Xác định sự có mặt của các gen độc tố ở các chủng vibrio gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính trên tôm thẻ chân trắng tại Thừa Thiên Huế

Bài viết trình bày một số kết quả bước đầu về sự có mặt của các gen độc tố trên các loài Vibrio gây bệnh trên tôm được phân lập ở Thừa Thiên Huế. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.

Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 129, Số 1A, 115–123, 2020 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 XÁC ĐỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA CÁC GEN ĐỘC TỐ Ở CÁC CHỦNG Vibrio GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP TÍNH TRÊN TƠM THẺ CHÂN TRẮNG TẠI THỪA THIÊN HUẾ Hoàng Tấn Quảng1, Trần Thúy Lan1, Phạm Thị Diễm Thi1, Lê Thị Tuyết Nhân1, Lê Mỹ Tiểu Ngọc1, Nguyễn Duy Quỳnh Trâm2, Nguyễn Thị Thu Liên1* Viện Công nghệ sinh học, Đại học Huế, Tỉnh lộ 10, Phú Thượng, Phú Vang, Thừa Thiên Huế, Việt Nam Trường đại học Nông Lâm, Đại học Huế, 102 Phùng Hưng, Huế, Việt Nam * Tác giả liên hệ Nguyễn Thị Thu Liên (Ngày nhận bài: 17-12-2019; Ngày chấp nhận đăng: 08-04-2020) Tóm tắt Bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease – AHPND) bệnh vi khuẩn gây Bệnh dẫn đến tỷ lệ chết lên đến 100% quần thể tôm thẻ chân trắng, tôm sú gây tổn thất kinh tế đáng kể cho ngành nuôi tôm nhiều nước châu Á Các nghiên cứu trước cho thấy khơng phải chủng Vibrio có khả gây bệnh chúng mang gen độc tố khác Chúng tơi đánh giá có mặt gen độc tố chủng Vibrio phân lập Thừa Thiên Huế đồng thời phân tích trình tự gen Kết cho thấy 14 chủng Vibrio mang gen pirABvp nghiên cứu, gen tlh xuất tất chủng, gen toxR xuất 7/14 chủng gen trh tdh khơng xuất chủng vi khuẩn Vibrio phân lập Giải trình tự đoạn thị gen độc tố cho thấy gen có độ tương đồng cao (98–100%) so với gen công bố ngân hàng gen, gen pirAvp pirBvp sai khác cịn gen tlh toxR có sai khác nhiều Đây sở để thực nghiên cứu việc sản xuất chế phẩm phòng trị bệnh hoại tử gan tụy cấp tính tơm Từ khóa: AHPND, gen độc tố, hoại tử gan tụy cấp, tôm, Vibrio Screening and analysing toxic genes from Vibrio isolates causing acute hepatopancreatic necrosis disease in white-leg shrimp at Thua Thien Hue Hoang Tan Quang1, Tran Thuy Lan1, Pham Thi Diem Thi1, Le Thi Tuyet Nhan1, Le My Tieu Ngoc1, Nguyen Duy Quynh Tram2, Nguyen Thi Thu Lien1* Institute of Biotechnology, Hue University, Road No 10, Phu Thuong, Phu Vang, Thua Thien Hue, Vietnam University of Agriculture and Forestry, Hue University, 102 Phung Hung St., Hue, Vietnam * Correspondence to Nguyen Thi Thu Lien (Received: 17 December 2019; Accepted: 08 April 2020) Abstract Acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) is a disease caused by bacteria, with the death ratio up to 100% in the population of Litopenaeus vannamei and Penaeus monodon, and causes great DOI: 10.26459/hueuni-jns.v129i1A.5621 115 Hoàng Tấn Quảng CS economic losses to many shrimp‐producing countries in Asia Previous studies have shown that not all strains of Vibrio can cause AHPND because they contain different toxin genes, such as pirAvp, pirBvb, tlh, trh, and tdh In this study, we evaluate the presence of several