Nghiêu cứu xác định cloramphenicol trong dược phẩm bằng phương pháp von ampe sử dụng điện cực giọt thủy ngân treo

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO Chun ngàng: Hóa Phân tích Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS HỒNG THỌ TÍN Hà Nội - Năm 2011 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng T 1.1 G 1.1.1 G 1.1.2 G 1.1.2.1 G 1.1.2.2 T 1.1.2.3 D 1.1.2.4 S 1.2 G 1.2.1 G 1.2.2 C 1.2.3 C 1.2.3.1 K 1.2.3.2 K 1.3 M 1.3.1 P 1.3.1.1 P 1.3.1.2 P 1.3.2 P 1.3.3 P Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 1.3.3.1 C 1.3.3.2 C 1.3.3.3 P 1.3.4 M Chƣơng 2: N 2.1 N 2.2 P 2.2.1 T 2.2.2 G 2.2.3 C 2.3 T 2.3.1 T 2.3.2 H Chƣơng 3: K 3.1 K 3.2 K n 3.3 K 3.3.1 Ả 3.3.2 Ả 3.4 K 3.5 K 3.6 K Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 3.6.1 3.6.2 2.6.3 3.7 3.7.1 3.7.2 3.7.3 3.8 3.9 3.10 3.11 3.11.1 3.11.2 3.11.3 3.11.3.1 3.11.3.2 3.11.3.3 2.12 KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO „ Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc Hình 1.2: (a) Sự b kỹ Hình 1.3: (a) Sự b kỹ Hình 2.1: Thiết bị Hình 3.1: Đƣờng 2,5ppm Hình 3.2: Đƣờng cá Hình 3.3: Đƣờng hƣởng c đệm axe Hình 3.4: Đƣờng 2,5ppm Hình 3.5: Đồ thị cloramp Hình 3.6: Đƣờng hợp Hỉnh 3.7: Đƣờng axit Hình 3.8: Đƣờng axit Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Hình 3.9: Đƣờ Hình 3.10: Đƣờ Hình 3.11: Đƣờ HÌnh 3.12: Đƣờ Hình 3.13: Đƣờ độ k Hình 3.14: Đồ t Hình 3.15: Đƣờ thuố HÌnh 3.16: Đƣờ thuố Hình 3.17: Đƣờ thuố Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Bảng 3.1: Bảng 3.2: Bảng 3.3: Bảng 3.4: Bảng 3.5: Bảng 3.6: Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9: Bảng 3.10 Bảng 3.11: Bảng 3.12: Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Bảng 3.13: Bảng 3.14: Bảng 3.15: Bảng 3.16: Bảng 3.17: Bảng 3.18: Bảng 3.19: Bảng 3.20: Bảng 3.21: Bảng 3.22: Bảng 3.23: Bảng 3.24: Bảng 3.25 Bảng 3.26: Bảng 3.27: MỞ ĐẦU Ngày nay, sống đại đòi hỏi ngƣời phải lao động cƣờng độ cao Thêm vào đó, mơi trƣờng sống nhiễm nguyên nhân khiến tỉ lệ mắc bệnh nấm khuẩn ngƣời ngày tăng Việc nghiên cứu thuốc chữa trị loại bệnh đƣợc quan tâm ý Kháng sinh chất có khả ức chế tiêu diệt số loài nấm, vi khuẩn gây bệnh cho ngƣời sinh vật Vì loại thuốc kháng sinh đóng vai trò quan trọng việc bảo vệ nâng cao sức khỏe sinh vật nói chung ngƣời nói riêng Hoạt động kiểm sốt hàm lƣợng thuốc kháng sinh đƣa vào thể cho phù hợp với mức độ nhiễm khuẩn đóng vai trị định pháp đồ điều trị bệnh Do đó, việc xác định đƣợc xác hàm lƣợng thuốc điều cần thiết Hiện nay, có nhiều phƣơng pháp đƣợc dùng để xác định hàm lƣợng kháng sinh Trong số đó, phƣơng pháp cực phổ đƣợc đánh giá phƣơng pháp có nhiều thuận lợi, đặc biệt chất kháng sinh có tính điện hoạt nhƣ cloramphenicol Việc nghiên cứu xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol đƣợc nghiên cứu nhiều giới nhƣ nƣớc Tuy nhiên phƣơng pháp chủ yếu đƣợc nghiên cứu phƣơng pháp sắc ký phƣơng pháp quang Trong luận văn này, tiến hành nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp cực phổ với kỹ thuật đo xung vi phân để xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol số loại dƣợc phẩm khác nhau, dạng dung dịch nhƣ dạng bột Sóng cực phổ cloramphenicol sóng cực phố anot, xuất pic nằm xung quanh vị trí 0V, bị ảnh hƣởng hóa chất khác Việc sử dụng phƣơng pháp cực phổ lần