Chiết xuất, phân lập stipuleanosid r2 từ sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus seem ) làm nguyên liệu xây dựng chất chuẩn cho dược liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC BÙI THỊ THANH VÂN CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP STIPULEANOSID R2 TỪ SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidus Seem.) LÀM NGUYÊN LIỆU XÂY DỰNG CHẤT CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: Bùi Thị Thanh Vân CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP STIPULEANOSID R2 TỪ SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidus Seem.) LÀM NGUYÊN LIỆU XÂY DỰNG CHẤT CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa : QH.2014.Y Người hướng dẫn: TS NGUYỄN HỮU TÙNG Hà Nội - 2019 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu hồn thiện khóa luận này, bên cạnh tơi ln có giúp đỡ vơ q giá đến từ thầy cô giáo Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội với bạn bè gia đình thân u tơi Th ời điểm hồn thành khóa luận lúc tơi dành lời tri ân chân thành nh ất đến người dạy, dìu dắt giúp đỡ tơi suốt thời gian qua Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giáo viên hướng dẫn – TS Nguyễn Hữu Tùng – Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội - thầy dành nhiều thời gian hướng dẫn, dạy dỗ giúp đỡ q trình thực đề tài Tơi xin cảm chị Đặng Thị Ngần – Khoa Y Dược, Đạ i học Quốc gia Hà Nội nhiệt tình dạy, đóng góp ý kiến để khóa luận tơi đượ c hồn thiện Tơi xin gửi lời cảm ơn tới chị Nguyễn Thị Thu Thủy anh Nguyễn Hoàng Việt – Đại học Dược Hà Nội; PGS.TS Dương Thị Ly Hương – Khoa Y Dược Đại học Quốc gia Hà Nội chủ nhiệm đề tài Tây Bắc giúp tơi có kết để tiếp bước thực nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm Khoa, thầy cô Khoa Y Dược, đặc biệt mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc tạo điều kiện cho thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể Dược học khóa QH.2014.Y, đặc biệt bạn Hà, Hoa, Nhung, Thảo đồng hành suốt thời gian nghiên cứu Cuối cùng, xin dành lời tri ân sâu sắc tới gia đình thân yêu tôi, nuôi nấng tạo động lực để tơi có kết ngày hơm Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2019 Sinh viên Bùi Thị Thanh Vân MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 CHẤT CHUẨN, CHẤT ĐỐI CHIẾU 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Ứng dụng 1.1.3 Phân loại 1.1.4 Sự cần thiết việc thiết lập chất chuẩn đối chiếu 1.1.5 Phương pháp thiết lập chất chuẩn 1.2 TỔNG QUAN VỀ SÂM VŨ DIỆP .6 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý .8 1.1.4 Công dụng .9 1.2 TỔNG QUAN VỀ STIPULEANOSID R2 1.2.1 Cơng thức hóa học đặc điểm .9 1.2.2 Tác dụng sinh h ọc 10 1.2.3 Các nghiên cứu stipuleanosid R2 10 CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 11 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 11 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 11 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 12 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 12 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.3.1 Nghiên cứu chiết xuất, phân lập tinh chế, xác định cấu trúc hóa học stipuleanosid R2 13 2.3.2 Xây dựng liệu nhận dạng chất 14 2.3.3 Phương pháp định tính, định lượng stipuleanosid R2 SVD b ằ ng HPLC 14 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 15 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 16 3.1 Chiết xuất, phân lập tinh chế Stipuleanosid R2 Sâm vũ diệp 16 3.1.1 Chiết xuất 16 3.1.2 Phân lập 17 3.1.3 Kiểm tra độ tinh khiết stipuleanosid R2 phân lập SKLM 18 3.2 Xây dựng liệu nhận dạng stipuleanosid R2 19 3.2.1 Đặc điểm cảm quan 19 3.2.2 Điểm chảy 19 3.2.3 Kết đo phổ 19 3.3 Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 