toxic genes on Vibrio isolates from Thua Thien Hue province and analyze the sequence of these genes The results show that in 14 Vibrio strains carrying pirABvp gene, the tlh and toxR genes occur in 14/14 and 7/14 strains, respectively, while none of them have the two genes of trh and tdh Analyzing the sequence of four DNA fragments shows that these genes have high similarity (98–100%) compared with the genes announced on the Genbank Genes pirAvp and pirBvp are less different, while tlh and toxR genes are more different The results could be used for further studies in the production of bioproducts for the prevention and treatment of acute hepatopancreatic necrosis disease in shrimp Keywords: AHPND, acute hepatopancreatic necrosis disease, shrimp, toxic encoding gene, Vibrio Đặt vấn đề minh yếu tố độc lực gây nên hội chứng gan tụy cấp tôm [4-6] Các gen tương ứng chúng Bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (Acute (được đặt tên pirAvp pirBvp) nằm Hepatopancreatic Necrosis Disease – AHPND) plasmid có kích thước lớn (69–70 kb) chủng bệnh vi khuẩn gây Bệnh thường cảm nhiễm V parahaemolyticus gây bệnh gan tụy cấp [4, 7] giai đoạn tôm nuôi 35 ngày tuổi Bệnh hoại Trên plasmid, gen pirAvp pirBvp nằm vùng tử gan tụy cấp tính đe dọa nghiêm trọng ngành nucleotide với kích thước khoảng 3,5 kb với hai lần công nghiệp nuôi tôm châu Á (bao gồm Trung lặp đảo ngược chuỗi mã hóa transposase (1 kb) Quốc, Việt Nam, Malaysia, Thái Lan Philippine) Dựa phân tích proteomic, gen pirAvp (336 bp) số nước khác giới Bệnh dẫn pirBvp (1.317 bp) mã hoá cho protein có kích đến tỷ lệ chết lên đến 100% quần thể tôm thẻ thước khoảng 13 50 kDa [4] chân trắng, tôm sú gây nên tổn thất kinh tế đáng kể cho ngành nuôi tôm [1] Các nghiên cứu trước cho thấy chủng Vibrio có khả gây bệnh Ở Việt Nam, bệnh AHPND chúng mang gen độc tố khác Trong số công bố ảnh hưởng nghiêm trọng đến ao ni đó, hemolysin loại độc tố phổ biến loài tơm nhiều địa phương tỉnh Hải Phịng, Vibrio gây bệnh Đây ngoại độc tố làm phân giải Quảng Ninh, Nghệ An, Quảng Trị, Thừa Thiên tế bào hồng cầu giải phóng hemoglobin Ở lồi Huế vùng đồng Sông Cửu Long, ảnh V parahaemolyticus, tồn ba gen độc tố hemolysin hưởng lên tơm sú (Penaeus monodon) tơm thẻ bao gồm tdh trh mã hóa hemolysin bền chân trắng (Penaeus vannamei) với biểu nhiệt tlh mã hóa hemolysin khơng bền nhiệt Cả bệnh tích lên quan gan tụy Mặc dù loài Vibrio hai gen tdh trh nằm operon độc tố Vp- parahaemolyticus cho tác nhân gây toxRS, điều hịa gen toxR có trình tự bảo bệnh hoại tử gan tuỵ tôm, số nghiên tồn cao loài [8] cứu gần cho thấy số loài Vibrio khác V vulnificus, V fluvialis, V cholerae V alginolyticus có liên quan đến xuất bệnh [2, 3] Độc tố PirABvp, tương đồng với độc tố tiêu diệt côn trùng (Pir) Photorhabdus, chứng 116 Trong báo này, chúng tơi trình bày số kết bước đầu có mặt gen độc tố lồi Vibrio gây bệnh tơm phân lập Thừa Thiên Huế pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 129, Số 1A, 115–123, 2020 Thành phần PCR bao gồm: 50 ng DNA tổng Nguyên liệu phương pháp s, 10 pmol primer mi loi, àL 2ì GoTaqđ Green 2.1 Nguyên liệu Master Mix (Promega, Mỹ), bổ sung