Nghiên cứu xác định một số chất cấm trong mỹ phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ KHÁNH HUYỀN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ KHÁNH HUYỀN Mã sinh viên: 1501223 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỔI PHỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: HVCH Ngô Thị Duyên PGS TS Lê Đình Chi Nơi thực hiện: Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Khóa luận hồn thành Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung Ương hướng dẫn HVCH Ngơ Thị Dun TS Lê Đình Chi Lời xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới HVCH Ngô Thị Duyên TS Lê Đình Chi, hai người thầy định hướng nghiên cứu, hướng dẫn góp ý giúp tơi hồn thành khóa luận Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo công tác Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất, trường Đại học Dược Hà Nội dạy giúp đỡ thời gian học tập trường Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới Ban lãnh đạo Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương cán khoa Mỹ phẩm Viện tạo điều kiện giúp tơi hồn thành đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè ln quan tâm, chăm sóc, động viên giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe, hạnh phúc gặt hái nhiều thành công công việc sống Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2020 Sinh viên Dương Thị Khánh Huyền MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN3 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT6 DANH MỤC CÁC BẢNG8 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ9 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu .3 1.1.1 Đặc tính GLU nghiên cứu .3 1.1.2 Vài nét Glucocorticoid 1.2 Tổng quan sắc ký lỏng khối phổ 1.2.1 Hệ thống HPLC .9 1.2.2 Khối phổ 10 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng, nguyên liệu trang thiết bị nghiên cứu .15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Chất chuẩn, dung mơi, hóa chất 15 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ phân tích 16 2.2 Nội dung nghiên cứu .16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Quy trình xử lý mẫu .16 2.3.2 Xây dựng phương pháp phân tích 17 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích xây dựng 17 2.3.4 trường Ứng dụng xác định GLU số mẫu mỹ phẩm có mặt thị ……………………………………………………………………… 21 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu .21 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Quy trình chuẩn bị mẫu 22 3.1.1 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 22 3.1.2 Chuẩn bị dung dịch mẫu .23 3.1.3 Chuẩn bị chuẩn nội 23 3.1.4 Chuẩn bị mẫu chuẩn 23 3.1.5 Chuẩn bị mẫu thử 24 3.1.6 Chuẩn bị mẫu tự tạo 25 3.2 Xây dựng phương pháp phân tích 25 3.2.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện khối phổ 25 3.2.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký 30 3.2.3 Khảo sát lựa chọn chuẩn nội 32 3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 33 3.3.1 Sự phù hợp hệ thống (system suitability) .33 3.3.2 Độ đặc hiệu – chọn lọc (selectivity) 33 3.3.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 35 3.3.4 Khoảng tuyến tính đường chuẩn (linearity) 36 3.3.5 Độ xác phương pháp (accuracy) 37 3.4 Kết xác định GLU mẫu mỹ phẩm dạng kem thị trường 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .41 KẾT LUẬN 41 KIẾN NGHỊ .