ỨNG DỤNG kỹ THUẬT sắp xếp dãy mô TRONG NGHIÊN cứu các dấu ấn ER, PR, HER2, KI67 ở BỆNH NHÂN UNG THƯ vú

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI .*** NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SẮP XẾP DÃY MÔ TRONG NGHIÊN CỨU CÁC DẤU ẤN ER, PR, HER2, KI67 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ *** NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SẮP XẾP DÃY MÔ TRONG NGHIÊN CỨU CÁC DẤU ẤN ER, PR, HER2, KI67 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ Chuyên ngành: Xét nghiệm y học Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học PGS.TS Tạ Văn Tờ HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: PGS.TS Tạ Văn Tờ, người Thầy tận tình hướng dẫn, cung cấp cho kiến thức, phương pháp luận quý báu, tạo điều kiện thuận lợi, động viên tơi q trình học tập, triển khai nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Bộ môn Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn tập thể Trung tâm Giải phẫu bệnh – Sinh học phân tử Bệnh viện K cho phép, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình triển khai nghiên cứu thu thập số liệu Cuối cùng, xin gửi lịng biết ơn tình cảm u q đến Bố mẹ, gia đình, bạn bè đồng nghiệp hết lịng ủng hộ, động viên tơi suốt q trình học tập động lực giúp tơi vượt qua khó khăn để hồn thành khóa học Tơi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Thị Thu Hương LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thu Hương, học viên Cao học khóa 26, chuyên ngành Xét nghiệm y học, Trường Đại học Y Hà Nội, xin cam đoan: Đây luận văn trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Tạ Văn Tờ Công trình nghiên cứu khơng trùng lặp với cơng trình nghiên cứu khác cơng bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Thị Thu Hương DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT HMMD KHV KN KT LS MBH TMA TTNT UTBM UTV Hóa mơ miễn dịch Kính hiển vi Kháng nguyên Kháng thể Lâm sàng Mô bệnh học Kỹ thuật xếp dãy mô vi thể Thụ thể nội tiết Ung thư biểu mô Ung thư vú MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương ung thư vú 1.1.1 Giải phẫu tuyến vú 1.1.2 Sinh lý tuyến vú 1.1.3 Đặc điểm số dấu ấn sinh học ung thư vú 1.2 Đại cương hóa mơ miễn dịch 1.2.1 Khái niệm hóa mơ miễn dịch 1.2.2 Lịch sử hình thành phát triển kỹ thuật nhuộm HMMD 1.2.3 Nguyên lý kỹ thuật nhuộm HMMD .10 1.2.4 Quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch 16 1.3 Đại cương kỹ thuật xếp dãy mô 23 1.3.1 Khái niệm kỹ thuật xếp dãy mô .23 1.3.2 Lịch sử phát triển kỹ thuật xếp dãy mô 24 1.3.3 Kỹ thuật xếp dãy mô .26 1.4 Một số nghiên cứu xác định dấu ấn ung thư vú thông qua kỹ thuật xếp dãy mô 30 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .33 2.1 Đối tượng thời gian nghiên cứu .33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 33 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .33 2.2.2 Cỡ mẫu kỹ thuật chọn mẫu .33 2.2.3 Các số/biến số nghiên cứu .34 2.2.4 Phương pháp thu thập số liệu .34 2.2.5 Quy trình thu thập số liệu 34 2.2.6 Quản lý phân tích số liệu 39 