Đang tải... (xem toàn văn)
Bình vôi (Stephania glabra (roxb.) miers) là một loài cây dược liệu quý có tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ, hạ sốt, bảo vệ thần kinh, chống động kinh, hạ huyết áp. Ngoài tự nhiên, cây Bình vôi đang bị khai thác cạn kiệt, nguồn cung cây giống không đáp ứng nhu cầu phát triển diện tích trồng. Nghiên cứu nhân giống cây Bình vôi in vitro nhằm mục tiêu bảo tồn loài cây này.
Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 10 15 Nhân giống Bình vơi (stephania glabra (roxb.) miers) in vitro Nguyễn Thị Sen, Đỗ Tiến Vinh, Mai Thị Phương Hoa* Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Nguyễn Tất Thành * mtphoa@ntt.edu.vn Tóm tắt Bình vơi (Stephania glabra (roxb.) miers) lồi dược liệu q có tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ, hạ sốt, bảo vệ thần kinh, chống động kinh, hạ huyết áp Ngoài tự nhiên, Bình vơi bị khai thác cạn kiệt, nguồn cung giống không đáp ứng nhu cầu phát triển diện tích trồng Nghiên cứu nhân giống Bình vơi in vitro nhằm mục tiêu bảo tồn lồi Kết xác định chất khử trùng javel (75% thời gian 15 phút) HgCl2 (0,1% thời gian phút) cho tỉ lệ vô trùng chồi bình vơi đạt 89,42%; mơi trường MS có bổ sung BA 2mg/l thích hợp cho q trình nhân chồi; tỉ lệ rễ đạt 64,86% môi trường MS có bổ sung NAA 1mg/l ® 2020 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Bình vơi (Stephania glabra (roxb.) miers) lồi dây leo có rễ củ thường gặp vùng núi đá vơi: Tun Quang, Hồ Bình, Cao Bằng, Thanh Hố, Lâm Đồng, Bà Rịa - Vũng Tàu Thành phần hóa học Bình vơi alkaloid, hoạt chất có tác dụng Ltetrahydropalmatin (rotundin), stepharin, roemerin, cycleanin, cepharanthin với hàm lượng khác lồi[1] Tại Việt Nam, Rotundin từ Bình Vơi chứng minh tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ, tác dụng hạ sốt, bảo vệ thần kinh, chống động kinh, hạ huyết áp, giãn trơn Học viện Quân Y tổng hợp thành công Rotundin sunfat từ Rotundin chiết xuất từ củ Bình Vơi để sản xuất thuốc tiêm Hiện nay, thị trường có nhiều dược liệu chứa Rotundin Rotundin sunfat sản phẩm viên Rotunda, Sen vông, Roxen, Nightqueen Rotundin nguồn gốc tự nhiên có ưu điểm bật độc tính thấp, dung nạp thuốc tốt, mang lại giấc ngủ sinh lí Sau ngủ khơng bị mệt mỏi, nhức đầu, hoa mắt, buồn nôn, khô miệng, vụng về, giảm tập trung, không bị lệ thuộc thuốc, khơng giảm trí nhớ sử dụng kéo dài loại thuốc tổng hợp từ hóa chất (Seduxen, Valium, Stinox, Xanax, Temesta…) Các nghiên cứu gần cho thấy Rotundin sử dụng với liều thấp cịn có tác dụng làm giảm ảnh hưởng gây nghiện cocain[1] Nhu cầu củ Bình Vơi tăng với giá thành cao dẫn đến tình trang khai thác mức, khơng có qui hoạch làm Nhận 18.12.2019 Được duyệt 25.05.2020 Cơng bố 29.06.2020 Từ khóa Stephania glabra (Roxb.) Miers, Bình vơi, ni cấy mơ, vi nhân giống cho lồi ngày cạn kiệt Ngoài ra, hàm lượng dược chất có lồi Bình vơi khác nhau, phương thức nhân giống truyền thống không đảm bảo số lượng, chất lượng giống gây ảnh hưởng lớn đến việc qui hoạch trồng loài Phương pháp nhân giống truyền thống gì? Và nhược điểm phương pháp Đã có nghiên cứu nhân in vtro bình vơi chưa? Nếu có nghiên cứu đạt kết già vật liệu