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO1 PHỤ LỤC3 Phụ lục 1: Danh mục mỹ phẩm kiểm tra3 Phụ lục 2: Kết thẩm định5 2.1 Kết thẩm định độ chụm trung gian phương pháp5 2.2 Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại6 Phụ lục 3: Sắc ký đồ số mẫu mỹ phẩm thị trường8 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt APCI Giải thích Atmospheric pressure chemical ionization (Kỹ thuật ion hóa hóa học áp suất khí quyển) APPI Atmospheric pressure photoionization (Kỹ thuật ion hóa ánh sáng áp suất khí quyển) ASEAN Association of South East Asia’s Nations (Liên hiệp quốc gia Đông Nam Á) ACN Acetonitril BMD Betamethason dipropionat CBP Clobetasol propionate CTPT Công thức phân tử DAD Diod array detector (Detector mảng diod) DXA Dexamethason acetat ESI Electrospray ionization (Ion hóa kiểu phun sương điện) GLU Glucocorticoid GLP Good laboratory practice (Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm) HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HQC IS KLPT LC – MS Internal standard (Chuẩn nội) Khối lượng phân tử Liquid chromatography – mass spectrophometry (Sắc ký lỏng khối phổ) LC – MS/MS Liquid chromatography – Tandem mass spectrophometry (Sắc ký lỏng khối phổ hai lần) LOD Limit of detection (Giới hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (Giới hạn định lượng) MeOH Methanol MQC MRM Multiple Reaction Monitoring PRS Prednison RSD Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) S/N Signal/ noise SD Standard deviation (Độ lệch chuẩn) SKĐ Sắc ký đồ TAA Triamcinolon acetonid TB TLC Trung bình Thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng ) TLTK Tài liệu tham khảo USFDA United states – Food and Drug administration (Cục quản lý thực phẩm, dược phẩm Mỹ) v/v VKNTTW Volume/Volume (thể tích/thể tích) Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số phương pháp phân tích Glucocorticoid mỹ phẩm Bảng 1: Thông tin chất chuẩn sử dụng 15 Bảng 1: Nồng độ đường chuẩn GLC 23 Bảng 2: Điều kiện khối phổ chất phân tích 29 Bảng 3: Các thông số tối ưu MS 29 Bảng 4: Chương trình gradient dung mơi 31 Bảng 5: Kết đánh giá phù hợp hệ thống LC-MS/MS (n=6) 33 Bảng 6: Kết so sánh thời gian lưu pic mẫu tự tạo mẫu chuẩn .34 Bảng 7: Kết so sánh tỷ lệ cường độ ion mẫu tự tạo mẫu chuẩn 35 Bảng 8: Giá trị LOD LOQ glucocorticoid 35 Bảng 9: Kết khảo sát đường chuẩn prednison, dexamethason acetat, clobetason propionat 36 Bảng 10: Kết khảo sát đường chuẩn betamethason dipropionate, triamcinolon acetonid .36 Bảng 11: Kết độ thu hồi độ lặp lại phương pháp (n=6) 37 Bảng 12: Kết độ chụm trung gian phương pháp (n=12) 38 Bảng 13: Thơng tin sử dụng để định tính GLU 39 Bảng 14: Kết xác định GLU mẫu mỹ phẩm thực tế 39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1: Cơng thức cấu tạo betamethason dipropionat Hình 2: Công thức cấu tạo clobetasol propionat Hình 3: Cơng thức cấu tạo dexamethason acetat Hình 4: Cơng thức cấu tạo triamcinolon acetonid Hình 5: Công thức cấu tạo prednison Hình 6: Sơ đồ hệ thống HPLC Hình 7: Sơ đồ khối cấu tạo phận khối phổ kế 11 Hình 8: Sơ đồ tạo ion dương nguồn ESI 12 Hình 9: Sơ đồ phân tích tứ cực 13 Hình 10: Sơ đồ cấu tạo thiết bị phổ kế tứ cực kiểu chập ba 14 Hình 1: Quy trình chuẩn bị mẫu thử 24 Hình 2: Phổ khối MS dung dịch chuẩn Betamethason dipropionat với chế độ ESI (+) 26 Hình 3: Giản đồ mối quan hệ cone voltage số lượng ion có số khơi 505,25 Da vào phân phân tích khối .26 Hình 4: Phổ khối MS/MS phân mảnh ion [BMD-H]+ .27 Hình 5: Giản đồ lượng phân