tinh chế HPLC 22 3.3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký 22 3.3.2 Nhận dạng pic sắc ký đồ stipuleanosid R2 phân lập 23 3.3.3 Định lượng stipuleanosid R2 phân lập 24 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 29 4.1 Về chiết xuất, phân lập tinh chế 29 4.2 Bước đầu xây dựng liệu nhận dạng 30 4.3 Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập HPLC30 4.3.1 Xây dựng phương pháp 30 4.3.2 Phân tích định tính định lượng stipuleanosid R2 phân lập .30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤ BuOH CCĐC EtOH GC HPLC MeOH MS NRM LOD LOQ RDS SKĐ SKLM SVD UV DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng So Bảng 3.1 Hà Bảng 3.2 Kế Bảng 3.3 Bảng 3.4 Số Bảng 3.5 Sự Bảng 3.6 Kế Ch DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hình ảnh sâm Hình 1.2 Các hợp chất Hình 1.3 Cấu trúc hóa Hình 2.1 Mẫu sâm vũ Cai Hình 3.1 Quy trình chi Hình 3.2 Sơ đồ phân lậ Hình 3.3 Sắc ký đồ 10% /EtOH Hình 3.4 Cấu trúc hóa Hình 3.5 SKĐ HPLC c chất chuẩn đố Hình 3.6 Sắc ký đồ xá ĐẶT VẤN ĐỀ Đất nước Việt Nam ta tự hào thiên nhiên ưu đãi, tạo hóa ban cho nguồn dược liệu “giàu có” so với nước khu vực giới Thống kê Viện Dược liệu cho thấy, nước ghi nhận 5.117 loài thực vật nấm, 408 lồi động vật 75 loại khống có cơng dụng làm thu ốc, có nhiều loài dược liệu quý hiếm, đặc hữu như: sâm vũ diệp, sâm ngọc linh, ba kích, ngân đằng, thơng đỏ… Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem., họ Nhân sâm – Araliaceae) dược liệu quý, phân bố Trung Quốc dãy núi Hoàng Liên Sơn, Tây Bắc nước ta Về mặt y học, sâm vũ diệp sử dụng làm thuốc bổ thành phần số thuốc truyền thống dân tộc vùng núi Tây Bắc có tác dụng chống ung thư, chống oxy hóa, bổ dưỡng, tăng trí nhớ Theo tài liệu công bố sâm vũ diệp cho thấy saponin thành phần hoạt chất mang lại tác dụng dược lý giá trị sử dụng dược liệu quý y học, đặc biệt nói đến stipuleanosid R2 – saponin quan trọng có sâm vũ diệp Để nâng cao chất lượng nghiên cứu stipuleanosid R2 nói riêng hợp chất nói chung, việc kiểm tra, kiểm sốt chất lượng dược liệu vơ quan trọng Song thực tế nước ta cịn gặp khó khăn việc phân tích, kiểm nghiệm thiếu chất chuẩn cần thiết Phần lớn chất chuẩn sử dụng phải nhập từ nước với giá cao thời gian đặt hàng kéo dài Nhằm khắc phục nhược điểm này, với mục tiêu phát triển ti ềm vị dược liệu quý sâm vũ diệp, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Chiết xuất, phân lập stipuleanosid R2 từ Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) làm nguyên liệu xây dựng chất chuẩn cho dược liệu” Mục tiêu đề tài: Chiết xuất, phân lập tinh chế stipuleanosid R2 có độ tinh khiết 95% từ dược liệu sâm vũ diệp Bước đầu xây dựng liệu nhận dạng stipuleanosid R2: nhiệt độ nóng chảy, liệu phổ Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập Kết đề tài góp phần xây dựng sở liệu thành phần hóa học, xây dựng tiêu chuẩn dược liệu sâm vũ diệp làm sở cho nghiên cứu hoạt tính sinh học stipuleanosid R2, tảng cho việc phát triển sâm vũ diệp điều trị CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 CHẤT CHUẨN, CHẤT ĐỐI CHIẾU 1.1.1 Khái niệm Chất chuẩn (standard subtances) hay chất chuẩn đối chi ế u (reference standards) chất cần thiết để đánh giá nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm… theo quy trình xác định nhằm đảm bảo kết phân tích đạt độ xác, đáng tin cậy [28] Chất chuẩn đối chiếu phần quan trọng đo lường thiết lập tính khả thi so sánh (comparability) truy nguyên (traceability)[6] Theo dược điển Việt Nam V: Chất đối chiếu chất đồng xác định để dùng phép thử quy định hóa học, vật lý sinh học Trong phép thử tính chất ch ất đối chiếu so sánh với tính chất chất thử Chất đối chiếu phải có độ tinh khiết phù hợp