sử dụng để nghiên cứu phận Vì việc nghiên cứu nhân giống vơi hồn tồn cần thiết Vật liệu phương pháp nghiên cứu Vật liệu: Cây Bình vơi Trung tâm Cây thuốc q tỉnh Hịa Bình cung cấp Thành phần khoáng sử dụng cho nghiên cứu môi trường MS[2], LV[3], WPM[4] Các chất bổ sung NAA (α - Naphthaleneacetic acid - Merck germany), IBA (Indol butyric acid- MB cell Korea), IAA (Indole-3-acetic acid - MB cell Korea), BA (6 - benzylaminopurine- Merck germany), Kinetin (MB cell Korea), đường sucrose 30g/l Môi trường khử trùng nồi hấp tiệt trùng 1210C, áp suất 1atm 20 phút Điều kiện ni cấy: thí nghiệm thực điều kiện nhiệt độ 26°C ± 2°C, cường độ ánh sáng 2000 3000lux, thời gian chiếu sáng 10 giờ/ngày Địa điểm nghiên cứu: Phịng ni cấy mô thực vật khoa Công nghệ Sinh học Đại học Nguyễn Tất Thành Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 10 16 Phương pháp: Thí nghiệm bố trí theo khối hồn tồn ngẫu nhiên với lần lặp lại, lần bình thủy tinh chứa 50ml mơi trường ni cấy, bình cấy mẫu Kết nghiên cứu xử lí thống kê phần mềm SAS 9.1 trắc nghiệm phân hạng LSD với độ tin cậy 99% Thiết kế thí nghiệm: Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng javel đến q trình vơ trùng mẫu Bình vơi in vitro: Chồi Bình vơi to khỏe khơng sâu bệnh sau thu thập khử trùng hai lần javel (50; 75 100%) với khoảng thời gian (10 15 phút), HgCl (1‰) thời gian phút Mẫu sau rửa sạch, loại bỏ mẫu bị hoại cấy vào môi trường MS có bổ sung đường sucrose 30g/l, agar 8g/l Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng loại môi trường khoáng đến sinh trưởng phát triển Bình vơi in vitro: chồi Bình vơi vơ trùng cắt thành đoạn có chiều dài - 3cm, có - Sau cấy vào bình mơi trường thí nghiệm LV; MS WPM có bổ sung đường sucrose 30g/l agar 8g/l Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA Kinetin đến q trình ni cấy tạo chồi Bình vơi: chồi Bình vơi vơ trùng cắt thành đoạn có chiều dài 3cm, có - Sau cấy vào bình mơi trường MS có bổ sung BA; Kinetin theo nồng độ thí nghiệm (0,5; 1; 3mg/l), đường sucrose 30g/l agar 8g/l Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng IBA, NAA, IAA đến trình tạo rễ Bình vơi in vitro: chồi Bình vơi vơ trùng cắt thành đoạn có chiều dài - 3cm, có - Sau cấy vào bình mơi trường MS có bổ sung IBA, NAA, IAAvới nồng độ thí nghiệm (0,5; 2mg/l), đường sucrose 30g/l agar 8g/l Các tiêu theo dõi - Tỉ lệ mẫu vô trùng (%) = (tổng số mẫu vô trùng/tổng số mẫu ban đầu) x 100 - Tỉ lệ mẫu tạo chồi (%) = (tổng số mẫu vô trùng tạo chồi/tổng số mẫu vô trùng) x 100 - Số phát sinh tính cách đếm số sau tuần nuôi cấy trừ cho số ban đầu - Số chồi phát sinh tính cách lấy số chồi sau tuần nuôi cấy trừ cho số chồi ban đầu - Chiều cao chồi tính từ phần tiếp giáp thân với rễ tới đỉnh chồi cao - Chiều cao trung bình chồi (cm) = tổng chiều cao chồi/tổng số chồi đo đếm - Chiều dài rễ tính từ phần tiếp giáp thân với rễ đến chóp rễ dài - Chiều dài trung bình rễ (cm) = tổng chiều dài rễ/tổng số rễ đo đếm - Số rễ tính cách đếm số rễ sau tuần nuôi cấy Kết thảo luận 3.1 Kết thí nghiệm 1: Vơ mẫu tạo ngun liệu Bình Vơi in vitro Trong thí nghiệm hóa chất sử dụng cồn 700 javel 50%, 75% 100% khoảng thời gian 10 