mảnh (m/z 505,25 -> 337,13) .28 Hình 6: Giản đồ lượng phân mảnh (m/z 505,25 -> 411,22) .28 Hình 7: SKĐ mẫu chuẩn sử dụng cột Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm, 1,7 µm), pha động MeOH : Acid formic 0,1% (70:30, v/v) 30 Hình 8: Sắc ký đồ mẫu chuẩn sử dụng chương trình gradient 31 Hình 9: Sắc ký đồ chuẩn glibenclamid .32 Hình 10: Sắc ký đồ mẫu .34 Hình 11: Sắc ký đồ S/N LOD số chất đại diện 35 Hình 12: Sắc ký đồ S/N LOQ số chất đại diện 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Glucocorticoid (GLU) nhóm thuốc định rộng rãi nhiều bệnh với hiệu điều trị đáng kể thuốc thay Trong da liễu, chúng sử dụng để điều trị bệnh vẩy nến, viêm da, eczema… Chúng làm giảm viêm tạm dừng triệu chứng viêm da vẩy nến thể mảng nghiêm trọng Để sử dụng chỗ, chúng có sẵn dạng kem, gel thuốc mỡ với hiệu lực tác dụng khác Tuy nhiên, điều trị kéo dài với chế phẩm chứa GLU dẫn đến số tác dụng phụ tồn thân tăng huyết áp, đái tháo đường, loãng xương, hội chứng Cushing…và dùng chỗ dẫn đến viên da, rạn da, teo da vĩnh viễn… [3], [8] Từ xa xưa người có nhu cầu làm đẹp biết làm đẹp Ngày nay, xã hội phát triển, kinh tế phát triển nhu cầu làm đẹp ngày tăng cao; Trên thị trường có vơ số loại mỹ phẩm với mức giá chất lượng đa dạng để thỏa mãn nhu cầu người Với khả kháng viêm ức chế miễn dịch, GLU dễ bị lợi dụng trộn trái phép vào mỹ phẩm bôi da (12-15% mỹ phẩm kiểm tra có chứa GLU trái phép [18], [19]) nhằm đem đến da hết mụn, láng mịn trắng sáng không tỳ vết thời gian ngắn cho người dùng Tuy nhiên hiệu tức thời bề nổi, sử dụng thời gian dài điều vơ nguy hiểm, dẫn đến số biến chứng da bị bào mòn đến mỏng, nám kháng trị, vi khuẩn nấm tăng sinh… gây ảnh hưởng đến thẩm mỹ sức khỏe người sử dụng Mỹ phẩm sử dụng tiếp xúc trực tiếp với phận bên ngồi thể, khơng có quy định thời gian liều lượng sử dụng, khơng có giám sát y tế; nên với lượng nhỏ GLU đưa vào mỹ phẩm đem đến tác dụng khơng mong muốn Chính vậy, theo hiệp định hệ thống hòa hợp ASEAN mỹ phẩm, GLU nhóm chất đưa vào danh mục chất không phép dùng mỹ phẩm [13] Như vậy, địi hỏi cần có phương pháp phân tích để sàng lọc sản phẩm mỹ phẩm kem, gel, thuốc mỡ có chứa GLU Các nghiên cứu trước đưa số phương pháp LC (TLC HPLC với detector DAD) để phân tích steroid mỹ phẩm [5], [9] Tuy nhiên, phương pháp số nhược điểm giới hạn phát cao, độ đặc hiệu hạn chế [9] Những tồn cho thấy cần thiết phải nghiên cứu xây dựng phương pháp có độ nhạy, độ đặc hiệu cao hơn, Hình 12: Sắc ký đồ S/N LOQ số chất đại diện 3.3.4 Khoảng tuyến tính đường chuẩn (linearity) Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ chất phân tích Bảng 3.1 (mục 3.1.5) Xây dựng đường biểu diễn phụ thuộc tỷ lệ diện tích pic nồng độ chất mẫu tính độ chệch điểm dùng để xây dựng đường chuẩn Kết trình bày Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 9: Kết khảo sát đường chuẩn prednison, dexamethason acetat, clobetason propionat STT Prednison Dexamethason Clobetason acetat propionat Nồng độ Độ Nồng độ Độ Nồng độ Độ chệch (ng/ml) chệch (ng/ml) chệch (ng/ml) (%) (%) (%) S1 5,07 12,7 7,78 3,5 3,06 -10,4 S2 20,29 -8,1 31,11 -6,3 12,25 0,2 S3 40,59 -3,0 62,21 2,8 24,50 5,0 S4 50,74 5,8 77,76 1,7 30,63 1,9 S5 60,88 2,6 93,32 -0,5 36,75 2,8 S6 81,18 2,7 124,42 -0,8 49,00 0,1 S7 101,47 -0,9 155,53 0,0 61,25 1,0 Phương trình Y = 0,0323x – 0,0413 Y = 0,0210x + 0,0473 Y = 0,0517x – 0,0194 đường chuẩn Hệ số tương 0,9986 0,9997 0,9996 quan (R) Bảng 