nước cất vơ Ngun liệu nghiên cứu lồi Vibrio trùng vừa đủ 12 µL Q trình khuếch đại PCR phân lập từ mẫu tôm bị bệnh hoại tử gan tụy cấp thực máy luân nhiệt MJ Mini™ tỉnh Thừa Thiên Huế Viện Công nghệ sinh Thermal Cycler (Biorad, Mỹ) theo chu trình: 95 học, Đại học Huế cung cấp Đây chủng °C/10 phút; 30 chu kỳ: 95 °C/30 giây, 53 °C/30 giây, định danh mang gen độc tố pirAvp và 72 °C/1 phút; cuối 72 °C/10 phút Sản phẩm pirBvp PCR điện di gel agarose 0,8% nhuộm 2.2 6× GelRedTM loading buffer with tricolor Phương pháp (ABT, Việt Nam) Hình ảnh điện di thu nhận Tách chiết DNA tổng số bàn đọc UV Các chủng vi khuẩn Vibrio nuôi môi trường peptone muối kiềm (ASPW) với 2% peptone 2% NaCl, pH 8,6, lắc 18 30 °C với tốc độ 180 vịng/phút Dịch ni cấy ly tâm 13.000 vòng/phút phút °C để thu tế bào DNA tổng số tách chiết AquaPure Genomic DNA Isolation Kit (Cat 732-6340, Biorad) theo hướng dẫn nhà sản xuất sau bảo quản °C Chất lượng DNA tổng số kiểm tra điện di gel agarose 0,8% Sản phẩm PCR tạo dòng vào vector pGEM T-easy (Promega) theo hướng dẫn nhà sản xuất, sau vector tái tổ hợp chuyển vào vi khuẩn E coli TOP10 phương pháp sốc nhiệt Thể tái tổ hợp chọn lọc môi trường LB có bổ sung 50 µg/mL ampicillin, X-Gal/IPTG Khuẩn lạc màu trắng chọn ngẫu nhiên từ đĩa tiến hành PCR với cặp mồi M13F (5’GTAAACGACGGCCAG-3’) M13R (5’-CAGGA AACAGCTATG AC-3’) Chu trình nhiệt phản ứng khuếch đại với mồi M13 thực giống Xác định có mặt gen mã hóa độc tố vi khuẩn Sự có mặt độc tố chủng gây bệnh phần Sản phẩm PCR điện di kiểm tra gel agarose 0,8% gửi phân tích trình tự tự phương pháp Sanger gan tụy cấp tôm xác định thông qua có mặt gen mã hóa protein độc tính (pirAvp, pirBvp, toxR tlh) dựa cặp mồi đặc hiệu cho đoạn thị gen Trình tự cụ thể mồi trình bày Bảng Trình tự nucleotide gen kiểm tra phần mềm BioEdit, sau so sánh với trình tự cơng bố ngân hàng gen thông qua công cụ BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih gov/) Bảng Trình tự mồi sử dụng Gen Tên mồi Trình tự nucleotide pirAvp VpPirA-284 5’-TGACTATTCTCACGATTGGACTG-3’ Kích thước (bp) Tài liệu tham khảo 284 [4] 392 [4] 450 [9] 367 [10] 5’-CACGACTAGCGCCATTGTTA-3’ pirBvp VpPirB-392 5’-TGATGAAGTGATGGGTGCTC-3’ 5’-TGTAAGCGCCGTTTAACTCA-3’ tlh tl 5’-AAAGCGGATTATGCAGAAGCACTG-3’ 5’-GCTACTTTCTAGCATTTTCTCTGC-3’ toxR tR 5’-GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3’ DOI: 10.26459/hueuni-jns.v129i1A.5621 117 Hoàng Tấn Quảng CS Gen Tên mồi Trình tự nucleotide Kích thước (bp) Tài liệu tham khảo 410 [11] 245 [11] 5’-ATACGAGTGGTTGCTGTCATG-3’ trh tdh L-trh 5’-TTGGCTTCGATATTTTCAGTATCT-3’ R-trh 5’-CATAACAAACATATGCCCATTTCCG-3’ L-tdh 5’-GTAAAGGTCTCTGACTTTTGGAC-3’ R-tdh 5’-TGGAATAGAACCTTCATCTTCACC-3’ mẫu nghiên cứu Kết tương đồng với Kết thảo luận 3.1 Sự có mặt gen độc tố chủng Vibrio gây bệnh Ly loài V parahaemolyticus mẫu hải sản Dựa chủng Vibrio cung cấp, cho thấy có tương đồng định chúng tơi nuôi cấy tăng sinh môi trường chủng Vibrio gây bệnh Việt Nam Các ASPW, tách chiết DNA tổng số sau xác định chủng thu Thừa Thiên Huế có có mặt có mặt gen độc tố Từ 14 chủng mang gen gen độc tố tương tự chủng thu gây bệnh pirAvp pirBvp, tiến hành Nha Trang [12] Các công