khẳng định tính ƣu việt phƣơng pháp phân tích điện hóa, cho phép xác định nhanh hàm lƣợng chất, việc xử lý mẫu trƣớc tiến hành đo đơn giản tránh làm chất q trình phân tích Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Kết quả: Bảng 3.21: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt giá trị thêm chuẩn ∆C (ppm) I (nA) 2.00e-7 Cx + 1.50e-7 i (A) Cx + Cx 1.00e-7 -0.10 E (V) Ngoại suy đồ thị Cx = 0,92ppm Thí nghiệm đƣợc làm lặp lại lần thu đƣợc giá trị Cx Bảng 3.22: Giá trị hàm lượng cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt Lần 0,92ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch đo (0,91 ± 0,01) ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch ban đầu là: (364 ± 4) ppm Hàm lƣợng cloramphenicol thuốc (3640 ± 40) ppm 52 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Hàm lƣợng tƣơng đƣơng 0,364% cloramphenicol mẫu thuốc, so sánh với giá trị nhà sản xuất đƣa 0,4% sai lệch 9% 3.11.3.2 Mẫu thuốc viên Đặc điểm: Thuốc dạng viên nén màu trắng, hàm lƣợng ghi bao bì 250mg/viên, đƣợc bảo quản vỉ chất liệu polyme Hòa tan thuốc vào nƣớc cất lần, định mức 1000mL Lấy 1,0 mL mẫu vào bình định mức 100mL, thêm 10 mL dung dịch đệm axetat pH 5,5, định mức nƣớc cất lần Lấy 25 mL dung dịch đem ghi sóng cực phổ xung vi phân cloramphenicol, thêm chuẩn lần 2ppm, ghi sóng cực phổ Kết quả: Bảng 3.23: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc viên nén giá trị thêm chuẩn ∆C (ppm) I (nA) Cx + 4.00e-7 Cx + 3.00e-7 Cx + Cx + i(A)2.00e-7 Cx 1.00e-7 -0.20 -0.10 53 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Ngoại suy đồ thị Cx = 2,29ppm Thí nghiệm đƣợc làm lặp lại lần thu đƣợc giá trị Cx Bảng 3.24: Giá trị hàm lượng cloramphenicol mẫu thuốc viên nén Lần 2,28ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch đo (2,30 ± 0,02) ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch ban đầu là: (230 ± 0,2) ppm Hàm lƣợng cloramphenicol thuốc (230 ± 0,2) mg/viên, so sánh với giá trị nhà sản xuất đƣa 250mg sai lệch 8% 3.11.3.3 Mẫu thuốc tiêm Đặc điểm: Thuốc dạng bột nàu trắng, hàm lƣợng ghi bao bì 1g, đƣợc đựng lọ thủy tinh nút cao su thể tích 10mL Hòa tan thuốc vào nƣớc cất lần, định mức 1000mL Lấy 0,5 mL mẫu vào bình định mức 100mL, thêm 10 mL dung dịch đệm axetat pH 5,5, định mức nƣớc cất lần Lấy 25 mL dung dịch đem ghi sóng cực phổ xung vi phân cloramphenicol, thêm chuẩn lần 2ppm, ghi sóng cực phổ Kết quả: Bảng 3.25: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc tiêm & giá trị thêm chuẩn ∆C (ppm) I (nA) 54 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 4.00e-7 i (A) 3.00e-7 2.00e-7 1.00e-7 Hình 3.17: Đường quét xung vi phân đồ đường thêm chuẩn mẫu thuốc tiêm Ngoại suy đồ thị Cx = 4,94ppm Thí nghiệm đƣợc làm lặp lại lần thu đƣợc giá trị Cx Bảng 3.26: Giá trị hàm lượng cloramphenicol mẫu thuốc tiêm Lần 4,94ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch đo (4,90 ± 0,06) ppm Nồng độ cloramphenicol dung dịch ban đầu là: (980 ± 12) ppm Hàm lƣợng cloramphenicol thuốc (980 ± 12) mg/viên, so sánh với giá trị nhà sản xuất đƣa 1000mg (1g) sai lệch 2% 3.12 So sánh kết đối chứng Cả mẫu đƣợc gửi phân tích Trung tâm Phân tích Thử nghiệm I, Tập đồn VinaControl Phƣơng pháp phân tích đƣợc u cầu phƣơng pháp sắc ký khí Kết nhận đƣợc mẫu sát với kết phân tích mẫu luận văn sử dụng phƣơng