10: Kết khảo sát đường chuẩn betamethason dipropionate, triamcinolon acetonid STT S1 S2 Betamethason dipropionat Nồng độ Độ chệch (ng/ml) (%) 2,06 -14,1 8,22 -5,1 36 Triamcinolon acetonid Nồng độ Độ chệch (ng/ml) (%) 5,05 12,3 20,18 0,3 S3 S4 S5 S6 S7 Phương trình đường chuẩn Hệ số tương quan (R) 16,45 3,5 20,56 4,1 24,67 -1,2 32,90 4,2 41,12 -2,5 Y = 0,0733x – 0,0376 40,36 1,0 50,45 -3,7 60,54 -1,0 80,73 2,6 100,91 -9,4 Y = 0,0301x – 0,0264 0,9980 0,9988 Kết đưa bảng 3.9 3.10 cho thấy phương trình đường chuẩn GLU có hệ số tương quan lớn 0,995 Do khoảng nồng độ khảo sát có phụ thuộc tuyến tính diện tích pic nồng độ tương ứng Nồng độ GLU xác định lại từ đường chuẩn so với giá trị lý thuyết nằm giới hạn cho phép (± 15% với tất điểm đường chuẩn, riêng nồng độ LOQ ± 20%) [10] 3.3.5 Độ xác phương pháp (accuracy) a Độ thu hồi độ lặp lại phương pháp: Tiến hành sắc ký mẫu tự tạo mức nồng độ LOQ, MQC, HQC mục 3.1.6, phân tích lặp lại lần cho nồng độ Các kết tính độ thu hồi (R) độ lệch tương đối (RSD) thể Bảng 3.11 Bảng 11: Kết độ thu hồi độ lặp lại phương pháp (n=6) STT Tên chất Prednison Triamcinolon acetonid Dexamethason acetat Clobetason propionat Betamethason dipropionat Mức nồng độ LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC R (%) 98,8 ± 10,1 100,0 ± 7,7 97,4 ± 3,7 101,6 ± 9,0 96,8 ± 5,3 97,4 ± 3,4 104,9 ± 1,5 97,2 ± 3,1 97,4 ± 2,7 93,4 ± 5,5 97,5 ± 3,5 101,2 ± 4,0 97,1 ± 7,8 96,6 ± 4,2 97,9 ± 2,9 RSD (%) 10,2 7,7 3,8 8,9 5,5 3,5 11,0 3,2 2,7 5,9 3,5 3,9 8,1 4,4 3,0 Theo quy định USFDA, độ thu hồi nằm khoảng từ 80 – 110% RSD ≤ 8% MQC HQC, RSD ≤ 11% LOQ Kết thu có độ từ 87,9 – 37 107,7% RSD từ 2,7 – 7,7% MQC, HQC 5,9 – 11,0% LOQ; chứng tỏ phương pháp có độ cao, độ lặp lại tốt phân tích GLU mẫu mỹ phẩm b Độ chụm trung gian phương pháp (intermediate precision): Tiến hành tương tự độ lặp lại phương pháp tiến hành vào ngày khác Kết độ chụm trung gian phương pháp thể Bảng 3.12 Bảng 12: Kết độ chụm trung gian phương pháp (n=12) STT Tên chất Prednison Triamcinolon acetonid Dexamethason acetat Clobetason propionat Betamethason dipropionat Mức nồng độ LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC LOQ MQC HQC RSD (%) 9,5 6,3 3,4 8,9 4,5 3,1 9,9 3,4 3,4 9,0 4,0 3,1 10,5 4,5 2,8 Kết từ bảng 3.12 cho thấy khoảng nồng độ LOQ, MQC, HQC mẫu tự tạo, phương pháp có độ chụm trung gian đạt yêu cầu quy định (giá trị RSD ≤ 8% nồng độ MQC, HQC ≤ 11% nồng độ LOQ) 3.4 Kết xác định GLU mẫu mỹ phẩm dạng kem thị trường Áp dụng phương pháp LC – MS/MS vừa xây dựng để phát xác định hàm lượng GLU có mặt trái phép 24 mẫu mỹ phẩm dạng kem thị trường Các mẫu kem xử lý theo quy trình phân tích mục 3.1.4 Dựa sở sau để phân tích mẫu: - Định tính: Tiến hành phân tích song song với chuẩn GLU tương ứng sử dụng kỹ thuật MRM Khẳng định có mặt GLU mẫu dựa tiêu chí: 1-Xuất pic thời gian lưu với chuẩn GLU tương ứng (chênh lệch thời gian lưu không 5%) 38 2-Xuất đồng thời ion mẹ ion theo dõi MRM 3-Tỷ lệ cường độ ion thu mẫu thử phải nằm khoảng chênh lệch chấp nhận so với tỷ lệ thu chuẩn GLU tương ứng phân tích ngày (xem bảng 3.13) Bảng 13: Thông tin sử dụng để định tính GLU Hoạt chất Prednison Triamcinolon acetonid Dexamethason acetat Clobetasol propionat Betamethason dipropionat Khoảng giá trị tỷ lệ cường độ ion cần thu mẫu thử để kết luận sơ có mặt GLU 0,507 – 0,707 Chênh lệch tỷ lệ cường độ ion thu mẫu thử so với chuẩn phân tích đồng thời để kết luận có