Bài viết thiết lập phương pháp xác định đột biến gen Jak2 V617F và CARL bằng cách phối hợp công nghệ PCR đặc hiệu hai hướng allele tích hợp công nghệ ARMS. Đối tượng và phương pháp: 64 bệnh phẩm máu ngoại vi thu thập từ các bệnh nhân có hội chứng tăng sản tủy, 02 mẫu chứng dương mang đột biến Jak2 V617F và 01 mẫu chứng mang đột biến CARL. Các mẫu chứng dương được pha vào mẫu ADN chân tóc người khỏe mạnh với các tỷ lệ giảm dần: 100, 50, 25, 5, 0,5 và 0% sau đó sử dụng DSA-PCR-ARMS để phát hiện xác định độ nhạy kỹ thuật và giải trình tự gene để xác định độ đặc hiệu của phương pháp.
PCR ĐẶC HIỆU ALLELE TÍCH HỢP CƠNG NGHỆ AMPLIFICATION REFRACTORY MUTATION SYSTEM (DSA-PCRARMS) PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN JAK2 V617F VÀ CARL TRÊN BỆNH NHÂN CÓ HỘI CHỨNG TĂNG SẢN TỦY Ngơ Tất Trung1, Đào Thanh Qun1, Phan Quốc Hồn1, Lê Hữu Song1 DOI: 10.38103/jcmhch.2020.59.8 TÓM TẮT Đặt vấn đề: Đột biến gen Jak2V617F CARL xác định dấu ấn có giá trị chẩn đốn hội chứng tăng sản tủy Mục tiêu: Thiết lập phương pháp xác định đột biến gen Jak2 V617F CARL cách phối hợp công nghệ PCR đặc hiệu hai hướng allele tích hợp cơng nghệ ARMS Đối tượng phương pháp: 64 bệnh phẩm máu ngoại vi thu thập từ bệnh nhân có hội chứng tăng sản tủy, 02 mẫu chứng dương mang đột biến Jak2 V617F 01 mẫu chứng mang đột biến CARL Các mẫu chứng dương pha vào mẫu ADN chân tóc người khỏe mạnh với tỷ lệ giảm dần: 100, 50, 25, 5, 0,5 0% sau sử dụng DSA-PCR-ARMS để phát xác định độ nhạy kỹ thuật giải trình tự gene để xác định độ đặc hiệu phương pháp Kết quả: Ngưỡng phát Jak2V617F 0,5% tế bào ung thư tổng số tế bào xét nghiệm, độ đặc hiệu 100% sau giải trình tự gene Đột biến gen Jak2 (V617F) xảy 32/50 (64%) thể điển hình hội chứng tăng sản tủy Trong có 2/17 bệnh nhân tăng tiểu cầu nguyên phát 1/13 bệnh nhân xơ tuỷ có mang gene CARL đột biến Kết luận: Phương pháp DSA-PCR-ARMS để phát đột biến gene Jak2 V617F CARL xây dựng thành công tỷ lệ đột biến bệnh nhân Việt Nam bước đầu xác định Từ khóa: Jak2 V617F, CARL, hội chứng tăng sản tủy (MPN) ABSTRACT BIDIRECTIONAL ALLELE SPECIFIC PCR INTEGRATED WITH AMPLIFICATION REFRACTORY MUTATION SYSTEM –(DSA-PCR-ARMS) FOR ANALYZING CARL AND JAK2 V617F MUTATIONS IN PATIENTS WITH MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASM Ngo Tat Trung1, Dao Thanh Quyen1, Phan Quoc Hoan1, Le Huu Song1 Bachground: Jak2 V617F and CARLmutation arerecognized as essential molecular genetic markers in Objective: identify Jak2 V617F, CARL mutations in MPN patients Bệnh viện TƯQĐ 108 - Ngày nhận (Received): 25/7/2019; Ngày phản biện (Revised): 27/01/2020; - Ngày đăng (Accepted): 20/02/2020 - Người phản hồi (Corresponding author): Ngô Tất Trung - Email: tatrungngo@gmail.com; SĐT: 0919119416 Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 59 PCR Subjects: 64 MPN patients’ samples, one V617F positive referrance samples and one CALR mutant positive sample Methods: Dilution series of 100%, 50%, 25%, 5%, 0.5% and 0% mutant alleles were created as pseudothe mentioned genetics markers Result: Our approach can detect