2.2.7 Đạo đức nghiên cứu 39 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40 3.1 Quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch sử dụng kỹ thuật xếp dãy mô 40 3.1.1 Về mặt kỹ thuật 40 3.1.2 Nhược điểm số lỗi thực kỹ thuật xếp dãy mơ q trình phân tích nghiên cứu 43 3.2 So sánh tỷ lệ bộc lộ số dấu ấn miễn dịch ung thư vú kỹ thuật xếp dãy mô miễn dịch với kỹ thuật truyền thống 45 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 52 4.1 Quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch máy cho mẫu bệnh phẩm ung thư vú sử dụng kỹ thuật xếp dãy mô 52 4.2 So sánh tỷ lệ bộc lộ số dấu ấn miễn dịch ung thư vú kỹ thuật xếp dãy mô miễn dịch với kỹ thuật truyền thống 57 KẾT LUẬN 66 KHUYẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 So sánh tỷ lệ bộc lộ thụ thể nội tiết ER qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 45 Bảng 3.2 So sánh tỷ lệ bộc lộ thụ thể nội tiết PR qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 47 Bảng 3.3 So sánh tỷ lệ bộc lộ thụ thể nội tiết Her2 qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 48 Bảng 3.4 So sánh nhóm kết nhuộm hóa mơ miễn dịch dấu ấn qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 50 Bảng 3.5 So sánh tỷ lệ bộc lộ Ki67 ung thư vú qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô miễn với kỹ thuật truyền thống .51 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Sự đồng kết bộc lộc dấu ấn ER qua qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 46 Biểu đồ 3.2 Sự đồng kết bộc lộc dấu ấn PR qua qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 47 Biểu đồ 3.3 Sự đồng kết bộc lộc dấu ấn Her2 qua qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 49 Biểu đồ 3.4 Sự đồng kết bộc lộc dấu ấn Ki67 qua qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô với kỹ thuật truyền thống 51 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 113 mẫu lấy kỹ thuật xếp dãy mô đúc khối nến, cắt nhuộm tiêu HE .40 Hình 3.2 113 mẫu lấy kỹ thuật xếp dãy mô nhuộm dấu ấn ER, PR, Her2, Ki67 .40 Hình 3.3 Hình ảnh PR(+) độ phóng đại x100 42 Hình 3.4 Hình ảnh ER (+) độ phóng đại x100 42 Hình 3.5 Hình ảnh Her2 (3+) độ phóng đại x100 43 Hình 3.6 Hình ảnh Ki67 độ phóng đại x100 43 Hình 3.7 Các lõi mơ bị lệch vị trí q trình đúc khối nến .44 Hình 3.8 Khối nến ban đầu bị vỡ lấy mẫu q mạnh 44 Hình 3.9 Mẫu mơ nhuộm Her2 vùng có chất hoại tử 44 Hình 3.10 Hình ảnh Ki67 bong 44 Hình 3.11 Hình ảnh khơng trình diện hết lõi mơ tiêu nhuộm ER độ phóng đại x40 45 61 Her3 Her4 Do vậy, Her2 dấu ấn phân tử thường dùng làm số tiên lượng với EGFR nhiều loại ung thư Kết nghiên cứu ra, tỷ lệ mẫu Her2 dương tính thu qua phương pháp nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô kỹ thuật truyền thống 40,7% 38,9%, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê kết hai phương pháp (p=0,892 >0,05) Tỷ lệ Her2 dương trình nghiên cứu chúng tơi thấp so với nghiên cứu thực năm 2014 120 mẫu bệnh phẩm tương ứng bệnh nhân chẩn đốn ung thư biểu mơ tuyến vú ống xâm nhập Bệnh viện K trung ương (bởi