pháp cực phổ Phƣơng pháp sắc ký khí cho kết gần với hàm lƣợng ghi nhãn mác lần lƣợt 0,41%, 248mg/viên 0,992 gam mẫu: mẫu thuốc nhỏ 55 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 mắt, mẫu thuốc viên nén mẫu thuốc tiêm với sai số lần lƣợt 2,5%; 0,8% 0,8% Mặc dù phƣơng pháp cực phổ cho kết phân tích sai lệch khoảng từ 2% đến 9% so với hàm lƣợng ghi nhãn mác sản phẩm nhƣng thời gian phân tích nhanh Sai số gặp phải chủ yếu tỷ lệ pha loãng lớn nên nhân hệ số cao gây sai lệch lớn cho kết phân tích cuối Bảng 3.27: Tổng hợp so sánh kết phân tích mẫu Tên mẫu Thuốc nhỏ mắt Thuốc viên Thuốc tiêm 56 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 KẾT LUẬN Với mục đích phát triển phát triển phƣơng pháp phân tích điện hóa ứng dụng vào phân tích dƣợc phẩm, chúng tơi nghiên cứu áp dụng thành công phƣơng pháp von-ampe xác định hàm lƣợng cloramphenicol số mẫu thuốc có thị trƣờng Sau thời gian nghiên cứu, tiến hành thí nghiệm xử lý số liệu, chúng tơi rút đƣợc số kết luận sau: - Quy trình xác định cloraphenicol phƣơng pháp cực phổ xung vi phân với điều kiện tối ƣu: + Cloramphenicol đƣợc đo đệm axetat 0,1M pH5,5 + Thời gian xục khí N2 tối ƣu 150s + Khoảng quét từ -0,3V đến 0,2V + Tốc độ quét 50mV/s - Khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn xác định cloramphenicol từ 0,5ppm -6 -5 đến 15ppm tƣơng đƣơng 1,5.10 M đến 4,6.10 M, R2 = 0,9992 - Sai số, độ lặp lại, độ phƣơng pháp tốt, áp dụng để phân tích mẫu thực tế Phƣơng pháp đƣợc ứng dụng xác định hàm lƣợng số mẫu thuốc Phƣơng pháp có thời gian xác định chất nhanh, cho kết có độ tin cậy cao, sai số dƣới 10% đƣợc kiểm nghiệm đối chúng với kết mẫu phân tích phƣơng pháp sắc ký khí Nhƣ vậy, phƣơng pháp cực phổ đƣợc nghiên cứu luận văn hồn tồn đƣợc sử dụng để xác định cloramphenicol mẫu dƣợc phẩm 57 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đặng Hồng Hải (2010), “Hóa dược” – Đại học Y khoa Hà Nội [2] Trần Đức Hậu (2004), “Hóa dược 1” – Đại học Dƣợc Hà Nội [3] Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2003), Hóa học Phân tích, Phần II – Các phương pháp phân tích cơng cụ” – Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội [4] Nguyễn Việt Huyến (1990), “Cơ sở phương pháp phân tích điện hóa” – Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội [5] Phạm Luận, “Sổ tay pha chế dung dịch, phẩn 1,2” – Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội [6] Từ Vọng Nghi (1968), Phương pháp phân tích cực phổ” - NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp [7] Từ Vọng Nghi (2001) “Hóa học Phân tích” – NXB Đại học Quốc gia Hà Nội [8] NK dịch từ The Advocate 10/2003, “Nhìn lại vấn đề dư lượng cloramphenicol”, Thƣơng mại thủy sản, Tạp chí Hiệp hội chế biến xuất thủy sản Việt Nam, trang 26-38 [9] Tạ Thị Thảo (2005), “Bài giảng thống kê hóa Phân tích” – ĐẠi học Khoa học Tự nhiên Hà Nội [10] Đào Hữu Vinh, Từ Vọng Nghi (1972), “Các phương pháp Hóa học phân tích” – NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp [11] http://www.thuocbietduoc.com.vn/thuoc/thuoc-goc137.aspx [12] http://en.wikipedia.org/wiki/Chloramphenicol 58 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Tiếng nƣớc [13] U.S Department of Health and Human Services, Technology Planning and Management Corporation, FINAL Report on Carcinogens Background Document for