với mục đích sử dụng [3] Theo định nghĩa FDA: “Chất chuẩn đối chiếu (reference standards) lô hay mẻ hợp chất làm thuốc điều chế đặc biệt cách tổng hợp độc lập cách tinh chế bổ sung nguyên liệu điều chế chứng minh loạt thử nghiệm phân tích sâu rộng để xác định ngun liệu xác thực có độ tinh khiết tối đa, đạt cách hợp lý Nó thường dùng cho việc phân giải cấu trúc chất làm chuẩn cho chất chuẩn làm việc (working standards) [19] 1.1.2 Ứng dụng Chất đối chiếu dùng phép thử sau: - Định tính phương pháp quang phổ hấp thụ hồng ngoại - Định lượng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến, quang phổ huỳnh quang - Các phép thử định tính định lượng phương pháp sắc ký - Định lượng phương pháp vi sinh vật - Các phép chuẩn độ đo thể tích, phân tích khối lượng - Các phép thử sinh học - Một số phép thử khác có hướng dẫn chuyên luận riêng [3] Ngồi chất đối chiếu cịn dùng để: - Thẩm định phương pháp - Chuẩn hóa chất đối chiếu khác Hình 3.5 SKĐ HPLC stipuleanosid R2 phân lập (A), cao BuOH (B)và chất chuẩn đối chiếu (C) Nhận xét: Kết phân tích HPLC minh họa cho thấy stipuleanosid R2 hợp chất thiên nhiên có SVD với thơng số thời gian lưu dung dịch cao butanol chuẩn bị thời điểm chạy sắc ký với điều kiện chiết xuất chuẩn thường quy 15,565 15.564 phút, giá trị tương đương với thời gian lưu chất chuẩn 15.565 phút 3.3.3 Định lượng stipuleanosid R2 phân lập Yêu cầu: Hàm lượng không thấp 95,0% tính theo nguyên trạng Tiến hành: Pha mẫu hợp chất stipuleanosid R2 phân lập được: dùng cân phân tích cân xác mẫu, mẫu khoảng 10 mg chất phân lập vào bình định mức 20 mL, hịa tan pha lỗng vừa đủ MeOH, sau siêu âm 10 phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm Pha mẫu dung dịch đối chiếu stipuleanosid R2: dùng cân phân tích cân xác khoảng 10 mg chuẩn stipuleanosid R2 vào bình định mức 20 mL, hịa tan pha 24 loãng vừa đủ MeOH, siêu âm 10 phút, ly tâm lấy dịch chiết lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiến hành chạy HPLC với điều kiện sắc ký nêu mục 3.3.1 Thu kết sắc ký trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết định lượng nguyên liệu thiết lập chất chuẩn Mẫu thử Khối lượn 9,45 10,17 9,34 9,61 10,28 10,74 Hàm RSD Nhận xét: Các mẫu thử có hàm lượng lớn 95,0% (tính theo nguyên trạng), theo lý thuyết đạt yêu cầu để thiết lập chất chuẩn đối chiếu, nhiên chưa thể kết luận cách chắn, c ầ n phải tiến hành thêm phương pháp đặc hiệu xác 25 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Về chiết xuất, phân lập tinh chế 4.1.1 Chiết xuất Với quy trình chiết xuất dược liệu SVD phương pháp chi ế t siêu âm sử o dụng dung môi ethanol 70 , cất quay thu cắn toàn phần, phương pháp chiết siêu âm có ưu điểm làm tăng tốc độ chiết, giảm nhiệt độ áp suất chiết Từ cao chiết toàn phần phân đoạn phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần: ether, ethyl acetat n-butanol thu cắn phân đoạn với khối lượng ether (1,26 %), EtOAc (0,59 %), BuOH (4,71%) so với nguyên liệu khô ban đầu Hợp chất stipuleanosid R2 chất saponin phân cực, việc chiết lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần nhằm mục đích loại bỏ thành phần khơng phân cực phân cực tan dung môi ether ethyl acetat, chuẩn bị cho bướ c phân lập tiến hành nhanh xác 4.1.2 Phân lập tinh chế Phân đoạn n-butanol thu với hàm lượng cao sử dụng để tiến hành phân lập stipuleanosid R2 sắc ký cột pha thuận với hệ dung môi rửa giải CH2Cl2 – MeOH theo gradient nồng độ Kết hợp với SKLM để đánh giá phân đoạn thu được, cho thấy phân đoạn B4 cho sắc ký đồ mỏng có vết màu hồng tím rõ nét phù h ợ p so với đặc tính hợp chất cần phân lập Sau chúng tơi tiến hành sắ c ký c ột pha đảo để tinh chế stipuleanosid R2 dược liệu SVD thu 180 mg bột màu trắng Kiểm tra độ tinh khiết