % Hàm ẩm cao, số lượng V V sống sót giảm Điều giải th ch chitosan alginat có t nh hút ẩm, nên hàm ẩm vi nang tăng lên Độ ẩm tăng cao làm V V trở lại trạng thái hoạt động, sinh trưởng, già hóa dần chết Tuy nhiên sau 120 ngày, lượng V V bao gói vi nang đạt 109 FU g hàm ẩm < 5% đạt yêu cầu chế phẩm probiotic ghi ứu tr ã thu s t uả h h hư s u - au đơng khơ vi nang bao có cấu trúc tương đối đặc kh t gồm mạng lưới lớp đồng tâm xếp dày đặc, lớp vỏ bên dày bao bọc lớp bên Vi nang bao có đường k nh trung bình 3,18 5% 0,02 mm Hàm ẩm vi nang bao nằm khoảng 3-4%, nhỏ ố lượng L acidophilus vi nang nhân đạt ~ 9,5 log CFU/g, ố lượng S boulardii đạt ~ 9,0 log CFU/g, đáp ứng yêu cẩu chế phẩm probiotic - au trình bảo quản 120 ngày nhiệt độ bảo quản, hàm ẩm vi nang tăng từ 2,31% lên 2,71% < 5% số lượng L acidophilus vi nang nhân giảm xuống 9,10 log CFU/g, số lượng S boulardii vỏ vi nang giảm xuống 8,37 log CFU/g, nhiên đạt yêu cầu chế phẩm probiotic 49 C Ư NG 4.1 T ẬN Đ X T t uận Sau thời gian nghiên cứu, đề tài đạt mục tiêu đề có số kết luận sau: Đã bào ch đượ vi nang ao đa ớp chứa L acidophilus S boulardii - Vi nang nhân AC1 chứa L acidophilus: H n dịch alginat (3%), tinh bột (10%) chứa sinh khối L acidophilus, CaCl2 (2%), chitosan (3%) có bổ sung chitosan q trình đơng tụ, thời gian đông tụ 30 phút - Lớp vỏ màng bao chứa S boulardii gồm: alginat (0,5%), tinh bột (10%), chứa sinh khối S boulardii, CaCl2, chitosan có tác động khuấy trộn 100v phút trình bao h n dịch V đặc tính vi nang đ nh h n n o vệ v nan - au đơng khơ vi nang bao có đường kính trung bình 3,18 ± 0,02 mm Hàm ẩm vi nang bao nằm khoảng 3-4%, nhỏ 5% đáp ứng yêu cầu vi nang probiotic - au đơng khơ vi nang bao có cấu trúc đặc lại dạng phân lớp, lớp vỏ bên dày bao bọc lớp bên ố lượng L acidophilus vi nang nhân đạt ~ 9,5 log CFU/g, số lượng S boulardii lớp vỏ vi nang đạt ~ 9,0 log CFU/g - au trình bảo quản 120 ngày nhiệt độ bảo quản, hàm ẩm vi nang < 5% số lượng V V đạt ~ 9,0 log CFU/g, đạt yêu cầu chế phẩm probiotic Đ xuất Bên cạnh kết đạt được, thời gian có hạn, đề tài xin đưa số đề xuất nhằm hoàn thiện nâng cao t nh ứng dụng thực tế sau: Tiếp tục nghiên cứu bào chế vi nang L acidophilus, S boulardii bao đa lớp kết hợp với số prebiotic khác Nghiên cứu khả bảo vệ giải phóng vi sinh vật vi nang bao điều kiện mơi trường tiêu hóa với đ ch tác dụng khác 50 TÀI LIỆU THAM KH O Ti ng Việt Nguyễn ân Dũng 2012 , Vi sinh vật h c, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội, tr 221-228 Đàm Thanh Xuân cộng 2016 , "Đ a tinh b t s a gầ n trình t o vi nang probiotic ch a vi khu n Lactobacillus acidophilus ATCC 4356", tạp ch Dược học, Bộ Y Tế, 56 (487), tr 8-11 Đàm Thanh Xuân cộng (2017), "Nghiên c u khả ảo v Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 c a vi nang alginat - tinh b t bao chitosan", Số 492, tạp ch dược học, 28, tr 10-11 Đàm Thanh Xuân cộng 2017 , "Đ ả ng c a tinh b t c tính c a vi nang alginat t " , ố 4, trang 2-6, tạp chí Nghiên cứu dược Thơng tin thuốc Liêu Mỹ Đông cộng (2015), "Nâng cao khả ng c a Lactobacillus casei vi gói kỹ thuật sấy phun v i hỗn h p prebiotic", tạp chí phát triển KH&CN, K3-2015, tr 65 – 74 Mai Hồng Xuân 2019 , Đ ả ô – Lactobacillus