phút 15 phút Sau vô trùng, mẫu cấy vào môi trường nuôi cấy MS Sau khoảng thời gian định, từ - tuần, mẫu bắt đầu nảy mầm Quan sát tỉ lệ nảy mầm, tỉ lệ nhiễm, xác định nồng độ javel thu sau 30 ngày thể Bảng Bảng Kết khảo sát nồng độ javel thời gian vô trùng mẫu Nghiệm thức 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 Nồng độ javel (%) Thời gian (phút) Tỉ lệ mẫu vô trùng (%) Tỉ lệ mẫu tạo chồi (%) 50 10 36,28e 86,20a d 50 15 42,22 83,13a 75 10 65,66c 78,92b b 75 15 89,42 77,31b ab 100 10 90,69 46,95c 100 15 93,28a 44,86c Các kí tự theo sau giá trị trung bình cột thể khác biệt nghiệm thức với mức ý nghĩa P ≤ 0,01 trắc nghiệm phân hạng LSD Có khác biệt rõ rệt nghiệm thức với mức ý nghĩa P ≤ 0,01 nồng độ javel cao tỉ lệ mẫu vơ trùng tăng, ngược lại tỉ lệ mẫu tạo chồi giảm nghiệm thức Cồn javel chất có tác dụng sát khuẩn cao nên tăng thời gian khử trùng tỉ lệ nhiễm giảm thời gian khử trùng lâu dung dịch xâm nhập vào bên gây độc với mẫu Nghiệm thức 1.4 nồng độ javel 75% thời gian 15 phút tỉ lệ mẫu vô trùng 89,42%, ngược lại tỉ lệ mẫu tạo chồi 77,31% cao (không khác biệt NT1.3) Javel 50% thời gian 10 phút (NT1.1) tỉ lệ mẫu vô trùng 36,28% - thấp - tỉ lệ mẫu tạo chồi 86,20% Đại học Nguyễn Tất Thành cao thời gian chưa đủ để diệt nguồn bệnh, nên sau 20 - 21 ngày xuất số mẫu bào tử nấm Tăng thời gian khử trùng lên 10 phút, tỉ lệ nhiễm giảm khả tạo chồi giảm, thời gian mẫu tạo chồi kéo dài (15 - 20 ngày sau cấy NT javel 100% thời gian 15 phút mẫu vô trùng 93,28%; mẫu tạo chồi 44,86%) Chất lượng mẫu sống khử trùng javel 50 - 75% thời gian - 10 phút cho mẫu xanh khỏe Sau 12 15 ngày vơ trùng có tượng nhú mầm Tăng javel 100% thời gian lên 10 phút mẫu có tượng đen, yếu thời gian nảy mầm chậm (20 ngày) Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 10 17 Hình Mẫu bình vôi nảy chồi sau 12 - 15 ngày vô trùng với javel (75% thời gian 15 phút) Hình Mẫu Bình vơi khử trùng javel (75% thời gian 15 phút) sau 30 ngày nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung than hoạt tính (1g/l) Như vậy, nồng độ Javel 75% thời gian khử trùng 15 phút tốt để tạo mẫu Bình vơi in vitro Sau 30 ngày, chồi chuyển sang mơi trường MS có bổ sung than hoạt tính chuẩn bị làm nguyên liệu cho thí nghiệm 3.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát mơi trường khống bảo quản nguồn gen Bình Vơi in vitro Bảng Kết khảo sát môi trường khống ni cấy Bình vơi Nghiệm thức 2.1 2.2 2.3 Môi trường nuôi cấy MS LV WPM Chiều cao chồi (cm) 7,07a 4,18b 3,90b Số (lá) 6,34a 4,08b 3,68b Số chồi phát sinh (chồi) 0,92a 0,39ab 0,31b Các kí tự theo sau giá trị trung bình cột thể khác biệt nghiệm thức với mức ý nghĩa P ≤ 0,01 trắc nghiệm phân hạng LSD Kết khảo sát mơi trường khống ni cấy Bình Vơi, mơi trường sử dụng MS, WPM, LV có bổ sung đường sucrose 30g/l, agar 7,8g/l Vật liệu sử dụng kết thí nghiệm trước, đoạn thân cắt thành đoạn có chiều dài tương tự nhau, cấy vào môi trường nuôi cấy, thời gian 30 ngày khảo sát kết Bảng có khác biệt rõ ràng tiêu khảo sát loại mơi trường sử dụng thí nghiệm Trên môi trường MS, nghiệm thức 2.1 chiều cao chồi 7,07cm A B cao môi trường LV 4,18cm môi trường WPM 3,90cm So