Phân Lập Và Kiểm Tra Tính Nhạy Cảm Của Vi Khuẩn Escherichia Coli Và Salmonella Spp. Đối Với Kháng

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG TRƯƠNG PHƯỚC ĐỨC PHÂN LẬP VÀ KIỂM TRA TÍNH NHẠY CẢM CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA SPP ĐỐI VỚI KHÁNG SINH Ở TRẠI GÀ THỊT TÂN LẬP THUỘC HUYỆN TRẢNG BƠM – TỈNH ĐỒNG NAI Luận Văn Tốt Nghiệp Ngành : BÁC SĨ THÚ Y Cần Thơ, 12/ 2010 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận Văn Tốt Nghiệp Ngành : BÁC SĨ THÚ Y Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ KIỂM TRA TÍNH NHẠY CẢM CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA SPP ĐỐI VỚI KHÁNG SINH Ở TRẠI GÀ THỊT TÂN LẬP THUỘC HUYỆN TRẢNG BƠM – TỈNH ĐỒNG NAI Giáo viên hướng dẫn: PGS TS LƯU HỮU MÃNH NGUYỄN THANH PHI LONG ThS BÙI THỊ LÊ MINH Sinh viên thực hiện: Trương Phước Đức MSSV: 3064576 Lớp Thú Y K32 Cần Thơ, 12/ 2010 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y  Đề tài: “Phân lập kiểm tra tính nhạy cảm vi khuẩn Escherichia coli Salmonella spp kháng sinh trại gà thịt Tân Lập thuộc huyện Trảng Bom – tỉnh Đồng Nai” Sinh viên thực hiện: Trương Phước Đức, lớp THÚ Y K32 Địa điểm: Phịng thí nghiệm Vi trùng Miễn dịch, môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ Thời gian thực hiện: từ tháng 09 năm 2010 đến tháng 11 năm 2010 Cần Thơ, ngày tháng Duyệt Bộ môn năm 2010 Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 Duyệt Giáo Viên Hướng Dẫn LƯU HỮU MÃNH Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 Duyệt Khoa Nông nghiệp Sinh Học Ứng Dụng i LỜI CẢM ƠN  Trong suốt q trình học tập, tơi ln nhận giúp đỡ nhiều người Tơi khơng biết nói Trước trường, tơi xin: Thành kính biết ơn ! Cha mẹ hết lòng tận tụy chăm sóc, dạy bảo cho tơi nên người Kính dâng lên cha mẹ lòng biết ơn sâu sắc người thân động viên suốt thời gian qua Xin chân thành biết ơn ! Thầy Lưu Hữu Mãnh dành thời gian quý báu, tận tình hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian làm luận văn tốt nghiệp Thầy Đỗ Trung Giã, cố vấn học tập nhắc nhở động viên suốt thời gian học tập Trường Quý Thầy, Cô Bộ môn Thú y Bộ môn Chăn nuôi tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm vô quý báu với suốt thời gian qua Xin chân thành cám ơn ! Anh Nguyễn Thanh Phi Long, anh Võ Thanh Duy anh em trại Cây Gáo trại Tân Lập tạo điều kiện cho thực luận văn tốt nghiệp Cô Bùi Thị Lê Minh, cô Nguyễn Thu Tâm giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu phân tích mẫu suốt thời gian thực luận văn tốt nghiệp Cùng tất bạn bè động viên, chia sẻ giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài Cần thơ, ngày 20 tháng 12 năm 2010 Trương Phước Đức ii TÓM LƯỢC Đề tài: “Phân lập kiểm tra tính nhạy cảm vi khuẩn Escherichia coli Salmonella spp kháng sinh trại gà thịt Tân Lập thuộc huyện Trảng Bom – tỉnh Đồng Nai” thực từ tháng đến tháng 11 năm 2010 Từ tháng đến tháng 11 năm 