acidophilus, hóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thị Phương Thúy 2016 , Nghiên c u bào ch vi nang Lactobacillus ô acidophilus v i Alginat Chitosan bằ , luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Văn ong 2015 , M t s v bào ch hi i , NXB Y học, Hà Nội, tr 112-128 Nguyễn Văn ong 2016 , Vi nang, NXB Y học, Hà Nội, pp 13-28 10 Nguyễn Văn Toàn 2017 , Khảo sát ả ng c n m t s tính chất c a vi nang probiotic alginat tinh b t, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 11 Võ T Thúy Ngân (2018), Nghiên c u bào ch vi nang Lactobacillus acidophilus ng giải phóng t i tràng Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Ti g h 12 Anal Anil Kumar Singh Harjinder (2007),"Recent advances in microencapsulation of probiotic for industrial applications and targeted delivery", Trends in Food Science & Technology, 18(5), pp 240-251 13 Advances in Materials Science and Engineering, doi:10.1155/2018/6354924 (2018) “ Capsul 2018, 1–8 f f ” 14 Ansari Fereshteh, Pourjafar Hadi, Vahid Jodat, Javad Sahebi, and Amir Ataei 2017 , Efect of Eudragit 100 nanoparticles and alginate chitosan encapsulation on the viability of Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus rhamnosus 15 Capela, P., Hay, T.K.C., Shah, N.P (2006) “Eff f and microencapsulation on survival of probiotic organisms in yoghurt and freeze”, Food Res Int 39, 203–211 16 Champagne, C.P., Kailasapathy, K (2008) In: Garti, N (Ed.), Controlled Release Technologies for Targeted Nutrition Woodhead Publishing, CRC Press, Cambridge, UK, pp 344–369 17 Chan Eng-Seng al et (2011), "Effects of starch filler on the physical properties of lyophilized calcium–alginate beads and the viability of encapsulated cells", Carbohydrate Polymers, 83, pp 225-232 18 Chávarri, M., Marón, I 2010 Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions , International Journal of Food Microbiology, 142(1-2), 185–189 19 Cook, M T, V V (2011) Production and Evaluation of Dry Alginate-Chitosan Microcapsules as an enteric Delivery Vehicle for Probiotic acteria , Biomacromolecules, 12(7), 2834– 2840 20 Duongthingoc, D., George, P., Katopo, L., Gorczyca, E., & Kasapis, S (2013) Effect of whey protein agglomeration on spray dried microcapsules containing Saccharomyces boulardii”, Food Chemistry, 141(3), 1782–1788 21 F O hara M amp; Shanahan (2006) The gut flora as a forgotten organ EMBO Rep, 7, pp 688 – 693 22 FAO/WHO (2001), "Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with live lactic acid bacteria [Report of a joint FAO/WHO expert consultation]", pp 1-34 23 Fuller R Probiotic in human medicine (1989) J Appl Microbiol 66, pp 365– 378 24 Guan Kun Lee, Seppo Saiminen Handbook of probiotic and prebiotics (1999), pp 68 - 70, 441 – 445, 488 – 490 25 Guarner, F.; Schaafsma, G.J Probiotic (1998) Int J Food Microbiol 39, pp 237– 238 26 Heidebach T, Forst P, Kulozik U (2009) Microencapsulation of probiotic cells by means of rennet-gelation of milk proteins , Food Hydrocolloid., pp 23 - 27 27 Hill, C.; Guarner, F.; Reid, G et al (2014) Expert consensus document: The International Scientific Association for Probiotic and Prebiotics consensus statement on the scope and appropriate use of the term