Định lượng và thử độ hòa tan của chế phẩm có chứa trimethoprim, sulfamethoxazol bằng quang phổ đạo hàm

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÃ THỊ PHƢƠNG THẢO ĐỊNH LƢỢNG VÀ THỬ ĐỘ HÒA TAN CỦA CHẾ PHẨM CÓ CHỨA TRIMETHOPRIM, SULFAMETHOXAZOL BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÃ THỊ PHƢƠNG THẢO MÃ SINH VIÊN: 1501456 ĐỊNH LƢỢNG VÀ THỬ ĐỘ HỊA TAN CỦA CHẾ PHẨM CĨ CHỨA TRIMETHOPRIM, SULFAMETHOXAZOL BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Đặng Hồng Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích độc chất Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, với lòng biết ơn kính trọng sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Vũ Đặng Hoàng - Giảng viên cao cấp Bộ mơn Hóa phân tích độc chất - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội dành nhiều thời gian, cơng sức, ln tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ em trình nghiên cứu hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Hóa phân tích độc chất - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội suốt thời gian em làm thực nghiệm môn Em xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trƣờng, phòng ban, thầy tồn thể cán cơng nhân viên Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội trực tiếp giảng dạy tạo điều kiện tốt cho em trình học tập trƣờng Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn tới chị Lƣu Thị Ngọc Hân (Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Hà Nội) bạn Nguyễn Thị Ngọc Thụy ln nhiệt tình giúp đỡ đồng hành em suốt trình thực khóa luận Cuối em xin gửi lời cảm ơn tới ngƣời thân, bạn bè động viên khuyến khích em q trình học tập nhƣ thời gian em thực đề tài Hà Nội, tháng 06 năm 2020 Sinh viên Lã Thị Phƣơng Thảo MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan sulfamethoxazol trimethoprim 1.1.1 Một số đặc điểm lý hóa sulfamethoxazol trimethoprim 1.1.2 Một số phƣơng pháp định lƣợng đồng thời sulfamethoxazol trimethoprim 1.2 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại – khả kiến (UV-Vis) 10 1.2.1 Định luật Lambert-Beer 10 1.2.2 Định lƣợng dung dịch nhiều thành phần quang phổ đạo hàm .11 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên liệu thiết bị 15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Máy móc, thiết bị 15 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 16 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời SUL TRI quang phổ đạo hàm 17 2.3.2 Ứng dụng phƣơng pháp để định lƣợng thử độ hòa tan chế phẩm nghiên cứu 17 2.3.3 Xử lý kết thực nghiệm 17 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .19 3.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 19 3.1.1 Chuẩn bị dung môi 19 3.