chất tinh chế phương pháp SKLM cho thấy cắn tinh chế vết màu hồng sau chuyển sang màu tím, đặc trưng dẫn xuất triterpen Kết góp phần đánh giá stipuleanosid R2 tinh chế có độ tinh khiết cao, ứng dụng phương pháp việc phân lập hợp chất stipuleanosid R2 SVD dược liệu khác chứa thành phần Như trình bày phần tổng quan, stipuleanosid R2 có nhiều tác dụng dược lý có ý nghĩa lâm sàng, sử dụng để điều trị nhiều bệnh có tác dụng gây độc số dòng tế bào ung thư Hiện tác dụng stipuleanosid R2 chưa dùng nhiều lâm sàng tương lai stipuleanosid R2 nghiên cứu sử dụng rộng rãi người phâp lập tinh chế stipuleanosid R2 cần thiết phục vụ cho việc nghiên cứu tác dụng sinh học 29 quy trình chiết xuất, phân lập tinh chế mà chúng tơi đưa ứng dụng 4.2 Bước đầu xây dựng liệu nhận dạng Việc xác minh lại cấu trúc stipuleanosid R2 tinh chế dược liệu Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) phân tích khối phổ (ESI-MS) khẳng định công thức phân tử cấu trúc stipuleanosid R2 tinh chế phù hợp với lý thuyết Đồng thời kết nhiệt độ nóng chảy đo chất phân lập góp phần khẳng định sản phẩm tinh chế hợp chất stipuleanosid R2 4.3 Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập HPLC 4.3.1 Xây dựng phương pháp Chúng thực xây dựng phương pháp HPLC với detector DAD để định tính, định lượng stipuleanosid R2 tinh chế đượ c Đề tài sử dụng phương pháp phân tích định lượng saponin HPLC phương pháp Dược điển nước công nhận đạt yêu cầu tính tiên tiến so với phương pháp quang phổ hay phương pháp khối lượng phần lớn chuyên luận dược liệu Đây phương pháp có nhiều ưu điểm tiến hành đơn giản từ việc pha mẫu, chuẩn bị dung môi pha động đến tiến hành s ắ c ký Trong khoảng nồng độ khảo sát, diện tích pic nồng độ chất phân tích có mối tương quan tuyến tính chặt chẽ Phương pháp cịn đảm bảo độ độ đặc hiệu cao Tham khảo số tài liệu kết hợp với điều kiện có sẵn, chúng tơi lựa chọn chương trình sắc ký mô tả mục 3.3.1 Với điều kiện sắc ký lựa chọn, chất nghiên cứu mẫu thử chuẩn bị từ dịch chiết n-butanol thân rễ SVD chất phân l ậ p tách tương đối tốt, pic cân đối, thời gian lưu hợp lý, phù hợp để định lượng thành phần thân rễ SVD 4.3.2 Phân tích định tính định lượng stipuleanosid R2 tinh chế 4.3.2.1 Định tính Kết SKĐ chạy HPLC mẫu: stipuleanosid R2 phân lập được, cao BuOH chất chuẩn đối chiếu cho pic thời gian lưu khoảng phút thứ 15 Theo tài liệu nghiên cứu nay, khẳng định thời gian lưu hợp chất stipuleanosid R2 4.3.2.2 Định lượng 30 Bằng phương pháp HPLC với detector UV xây dựng để định tính, định lượng stipuleanosid R2 xác định giới hạn tạp chất liên quan stipuleanosid R2 tinh chế được, xác định xác hàm lượng stipuleanosid R2 tinh chế 96,22 0,11 (%) > 95,0% (tính theo nguyên trạng), đạt yêu cầu để thiết lập chất chuẩn đối chiếu Stipuleanosid R2 tinh chế xây dựng thành chất đối chi ếu sử dụng phân tích, xây dựng tiêu chuẩn Với mục đích xa thiết lập chất chuẩn phục vụ cho công tác kiểm nghiệm dược liệu SVD, sau xác định độ tinh khiết SKLM HPLC saponin phân lập được, thời gian có hạn, chúng tơi dừng lại việc chiết xuất, phân lập tinh chế Việc thiết lập chất chuẩn stipuleanosid R2 cần đánh giá thêm vài ch ỉ tiêu khác theo tiêu chí DĐVN Dược điển quốc tế 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Với kết thực nghiệm thu đề tài đạt mục tiêu đề là: Nghiên cứu chiết xuất, phân lập tinh chế Stipuleanosid R2 t dược liệu sâm vũ diệp Bước đầu xác minh cấu trúc hóa học, xây dựng liệu nh ậ n dạng chất tinh chế Định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập Như vậy, việc xây dựng tiêu chuẩn cho hợp chất saponin từ thân rễ SVD – stipuleanosid R2 góp phần ý nghĩa vào sở liệu hóa thực vật tiêu chuẩn hóa dược liệu SVD làm sở định hướng cho nghiên cứu hoạt tính