mặt GLU ± 10% 0,435 – 0,635 ± 10% 0,666 – 0,866 ± 10% 0,647 – 0,847 ± 10% 0,289 – 0,489 ± 10% - Định lượng: Dựa vào lượng cân mẫu chuẩn, mẫu thử; tỷ lệ diện tích pic so với chuẩn nội mẫu chuẩn, mẫu thử độ pha lỗng, tính hàm lượng GLU có mặt mẫu thử Kết tổng hợp bảng 3.14 Bảng 14: Kết xác định GLU mẫu mỹ phẩm thực tế Mẫu Chỉ tiêu phân tích (mg/g) Prednison Triamcinolon Dexamethason Clobetason Betamethason acetonid acetat propionat dipropionat M1 - - - - - M2 - - - - - M3 - - - - - M4 - - - - - M5 - - - - - M6 - - - - - M7 - - - - - M8 - - - - - 39 M9 - - - - - M10 - - - - - M11 - - - 0,22 - M12 - - - - - M13 - - - - - M14 - - - - - M15 - - - - - M16 - 0,51 - - - M17 - - - - - M18 - - 0,53 - - M19 - 0,06 - - - M20 - - - - - M21 - - - - - M22 - - - - - M23 - - - - - M24 - - - - 0,57 Ghi chú: (-) không phát thấy Kết đưa bảng 3.14 cho thấy 24 mẫu mỹ phẩm kiểm tra, phát mẫu mỹ phẩm có chứa GLU có hàm lượng từ 0,06 – 0,57 mg/g 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau trình nghiên cứu, khóa luận đạt mục tiêu đề Các kết đạt cụ thể sau: Đã khảo sát đưa quy trình xử lý mẫu tối ưu (Hình 3.1) Đã xây dựng phương pháp xác định đồng thời 05 GLU (prednison, triamcinolon acetonid, dexamethason acetat, clobetason propionat, betamethason dipropionat) mỹ phẩm LC – MS/MS Các điều kiện phân tích sau: - Điều kiện khối phổ: Nguồn ion hóa ESI (+) với thông số tối ưu điều kiện khối phổ chất phân tích bảng 3.2 bảng 3.3 - Điều kiện sắc ký: + Pha động: methanol – dung dịch acid formic 0,1%, theo chương trình gradient dung mơi bảng 3.4 + Cột Acquity UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, 1,7 µm), trì 400C + Tốc độ dịng: 0,2 ml/phút + Thể tích tiêm mẫu: µl - Chất chuẩn nội: Glibenclamid Phương pháp thẩm định theo hướng dẫn USFDA thẩm định phương pháp phân tích mỹ phẩm Kết thẩm định cho thấy phương pháp có tính đặc hiệu cao, giới hạn phát từ 0,8 – 3,1 (ng/ml), giới hạn định lượng từ 2,0 – 7,7 (ng/ml), khoảng tuyến tính, độ đúng, độ chụm đạt u cầu, có khả định tính định lượng đồng thời 05 GLU mỹ phẩm dạng kem Ứng dụng phương pháp xây dựng để kiểm tra có mặt GLU 24 mẫu mỹ phẩm dạng kem thị trường Kết cho thấy mẫu (21%) có chứa trái phép GLU KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu phát triển phương pháp chất khác nhóm Glucocortioid, nhằm xây dựng phương pháp phát đồng thời nhiều chất hơn, phát huy tối đa ưu detector khối phổ Cần kiểm tra chặt chẽ, rộng rãi có mặt trái phép GLU mỹ phẩm 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO I TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Trần Tử An, Thái Nguyễn Hùng Thu (2012), Hóa phân tích tập 2, Nhà xuất Y học, tr 107-121, 295-318 Trần Tử An, Trần Tích (2007), Hóa phân tích tập 1, Nhà xuất Y học, tr 1925, 35-52 Bệnh viện Da liễu Trung ương "Các thương tổn da Steroid chỗ" Bộ Y Tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học Hà Nội Lê Thị Hường Hoa (2013), Nghiên cứu xây dựng quy trình phát xác định hàm lượng số chất cấm sử dụng mỹ phẩm, luận án Tiến sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Thái Nguyễn Hùng Thu, Lê Thị Hường Hoa (2019), Kiểm nghiệm mỹ phẩm, Nhà xuất Y học, tr 77-82 Tạ Mạnh Hùng (2016), Nghiên cứu định lượng atenolol đồng phân đối quang số chế phẩm thuốc dịch sinh học, Luận án Tiến sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2006), Dược lý học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr 255-258 Hoàng