presence of 0.5 % V617F mutant DNA fragment; beside that just by one gel-based PCR reaction, we can differentiate the deletion/insertion CARL carriers from the wild type counterpart By applying our approachesto a study cohort of 50 MPN cases, a sensitivity of 64% mutation case amongst the 10 V617F negative cases Conclusion: The in-house of Jak2 V617F/CARL mutation detection protocols have been successfully established in our hospital Key words: Jak2 V617F, CARL, myeloid proliferative neoplasm (MPN) I ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng tăng sản tủy dạng rối loạn dị dòng hệ huyết học, bao gồm bệnh lý: bạch cầu tủy mạn (BCTM), đa hồng cầu (polycythemia vera - ĐHC), hội chứng xuất huyết tăng tiểu cầu nguyên phát (essential thrombocytosis-XHTTCNP) hội chứng xơ tủy ( thể bệnh loạn sản tủy khơng điển hình khác như: hội chứng tăng bạch cầu toan (TBCAT), tăng bạch cầu kiềm (TBCAK) hội chứng tăng bạch cầu hạt khác Tuy có tên chung hội chứng tăng sản tủy phân típ khác mang đặc điểm di truyền học khác phác đồ điều trị khác Ngồi thơng số huyết học đặc trưng phân típ gia tăng huyết sắc tố (ĐHC), tăng sản tiểu cầu (XHTTCNP), hay gia tăng mức tế bào megakaryocyte (XT), đột biến gene Jak2 đặc điểm di truyền học bật phân típ bệnh Các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy khoảng 90-100% bệnh nhân ĐHC, 50% XHTTCNP 65% XT mang đột biến Jak2 vị trí V617F[1] Theo hướng dẫn mạng lưới bạch cầu châu Âu, đột biến gen Jak2 tiêu chẩn đoán hội chứng tăng sản tủy thuộc phân type: ĐHC, XHTTCNP XT[2] Tuy nhiên thực tế chẩn đoán điều trị bệnh Việt Nam, giới ghi nhận 60 tỷ lệ khoảng 20-40% bệnh nhân không mang đột biến gen này, gây khó khăn chẩn đốn điều trị Trong năm gần người ta phát thấy xuất đột biến gen CARL nhóm hội chứng tăng sản tủy khơng mang đột biến JAK2 đột biến CARL nhanh chóng trở thành tiêu chí chẩn đốn bệnh này[3, 4] Trong kít để xét nghiệm tìm kiếm đột biến CARL chưa phổ biến giới Việt Nam Đứng trước tình hình đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu xây dựng quy trình xét nghiệm phát đột biến gen Jak2 V617F, đột biến CARL ứng dụng chẩn đoán điều trị hội chứng tăng sản tủy II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Đối tượng: 64 bệnh phẩm máu ngoại vi thu thập từ bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chứng tăng sản tủy Bệnh viện TƯQĐ108; 02 mẫu chứng dương đột biến Jak2 V617F Bệnh viện đa khoa quốc gia Singapore cung cấp, 01 mẫu chứng dương CARL Đại học tổng hợp Cambridge (Vương Quốc Anh) cung cấp 2.2 Phương pháp: PCR đặc hiệu hai hướng mutation system (DSA-PCR-ARMS) sử dụng nghiên cứu Bộ mồi xác định đột biến G2343T(V617F) thiết kế bao gồm hỗn hợp mồi (hình 1): cặp mồi V617F-FO/V617F-RO cho Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 cho phép nhân lên băng kiểu dại (Wild-type – 181 bp) cặp mồi V617F_MT_R/V617F_FO nhân lên băng đột biến với kích thước 279 bp phép nhân lên băng nội chuẩn (kích thước 405 bp) đặc hiệu cho có mặt gen Jak2 ADN mẫu bệnh phẩm, cặp mồi V617F_WT_F/V617F_RO_TR V617F_WT_F A V617F_FO X A G T DNA pol G T