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu .19 3.2 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng 20 3.2.1 Xác định khoảng cộng tính 20 3.2.2 Chọn bƣớc sóng định lƣợng 21 3.2.3 Khảo sát khoảng tuyến tính 24 3.2.4 Độ đúng, độ lặp phƣơng pháp 25 3.3 Kết định lƣợng 26 3.4 So sánh kết định lƣợng 27 3.5 Thử độ hòa tan 28 3.5.1 Quy trình thử 29 3.5.2 Kết .29 3.6 Bàn luận 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO .33 PHỤ LỤC 36 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt C Concentration Nồng độ HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SUL Sulfamethoxazole Sulfamethoxazol TRI Trimethoprim Trimethoprim UPLC Ultra Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu Chromatography UV Ultraviolet Tử ngoại DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số đặc điểm lý hóa sulfamethoxazol trimethoprim Bảng 2: Một số phƣơng pháp định lƣợng đồng thời sulfamethoxazol trimethoprim Bảng 3: Các chế phẩm đƣợc nghiên cứu 16 Bảng 4: Khảo sát khoảng tuyến tính 25 Bảng 5: Độ đúng, độ lặp phƣơng pháp 25 Bảng 6: Kết định lƣợng SUL chế phẩm nghiên cứu (n=3) .26 Bảng 7: Kết định lƣợng TRI chế phẩm nghiên cứu (n=3) 26 Bảng 8: Kết so sánh thẩm định t cặp phƣơng pháp đạo hàm bậc giao điểm không HPLC 27 Bảng 9: Kết so sánh thẩm định t cặp phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối HPLC 28 Bảng 10: Kết phần trăm hàm lƣợng hoạt chất hòa tan so với nhãn chế phẩm viên nén, viên nang sau 60 phút 29 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1: Phổ hấp thụ đạo hàm dải phổ tuân theo định luật phân bố Gauss 12 Hình 2: Đạo hàm bậc lamivudin (1) 15 µg/ml; (2) 20 µg/ml; (3) 30 µg/ml (đƣờng nét liền) zidovudin (1) 30 µg/ml; (2) 50 µg/ml; (3) 75 µg/ml (đƣờng nét đứt) methanol Mũi tên bƣớc sóng định lƣợng 13 Hình 4: Phổ hấp thụ dung dịch chuẩn SUL 40,0 mg/L, TRI 8,0 mg/L, phổ cộng phổ hỗn hợp với hàm lƣợng SUL, TRI tƣơng ứng 20 Hình 5: Phổ đạo hàm bậc dãy dung dịch chuẩn SUL (20-48 mg/L), TRI (4-9,6 mg/L) chế phẩm bột uống Supertrim 21 Hình 6: Phổ đạo hàm bậc dãy dung dịch chuẩn SUL (20-48 mg/L), TRI (4-9,6 mg/L) chế phẩm viên nén Biseptol 22 Hình 7: Phổ đạo hàm bậc phổ tỷ đối dãy dung dịch chuẩn SUL (20-48 mg/L) + TRI mg/L, dung dịch chuẩn SUL 40 mg/L chế phẩm viên nén Biseptol, với số chia dung dịch chuẩn TRI mg/L .23 Hình 8: Phổ đạo hàm bậc phổ tỷ đối dãy dung dịch chuẩn SUL 40mg/L + TRI (4-9,6 mg/L) chế phẩm viên nén Trimeseptol, với số chia dung dịch chuẩn SUL 20 mg/L 24 Hình 9: Đƣờng cong hịa tan viên nén Biseptol 29 Hình 10: Đƣờng cong hịa tan viên nang Sulfareptol 29 ĐẶT VẤN ĐỀ Cotrimoxazol hỗn hợp bao gồm sulfamethoxazol (5 phần) trimethoprim (1 phần), đƣợc biết đến kháng sinh phổ rộng điều trị nhiễm khuẩn đƣờng tiết niệu, hơ hấp tiêu hóa Sulfamethoxazol sulfonamid có cấu trúc tƣơng tự acid para aminobenzoic, ức chế giai đoạn I - trình tổng hợp acid dihydrofolic vi khuẩn nhờ có lực cao với dihydrofolat synthetase Trimethoprim