bố trước cho khảo sát có mặt gen độc tố khác tlh, thấy chủng Vibrio mang tất toxR, trh tdh gen độc tố, chẳng hạn, Mahmud cs nhận kết Nguyễn Văn Duy Nguyễn Thị Cẩm Kết khảo sát có mặt gen tlh cho thấy 100% chủng mang gen này, tỷ lệ phù hợp với công bố trước Đối với gen toxR, ghi nhận 7/14 mẫu chứa gen này, tồn thuộc lồi V parahaemolyticus (Bảng 2) Theo Han cs., gen tlh toxR xuất tươi sống Nha Trang Kết nghiên cứu thấy có 18/6000 chủng V parahaemolyticus Nhật Bản chứa gen tdh [9] Bảng Sự có mặt gen độc tố chủng Vibrio gây bệnh TT Loài tlh toxR trh tdh V parahaemolyticus TX07-3/3 x x – – V shilonii TX05-3/3 x – – – nghiên cứu chủng V parahaemolyticus phân V shilonii TX03-3/3 x – – – lập từ vùng cửa sông Mỹ nhận thấy 79% số chủng V shilonii TX02-3/3 x – – – mang gen tlh [11] Ở Việt Nam, có mặt gen V shilonii TX01-3/3 x – – – V shilonii TV02-3/3 x – – – V parahaemolyticus K31-X-13/6/2019 x x – – V parahaemolyticus K39-X-13/6 x x – – V communis R-PDK4-V-13/6 x – – – 10 V parahaemolyticus R-PD-K3-10/6 x x – – 100% loài V parahaemolyticus nghiên cứu [4]; điều tương đồng với kết nghiên cứu chúng tơi Trong đó, Gutierrez West cs tlh toxR chủng Vibrio gây bệnh công bố Nguyễn Văn Duy Nguyễn Thị Cẩm Ly phân lập chủng V parahaemolyticus mẫu hải sản tươi sống Nha Trang chủng mang gen tlh toxR [12] Tương tự, nghiên cứu Han cs cho thấy 9/9 chủng V parahaemolyticus Việt Nam mang gen tlh toxR [13] Trong nghiên cứu mình, chúng tơi nhận thấy gen trh tdh không xuất 118 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 129, Số 1A, 115–123, 2020 TT Loài tlh toxR trh tdh 11 V parahaemolyticus R-PD-K3-10/6 x x – – 12 V furnissii R-K3913/6 x – – – 13 V parahaemolyticus VX01 x x – – 14 V parahaemolyticus K5 x x – – 3.2 mã số MH700243 Kết so sánh cho thấy có sai khác gen pirA công bố từ chủng Vibrio ngân hàng gen Hai mươi chín trình tự cơng bố tương đồng 100% với trình tự chúng tơi thu Xác định trình tự gen độc tố Sau xác định chủng mang gen gây bệnh, chọn gen từ chủng VX01 để phân tích trình tự gen độc tố Đây chủng phân lập chủng mang gen pirABvr (Hình 1) Kết phân tích trình tự cho thấy gen nghiên cứu có trình tự tương đồng 100% với gen tương ứng loài V parahaemolyticus công bố ngân hàng gen Đối với gen pirAvp, kết phân tích trình tự sản phẩm PCR cho thấy trình tự nucleotide dài 284 bp (Hình 2), kích thước lý thuyết cơng bố tương đồng 100% với trình tự gen pirA chủng V parahaemolyticus CMCR003, Hình Sản phẩm PCR gen độc tố từ chủng V parahaemolyticus VX01 M: DNA ladder Kb marker Hình Trình tự nucleotide đoạn thị gen pirAvp trình tự cơng bố (MH700243) DOI: 10.26459/hueuni-jns.v129i1A.5621 119 Hoàng Tấn Quảng CS Đối với gen pirB, kết phân tích trình tự JX262963), mức độ tương đồng 99,78% (sai khác sản phẩm PCR cho thấy trình tự nucleotide nucleotide vị trí 347) So sánh với gen tlh dài 392 bp (Hình 3) lý thuyết công bố chủng V parahaemolyticus HA2 (mã số CP023709), tương đồng 100% với trình tự gen pirB mức độ tương đồng 99,56% (sai khác chủng V parahaemolyticus RECR004, mã số nucleotide vị trí 259) Kết so sánh với 100 MH714301 Tương tự gen pirAvp, 27 trình tự gen trình tự tương đồng cao NCBI cho