V617F_FO V617F_MT_R Internal control 405 bp B Mutant V617F 279 bp Wild type 181 bp Hình 1: Mơ hình thiết kế mồi phương pháp DSA-PCR-ARMS Thông thường để thực PCR đặc hiệu allele mồi đặc hiệu bắt cặp bổ sung xác với nucleotide đầu tận 3’tại vị trí nghi ngờ có đột biến Tuy nhiên, việc thay đổi nucleotide làm giảm lực đặc hiệu mồi khơng triệt tiêu hồn tồn tính chất bắt mồi oligo Vì vậy, chúng tơi thay đổi số vị trí tận đầu 3’ refractory mutation system – ARMS [7] Việc thay đổi mặt làm giảm lực không đặc hiệu mồi đột biến với khuôn thể dại lại không thay đổi tính đặc hiệu mồi với đoạn ADN đột biến Bộ mồi đặt tên SHPT108@V617F (Trình tự cụ thể mồi cung cấp bạn đọc quan tâm liên hệ với nhóm tác giả) 2.3 Đánh giá độ nhạy kỹ thuật: Để khẳng định độ nhạy kỹ thuật phương pháp chẩn đốn, chúng tơi tiến hành pha lỗng mẫu ADN mang đột biến Jak2 V617F chuẩn dương Bệnh viện Đa khoa quốc gia Singapore cung cấp vào mẫu ADN chân tóc người khỏe mạnh với tỷ lệ giảm dần (100, Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 50, 25, 5, 0,5 0% đột biến so với gen không đột biến) thực phản ứng PCR đặc hiệu allele 2.4 Đánh giá độ đặc hiệu kỹ thuật: Để khẳng định độ đặc hiệu phương pháp chẩn đoán đột biến G2343T(V617F) kỹ thuật DSA-PCRARMS, chúng tơi lựa chọn giải trình tự ngẫu nhiên số bệnh phẩm chẩn đoán dương tính với đột biến G2343T(V617F) 2.5 Giải trình tự gen: Kết DSA-PCRARMS khẳng định lại giải trình tự gen hệ thống giải trình tự gen trực tiếp CEQ8800 (Beckman Coulter – USA) 2.6 Phát đột biến CARL: Các nghiên cứu gần cho thấy đột biến gen CARL xuất khoảng 67-70% bệnh nhân XHTTCNP 84-88% bệnh nhân XT không mang đột biến gen JAK2 Tổng tần suất đột biến CARL chiếm khoảng 8-10% tổng số ca tăng sinh tủy[3, 8] Cho đến có 19 thể đột biến khác CARL ghi nhận, số thể đột biến CARL type đoạn 52bp chiếm tỷ lệ cao (khoảng 60%) khuôn khổ nghiên cứu 61 PCR Bệnh viện Trung ương Huế tập trung vào việc xây dựng quy trình phát biến thể CARL 52-bp deletion: sơ đồ PCR chẩn đốn thể hình 2: cặp mồi Q-CARL-F/ Q-CARL-R bắt cặp không đặc hiệu vào thể dại thể đột biến Tuy nhiên, sản phẩm nhân lên thể dại 167bp sản phẩm PCR thể đột biến CARL 52-bp Deletion 115 pb Hai sản phẩm dễ dàng phân biệt gel agarose 2% (Trình tự mồi cung cấp bạn đọc quan tâm liên hệ với nhóm tác giả) 171 bp WT CALR Mất đoạn119 bp Del52 CALR PCR điện di Băng thể dại 171 bp Băng thể đột biến 119 Del52 Hình 2: Trình tự gene CARL thường xảy đột biến đoạn (del52) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Độ nhạy kỹ thuật phương pháp DSA-PCR-ARMS phát đột biến Jak2V617F Hình 3: Kết điện di thạch Agarose 3% sau nhân gene DSA-PCR-ARMS tỷ lệ % mang gene đột biến V617F 62 Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 Chỉ cần có 5% gene Jak2 đột biến G2343T (V617F) so với gene Jak2 kiểu dại phát cách dễ dàng phương pháp DSA-PCR-ARMS Ngay mẫu có 0,5% gene Jak2 đột biến G2343T(V617F) so với gene Jak2 kiểu dại phát DSA-PCR-ARMS (mũi tên chỉ) Chú thích: băng có kích thước 405 bp gene nội chuẩn; băng có kích thước 181 bp gene kiểu dại băng có kích thước 279bp gene đột