sánh số lá, 30 ngày sau cấy, môi trường MS số cao 6,34 phiến to, xanh đậm Số phát sinh thấp môi trường WPM 3,68 Số chồi phát sinh 30 ngày chưa cao 0,92 chồi cao nghiệm thức MS cịn mơi trường LV WPM không khác biệt nhiều (0,39 - 0,31 lá) Như vậy, qua thí nghiệm ni cấy Bình Vơi mơi trường thích hợp để ni cấy nhân giống mơi trường MS C D Hình Chồi bình vơi ni cấy mơi trường: mẫu ban đầu (A), môi trường WPM (B), môi trường LV (C), môi trường MS (D) Sau 30 ngày nuôi cấy Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 10 18 3.3 Kết thí nghiệm 3: Nhân nhanh chồi Bình Vơi in vitro Trong thí nghiệm này, nồng độ BA Kinetin sử dụng với - 0,5 - - - 3mg/l mơi trường MS có bổ sung đường sucrose 30g/l, agar 7,8g/l than hoạt tính 1g/l Ở tất nồng độ BA kinetin sử dụng cho thí nghiệm có số chồi phát sinh, chiều cao chồi số có khác biệt mặt thống kê nghiệm thức Ở tiêu chất lượng chồi cho thấy, nồng độ khác sinh trưởng phát triển theo chiều hướng tăng trưởng khác nhau: BA nồng độ thích hợp khơng ảnh hưởng đến chất lượng chồi, chất lượng chồi đạt xanh, mập NT từ 3.1 - 3.5 với nồng độ BA tương ứng từ 0,5 - 3mg/l Số chồi dao động 0,88 – 3,57 chồi, số chồi thấp nghiệm thức đối chứng 3.1 (BA 0mg/l; kinetin 0mg/l) số chồi có phát sinh khơng nhiều, nhỏ, mỏng, hình thái không rõ ràng Nghiệm thức 3.4 BA (2mg/l) 3,57 chồi; chồi xanh thân mập Khi tăng BA lên 3mg/l số chồi bắt đầu giảm NT 3.5 3,35 chồi Thân nhỏ yếu, chậm phát triển chiều cao tăng nồng độ BA nhiều lớn, chồi nhiều BA cytokinin có vai trị việc hoạt hóa q trình phân bào, nhờ có tác dụng cảm ứng cho việc tạo thành chồi phân hóa chồi Do đó, đưa BA vào mơi trường ni cấy kích thích chồi phát triển Tuy nhiên, tỉ lệ tái sinh chồi cao nồng độ 2mg/l Khi tăng lên nồng độ cao hơn, tỉ lệ tái sinh chồi giảm Điều chứng minh hiệu tái sinh chồi phụ thuộc vào yếu tố nội sinh mẫu, nồng độ phù hợp BA có hiệu tốt tái sinh chồi Bình Vơi, nồng độ q cao dẫn tới tác dụng ngược, gây độc tế bào, hạn chế tỉ lệ tái sinh chất lượng chồi Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA Kinetin đến trình ni cấy tạo chồi Bình vơi Nghiệm thức ĐC 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 BA (mg/l) 0,5 - Kinetin (mg/l) 0,5 Số chồi phát sinh (chồi) 0,88e 1,35de 1,91d 3,57a 3,35ab 1,11e 1,76d 2,69c 2,81bc Chiều cao chồi (cm) 6,99a 6,91a 6,12ab 4,68cd 4,32cde 6,71a 5,11bc 3,51de 3,20e Số (lá) 6,28abc 7,37a 7,07a 6,68ab 5,82bcd 5,66bcd 5,34cd 4,84de 3,91e Các kí tự theo sau giá trị trung bình cột thể khác biệt nghiệm thức với mức ý nghĩa P ≤ 0,01 trắc nghiệm phân hạng LSD Môi trường MS bổ sung kinetine nồng độ biến thiên 0,5 3mg/l nghiệm thức 3.6 -3.9 số chồi phát sinh thấp 1,11 chồi - 2,81 chồi, cao nghiệm thức 2.9 kinetin 3mg/l Chiều cao chồi ngược lại giảm dần theo nồng độ kinetin từ 6,71 - 3,2cm nghiệm thức Theo nghiên cứu Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2014)[5], “Sự ảnh hưởng auxin cytokinin đến khả tạo nhân chồi Bình vơi (Stephania rotunda Lour.)” xác định BA nồng độ 2mg/l cho hệ số nhân chồi cao chồi sau tuần nuôi cấy Kết nghiên cứu cho thấy việc sử dụng BA nồng độ 2mg/l tốt cho q trình A B nhân nhanh Bình Vơi, giống với nghiên cứu trước đó, nhiên hệ số nhân chồi lại thấp giải thích sau: Ngồi ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng cho vào mơi trường ni cấy, chất kích thích tố nội sinh mẫu ảnh hưởng lớn đến hình thành chồi mẫu cấy Qua số liệu thu quan sát thực tế, nhận thấy sử dụng BA cho hệ số nhân chồi cao hơn, chất lượng chồi tốt Đối với Bình Vơi, BA cho kết sinh trưởng phát triển chồi tốt so với kinetin; nồng độ BA tạo chồi lựa chọn 2mg/l C D Hình Chồi Bình vơi ni cấy mơi trường MS có bổ sung BA 2mg/l: mẫu ban đầu (A); sau cấy 20 ngày (B), sau cấy 30 ngày (C) sau cấy 45 ngày (D) Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 10 19 3.4 Kết thí nghiệm 4: ni cấy tạo Bình Vơi in vitro hồn chỉnh Thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo rễ Bình Vơi in vitro Auxin nhóm chất điều hịa sinh trưởng thực vật sử dụng thường xuyên nuôi cấy mô thực vật Auxin kết hợp với thành phần khác mơi trường dinh dưỡng để kích thích tăng trưởng mơ sẹo, huyền phù tế bào điều hịa phát sinh hình thái Hormone auxin thúc đẩy phân chia, giãn dài tế bào phân hóa rễ loại hormone dùng phổ biến nuôi cấy mơ kích thích rễ IAA (auxin tự nhiên) NAA (auxin nhân tạo) Thí nghiệm sử dụng thân Bình Vơi mơi trường MS có bổ sung BA 2mg/l, đường sucrose 30g/l, agar 7,8g/l than hoạt tính 1g/l dùng IAA, IBA, NAA với nồng độ 0,5 - 2mg/l Kết thể Bảng cho thấy, tất cơng thức kích thích tạo rễ sau 30 ngày nuôi cấy trừ nghiệm thức đối chứng NT 4.1 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ IAA, IBA NAA đến trình ni cấy tạo rễ Bình vơi Nghiệm thức ĐC 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 4.10 Điều hòa sinh trưởng NAA NAA NAA IBA IBA IBA IAA IAA IAA Nồng độ (mg/l) 0,5 0,5 0,5 Chiều cao (cm) 6,29cd 7,55b 8,96a 9,09a 6,59bc 6,85bc 7,25bc 6,44bcd 7,49bc 5,24d Tỉ lệ tạo rễ (%) Số rễ (rễ) 0g 0e d 33,11 2,86b 64,86a 3,70a a 65,21 3,79a e 26,92 1,34c c 38,80 2,38b 48,04b 2,64b f 16,10 0,70d e 25,64 1,69c 26,33e 1,54c Các kí tự theo sau giá trị trung bình cột thể khác biệt nghiệm thức với mức ý nghĩa P ≤ 0,01 trắc nghiệm phân hạng LSD Hình Chồi Bình vơi ni cấy mơi trường MS có bổ sung NAA 1mg/l: mẫu ban đầu (A); sau nuôi cấy 45 ngày (B, C D) Tuy nhiên, mơi trường ni cấy có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng NAA với nồng độ 1mg/l cho thấy sinh trưởng phát triển Bình Vơi tốt Chiều cao nuôi cấy môi trường (NT4.3) đạt 8,96cm, cao NT đối chứng 4.1 6,29cm Tỉ lệ tạo rễ 64,86%, số rễ hình thành 3,7 rễ Bên cạnh phát triển nhanh chiều cao, thân to Lá xanh đậm, phiến to dày nghiệm thức 4.3 Nghiệm thức 4.5 - 4.7 bổ sung IBA 0,5 - 2mg/l chiều cao từ 6,59 - 7,25cm khả rễ 26,92 - 48,04%, số rễ 1,34 - 2,64 rễ Cao bổ sung IBA 2mg/l chiều cao 7,25cm; tỉ lệ tạo rễ 48,04%, số rễ 2,64 rễ Nghiệm thức 4.8 - 4.10 bổ sung IAA 0,5 - 2mg, chiều cao giảm nồng độ tăng (6,44 - 5,24cm) tỉ lệ tạo rễ thấp gần lần so với nghiệm thức 4.3 bổ sung NAA 1mg/l Trung bình thấp so với nghiệm thức bổ sung NAA Kết nghiên cứu giải thích sau: NAA chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin, thúc đẩy sinh trưởng giãn nở tế bào, tăng cường q trình sinh tổng hợp, trao đổi chất, kích thích hình