Thanh Tâm (2008), Xây dựng phương pháp phát số chất thuộc nhóm glococorticoid trộn trái phép mỹ phẩm, Luận văn Thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 10 Viện Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 16-59 11 Vũ Phương Thảo (1993), Hóa dược, Nhà xuất y học, tr 50-65 II TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 12 ASEAN Association of South East Asian nation (2005), Identification of hydrocortisone acetate, dexamethasone, betamethasone, betamethason 17valerate and triamcinolone acetonide in cosmetic products by TLC and HPLC 13 ASEAN Association of South East Asian nation (2019), Annex of the Asean cosmetics directive 14 Commission European (2002), "Commission Decision 2002/657/EC of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results", Official journal of the European Communities, 221, pp 8-36 15 Fiori Jessica, Andrisano Vincenza (2014), "LC–MS method for the simultaneous determination of six glucocorticoids in pharmaceutical formulations and counterfeit cosmetic products", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 91, pp 185-192 16 Giaccone Vita, Polizzotto Giuseppe, et al (2017), "Determination of ten corticosteroids in illegal cosmetic products by a simple, rapid, and highperformance LC-MS/MS method", International journal of analytical chemistry, 2017 17 HAURI Urs, HOHL Christopher (2004), "Determination of clandestine corticosteroids in cosmetics with LC/DAD/MS", Mitteilungen aus Lebensmitteluntersuchung und Hygiene, 95(5), pp 466-476 18 Kim Nam Sook, Yoo Geum Joo, et al (2017), "Determination of 43 prohibited glucocorticoids in cosmetic products using a simultaneous LC-MS/MS method", Analytical methods, 9(13), pp 2104-2115 19 Nam Yun Sik, Kwon Il Keun, et al (2012), "Quantitative monitoring of corticosteroids in cosmetic products manufactured in Korea using LC–MS/MS", Forensic science international, 220(1-3), pp e23-e28 20 United States Food and Drug administration (2019), Guideline for the validation of chemical methods in food, feed, cosmetics and veterinary products 21 United States Food and Drug administration (2003), Guidance for industry: Mass spectrometry for confirmation of the identity of animal drug residues PHỤ LỤC Phụ lục 1: Danh mục mỹ phẩm kiểm tra STT Tên mẫu Nơi sản xuất Số lô Hạn dùng POND'S White beauty Kem dưỡng trắng hồng tinh khiết ban ngày Rebirth original placenta anti-wrinkle cream Olay natural white pinkish fairness whitening cream Curel kem dưỡng da cấp ẩm chuyên sâu Kem trị nám, tàn nhang Lotus special YC527 so white total solutions Kem dưỡng trắng giảm thâm nám ban đêm ZA True white ex night cream Kem vitamin dưỡng trắng white perfect day cream Kem dưỡng da giữ ẩm Bạch Liên Herbal special Hanatural Kem dưỡng trắng giúp tái tạo da giữ ẩm- se khít lỗ chân lơng Kem ngừa nám cao cấp One today Công ty TNHH Quốc tế Unielever Việt Nam 12 04/01/2021 Lanopearl LTD Ltd, Australia B D28KH 24/01/2022 P & G, Thái Lan 83444811J2 10/2021 Kao Corporation, Nhật Bản Công ty Cổ phần Nam Hải Long Thái Lan 2158 08/2021 040518lW1 05/04/2021 LOT02 07/2023 Shiseido Việt Nam 9014BF 14/01/2024 Loreal, Indonesia M15350 13/01/2020 Công ty Cổ phần Nam Hải Long 210418HW1 21/04/2021 Công ty Dược Mỹ phẩm Elle Việt Nam HSKCL25 14/11/2021 Công ty TNHH MTV SX TM MP Đăng Dương Việt Nam Công ty TNHH Greenbon Việt Nam Thảo dược Đông Giang Đường, Việt Nam 01DD1915 05/2020 K21 