biến 3.2 Độ đặc hiệu kỹ thuật phương pháp phát đột biến Jak2 V617F Hình 4: So sánh độ đặc hiệu kỹ thuật DSA-PCR-ARMS giải trình tự gen Kết cho thấy trình tự đoạn gen Jak2 (hình gov/)(TGGAGTATGTGTCTGTGG) Như panel dưới) vị trí nghi ngờ đột biến mẫu nucleotide G allele gene Jak2 đột bệnh phẩm JA-17 (TGGAGTATGTGTTCTGTGG) biến chuyển thành T Điều hoàn tồn phù hợp khác hồn tồn với trình tự hoang dại lưu giữ với hình ảnh PCR điện di ngân hàng gen (http://www.ncbi.nlm.nih 3.3 Phát đột biến thêm đoạn/mất đoạn gen CARL Inserted CARL 171 bp WT CARL Inserted CARL 171 bp WT CARL 119 bp Del52 CARL Hình 5: Hình ảnh điện di thạch agarose 3% để xác định đột biến gene CARL (thêm đoạn/mất đoạn) Hình ảnh nhận diện đột biến thêm đoạn đoạn rõ nét (mũi tên chỉ) Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 63 PCR 3.4 Giải trình tự mẫu bệnh phẩm mang đột biến CARL 52 Del Hình ảnh phổ sắc ký (Sanger sequencing) mẫu bệnh phẩm thể dại thể đột biến Del 52bp ghi nhận hình CTCCTCCTCTTTG CG TTTCTAG G TCTTCTTCCTCCTCCTTAAG CCTCTG G CTCC Hình 6: Phổ sắc ký (Sanger sequencing) mẫu bệnh phẩm thể đột biến Del 52bp (hình trên) thể dại (hình dưới) 3.5 Đối chiếu kết phát đột biến gene Jak2 với chẩn đoán lâm sàng 50 bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chứng tăng sản tủy Bảng Kết ứng dụng DSA-PCR-ARMS xác định đột biến Jak2 V617F CARL bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chứng tăng sinh tủy Hội chứng tăng sinh tủy Jak2 V617F(n, %) Đột biến CARL (n, %) Đa hồng cầu (n=20) Tăng tiểu cầu nguyên phát (n=17) Hội chứng xơ tủy (n=13) 12(60) 14(82,3) 6(46) (0) (11,76) (7,7) Mặc dù số mẫu chưa nhiều, kết cho thấy đột biến gen Jak2 (V617F) xảy 32/50 (64%) thể điển hình hội chứng tăng sản tủy (Đa hồng cầu, tăng tiểu cầu nguyên phát hội chứng xơ tủy) Trong có 2/17 bệnh nhân tăng tiểu cầu nguyên phát 1/13 bệnh nhân xơ tuỷ có mang gene CARL đột biến 64 IV BÀN LUẬN Hiện việc điều trị bệnh lý máu chun biệt cá thể hóa dựa nhiều khía cạnh đặc biệt yếu tố di truyền Vì vậy, chẩn đốn hội chứng tăng sản tủy nhiên phác đồ điều trị khác cho phân típ [2] Do đó, việc làm chủ cơng nghệ chẩn đốn đột biến gene, Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 phát dấu ấn phân tử nhu cầu cấp thiết chẩn đoán, điều trị bệnh lý máu ác tính Các nghiên cứu gần cho thấy 90% bệnh nhân ĐHC 50% bệnh nhân có TTCNP XT có đột biến gen Jak2 vị trí V617F[1].Đột biến xuất với tần suất thấp nhóm bệnh bạch cầu tủy cấp không xuất bệnh lý máu ác tính khác Vì đột biến V617F Jak2 đặc trưng cho phân típ điển hình hội chứng tăng sản tủy (ĐHC, TTCNP XT)[9] Đồng thời phân típ có phác đồ điều trị tương đối giống hoàn toàn khác với phác đồ áp dụng cho hội chứng tăng bạch cầu toan bạch cầu tủy mạn Vì việc phát trạng thái đột biến gen Jak2 V617F có giá trị hỗ trợ chẩn đốn phân biệt định hướng điều trị thể bệnh [2] Tuy nhiên, có khoảng 30-40% bệnh nhân mắc hội chứng tăng sản tủy không mang đột biến JAK2 – yếu tố chẩn đốn bệnh bác sỹ điều trị gặp khó khăn việc định điều trị Điều may mắn có tỷ lệ định bệnh nhân xuất huyết TTCNP XT không mang đột biến JAK2 