thấy pirB từ chủng Vibrio công bố tương đồng mức độ tương đồng gen tlh với gen công 100% với trình tự chúng tơi bố thấp so với gen pirAvp pirBvp, Đối với gen tlh, kết phân tích trình tự sản phẩm PCR cho thấy trình tự nucleotide dài 450 bp (Hình 4) giống lý thuyết, tương đồng 100% với trình tự gen tlh chủng V parahaemolyticus ATCC 33846 (mã số GU971655) Tuy nhiên, so sánh trình tự thu với gen tlh chủng V parahaemolyticus TS-9-11-1 (mã số có trình tự tương đồng 100% Điều chứng tỏ gen tlh gen có mức độ đột biến cao không ổn định gen pirA pirB So sánh với gen tlh từ chủng V parahaemolyticus strain C1 phân lập Nha Trang (mã số JQ929914) [12], gen tlh chúng tơi có mức độ tương đồng 99,56% (sai khác nucleotide vị trí 255 426) Như vậy, thấy gen tlh Việt Nam có khác vùng Hình Trình tự nucleotide đoạn thị gen pirBvp trình tự cơng bố (MH714301) 120 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 129, Số 1A, 115–123, 2020 Hình Trình tự nucleotide đoạn thị gen tlh trình tự cơng bố (JQ929914) Đối với gen toxR, kết phân tích cho thấy (mã số KF993361), mức độ tương đồng 99,73% trình tự nucleotide sản phẩm PCR dài 367 bp (sai khác nucleotide vị trí 76) So sánh với gen (Hình 5) tương đồng 100% với trình tự gen toxR toxR chủng V parahaemolyticus D3112 (mã số chủng V parahaemolyticus 20130629002S01 (mã CP034565), mức độ tương đồng 99,45% (sai khác số CP020034) So sánh với gen toxR từ chủng V nucleotide vị trí 286 301) Khi so sánh trình parahaemolyticus strain C1 phân lập Nha Trang tự với 100 gen toxR chủng (mã số JQ929913), gen toxR chúng tơi có mức Vibrio khác có mức độ tương đồng cao công độ tương đồng 100% [12] Như thấy gen bố ngân hàng gen, có trình tự có độ tương toxR Việt Nam khơng có sai khác đồng 100% Tương tự gen tlh, gen toxR vùng gen có mức độ đột biến cao khơng ổn định Tuy nhiên, so sánh trình tự thu với gen pirA pirB gen toxR chủng V parahaemolyticus NSTH10 DOI: 10.26459/hueuni-jns.v129i1A.5621 121 Hoàng Tấn Quảng CS Hình Trình tự nucleotide đoạn thị gen toxR trình tự cơng bố (CP034565) Kết luận Từ 14 chủng Vibrio mang gen pirABvp nghiên cứu, nhận thấy gen tlh xuất tất chủng; gen toxR xuất 7/14 chủng gen trh tdh không xuất chủng nghiên cứu Giải trình tự đoạn thị gen độc tố cho thấy gen có độ tương đồng cao (98–100%) so với gen công bố ngân hàng gen, gen pirAvp pirBvp sai khác cịn gen tlh toxR có sai khác nhiều Thơng tin tài trợ: Cơng trình thực kinh phí đề tài cấp Bộ Giáo dục Đào tạo năm 2018–2020, mã số CT-2018-DHH-01 CT-2018-DHH-02 Tài liệu tham khảo de la Pena LD, Cabillon NA, Catedral DD, Amar EC, Usero RC, Monotilla WD, et al Acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) outbreaks in Penaeus vannamei and P monodon 122 cultured in the Philippines Dis Aquat Organ 2015;116(3):251-254 Giang NTT, Toàn PV, Hùng PQ Hội chứng hoại tử gan tụy tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei) nuôi thương phẩm Ninh Thuận Tạp chí Khoa học – Cơng nghệ Thủy sản 2016; 1:32-40 Lụa ĐT, Khuê NV, Vân PT Non-Vibrio parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm nuôi Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2016;14(5):690-698 Han JE, Tang KFJ, Tran