probiotic , Nat Rev Gastroenterol Hepatol., 11, 506–514 28 Huang HY, Tang YJ, King VA, Chou JW, Tsen JH (2015 Lactobacillus reuteri chitosan-calcium-alginate Properties of encapsulation under simulated gastrointestinal conditions , Int Microbiol pp 61-9 29 Jeanette Coriat B., Andrés J Azuero O.A (2017 eview of the iterature on the Use of Probiotics to Treat Irritable Bowel Syndrome and Inflammatory Bowel Disease , Asociaciones Colombianas de Gastroenterología, pp 136 - 145 30 Lilly, D.M.; Stillwell, R.H (1965) Probiotic: Growth promoting factors produced by microorganisms Science, 147, 747–748 31 Mokarram, , Mortazavi, , Najafi, M H., hahidi, F 2009 The influence of multi stage alginate coating on survivability of potential probiotic bacteria in simulated gastric and intestinal juice , Food Research International, 42(8), pp 1040–1045 32 Mokhtari, S., Jafari, S M., Khomeiri, M., Maghsoudlou, Y., & Ghorbani, M 2017 The cell wall compound of Saccharomyces cerevisiae as a novel wall material for encapsulation of probiotic , Food Research International, 96, 19–26 33 Muthukumarasamy, P., Allan-Wojtas, P., Holley, 2006 tability of Lactobacillus reuteri in different types of microcapsules , Journal of Food Science, 71, M20–M24 34 Oliveira, A C., Moretti, T S., Boschini, C., Baliero, J C C., Freitas, O., & Favaro-Trindade, 2007 tability of microencapsulated B lactis and L acidophilus by complex coacervation followed by spray drying Journal of Microencapsulation, 24(7), 685–693 35 Quintal Martínez, J P., Ruiz Ruiz, J C., & Segura Campos, M R (2018) elease inetic tudies of Stevia rebaudiana Capsules from Sodium Alginate and Inulin by Ionotropic Gelation Advances in Materials Science and Engineering, 1–8 doi:10.1155/2018/6354924 36 Sae-kang V., Suphantharika M (2006), "Influence of pH and xanthan gum addition on freeze-thaw stability of tapioca starch pastes", Carbohydrate Polymers, 65 (3), pp 371-380 37 Sebastián Domingo, J J (2017) Review of the role of probiotics in gastrointestinal diseases in adults Gastroenterología y Hepatología (English Edition), 40(6), 417–429 38 hori, 2017 Microencapsulation Improved Probiotic urvival During Gastric Transit HAYATI Journal of Biosciences, 24(1), 1–5 39 Sarao, L K., & Arora, M (2015) Probiotics, prebiotics, and microencapsulation: review Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 57(2), 344–371 40 Tal, Y., Nussinovitch A., Zvitov-Marabi 2008 Unique shape, surface and porosity of dried electrified alginate gels Food Hydrocolloids, 22, pp 364–372 Tài iệu NT N T 41 https://vi.wikipedia.org/wiki/Probiotic ... thực với mục tiêu sau: - hảo sát số thông số ảnh hưởng tới trình tạo vi nang bao đa lớp chứa Lactobacillus acidophilus Saccharomyces boulardii - Đánh giá số đặc t nh vi nang bao C Ư NG TỔNG N 1.1... 2.2.1.1 Tạ vi h vi g h g hứa L acidophilus S boulardii L acidophilus - Tạo vi nang nhân (alginat, tinh bột, a2+, HI chứa L acidophilus - hảo sát ảnh hưởng thơng số q trình tới đặc t nh vi nang thời... mặt vi nang qua kính hiển vi điện tử độ phóng đại 50X cho thấy bề mặt vi nang nhẵn, lớp chitosan phủ lên lớp áo bảo vệ vi nang VSV Hình ảnh 3.13 vi phẫu c t ngang bề mặt vi nang tươi nhuộm 41 xanh