01/05/2020 11/06/2021 10 11 12 13 Greenbon Night cream kem nghệ nếp đỏ Cao đặc trị nám- tàn nhang 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Privia Kem dưỡng ẩm làm trắng da chống nhăn Kem thuốc bắc dưỡng da-trị mụn night cream Thảo mộc dân tộc: Thanh mộc hương Hada Labo perfect white kem dưỡng trắng Privia Co, Ltd Hàn Quốc Chi's natural Việt Nam KD001 18/01/2023 Khơng có thơng tin 01/11/2020 HTX dân tộc Dao Khơng có thơng tin 01/2020 n Sơn, Ba Vì Cơng ty TNHH AV01 01/03/2022 RohtoMentholatumViệt Nam Kem đặc trị nám mụn Công ty TNHH 20180522 10/01/2022 Ngự y triều Nguyễn Đông dược Ngự y triều Nguyễn Kem bơi da Thuần Việt Nam Khơng có thơng tin mộc Dr Mai herbal Công ty TNHH 012019.A00047355 12/10/2020 cosmetic TM DV SX Mỹ phẩm M.A.I Việt Nam Bio essence dòng sản L.D Waxson 007B 12/2021 phẩm dưỡng trắng Quanzhou chuyên sâu bio-white Trung Quốc chiết xuất tanaka camellia Kem dưỡng da tác Công ty Cổ phần 051217B1 12/5/2020 dụng Bạch Liên: Nam Hải Long Herbal Kem nám Bạch Liên: Công ty Cổ phần 030518LN1 5/3/2021 Lotus new night Nam Hải Long Kem khách gửi Khơng có thơng tin Phụ lục 2: Kết thẩm định 2.1 Kết thẩm định độ chụm trung gian phương pháp Tên chất Mẫu LOQ STT PRS TB* RSD* TAA TB* RSD* DXA TB* RSD* CBP TB* RSD* BMD TB* RSD* Mẫu MQC Tỷ lệa Nồng độb Thu hồic Tỷ lệa 0,153 0,137 0,132 0,125 0,141 0,109 6,06 5,56 5,41 5,19 5,69 4,69 1,79 1,558 1,547 1,582 1,601 1,637 0,142 0,145 0,122 0,105 0,134 0,12 5,60 5,70 4,93 4,37 5,33 4,87 0,195 0,238 0,209 0,215 0,199 0,218 7,05 9,10 7,71 8,00 7,24 8,14 0,104 0,095 0,134 0,128 0,133 0,125 2,41 2,24 3,00 2,88 2,98 2,82 2,04 2,04 2,04 2,04 2,04 2,04 0,082 0,075 0,103 0,111 0,095 0,088 117,0 107,3 104,3 100,1 109,7 90,4 101,8 9,5 110,8 112,8 97,6 86,4 105,5 96,3 101,6 8,9 91,2 117,6 99,8 103,5 93,6 105,3 103,4 9,9 79,9 74,1 99,4 95,5 98,8 93,6 91,8 9,0 1,63 1,53 1,92 2,03 1,81 1,71 92,0 10,5 1,432 1,449 1,55 1,467 1,39 1,473 1,707 1,639 1,586 1,679 1,717 1,589 1,618 1,515 1,557 1,465 1,422 1,501 1,525 1,471 1,338 1,459 1,377 1,39 Nồng độb Thu hồic Mẫu HQC Tỷ lệa Nồng độb Thu hồic 57,22 110,4 3,23 102,22 98,6 49,97 96,4 3,427 108,38 104,6 49,63 95,8 3,201 101,31 97,7 50,72 97,9 3,33 105,34 101,6 51,31 99,0 3,187 100,88 97,3 52,44 101,2 3,199 101,25 97,7 100,0 98,5 6,3 3,4 48,60 96,1 2,801 94,23 93,2 49,17 97,3 2,789 93,83 92,8 52,53 103,9 2,883 96,97 95,9 49,77 98,4 2,941 98,90 97,8 47,20 93,4 2,99 100,53 99,4 49,97 98,8 2,956 99,40 98,3 97,4 96,8 4,5 3,1 79,05 102,2 3,325 156,10 100,9 75,81 98,1 3,408 160,05 103,5 73,29 94,8 3,211 150,67 97,4 77,71 100,5 3,19 149,67 96,8 79,52 102,9 3,446 161,86 104,7 73,43 95,0 3,378 158,62 102,6 98,1 99,2 3,4 3,4 32,10 106,4 3,087 60,90 100,9 30,08 99,7 3,202 63,16 104,6 30,90 102,4 3,001 59,22 98,1 29,10 96,4 3,114 61,43 101,8 28,25 93,6 3,007 59,33 98,3 29,80 98,8 3,125 61,65 102,1 98,5 101,1 4,0 3,1 21,40 104,9 2,953 40,96 100,4 20,66 101,3 3,038 42,12 103,2 18,84 92,3 2,844 39,47 96,7 20,49 100,4 2,909 40,36 98,9 19,37 94,9 3,005 41,67 102,1 19,55 95,8 2,878 39,93 97,9 97,5 98,9 4,3 2,8 (a): Tỷ lệ diện tích so với chuẩn nội (b): Nồng độ tính lại từ đường chuẩn (ng/ml) (c): % thu hồi so với nồng độ thêm vào 2.2 Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại Tên chất PRS TAA DXA CBP Mẫu LOQ STT TB RSD TB RSD TB RSD TB RSD Mẫu MQC Tỷ Nồng Thu Tỷ Nồng lệa độb hồic lệa độb 0,171 5,61 108,3 1,738 56,16 0,175 5,74 110,8 1,735 56,06 0,163 5,35 