sinh học đối tượng tiềm thuộc chi Panax Và thêm vào kết cịn có ý nghĩa thực tiễn công tác kiểm nghiệm thuốc nói chung kiểm nghiệm dược liệu nói riêng KIẾN NGHỊ Hướng nghiên cứu tiếp theo, xin phép kiến nghị: Nghiên cứu thiết lập tiêu chuẩn chất chuẩn stipuleanosid R2 để có tài liệu bổ sung chất chuẩn đối chiếu vào Dược điển Việt Nam xuất lần thứ Tiến hành nghiên c ứu thiết lập chất chuẩn đối chiếu khác có nguồn gốc dược liệu phục vụ nhu cầu kiểm tra chất lượng dược liệu sản phẩm từ dược liệu 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO A TIẾNG VIỆT: [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007) Thực vật học tập 1, NXB Y học, Hà Nội Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong cộng (2003), Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam tập 2, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr 711 - 714 Bộ y tế (2017), Dược điển Việt Nam V tập 2, Nhà xuất y học, tr PL-113, phụ lục Bộ Y tế, Vụ khoa học đào tạo (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, tr 79-82, 84-110 Nguyễn Thượng Dong, TS Trần Công Luận, TS Nguyễn Thị Thu Hương (2007), Sâm Việt Nam số thuốc họ Nhân sâm, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 263-266 GS.TS.Nguyễn Minh Đức (2013), Tổng quan chất chuẩn, Đại học Y dược TP.Hồ Chí Minh Đỗ Văn Hào (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học sâm vũ diệp thu hái Tây Bắc, Khóa luận tốt nghiệp, Khoa Y dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Thị Huệ (2017), Phân tích acid oleanolic saponin tổng số rễ sâm vũ diệp thu hái Sa Pa, Khóa luận tốt nghiệp, Khoa Y dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội Dương Thị Phượng (2018), Định lượng Stipuleanosid R2 thân rễ Sâm vũ diệp, Khóa luận tốt nghiệp, Khoa Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Lê Thị Tâm (2017), Nghiên cứu tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu phân đoạn dịch chiết sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T sai et K M Feng) in vitro, Khoá luận tốt nghiệp đại học, Khoa Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Văn Tập, Phạm Thanh Huyền, Lê Thanh Sơn (2006), “Kết nghiên cứu phân bố, sinh thái Sâm Vũ Diệp Tam thất hoang Việt Nam”, Tạp chí dược liệu, 11(5), tr 177-180 Nguyễn Văn Tập (2005), “Các loài thuộc chi Panax L Việt Nam”, Tạp chí dược liệu, 10(3), tr 71-76 Ngơ Vân Thu, Trần Hùng (2011), Dược liệu học tập 1, NXB Y học – Bộ Y tế, tr 191-213 [14] Ngơ Vân Thu (1990), Hóa học Saponin, Khoa Dược – Trường Đại học Y Dược [15] [16] [17] [18] [19] [20] [21] [22] thành phố Hồ Chí Minh, tr 109-114 Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ mơn hóa phân tích (2006), Hóa phân tích II, tr.17, 99-146, 173-222 Viện nghiên cứu thực vật Vân Nam (1975), “Triterpene thuộc chi nhân sâm mối liên quan đến hệ thống phân loại, phân bố địa lý ”, Thực vật phân loại học báo cáo, 13(2), 29-44 B TIẾNG ANH Agrawal PK (1992), "NMR spectroscopy in the structural elucidation of oligossacharides and glycosides", Phytochemistry, 31, pp 1307-1330 Satinder Ahuja, Elsevier Publiccations (2003), Hand Book of Isolation and Characterization of Impurities In Pharmaceuticals , p.119 Center for Drug Evaluation and Research Food and Drug Administration Department of Health and Human Services (1987), Guideline for submitting supporting documentation in drug applications for the manufacture of drugs substances, p.29 Choi K T (2008), "Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng CA Meyer", ActaPharmacologica Sinica, 29(9), 1109 – 1118 Shao-Xing Dai, Wen-Xing Li et al (2016), "In silico identification of anticancer compounds and plants from traditional Chinese medicine database", Scientific Reports, 25462 Y Fan, D Y