nghiên cứu ra, tỷ lệ 45,83%) Ngoài ra, biểu đồ 3.3 cho thấy, tỷ lệ đồng kết bộc lộ dấu ấn Her2 hai kỹ thuật đạt cao (đạt 98,2%), Nghĩa có mẫu khơng có kết đồng Nghiên cứu Sneha S Chavan thực để so sánh bộc lộ dấu ấn Her2/neu hai phương pháp ra, có tỷ lệ hịa nhập tốt, lên tới 100% Her2/neu thực kỹ thuật xếp dãy mô kỹ thuật thơng thường Qua thấy, nhuộm HMMD kỹ thuật xếp dãy mô đem lại kết bộc lộ dấu ấn Her2 xác tương tự với kỹ thuật truyền thống Về kết phân nhóm phân tử: kết phân tích ra, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê sử dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch kỹ thuật truyền thống (p=0,998 >0,05) Cả hai kỹ thuật ra, nhóm kết ER(+), PR(+) Her2 âm tính có tỷ lệ cao (đều với 39,8%), nhóm ER(-), PR(-), Her2 dương tính (điều chiếm khoảng 20%) Một số nghiên cứu khác giới có cách phân nhóm phân tử khác Trong nghiên cứu thực năm 2014 ra, phân nhóm lịng ống B chiếm tỷ lệ cao 29,17%; sau đến phân nhóm lịng ống B/HER2(+) 62 chiếm 23,33%; phân nhóm HER2 chiếm 20,83%; phân nhóm ba âm tính 19,17%; phân nhóm lịng ống A chiếm tỷ lệ nhỏ 5,83%; thấp phân nhóm lịng ống A/HER2(+) 1,67% Như bảy phân nhóm chiếm chủ yếu (52,5%) hai phân nhóm lịng ống B lịng ống B/HER2 (+) Ngồi ra, tác giả Rajnish Kumar cộng thực nghiên cứu vào năm 2012 cho thấy nhận định, nhóm có ER(+) và/hoặc PR(+), Her2(+) Ki67 thấp chiếm tỷ lệ cao (42-59%), nhóm ER(+) và/hoặc PR(+), Her2(+)/hoặc Her2(-) với Ki67 cao đạt tỷ lệ 6-19%, nhóm ER(-), PR(-), Her2(-) có tỷ lệ 7-12% Với kết bộc lộ dấu ấn miễn dịch Ki67 Ki67 dấu ấn miễn dịch sử dụng để xác định tình trạng mắc ung thư vú Sự biểu protein Ki-67 có liên quan chặt chẽ với tăng sinh tế bào Ki-67 có mặt tất pha hoạt động chu trình tế bào (G1, S, G2 phân bào), khơng có tế bào nghỉ (G0), làm cho trở thành dấu hiệu tuyệt vời để xác định tăng sinh phân chia tế bào Chỉ số Ki-67 cần thiết để phân biệt typ phân tử UTV, typ lòng ống A typ lòng ống B, phục vụ cho tiên lượng xác định hướng điều trị cho bệnh nhân 18 Có nhiều nghiên cứu cho thấy Ki67 sử dụng dấu ấn dự đoán tiên lượng UTV Đánh giá số Ki67 có ý nghĩa bệnh nhân lựa chọn điều trị hóa chất tiền phẫu có giá trị tiên lượng, thể đáp ứng với điều trị hóa chất Giá trị số dấu ấn sinh học biết đến số nghiên cứu Chỉ số Ki67 cao đáp ứng tốt với điều trị, số Ki67 thấp lại có tiên lượng tốt với bệnh nhân UTV có điều trị nội tiết Trong nghiên cứu chúng tôi, kết bảng ra, phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch hai kỹ thuật xếp dãy mô kỹ thuật truyền thống cho tỷ lệ Ki67 cao (Ki67≥14%) 69,9% Nghĩa 63 khơng có khác biệt kết thu liên quan đến tỷ lệ Ki67 cao kỹ thuật với Ngoài ra, so với khả bộc lộ dấu ấn ER, PR Her2, đồng kết hai kỹ thuật xếp dãy mô kỹ thuật thường quy dấu ấn Ki67cũng cao, đạt 98,2% Thực tế, phương pháp Ki-67 sử dụng yếu tố tiên lượng ung thư vú sớm Điều minh chứng nghiên cứu 12.155 bệnh nhân, áp dụng phương pháp nhuộm HMMD thường quy, cho thấy Ki-67 dương tính có liên quan đến xác suất tái phát cao tất bệnh nhân (HR = 1,93 (khoảng tin cậy 95% (CI): 1,74–2,14); P