lại mang đột biến CARL đột biến CARL năm gần công nhận tiêu chuẩn chẩn đoán hội chứng tăng sản tủy[4] Vì vậy, chúng tơi tập trung xây dựng quy trình cơng nghệ để xét nghiệm đột biến Cũng giống nhiều đột biến khác, Jak2 V617F đột biến CARL phát giải trình tự gene trực tiếp (Sanger sequencing), nhiên phương pháp có độ nhạy kỹ thuật thấp: cần 20% ADN mang đột biến bệnh phẩm cần phân tích, bỏ qua trường hợp bệnh nhân có số lượng tế bào mang đột biến thấp máu ngoại vi Ngoài ra, giá thành giải trình tự gen cịn vấn đề khó khăn cho nhiều bệnh nhân Bằng thiết kế công nghệ phối hợp DSA-PCRARMS, xây dựng phương pháp chẩn đoán đột biến Jak2 với độ nhạy kỹ thuật 0,5% Điều có nghĩa kỹ thuật cho phép Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 phát đột biến V617F máu ngoại vi xuất tế bào mang đột biến số 200 tế bào khỏe mạnh Phương pháp nhạy 40 lần so với giải trình tự trực tiếp, đồng thời có giá thành thấp (900 000/bệnh nhân/lần xét nghiệm), thời gian phân tích kết ngắn (4h) so với giải trình tự gen Trong 01 phản ứng PCR điện di nồng độ agarose 3%, phân biệt bệnh nhân mang đột biến CARL thêm đoạn (hoặc đoạn - hình 4) Để áp dụng dấu ấn V617F/CARL thực hành lâm sàng, tiến hành xét nghiệm cho 50 bệnh nhân nghi ngờ hội chứng tăng sinh tủy điều trị Bệnh viện TƯQĐ 108 Kết cho thấy có 32 trường hợp xác định có đột biến gen Jak2 V617F (tỷ lệ 64%) Trong số 18 trường hợp âm tính với Jak2 V617F, có bệnh nhân bạch cầu tủy mạn, bệnh nhân ung thư gan, bệnh nhân nhồi máu lách sau chấn thương, trường hợp dị ứng (da đỏ róc vẩy tồn thân), trường hợp tăng bạch cầu toan, trường hợp tăng bạch cầu ưa acid trường hợp tăng tiểu cầu nguyên phát 2, trường hợp đa hồng cầu, trường hợp tăng tiểu cầu nguyên phát trường hợp sơ tủy không phát đột biến V617F Điều lý giải lẽ ngồi vị trí V617F, đột biến gen Jak2 xảy số vị trí khác (ví dụ 10 vị trí khác exon 12)[2] Tuy nhiên, số 10 ca mang hội chứng tăng sinh tủy không mang Jak2V617F, phát 03 trường hợp mang CARL đột biến: 02 trường hợp TTCNP 01 trường hợp XT Trong nghiên cứu quy mơ mẫu nhỏ (50 bệnh phẩm) có 12/20 trường hợp mang hội chứng ĐHC (60%), 14/17 trường hợp TTCNP (82,%), 6/13 trường hợp XT (46%) mang đột biến Jak2 V617; số liệu tương đương với công bố đồng nghiệp quốc tế thực cộng đồng dân cư khác [10] cao so với công bố đồng nghiệp khoa Huyết học truyền máu, Bệnh viện Bạch Mai Hà Nội [11] Nghiên cứu Bệnh viện Bạch Mai tìm 56,6% số bệnh nhân đa hồng cầu nguyên phát 0% số ca xơ 65 PCR tủy mang đột biến V617F Đặc biệt nhóm nghiên cứu khơng cơng bố phép thử độ nhạy kỹ thuật khơng chắn trường hợp âm tính nghiên cứu bệnh viện Bạch Mai Bệnh nhân thật không mang đột biến V617F hay phương pháp sử dụng không đủ độ nhạy để phát tồn tế bào mang đột biến Ở khía cạnh khác, chúng tơi phát 3/10 bệnh phẩm mang đột biến CARL, tỷ lệ chưa cao so với số liệu đồng nghiệp quốc tế (là 67-80%)[3, 8] Điều lý giải xét nghiệm tập trung phát thể đoạn 52bp thêm đoạn 67bp mà chưa thể phát kiểu đột biến đoạn thêm đoạn với kích thước ngắn hơn, ngồi quy mơ mẫu chúng tơi (n=10) chưa đủ ý nghĩa thống kê cần