Chloramphenicol, December 13 - 14, 2000, pp 1-5 [14] L Agui‟, A Guzma‟n, P Ya‟nez-Sedeno, J M Pingarro‟n (2002), Coltammetric Determination of Chloramphenicol in milk at Electrochemically Activated Carbon Fiber Microelectrodes, Analytica Chimia Acta, 461, pp 65-73 [15] Alemu, Hailemichael; Hlalele, Lebohang; Voltammetric determination of chloramphenicol at electrochemically pretreated glassy carbon electrode; Bulletin of the Chemical Society of Ethiopia, Volume 21, Number 1, April 2007 , pp 1-12(12); [16] Allen P Pfenning, Jose E Roybal, heidi S Rupp, Sherri B Turnipspeed, Steve A Gonzales and Jeffrey A Hurbut (2000), Simultaneous determination of residua of chloramphenicol, Florfenicol, Florfenicol amine and Thiamphenicol in Shrimp Tissue by Chromatography with Electron Capture Detection, Journal of AOAC International, Vol 83, No 1, pp 26-30 [17] Amati, P (1970), Chloramphenicol; Effect of DNA synthesis during phage development in E coli, Science, 168, pp 1226-1228 [18] Anbao Wang, Lan Zang, Yuzhi Fang (1999), Determination and Seperation of Chloramphenicol and its Hydroysate in Eye-Drops by Capillary Zone Electrporesis with Amperometric detection, Analytica Chimica Acta, 394, pp 309-316 [19] Chukwuenweniwe J Enoka, Johnson Smart and Sunday A Adelusi, An Alternative Colormetric Method for the determination of Chloramphenicol, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, Vol 2, Dec 2003, pp 215-221 59 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 [20] Devani MB, Shishoo CJ, Doshi KJ, Shah AK, Spectrophotometric Determination of Chloramphenicol and its Esters in Comples Drug Mixtures, J Assoc of Anal Chem 1981 May, 64 (3), pp 557-563 [21] D Guha, U Bhattacharjee, S Mitra, R Das, S Mukherjee (1998), Interaction of 3-aminophthahydrazide with 5-hydroxytetracyline and Chloramphenicol: a Flourscence Quenching Study, Spectrochimia Acta Part A, pp 525-533 [22] M Humayoun Akhtar, Claude Danisb, Andre Sauve, Carla Barry (1995), Gas Chromatography Determination of Incurred Chloramphenicol Residues in Eggs Following Optimal Extraction, Journal of Chromatography A, 696, pp 123-130 [23] A F Jackson, B R Wentzell, , D R McCalla and K B freeman (1977), Chloramphenicol damages bacterial DNA, Biochem Biophys, Res, Commun., 78, pp 151-157 [24] Joe Storey, Al Pfenning, Sherri Turniprseed, Gene, Nandrea, Rebecca Lee, Cathy Burns, Mark Madson, Determination of Chloramphenicol in Shrimp and Crap Tissues by Eletrospray Triple Quadrupole LC/MS/MS, Vol 19, No 6, June 2003 [25] Kjetil Fossdal and Jacobsen, Polarographic Determination of Chloramphenicol, Analytica Chimia Acta, 1971, pp 105-107 [26] Laferriere CI, Marks MI, Chloramphenicol: properties and clinical use.; Pediatr Infect Dis 1982 Jul-Aug;1(4):257-64 [27] Lúcia Codog noto & Eduar Winter, Keity Marga reth Doretto, Gabri el Bezzan Mon teiro, Susan ne Rath, Electroanalytical perform ance of selfassembled monolayer gold electrode for chloramp henicol determination, Microchim Acta (2010) 169:345 – 351 60 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 [28] W M A Niessen (1998), Analysis of Antibiotics by Liquid Chromatography Mass Spectroscopy, Journal of Chromatography A, 812, pp 53-75 [29] Rick W Fedeniuk, Phillis J Shand (1998), Theory an Methodology of Antibiotic Extraction