Đang tải... (xem toàn văn)
Alkyl glycerol (AG) có tác dụng kích thích hệ miễn dịch của con người một cách tự nhiên, giảm lượng cholesterol, chống viêm. Tác động sinh lý của các chất này rất đa dạng, rõ rệt nhất là để điều trị và phục hồi cho bệnh nhân ung thư (ức chế sự phát triển khối u, giảm di căn, giảm tăng trưởng mạch máu trong khối u, giảm đau), trị liệu sau xạ trị và xử lý trạng thái suy giảm miễn nhiễm. Được sử dụng như dạng thuốc hỗ trợ, điều trị đối HIV/AIDS để tăng cấp độ của hệ thống miễn dịch của chúng và các tế bào máu.
gốc lysine Plys, 22 tổng 39 gốc lysine BSA gắn kết với DA, Plys, có 14 tổng số 735 gốc lysine kết hợp thành công Bảng Số phân tử DA phức hợp kháng nguyên cộng hợp với KLH, BSA Plys STT Phức hợp Số gốc lysine tự Số phân tử DA kết hợp phân tử protein với phân tử protein Plys-DSS-DA 79 (*) 59 BSA-DSS-DA 35 (**) 22 KLH-DSS-DA 735 (***) 14 Ghi chú: Plys: Polylysin; BSA: Bovine Serum Albumin; KLH: Keyhole Limpet Hemocyanin (*): theo Brian ctv., 1996; (**): theo Huang ctv., 2004; (***): theo Dolaski ctv., 2005 IV THẢO LUẬN Xét mặt khối lượng phân tử, KLH protein glycosyl hóa lớn với khối lượng phân tử 4.500.000-13.000.000 đ.v.c Thông thường, protein có khối lượng phân tử lớn có nhiều gốc lysine tự đóng vai trị epitope (điểm tiếp nhận) phản ứng tạo phức với DA-DSS nên tăng khả cao tạo kháng thể Dolaski ctv., (2005) xác định có 739 gốc lysine tự phân tử KLH Tuy nhiên, phân tử KLH lại có xu hướng tập hợp lại kết tủa hịa tan mơi trường đệm PBS Do đó, nhóm lysine tự có nguy bị che khuất, dẫn đến hạn chế khả liên kết với phân tử DA Đây nguyên nhân dẫn đến hiệu suất hệ số kết hợp gốc lysine tự KLH với DA khơng cao thí nghiệm Plys có khối lượng phân tử 150.000-300.000 đ.v.c, với 79 gốc lysine tự cấu trúc phân tử Kết thí nghiệm cho thấy protein có tỉ lệ gắn kết gốc lysine phân tử DA cao 03 protein thử nghiệm 20 gốc lysine Plys không gắn kết 130 với DA chúng bị che khuất hịa tan mơi trường đệm (giống trường hợp KLH) Khác với 02 protein trên, BSA có khối lượng phân tử nhỏ hẳn (khoảng 65.000 đ.v.c), lại có tính tan tốt đệm PBS Trong thực nghiệm, 22 gốc lysine BSA kết hợp thành công với DA phức hợp kháng nguyên DA-DSS-BSA Kết hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu Huang ctv., (2004) chứng minh phân tử BSA có chứa 35 gốc lysine tự có khoảng 22-24 gốc gắn kết đặc hiệu với phân tử DA Như vậy, đánh giá 03 protein thử nghiệm, BSA có hiệu suất gắn kết tốt với DA Ngoài ra, nguồn gốc protein tải đóng vai trị quan trọng chế gây miễn dịch sinh vật thử nghiệm Thông thường, hệ miễn dịch nhạy cảm kháng ngun có đặc tính lạ, protein có nguồn gốc xa với động vật gây miễn dịch thường cho hiệu giá kháng thể cao KLH có nguồn gốc từ lồi ốc đá (Giant Keyhole Limpet Megathura crenulata) phân bố giới TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN hạn số vùng thuộc ven biển Thái Bình Dương, BSA protein nguồn gốc từ động vật móng guốc (bị), Plys có nguồn gốc từ tế bào thể người Như vậy, gây miễn dịch đối tượng thỏ trắng New Zealand, KLH có tính sinh miễn dịch tốt so với 02 protein cịn lại Tuy nhiên, tính theo hệ số gắn kết DA protein, số phân tử DA kết hợp với KLH lại nhỏ Kháng thể tạo liệu pháp miễn dịch sử dụng phức hợp kháng nguyên không đạt tính đặc hiệu cao với DA, đó, khơng đáp ứng yêu cầu sử dụng cho tạo kít ELISA V KẾT LUẬN Kết hợp kết thực nghiệm nguyên lý miễn dịch, BSA chọn lựa làm protein tải để điều chế phức hợp kháng nguyên từ bán kháng nguyên DA để sử dụng gây miễn dịch thỏ trắng New Zealand nhằm thu nhận kháng thể đặc hiệu kháng DA LỜI CẢM ƠN Cơng trình thuộc nội dung khoa học đề tài KHCN cấp Nhà nước 2013-2015 "Nghiên cứu phát triển KIT phát nhanh số độc tố vi tảo sản phẩm thủy sản" chương trình Cơng nghệ Sinh học Thủy sản Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn đến 2020 TÀI LIỆU THAM KHẢO Branna, P., Naar, J., Chinain, M., Pauillac, S., 1999 Preparation and characterization of domoic acid - protein conjugates using a small amount of toxin in a reversed micellar medium: Application in Competitive Enzyme linked Immunosorbant Assay Bioconjugate Chem 10: 1137-1142 Brian, L F., and Corn, R.M.,1996 Covalent Attachment and Derivatization of Poly (L-lysine) Monolayers