thiết Tuy nhiên, chúng tơi phát đột biến CARL nhóm TTCNP XT, điều hoàn toàn hợp lý với công bố trước [3, 8] V KẾT LUẬN Chúng tơi xây dựng thành cơng quy trình xác định đột biến gen Jak2 V617F đột biến CARL DSA-PCR-ARMS với ngưỡng phát 0,5% tế bào ác tính số tế bào khỏe mạnh VI LỜI CẢM ƠN Nhóm nghiên cứu xin cảm ơn Bộ khoa học cơng nghệ, chương trình KC10/16-20 tài trợ cho đề tài KC10.13/16-20 TÀI LIỆU THAM KHẢO Levine, R.L., et al., Role of JAK2 in the pathogenesis and therapy of myeloproliferative disorders Nat Rev Cancer, 2007 7(9); pp 673-83 Barbui, T., et al., Philadelphia-negative classical myeloproliferative neoplasms: critical concepts and management recommendations from European LeukemiaNet J Clin Oncol, 2011 29(6); pp 761-70 Nangalia, J., et al., Somatic CALR mutations in myeloproliferative neoplasms with nonmutated JAK2 N Engl J Med, 2013 369(25); pp 2391405 Tefferi, A., et al., An overview on CALR and CSF3R mutations and a proposal for revision of WHO diagnostic criteria for myeloproliferative neoplasms Leukemia, 2014 28(7); pp 1407-13 Baccarani, M., et al., Evolving concepts in the management of chronic myeloid leukemia: recommendations from an expert panel on behalf of the European LeukemiaNet Blood, 2006 108(6); pp 1809-20 Cools, J., et al., A tyrosine kinase created by fusion of the PDGFRA and FIP1L1 genes as a therapeutic target of imatinib in idiopathic hypereosinophilic syndrome N Engl J Med, 66 2003 348(13); pp 1201-14 C.R.Newton, A.G., L.E.Heptinstall, S.J.Powell, C.Summers, N.Kalshekerl, J.C.Smith and A.F.Markham, Analysis of any point mutation system (ARMS) Nucleic Acids Research, 1989 Volume 17 Number Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferative neoplasms N Engl J Med, 2013 369(25); pp 2379-90 Tefferi, A., Novel mutations and their functional and clinical relevance in myeloproliferative neoplasms: JAK2, MPL, TET2, ASXL1, CBL, IDH and IKZF1 Leukemia, 2010 24(6); pp 1128-38 10 Jones, A.V., et al., Widespread occurrence of the JAK2 V617F mutation in chronic myeloproliferative disorders Blood, 2005 106(6); pp 2162-8 11 Nguyên Thiên Lữ, P.q.V., Võ Quốc Vinh, Nguyễn Tuấn Hùng, Nguyễn Thị Lan Hương Triển khai kỹ thuật ASO-PCR xác định đột biến gen Jak2 V617F bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính Khoa Huyết học - Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai Tạp chí Y học Việt Nam, 2012 tr 329 Tạp Chí Y Học Lâm Sàng - Số 59/2020 ... kết phát đột biến gene Jak2 với chẩn đoán lâm sàng 50 bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chứng tăng sản tủy Bảng Kết ứng dụng DSA -PCR- ARMS xác định đột biến Jak2 V617F CARL bệnh nhân nghi ngờ mắc hội chứng. .. thấy đột biến gen Jak2 (V617F) xảy 32/50 (64%) thể điển hình hội chứng tăng sản tủy (Đa hồng cầu, tăng tiểu cầu nguyên phát hội chứng xơ tủy) Trong có 2/17 bệnh nhân tăng tiểu cầu nguyên phát. .. Kết cho thấy có 32 trường hợp xác định có đột biến gen Jak2 V617F (tỷ lệ 64%) Trong số 18 trường hợp âm tính với Jak2 V617F, có bệnh nhân bạch cầu tủy mạn, bệnh nhân ung thư gan, bệnh nhân nhồi