103,3 1,627 52,58 0,147 4,84 93,4 1,558 50,35 0,142 4,68 90,3 1,421 45,94 0,136 4,48 86,5 1,538 49,71 98,8 10,2 0,156 5,64 110,9 1,433 51,25 0,161 5,82 114,4 1,503 53,75 0,128 4,64 91,2 1,347 48,18 0,135 4,89 96,1 1,338 47,86 0,139 5,04 98,9 1,344 48,07 0,138 5,00 98,2 1,297 46,39 101,6 8,9 0,208 9,95 127,2 1,676 76,68 0,169 8,18 104,5 1,737 79,45 0,151 7,36 94,1 1,711 78,27 0,163 7,91 101,0 1,632 74,68 0,167 8,09 103,4 1,629 74,55 0,16 7,77 99,3 1,598 73,14 104,9 11,0 0,111 2,81 92,9 1,592 30,75 0,111 2,81 92,9 1,56 30,15 0,127 3,11 102,9 1,486 28,75 0,106 2,72 89,8 1,437 27,83 0,101 2,62 86,6 1,541 29,79 0,115 2,89 95,4 1,536 29,70 93,4 5,9 0,069 2,17 106,1 1,534 20,04 0,070 2,18 106,7 1,620 21,09 Thu hồic 108,4 108,2 101,5 97,2 88,6 95,9 100,0 7,7 100,7 105,6 94,7 94,0 94,5 91,2 96,8 5,5 98,0 101,5 100,0 95,4 95,2 93,4 97,2 3,2 101,6 99,6 95,0 91,9 98,4 98,1 97,5 3,5 97,9 103,0 Mẫu HQC Tỷ Nồng Thu lệa độb hồic 3,285 106,06 102,3 3,194 103,13 99,5 3,015 97,35 93,9 3,041 98,19 94,7 3,009 97,16 93,7 3,21 103,65 100,0 97,4 3,8 2,776 99,21 97,5 2,628 93,93 92,3 2,837 101,39 99,6 2,698 96,43 94,7 2,8 100,07 98,3 2,9 103,64 101,8 97,4 3,5 3,279 149,55 95,5 3,398 154,95 99,0 3,415 155,73 99,5 3,185 145,27 92,8 3,4 155,05 99,0 3,388 154,50 98,7 97,4 2,7 3,316 63,28 104,5 3,146 60,08 99,2 3,2 61,09 100,9 3,046 58,19 96,1 3,4 64,87 107,2 3,149 60,13 99,3 101,2 3,9 3,160 39,87 97,4 3,075 38,83 94,9 BMD TB RSD 0,056 0,042 0,041 0,046 2,01 1,84 1,83 1,89 98,3 90,0 89,4 92,4 97,1 8,1 1,521 1,400 1,493 1,507 (a): Tỷ lệ diện tích so với chuẩn nội (b): Nồng độ tính lại từ đường chuẩn (ng/ml) (c): % thu hồi so với nồng độ thêm vào 19,88 18,40 19,54 19,71 97,1 89,9 95,5 96,3 96,6 4,4 3,231 3,056 3,310 3,221 40,73 38,60 41,70 40,61 99,5 94,3 101,9 99,2 97,9 3,0 Phụ lục 3: Sắc ký đồ số mẫu mỹ phẩm thị trường * Mẫu M18: MAU THU03-Mar-2020 M18-1 8: MRM of Channels ES+ 435.18 > 337.13 (DEXAMETHASON ACETAT) 5.75e6 4.00 % 100 2.00 3.00 4.00 5.00 M18-1 4.00 7.00 8.00 8: MRM of Channels ES+ 435.18 > 319.2 (DEXAMETHASON ACETAT) 4.38e6 % 100 6.00 Time 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 * Mẫu M19: MAU THU03-Mar-2020 M19-1 7: MRM of Channels ES+ 435.11 > 339.09 (TRIAMCINOLON ACETONID) 1.58e6 3.70 % 100 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 4.00 5.00 6.00 M19-1 3.70 % 100 7.00 8.00 7: MRM of Channels ES+ 435.11 > 321.15 (TRIAMCINOLON ACETONID) 8.58e5 Time 2.00 3.00 7.00 8.00 * Mẫu M24: 07-Mar-2020 KEM 13: MRM of Channels ES+ 505.25 > 411.22 (BETAMETHASON DIPROPIONAT) 2.03e7 5.70 % 100 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 KEM 5.70 6.50 7.00 7.50 8.00 13: MRM of Channels ES+ 505.25 > 337.13 (BETAMETHASON DIPROPIONAT) 7.93e6 % 100 Time 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 ... kiểm tra chất cấm nhóm GLU mỹ phẩm Để góp phần giải tồn trên, nhóm nghiên cứu tiến hành thực nghiệm đề tài: ? ?Nghiên cứu xác định môt số chất cấm mỹ phẩm phương pháp sắc ký lỏng khối phổ? ?? với... sau: Xây dựng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC – MS/MS) xác định số chất cấm nhóm glucocorticoid mỹ phẩm dạng kem Áp dụng phương pháp xây dựng để xác định có hay khơng có chất cấm nhóm glucocorticoid... DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ KHÁNH HUYỀN Mã sinh viên: 1501223 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỔI PHỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: HVCH