on Gold Surfaces As Characterized by Polarization-Modulation FTIR Spectroscopy Anal Chem 68: 3187-3193 Dolashki, A., Schütz, J., Hristova, R., Voelter, W., and Dolashka, P., 2005 Spectroscopic Properties of Non-glycosilated Functional Unit KLH2-c of Keyhole Limpet Hemocyanin World Journal of Agricultural Sciences (2): 129-136 Garthwaite, I., Ross, K.M., Miles, C.O., Hansen, R.P., Foster, D., Wilkins, A.L., and Towers, N.R., 1998 Polyclonal Antibodies to Domoic Acid, and Their Use in Immunoassays for Domoic Acid in Sea Water and Shellfish Natural Toxins 6: 93-104 Huang, B.X., Kim, H-Y., and Dass, C., 2004 Probing Three-Dimensional Structure of Bovine Serum Albumin by Chemical CrossLinking and Mass Spectrometry J Am Soc Mass Spectrom 15: 1237–1247 Kania, M., and Hock, B., 2002 Development of monoclonal antibodies to domoic acid for the detection of domoic acid in blue mussel (Mytilus edulis) tissue by ELISA Analytical Letters: Chemical and Bio-sensors 35(5): 855-868 Kania, M., Kreuzer, M., Moore, E., Pravda, M., Hock, B., and Guilbault, G., 2003 Development of Polyclonal Antibodies against domoic acid for their use in electrochemical biosensors Analytical Letters 36(9): 1851-1863 Kawatsu, K., Hamano, Y., Noguchi,T., 1999 Production and characterization of a monoclonal antibody against domoic acid and its application to enzyme immunoassay Toxicon 37: 1579-1589 Newsome, H., Truelove, J., Hierlihy, L., and Collins, P., 1991 Determination of Domoic Acid in Serum and Urine by Immunochemical Analysis Bull Environ Contam Toxicol 47: 329-334 Osada, L., Marks, J., Stewart, J.E., 1995 Determination of Domoic Acid by Two Different Versions of a Competitive EnzymeLinked Immunosorbent Assay (ELISA) Bull Environ Contam Toxicol 54: 797-804 Smith, D.S., and Kitts, D.D., 1994 A competitite Enzyme-linked Immunoassay for domoic acid determination in human fluid Fd Chem Toxic 32 (12): 1147-1154 Smith, D.S., and Kitts, D.D., 1995 Enzyme immunoassay for the determination of domoic acid in mussel extracts J Agric Food Chem.43: 367-371 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 131 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SAÛN MAKING ANTIGEN FROM A HAP TEN DOMOIC ACID Dao Viet Ha1* and Pham Xuan Ky1 ABSTRACT With the aim to select the appropriate carrier protein for DA-antigen, a hap ten DA was coupled with 03 different carrier proteins e.g Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH), Bovine Serum Albumin (BSA) and Polylysin (Plys) via chemical substrate of Disuccinimidyl Suberate (DSS) Productivity of a reaction between DA and DSS (pH 6-7, room temperature) was stable (65-68%) In contrast, there was the difference in productivity among 03 carrier proteins reacted with DA-DSS: BSA showed highest productivity (20.5%), following were KLH (7.15%) and Plys (14.2%) In the antigen compound, a coupling ratio between DA and each protein was also different (Plys:59, BSA: 22, KLH: 14) Based on the information about free lysin number in protein structure, BSA is considered more advantage in both productivity and coupling ratio, therefore, it is selected to be as a carrier protein for DA antigen in order to produce specific DA-antibody in New Zealand rabbit in Vietnam Keywords: domoic acid, productivity, antigen, carier protein Người phản biện: TS Lê Hồng Phước Ngày nhận bài: 29/5/2015 Ngày thông qua phản biện: 03/8/2015 Ngày duyệt đăng: 07/8/2015 Institute of Oceanography, Vietnam Academy of Science and Technology *Email: daovietha69@gmail.com 132 TAÏP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 ... ƠN Cơng trình thuộc nội dung khoa học đề tài KHCN cấp Nhà nước 2013-2015 "Nghiên cứu phát triển KIT phát nhanh số độc tố vi tảo sản phẩm thủy sản" chương trình Cơng nghệ Sinh học Thủy sản Bộ Nông...VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN hạn số vùng thuộc ven biển Thái Bình Dương, BSA protein nguồn gốc từ động vật móng guốc (bị), Plys có nguồn gốc từ tế bào thể người Như vậy, gây miễn... khơng đáp ứng u cầu sử dụng cho tạo kít ELISA V KẾT LUẬN Kết hợp kết thực nghiệm nguyên lý miễn dịch, BSA chọn lựa làm protein tải để điều chế phức hợp kháng nguyên từ bán kháng nguyên DA để sử