from Biomatrices, J of Chrom A, 812, pp 3-15 [30] C Sánchez-Brunete, B Albero, E Miguel, J L Tadeo, (2005) Rapid Method for Determination of Chloramphenicol Residues in Honey Using Gas Chromatography-Mass Spectrometry, Bull Environ Contam Toxicol 75:459–465 [31] Sandra Impens, Wim Reybroeck, Han Vercammen, Dirk Courtheyn, Sigrid Ooghe, Katia De Wasch, Walter Smedts and Hubert De Brabander (2002), Sceening and Confirmation of Chloramphenicol in Shrimp Tissue Using ELISA in Combination with GC-MS and LC-MS, Analytica Chimia Acta, Vol 224116, pp 1-11 [32] Si Lin, Shi-qu an Han, Yi-bing Liu, Wen- ge Xu Guo- ying Guan, (2005) Chemiluminescence immunoassay for chloramphenicol, Anal Bioanal Chem 382: 1250–1255 [33] R Stidl · M Cichna-Markl, (2007) Sample clean-up by sol-gel immunoaffinity chromatography for determination of chloramphenicol in shrimp, J Sol-Gel Sci Techn 41:175–183 [34] Suchada Chuanuwatanakul, Orawon Chailapakul, Shoji Motomizu; (2008) Electrochemical analysis of chloramphenicol using boron-doped diamond electrode applied to a flow-injection system; Analytical sciences the international journal of the Japan Society for Analytical Chemistry; 24, Issue: 4, Pages: 493-498 [35] JJ Van der Lee, WP Van Bennekom and HJ De Jong, (1980) Determination of Chloramphenicol at Ultra-trace Lavels by High-Performance DPV, Analytica Chimia Acta, 117 171-182 61 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 [36] J.J Van der Lee, H B J Van der Lee-Rijsbergen, U R Tjaden and W P Van Bennekom, (1983) A liquid chromatographic method for chloramphenicol and its nitro degradation products with reductive amperometric detection at a mercury electrode, Analytica Chimica Acta, 149 29-38 [37] Wenrui Jin, Xiaoying Ye, Daiqing Yu, Qian Dong (2000), Measurement of Chloramphenicol be Capillary Zone Electrophoresis Following End-collumn Amperommetric Detection at a Carbon Fiber Micro-disk Array Electrode, Journal of Chromatography B, Vol 741, pp.155-162 [38] Yanb in Lu, Qing Shen, Zhiyu an Dai, Hong Zhang, (2010) Multi- walled carbon nanotub es as solid-phase extractionadsorbent for the ultra-fast determination of chloramp henicol in egg, honey, and milk by fused-core C18-base d high-performance liquid chromatog raphy –tandem mass spectrometry, Anal Bioanal Chem 398:1819– 1826 [39] J L Zhang, X C Tan, S W Tan, D D Zhao, L Liu, Z W Huang and Z Y Huang; Fenxi Shiyanshi, (2011), Electrochemical study of chloramphenicol and its determination using cobalt nanoparticles modified glassy carbon electrodes; 30(1), 51-54 [40] Zhi-Yong Huang, Qing-Pi Yan, Qiang Zhang, Ai-Hong Peng, (2009) Sample digestion for determining chloramphenicol residues in carp serum and muscle, Aquacult Int 17:69–76 62 ... Các cực làm việc thường dùng phương pháp von- ampe a Cực giọt thủy ngân treo (HMDE) Cực HMDE loại cực đƣợc dùng phổ biến phƣơng pháp vonampe Nó giọt thủy ngân hình cầu kích thƣớc nhỏ đƣợc treo. .. HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON- AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO Chuyên ngàng: Hóa Phân tích Mã số: 60 44... thuật ghi đường von- ampe Trong phƣơng pháp SV, để ghi đƣờng von- ampe, ngƣời ta dùng kỹ thuật khác nhƣ von- ampe xung vi phân, von- ampe sóng vng,… Khi đó, cách tƣơng ứng, phƣơng pháp von- ampe đƣợc gắn