2010, phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên khảo sát: 42 mẫu phân, 15 mẫu thức ăn máng, mẫu nước 12 mẫu khơng khí chuồng ni Kết cho thấy tỷ lệ nhiễm E Coli sau: phân có 29 mẫu nhiễm (chiếm 69.05%), thức ăn máng mẫu (53,33%) 100% mẫu nước có nhiễm, khơng tìm thấy vi khuẩn E coli khơng khí Có khác biệt tỷ lệ nhiễm E coli nhóm mẫu (p=0,000) Đối với Salmonella spp tỷ lệ nhiễm phân 9,25%, nước, thức ăn khơng khí chuồng ni khơng tìm thấy Kết kháng sinh đồ cho thấy tỷ lệ kháng thuốc vi khuẩn E coli kháng sinh Amoxcillin, Bactrim, Colistin mức cao 86,45%, 81,82% 77,19% E coli nhạy cảm với Norfloxacin 54,55% Tỷ lệ kháng thuốc vi khuẩn Salmonella kháng sinh Bactrim, Colistin 100% Salmonella spp nhạy cảm với Norfloxacin 66,67% iii MỤC LỤC  Trang Trang tựa i Trang duyệt ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt v Danh sách bảng vi Danh sách hình vii Tóm lược viii CHƯƠNG Đăt Vấn Đề CHƯƠNG Cở Sở Lý Luận .2 2.1 Vi khuẩn Escherichia coli .2 2.1.1 Đại cương Escherichia coli 2.1.2 Đặc điểm hình thái cấu tạo 2.1.3 Đặc điểm nuôi cấy .3 2.1.4 Đặc điểm sinh hóa .4 2.1.5 Cấu trúc kháng nguyên .4 2.1.6 Tính gây bệnh sức đề kháng 2.1.7 Độc tố vi khuẩn 2.2 Vi khuẩn Salmonella spp 2.2.1 Đại cương Salmonella spp .7 2.2.2 Đặc điểm hình thái cấu tạo 2.2.3 Đặc điểm nuôi cấy .8 2.2.4 Đặc điểm sinh hóa .8 2.2.5 Cấu trúc kháng nguyên .9 2.2.6 Tính gây bệnh sức đề kháng 11 2.2.7 Tính biến dị 11 2.2.8 Độc tố 12 2.2.9 Đối tượng mắc bệnh 12 2.3 Bệnh vi khuẩn E coli Salmonella gà 13 2.3.1 Tình hình nghiên cứu E coli Salmonella gà 13 2.3.2 Đặc điểm bệnh E coli Salmonella gà 15 iv 2.4 Một số tiêu chuẩn vi sinh vật thức ăn, nước uống dùng chăn nuôi 17 2.4.1 Tiêu chuẩn vi sinh vật thức ăn 17 2.4.2 Tiêu chuẩn vi sinh vật nước uống 18 CHƯƠNG Phương Tiện Phương Pháp Nghiên Cứu .19 3.1 Phương tiện nghiên cứu 19 3.1.1 Thời gian – địa điểm – đối tượng nghiên cứu 19 3.1.2 Thiết bị - hóa chất dùng nghiên cứu .19 3.2 Phương pháp nghiên cứu 20 3.2.1 Phương pháp lấy mẫu 20 3.2.2 Phương pháp phân tích mẫu .21 3.3 Kháng sinh đồ 27 ` 3.3.1 Nguyên tắc 27 3.3.2 Môi trường làm kháng sinh đồ 28 3.3.3 Phương pháp làm kháng sinh đồ 28 3.3.4 Đọc kết 28 3.4 Xử lý số liệu 29 CHƯƠNG Kết Quả Thảo Luận 30 4.1 Tổng quan địa điểm lấy mẫu… 30 4.1.1 Điều kiện tự nhiên xã hội huyên Trang Bom .30 4.1.2 Tình hình chăn ni trại gà Tân Lập 31 4.2 Kết phân lập vi khuẩn Escherichia coli Salmonella spp trại Tân Lập 34 4.2.1 Kết phân lập Escherichia coli 34 4.2.2 Mật độ vi khuẩn Escherichia coli 36 4.2.3 Kết phân lập Salmonella spp 37 4.3 Kết thử tính nhạy cảm vi khuẩn kháng sinh 38 4.3.1 Tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli 38 4.3.2 Tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella spp .39 CHƯƠNG Kết Luận Đề Nghị 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Đề nghị 41 v Tài Liệu Tham Khảo 42 Phụ chương vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT E.coli: Escherichia coli EHEC: Enterohemorrhagic E coli EPEC: Enteropathogenic E coli ETEC: Enterotoxigenic E coli EIEC: Enteroinvasive E coli EaggEC: Enteroaggregative E coli TCVN: Tiêu chuẩn Việt Nam PTNT: Phát triển nông thôn vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng Công thức kháng nguyên số chủng Salmonella 10 Bảng Loài mắc bệnh nguyên nhân gây bệnh 13 Bảng Tiêu chuẩn vi sinh vật số loại thức ăn gia súc .17 Bảng Tiêu chuẩn vệ sinh thức ăn hỗn hợp dành cho gà thịt 18 Bảng Tiêu chuẩn vi sinh vật nước dùng chăn nuôi 18 Bảng Định danh vi khuẩn Escherichia coli Salmonella phản ứng sinh hóa 26 Bảng Tiêu chuẩn đọc kết kháng sinh đồ 29 Bảng Quy trình tiêm phịng Vaccine phịng bệnh cho gà thịt 34 Bảng Tình hình nhiễm Escherichia coli trại gà Tân Lập 34 Bảng 10 Mật độ vi khuẩn E coli trại Tân Lập 36 Bảng 11 Tình hình nhiễm Salmonella spp trại gà Tân Lập 37 Bảng 12 Kết kiểm tra tính nhạy cảm nhóm kháng sinh vi khuẩn Escherichia coli 38 Bảng 13 Kết kiểm tra tính nhạy cảm nhóm kháng sinh vi khuẩn Salmonella spp 39 viii Tỷ lệ nhiễm (%) 120% 100,00 100% 80% 69,05 53.33 60% 40% 20% 0,00 0% phân thức ăn máng nước uống khơng khí Loại mẫu Hình 14 Biểu đồ tình hình nhiễm E coli trại gà Tân Lập 4.2.2 Mật độ vi khuẩn Escherichia coli Bảng 10 Mật độ vi khuẩn E coli trại Tân Lập Loại mẫu Số mẫu kiểm tra Số mẫu nhiễm Số khuẩn lạc trung bình 1g (1ml) mẫu Phân Thức ăn máng Nước uống 42 15 29 4,14 x 106 2,03 x 104 1,24 x 103 Kết phân lập E coli cho thấy vi khuẩn xuất phân, thức ăn nước uống Số khuẩn lạc trung bình loại mẫu phân 4,14 x 10 , thức ăn 2,03 x 104 nước 1,24 x 103 Theo Maryvonne (1999) 1gram phân gia cầm bình thường khoảng 10 – 107 vi khuẩn E coli (Dẫn liệu Nguyễn Văn Hiệp, 2000) ta nhận thấy phân lượng E coli mức bình thường, chưa có khả gây bệnh Còn nước số vi khuẩn E coli 1,24 x103 , kết cao mức cho phép nước dùng chăn nuôi (>100 vi khuẩn E coli) (TCVN 5944 – 1995: Tiêu chuẩn chất lượng nước bề mặt nước ngầm) Vì nơi đem nguồn bệnh vào trại Do đó, cần phải có cách xử lý nước trước cho gà uống Với thức ăn số vi khuẩn cao 2,03 x 10 không đạt mức cho phép sử dụng chăn nuôi thức ăn hỗn hợp hoàn chỉnh dành cho gà thịt Bộ Nơng Nghiệp PTNT (khơng có diện vi khuẩn E coli Salmonella) Có thể thức ăn thừa cịn sót lại máng, ăn gà giẩm đạp phân 38 lên nên kết cao Nên cần phải bố trí máng ăn thích hợp để gà khơng giẩm đạp lúc ăn, không để thức ăn thừa máng lâu Hình 15 Gà giẩm đạp lên thức ăn lúc ăn 4.2.3 Kết phân lập Salmonella spp Bảng 11 Tình hình nhiễm Salmonella spp trại gà Tân Lập Loại mẫu Phân ngày tuổi Phân ngày tuổi Phân 10 ngày tuổi Thức ăn máng Nước uống Khơng khí P – value Số mẫu kiểm tra Số mẫu nhiễm Tỷ lệ (%) 14 14 14 15 1 0 7,14a 7,14a 14,29a 0b 0c 0d 0,000 a, b, c, d: kí hiệu xử lý thống kê Trong cột chữ giống khác khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05) Những chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (p