xây dựng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để xác định một số chất cấm trong mỹ phẩm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ DUYÊN XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỂ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ DUYÊN XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỂ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Mạnh Hùng PGS.TS Lê Đình Chi HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Tạ Mạnh Hùng – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, PGS.TS Lê Đình Chi - Trường Đại học Dược Hà Nội, hai người thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cô công tác Bộ môn Hóa Phân tích – độc chất dạy giúp đỡ thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện cho học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới đồng nghiệp khoa Kiểm nghiệm Mỹ phẩm – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện giúp đỡ q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè giúp đỡ động viên để tơi có đủ nghị lực, tâm hồn thành luận văn Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn Q Thầy, Cơ, Cơ quan, Gia đình Bạn bè hỗ trợ động viên, giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 15 tháng 04 năm 2020 Học viên: Ngô Thị Duyên MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ QUI ĐỊNH QUẢN LÝ MỸ PHẨM 1.1.1 Quản lý mỹ phẩm giới 1.1.2 Quản lý mỹ phẩm Việt Nam 1.2 TỔNG QUAN VỀ NHĨM CHẤT GLUCOCORTICOID .5 1.2.1 Cơng thức cấu tạo tính chất lý hóa 1.2.2 Tác dụng dược lý 1.2.3 Tác dụng không mong muốn 1.2.4 Một số phương pháp định tính định lượng GC mỹ phẩm .9 1.3 TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ 10 1.3.1 Bộ phận nạp mẫu 11 1.3.2 Nguồn ion hóa kiểu phun sương điện (ESI – Electrospray ionization) .11 1.3.3 Bộ phận phân tích khối ghép nối ba tứ cực 11 1.3.4 Bộ phận phát (detector) .12 1.4 TỔNG QUAN THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM .12 1.4.1 Tính đặc hiệu - chọn lọc 13 1.4.2 Giới hạn phát (LOD) 13 1.4.3 Giới hạn định lượng (LOQ) 14 1.4.4 Khoảng tuyến tính đường chuẩn .14 1.4.5 Độ xác 15 1.4.6 Độ .15 1.4.7 Xác định tỷ lệ dương tính giả, âm tính giả 15 1.4.8 Khẳng định định tính 16 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.2 NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Chất chuẩn, dung mơi, hóa chất 17 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ phân tích 18 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 2.3.1 Xây dựng phương pháp phân tích .18 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 20 2.3.3 Xác định nhóm chất GC số mẫu kem bơi da có mặt thị trường 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 24 3.1.1 Xây dựng điều kiện khối phổ xác định GC 24 3.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 28 3.1.3 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 31 3.1.4 Khảo sát lựa chọn chuẩn nội .32 3.1.5 Kết xây dựng phương pháp LC-MS/MS xác định GC mỹ phẩm 33 3.2 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 36 3.2.1 Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS 36 3.2.2 Độ đặc hiệu – chọn lọc phương pháp 37 3.2.3 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 41 3.2.4 Xây dựng đường chuẩn khoảng tuyến tính .43 3.2.5 Độ đúng, độ lặp lại phương pháp 45 3.2.6 Độ xác trung gian phương pháp 46 3.2.7 Xác định tỷ lệ dương tính giả, âm tính giả 47 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH GC TRONG CÁC MẪU MỸ PHẨM DẠNG KEM TRÊN THỊ TRƢỜNG 47 CHƢƠNG BÀN LUẬN 50 4.1 PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI 12 GC TRONG MỸ PHẨM 50 4.1.1 Lựa chọn phổ khối MS/MS cho phân tích nhóm GC 50 4.1.2 Phương pháp xử lý mẫu .51 4.1.3 Phương pháp sàng lọc sơ GC kỹ thuật LC – MS/MS .51 4.1.4 Thẩm định phương pháp phân tích 51 4.2 KẾT QUẢ DƢƠNG TÍNH GIẢ, ÂM TÍNH GIẢ TRONG PHÂN TÍCH BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC – MS/MS 52 4.3 KẾT QUẢ KIỂM TRA CÁC MẪU MỸ PHẨM TRÊN TRỊ TRƢỜNG 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 KẾT LUẬN 55 KIẾN NGHỊ .56 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải thích ACD ASEAN Cosmetics Directive (Quy định mỹ phẩm ASEAN) ACN Acetonitril ASEAN BMD Association of South East Asia’s Nations (Liên hiệp quốc gia Đông Nam Á) Betamethason dipropionat BMV Betamethason valerat CBP Clobetasol propionat CTA Cortison acetat DAD Diod array detector (Detector mảng diod) DMPM Dung môi pha mẫu DXA Dexamethason acetat DXM Dexamethason EC European community (Hội đồng Châu Âu) ESI Electrospray ionization (Ion hóa kiểu phun sương điện) EtOH Ethanol FLA Fluocinolon acetonid FN False negative (âm tính giả) FP False positive (dương tính giả) GBC Glibenclamid GC Glucocorticoid HCTA Hydrocortison acetat HH Hỗn hợp HPLC IS High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) Internal standard (Chuẩn nội) KTT Khoảng tuyến tính LC – HR/MS LC-MS Liquid chromatography- high resolution mass spectrometry (Sắc ký lỏng khối phổ độ phân giải cao) Liquid chromatography – mass spectrophometry (Sắc ký lỏng khối phổ) LOD Liquid chromatography – Tandem mass spectrophometry (Sắc ký lỏng khối phổ hai lần) Limit of detection (Giới hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (Giới hạn định lượng) MeOH Methanol MRM Multiple reaction monitoring MTF Mometason furoat PAL Pharmaceutical Affairs Law (Luật quản lý Dược (Nhật Bản)) PP Phương pháp PRA Prednison acetat PRS Prednison QĐ- BYT Quyết định- Bộ Y Tế RA Relative abundance (Tỷ lệ cường độ ion ) RSD Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) SKĐ Sắc ký đồ TAA Triamcinolon acetonid TB Trung bình THF Tetrahydrofuran TLC Thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng ) TLTK Tài liệu tham khảo TT- BYT Thông tư- Bộ y tế USFDA UV - VIS United state – Food and Drug administration (Cục quản lý thực phẩm, dược phẩm Mỹ) Ultraviolet-visible (tử ngoại – khả kiến) v/v Volume/Volume (thể tích/thể tích) LC-MS/MS DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số nội dung quản lý mỹ phẩm Châu Âu, Mỹ, Nhật ASEAN Bảng 1.2 Công thức cấu tạo 12 GC nghiên cứu Bảng 1.3 Tính chất lý hóa GC nghiên cứu Bảng 1.4 Một số phương pháp định tính định lượng GC Bảng 1.5 Số lượng mẫu cần phân tích để xác định FP, FN .16 Bảng 2.1 Thông tin chất chuẩn sử dụng 17 Bảng 2.2 Nồng độ dãy đường chuẩn GC 21 Bảng 3.1 Chương trình gradient dung mơi 33 Bảng 3.2 Điều kiện detector khối phổ 33 Bảng 3.3 Thơng tin sử dụng phát định tính GC 36 Bảng 3.4 Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS .37 Bảng 3.5 So sánh thời gian lưu pic thu từ mẫu tự tạo mẫu chuẩn .38 Bảng 3.6 Tỷ lệ cường độ ion pic thu từ mẫu tự tạo mẫu chuẩn 39 Bảng 3.7 Kết phân tích mẫu LOD 42 Bảng 3.8 LOD LOQ phương pháp .43 Bảng 3.9 Kết khảo sát đường chuẩn PRS, DXM, PRA, CTA 44 Bảng 3.10 Kết khảo sát đường chuẩn HCTA, TAA, DXA, FLA .44 Bảng 3.11 Kết khảo sát đường chuẩn CBP, BMV, BMD, MTF 45 Bảng 3.12 Kết độ đúng, độ lặp lại phương pháp 46 Bảng 3.13 Kết xác trung gian phương pháp .46 Bảng 3.14 Kết phân tích GC số mẫu kem mỹ phẩm 48 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Công thức cấu tạo chung GC Hình 1.2 Sơ đồ cấu tạo máy khối phổ 11 Hình 1.3 Cấu tạo chế hoạt động phổ khối ghép nối ba tứ cực 12 Hình 3.1 Phổ khối MS dung dịch chuẩn BMV với chế độ ESI (+) 24 Hình 3.2 Giản đồ tối ưu điện tập trung ion có số khối 477,24 Da .25 Hình 3.3 Phổ khối MS/MS phân mảnh ion [BMV + H]+ 26 Hình 3.4 Giản đồ lượng phân mảnh ion m/z 477,24 → 355,14 27 Hình 3.5 Giản đồ lượng phân mảnh ion m/z 477,24 → 337,13 28 Hình 3.6 SKĐ mẫu chuẩn sử dụng cột Acquity UPLC BEH C8 (2,1 x 100 mm, 1,7 µm), pha động MeOH : acid formic 0,1 % (70:30) 29 Hình 3.7 SKĐ mẫu chuẩn sử dụng cột Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm, 1,7 µm), pha động MeOH : acid formic 0,1 % (70:30) 30 Hình 3.8 SKĐ mẫu chuẩn sử dụng pha động MeOH : acid formic 0,1 % (72:28) 30 Hình 3.9 SKĐ mẫu chuẩn sử dụng chương trình gradient 30 Hình 3.10 SKĐ mẫu tự tạo sử dụng dung môi ACN .32 Hình 3.11 SKĐ đại diện độ đặc hiệu 40 Hình 3.12 Giá trị S/N LOD số chất đại diện 41 Hình 3.13 Giá trị S/N LOQ số chất đại diện 42 Hình 3.14 SKĐ đại diện số mẫu kem có GC 49 ... luận định tính có mặt glucocorticoid mẫu [16], [17] Vì vậy, kỹ thuật lựa chọn để thực đề tài: ? ?Xây dựng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để xác định số chất cấm mỹ phẩm? ?? với mục tiêu: Xây dựng phương. .. DƢỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ DUYÊN XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỂ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng... [19], [21], [22] sử dụng để định tính định lượng GC mỹ phẩm Tóm tắt số phương pháp định tính, định lượng GC trình bày bảng 1.4 Bảng 1.4 Một số phương pháp định tính định lượng GC PP PP xử lý