LH, Lightner DV Photorhabdus insect-related (Pir) toxin-like genes in a plasmid of Vibrio parahaemolyticus, the causative agent of acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) of shrimp Diseases of Aquatic Organisms 2015;113(1):33-40 Lee CT, Chen IT, Yang YT, Ko TP, Huang YT, Huang JY, et al The opportunistic marine pathogen Vibrio parahaemolyticus becomes virulent by acquiring a plasmid that expresses a deadly toxin Proceedings of the National Academy of Sciences 2015;112(34):10798 Sirikharin R, Taengchaiyaphum S, Sanguanrut P, Chi TD, Mavichak R, Proespraiwong P, et al Characterization and PCR detection of binary, Pir-like toxins from Vibrio parahaemolyticus Isolates that cause Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND) in shrimp PLOS ONE 2015;10(5): e0126987 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 129, Số 1A, 115–123, 2020 Yang YT, Chen IT, Lee CT, Chen CY, Lin SS, Hor LI, et al Draft genome sequences of four strains of Vibrio parahaemolyticus, three of which cause early mortality syndrome/Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease in shrimp in China and Thailand Genome Announc 2014;2(5):e00816-14 Nishibuchi M, Kaper JB Thermostable direct hemolysin gene of Vibrio parahaemolyticus: a virulence gene acquired by a marine bacterium Infect Immun 1995;63(6):2093-2099 Mahmud HZ, Kassu A, Mohammad A, Yamato M, Bhuiyan NA, Balakrish Nair G, et al Isolation and molecular characterization of toxigenic Vibrio parahaemolyticus from the Kii Channel, Japan Microbiological Research 2006;161(1):25-37 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 11 Gutierrez West CK, Klein SL, Lovell CR High frequency of virulence factor genes tdh, trh, and tlh in Vibrio parahaemolyticus strains isolated from a pristine estuary Applied and Environmental Microbiology 2013;79(7):2247-2252 12 Duy NV, Ly NTC Phân lập xác định gen độc tố Vibrio parahaemolyticus hải sản tươi sống Nha Trang Tạp chí Khoa học-Cơng nghệ thủy sản 2012;2:42-47 13 Han JE, Mohney LL, Tang KFJ, Pantoja CR, Lightner DV Plasmid mediated tetracycline resistance of Vibrio parahaemolyticus associated with acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) in shrimps Aquaculture Reports 2015;2:17-21 10 Kim YB, Okuda J, Matsumoto C, Takahashi N, Hashimoto S, Nishibuchi M Identification of Vibrio parahaemolyticus strains at the species level by PCR targeted to the toxR gene Journal of Clinical Microbiology 1999;37(4):1173-1177 DOI: 10.26459/hueuni-jns.v129i1A.5621 123 ... Vibrio gây bệnh Việt Nam Các ASPW, tách chiết DNA tổng số sau xác định chủng thu Thừa Thiên Huế có có mặt có mặt gen độc tố Từ 14 chủng mang gen gen độc tố tương tự chủng thu gây bệnh pirAvp... Sự có mặt gen độc tố chủng Vibrio gây bệnh Ly loài V parahaemolyticus mẫu hải sản Dựa chủng Vibrio cung cấp, chúng tơi cho thấy có tương đồng định nuôi cấy tăng sinh môi trường chủng Vibrio gây. .. disease, shrimp, toxic encoding gene, Vibrio Đặt vấn đề minh yếu tố độc lực gây nên hội chứng gan tụy cấp tôm [4-6] Các gen tương ứng chúng Bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (Acute (được đặt tên pirAvp