thành rễ Kết luận Đề tài thành cơng việc ni cấy Bình vơi in vitro với kết sau: Nồng độ javel 75% với thời gian ngâm mẫu 15 phút kết hợp với HgCl2 0,1% thời gian ngâm mẫu phút thích hợp để vô trùng mẫu chồi với tỉ lệ vô trùng đạt 89,42% Mơi trường MS có bổ sung BA 2mg/l, sucrose 30g/l agar 8g/l thích hợp để nhân chồi với số chồi phát sinh đạt 3,57 chồi/mẫu Mơi trường MS có bổ sung NAA 1mg/l, sucrose 30g/l agar 8g/l thích hợp để ni cấy tạo Bình vơi in vitro hồn chỉnh với tỉ lệ tạo rễ 64,86% Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ Phát triển Khoa học Công nghệ Đại học Nguyễn Tất Thành, mã số đề tài 2019.01.40 Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 10 20 Tài liệu tham khảo Nguyễn Viết Thân, 2003 Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp hiển vi Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật 57-59 Murashige T.A and Skoog F.A, 1962 Revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures Physiologia plantarum 15(3):473-497 Litvay, J.D., D.C Verma, and M.A Johnson Influence of a loblolly pine (Pinus taeda L.) Culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot (Daucus carota L.) Plant Cell Reports 1985; 4(6): 325-328 Lloyd G & B McCown, 1981 Commercially feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot -tip culture In: Comb Proc Intl Plant Prop Soc., 30:421-426 Trần Văn Minh, 2013 Công nghệ sinh học thực vật Giáo trình cao học - nghiên cứu sinh Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, 751 trang Hoàng Minh Tấn, Nguyễn Quang Thạch Vũ Quang Sáng, 2006 Giáo trình Sinh lí Thực vật Đại học Nông nghiệp I Hà Nội Micropropagation of Stephania glabra (Roxb.) Miers Sen Nguyen-Thi, Vinh Do-Tien, Phuong-Hoa Mai-Thi* Faculty of Biotechology, Nguyen Tat Thanh University * mtphoa@ntt.edu.vn Abstract Stephania glabra (Roxb.) Miers is a precious medicinal plant that has sedative, analgesic, sedative, antipyretic, protective, anti-epileptic, antihypertensive properties.In the wild, Stephania glabra (Roxb.) Miers are being exhaustedly exploited, and the supply of seedlings does not meet the needs of growing planted areas This study aims to conserve this species in vitro The research results have identified that javel and HgCl have the best sterility with the rate of 89.42%.MS medium supplemented with BA is best suited for shoot multiplication The rooting rate reached 64.86% on MS medium supplemented with NAA Keywords Stephania glabra (Roxb.) Miers, micropropagation, tissue culture Đại học Nguyễn Tất Thành ... nghiệm 4: ni cấy tạo Bình Vơi in vitro hồn chỉnh Thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng đến khả tạo rễ Bình Vơi in vitro Auxin nhóm chất điều hịa sinh trưởng thực vật sử... 2.9 kinetin 3mg/l Chiều cao chồi ngược lại giảm dần theo nồng độ kinetin từ 6,71 - 3,2cm nghiệm thức Theo nghiên cứu Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2014)[5], “Sự ảnh hưởng auxin cytokinin đến khả tạo nhân. .. hưởng nồng độ BA Kinetin đến q trình ni cấy tạo chồi Bình vơi: chồi Bình vơi vơ trùng cắt thành đoạn có chiều dài 3cm, có - Sau cấy vào bình mơi trường MS có bổ sung BA; Kinetin theo nồng độ