Guo, Q Song, and T Li (2013), "Effect of total saponin of aralia taibaiensis on proliferation of leukemia cells", Zhong Yao Cai, 36(4), pp 604607 13 [23] Mahato S, Kundu A (1994), " C NMR spectra of pentacyclic triterpenoids-a complication and some salient features", Phytochemistry, 37, pp 1517-1575 [24] H T Nguyen, H Q Tran, T T Nguyen, V M Chau, K A Bui, Q L Pham, et al (2011), "Oleanolic triterpene saponins from the roots of Panax bipinnatifidus", Chem Pharm Bull (Tokyo), 59(11), pp 1417-1420 [25] C Liang, Y Ding, H T Nguyen, J A Kim, H J Boo, H K Kang, et al (2010), "Oleanane-type triterpenoids from Panax stipuleanatus and their anticancer activities", Bioorg Med Chem Lett, 20(23), pp 7110-7115 [26] Liu F et al (2008), Method Development for Gypenosides Fingerprint by High [27] [28] [29] [30] [31] [32] [33] [34] Performance Liquid Chromatography with Diode-Array Detection and the Addition of Internal Standard, pp 389-393 Y Satoh, S Sakai, M Katsumata, M Nagasao, M Miyakoshi, Y Ida, et al (1994), "Oleanolic acid saponins from root-bark of Aralia elata", Phytochemistry, 36(1), pp 147-152 Schwarz M et al (2009), “Herbal Reference Standards”, Planta Med, 75, 689– 703 H F Tang, Y H Yi, Z Z Wang, Y P Jiang, and Y Q Li (1997), "Oleanolic acid saponins from the root bark of Aralia taibaiensis", Yao XueXue Bao, 32(9), pp 685-90 Vu Thi Thom et al (2018), “Antithrombotic Activity and Saponin Coposition of the Roots of Panax bipinnatifidus Seem Growing in Vietnam”, Pharmacognosy Research, 10(4), pp 333-338 D Q Wang, J Fan, B S Feng, S R Li, X B Wang, C R Yang, et al (1989), "Studies on saponins from the leaves of Panax japonicus var bipinnatifidus(Seem.)Wu et Feng", Yao Xue Xue Bao, 24(8), pp 593-599 Y Weng, L Yu, J Cui, Y R Zhu, C Guo, G Wei, et al (2014), "Antihyperglycemic, hypolipidemic and antioxidant activities of total saponins extracted from Aralia taibaiensis in experimental type diabetic rats", J Ethnopharmacol, 152(3), pp 553-560 WHO (1997), A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements - Part 2: Validation, Word Health Organization, Geneva World Health Organization (2006), General guidelines for the establishment, maintenance and distribution of chemical reference substances, Genève, - 24 [35] Yuchi Zhang et al (2016), “Saponins from Panax bipinnatifidus Seem: New strategy of extraction, isolation, and evaluation of tyrosinase inhibitory activity based on mathematical calculations”, Journal of Chromatography B, 1039:7987 C TRANG WEB [36] https://www.pharmacopoeia.com/ [37] http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/74029835#section=Top [38] http://www.hmdb.ca/metabolites/HMDB0040855 PHỤ LỤC Phụ lục 01 Phiếu kết giám định mẫu Phụ lục 02 Sắc ký đồ mẫu trắng (MeOH) Phụ lục 03 Sắc ký đồ cao BuOH sâm vũ diệp nồng độ 100 mg/mL Phụ lục 01 Phiếu kết giám định mẫu Phụ lục 02 Sắc ký đồ mẫu trắng (MeOH) Phụ lục Sắc ký đồ cao BuOH sâm vũ diệp nồng độ 100 mg/mL ... vũ diệp, tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Chiết xuất, phân lập stipuleanosid R2 từ Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem. ) làm nguyên liệu xây dựng chất chuẩn cho dược liệu? ?? Mục tiêu đề tài: Chiết. .. HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: Bùi Thị Thanh Vân CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP STIPULEANOSID R2 TỪ SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidus Seem. ) LÀM NGUYÊN LIỆU XÂY DỰNG CHẤT CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN... lượng stipuleanosid R2 phân lập Kết đề tài góp phần xây dựng sở liệu thành phần hóa học, xây dựng tiêu chuẩn dược liệu sâm vũ diệp làm sở cho nghiên cứu hoạt tính sinh học stipuleanosid R2, tảng cho