dẫn chất pyrimidin, ức chế giai đoạn II trình tổng hợp acid folic vi khuẩn khả gắn cạnh tranh ức chế đặc hiệu dihydrofolat reductase (là enzym xúc tác cho phản ứng chuyển acid dihydrofolic thành acid tetrahydrofolic) [5] Cotrimoxazol khơng có tác dụng diệt khuẩn nhờ ức chế nối tiếp sulfamethoxazol trimethoprim mà cịn có tác dụng hiệp đồng chống lại phát triển vi khuẩn kháng thành phần thuốc Theo quy định Dƣợc điển Việt Nam V, phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) đƣợc sử dụng để định lƣợng đồng thời sulfamethoxazol trimethoprim viên nén Cotrimoxazol [2] Với mong muốn đề xuất phƣơng pháp định lƣợng đồng thời hai hoạt chất dạng bào chế khác (viên nén, viên nang, bột pha dung dịch…) kỹ thuật đạo hàm phổ tử ngoại (sử dụng dung mơi, hóa chất thông dụng, không qua chiết tách riêng thành phần), đề tài: ʺĐịnh lượng thử độ hòa tan chế phẩm có chứa Trimethoprim, Sulfamethoxazol quang phổ đạo hàmʺ đƣợc tiến hành với hai mục tiêu: - Xây dựng phép định lƣợng đồng thời hoạt chất hỗn hợp hai thành phần sulfamethoxazol trimethoprim phép biến đổi đạo hàm phổ tử ngoại - Ứng dụng phép định lƣợng để xác định hàm lƣợng sulfamethoxazol trimethoprim số chế phẩm lƣu hành thị trƣờng CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan sulfamethoxazol trimethoprim 1.1.1 Một số đặc điểm lý hóa sulfamethoxazol trimethoprim Bảng 1: Một số đặc điểm lý hóa sulfamethoxazol trimethoprim [2] [21] [22] Sulfamethoxazol Trimethoprim Công thức cấu tạo Công C10H11N3O3S C14H18N4O3 Tên 4-amino-N-(5-methylisoxazol-3- 5-(3,4,5- khoa yl)benzensulfonamid trimethoxybenzyl)pyrimidin-2,4- thức phân tử học diamin KLPT 253,3 290,3 Tính Bột kết tinh màu trắng gần nhƣ Bột trắng trắng vàng chất trắng Log P 0,7 0,91 pKa pKa1= 1,6 pKa = 7,12 (ở 20oC) pKa2 = 5,7 Tính Thực tế khơng tan nƣớc (610 Rất khó tan nƣớc (400 mg/L tan mg/L 37oC), dễ tan aceton, 25oC), khó tan ethanol 96% tan ethanol 96% Tan Tan dung dịch natri hydroxyd g/100mL) loãng dung dịch acid loãng g/100mL) cloroform methanol (1,82 (1,21 Bảng 4: Khảo sát khoảng tuyến tính Bƣớc sóng Phƣơng trình hồi quy R2 260,95 y = 0,021x + 0,0682 0,9975 TRI 247,90 y = – 0,169x + 0,0611 0,9993 Đạo hàm bậc giao SUL 264,50 y = – 0,008x – 0,0133 0,9991 điểm không TRI 255,75 y = 0,0109x – 0,0212 0,9936 Đạo hàm bậc phổ SUL 274,70 y = – 0,2021x + 0,2565 0,9995 tỷ đối TRI 246,60 y = – 0,4755x + 0,4624 0,9959 Phƣơng pháp Hoạt chất Đạo hàm bậc giao SUL điểm không (nm) 3.2.4 Độ đúng, độ lặp phương pháp Độ phƣơng pháp dựa phần trăm tìm lại chất chuẩn đƣợc thêm vào mẫu thử điều kiện Tiến hành khảo sát chế phẩm (thuốc bột Supertrim, viên nang Sulfareptol viên nén Trimeseptol), chế phẩm làm mẫu thử (n=3) Thêm xác đồng thời lƣợng dung dịch chuẩn SUL TRI tƣơng đƣơng 100% nồng độ dung dịch thử Kết phần trăm tìm lại đƣợc trình bày bảng Bảng 5: Độ đúng, độ lặp phương pháp Phần trăm tìm lại (%) Bột uống Supertrim Viên nang Sulfareptol Đạo hàm tỷ đối Đạo hàm bậc Đạo hàm bậc SUL TRI SUL TRI SUL TRI 98,3 95,7 98,8 97,9 98,9 94,8 101,3 94,7 96,9 102,1 96,5 99,8 100,7 99,5 97,7 100,1 97,8 94,2 101,5 99,0 100,7 97,3 99,0 95,6 98,8 97,3 99,3 96,5 101,4 96,0 102,8 97,6 99,6 100,8 99,2 96,1 Chế phẩm 25 bậc 1 104,3 97,1 100,5 103,8 100,1 96,5 102,9 98,8 99,2 95,3 99,2 98,4 104,1 94,5 99,2 98,0 97,7 94,7 Trung bình 101,6 97,1 99,1 99,1 98,9 96,2 SD 2,1 1,8 1,1 2,8 1,4 1,8 RSD 2,0 1,9 1,2 2,8 1,4 1,9 Viên nén Trimeseptol Với phƣơng pháp đạo hàm bậc giao điểm khơng, tín hiệu đạo hàm bƣớc sóng đinh lƣợng thấp (< 0,1) độ lặp lại phƣơng pháp không cao (RSD > 2%) nên phƣơng pháp không đƣợc áp dụng cho định lƣợng chế phẩm nghiên cứu 3.3 Kết định lƣợng Bảng 6: Kết định lượng SUL chế phẩm nghiên cứu (n=3) Hàm lƣợng phần trăm so với nhãn (Trung bình ± SD) Chế phẩm Đạo hàm bậc Đạo hàm tỷ đối bậc HPLC - DĐVN V Viên nang Sulfareptol 96,5 ± 0,7 96,3 ± 0,7 98,7 ± 0,2 Viên nén Biseptol 96,7 ± 1,6 98,7 ± 1,2 97,7 ± 0,7 Viên nén Cotrimstada 97,1 ± 1,0 97,9 ± 0,4 97,7 ± 0,5 Viên nén Trimeseptol 94,1 ± 2,0 94,3 ± 1,6 96,7 ± 0,2 Bột uống Supertrim 101,5 ± 0,5 99,5 ± 0,7 97,9 ± 0,6 Bảng 7: Kết định lượng TRI chế phẩm nghiên cứu (n=3) Hàm lƣợng phần trăm so với nhãn (Trung bình ± SD) Chế phẩm Đạo hàm bậc Viên nang Sulfareptol Đạo hàm tỷ đối bậc 96,3 ± 0,7 101,9 ± 1,2 26 HPLC - DĐVN V 100,8 ± 0,4 Viên nén Biseptol 94,2 ± 1,8 96,5 ± 0,8 99,4 ± 0,5 Viên nén Cotrimstada 94,6 ± 1,0 98,7 ± 1,0 98,3 ± 0,3 Viên nén Trimeseptol 96,6 ± 0,3 101,0 ± 0,1 99,3 ± 0,3 Bột uống Supertrim 94,3 ± 0,5 97,2 ± 0,8 98,1 ± 0,5 Trong nghiên cứu này, HPLC theo qui định DĐVN V đƣợc sử dụng làm phƣơng pháp đối chiếu với điều kiện sắc ký: máy sắc ký: Shimadzu LC 2030C 3D Plus; cột sắc ký: InertSustain C18 (250 mm × 4,6 mm, µm) - GL Sciences Inc; pha động (nƣớc : acetonitril : triethylamin, pH 5,9); tốc độ dòng 1,8 mL/phút; thể tích tiêm 20 µL; detector DAD: 254 nm 3.4 So sánh kết định lƣợng So sánh kết định lƣợng phƣơng pháp quang phổ đạo hàm với phƣơng pháp HPLC theo qui định DĐVN V phần mềm EXCEL với kiểm định thống kê t cặp với độ tin cậy 95% (bảng 9) Bảng 8: Kết so sánh kiểm định thống kê t cặp (độ tin cậy 95%) phương pháp đạo hàm bậc giao điểm không HPLC SUL TRI Biến Biến Biến Biến Trung bình 97,8 97,2 99,2 95,1 Phƣơng sai 0,5 7,2 1,2 1,1 5 5 n Tƣơng quan Pearson 0,4 0,7 Sai khác trung bình theo giả thiết 0 Bậc tự 4 t tính 0,5 10,4 p (T ≤ t) hai đuôi 0,6 t bảng hai đuôi 2,8 2,8 27 Với phƣơng pháp đạo hàm bậc giao điểm không, kết định lƣợng SUL khơng có khác biệt với độ tin cậy 95% so sánh với phƣơng pháp HPLC Tuy nhiên kết định lƣợng TRI quang phổ đạo hàm bậc nhỏ đáng kể so với HPLC (p < 0,05) Bảng 9: Kết so sánh kiểm định thống kê t cặp (độ tin cậy 95%) phương pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối HPLC SUL TRI Biến Biến Biến Biến Trung bình 97,8 97,3 99,2 99,1 Phƣơng sai 0,5 4,3 1,2 5,5 5 5 N Tƣơng quan Pearson 0,4 0,6 Sai khác trung bình theo giả thiết 0 Bậc tự 4 t tính 0,5 0,1 p (T ≤ t) hai đuôi 0,6 0,9 t bảng hai đuôi 2,8 2,8 Với phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê phép định lƣợng SUL TRI so sánh với phƣơng pháp HPLC (p > 0,05) Do đó, áp dụng phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối phép thử độ hòa tan để định lƣợng đồng thời SUL TRI 3.5 Thử độ hòa tan Tiến hành thử độ hòa tan chế phẩm: viên nén Biseptol, Cotrimstada, Trimeseptol viên nang Sulfareptol theo chuyên luận viên nén Cotrimoxazol DĐVN V 28 3.5.1 Quy trình thử - Cho 900 mL dung dịch HCl 0,1N vào bình thiết bị thử hồ tan - Làm ấm mơi trƣờng đến nhiệt độ 370C - Cho vào bình thử bình mẫu thử Hạ cánh khuấy cho máy chạy, thời gian thử hồ tan bắt đầu tính - Sau khoảng thời gian 5; 10; 20; 30; 45; 60 phút lấy khoảng mL mẫu, lọc, hút xác 1mL dịch lọc cho vào bình định mức 10 mL thêm dung dịch HCl 0,1N đến vạch - Xác định nồng độ SUL TRI phƣơng pháp quang phổ đạo hàm bậc phổ tỷ đối 3.5.2 Kết Hình 8: Đường cong hịa tan viên nén Biseptol (n = 6) 120 Hình 9: Đường cong hòa tan viên nang Sulfareptol (n = 6) 120 Biseptol 80 80 % Hòa tan 100 % Hòa tan 100 60 40 Sulfareptol 60 40 SUL SUL TRI 20 20 TRI 00 00 10 20 30 40 50 Thời gian (phút) 60 70 10 20 30 40 50 Thời gian (phút) 60 70 Kết cho thấy, viên nén Biseptol viên nang Sulfareptol hòa tan nhanh (hình 10) Sau khoảng 10 phút hàm lƣợng SUL TRI hòa tan lớn 80% Sau 30 phút, hai viên nén Cotrimstada Trimeseptol có hàm lƣợng SUL hịa tan lớn 85% TRI lớn 95% Hàm lƣợng SUL TRI hòa tan chế phẩm sau 60 phút đƣợc trình bày bảng 10: Bảng 10: Kết phần trăm hàm lượng hoạt chất hòa tan so với nhãn chế phẩm viên nén, viên nang sau 60 phút 29 Phần trăm hịa tan (Trung bình ± SD %) (n = 6) Chế phẩm SUL TRI Viên nén Biseptol 103,5 ± 2,1 90,6 ± 5,1 Viên nén Cotrimstada 92,3 ± 1,4 100,0 ± 2,1 Viên nén Trimeseptol 89,7 ± 1,2 93,6 ± 2,2 Viên nang Sulfareptol 96,2 ± 2,6 93,9 ± 2,1 3.6 Bàn luận Theo quy định DĐVN V, phƣơng pháp HPLC đƣợc sử dụng để định lƣợng đồng thời hỗn hợp SUL TRI viên nén Cotrimoxazol Tuy nhiên, phƣơng pháp đòi hỏi phải sử dụng nhiều dung môi hữu số lƣợng mẫu phân tích lớn (ví dụ: phép thử độ hịa tan…) Để tiết kiệm chi phí, phƣơng pháp đạo hàm phổ tử ngoại đƣợc nghiên cứu khóa luận Trên thực tế, quang phổ UV truyền thống định lƣợng đƣơc đồng thời SUL TRI hỗn hợp hai thành phần có đan xen dải phổ riêng biệt thành phần (hình 4) Do vậy, phép biến đổi đạo hàm đƣợc áp dụng để định lƣợng trực tiếp SUL TRI chế phẩm mà không cần qua giai đoạn tách chiết thành phần Phƣơng pháp đƣợc tiến hành với thông số đƣợc lựa chọn nhƣ sau:  Phép làm trơn phổ: Denta lambda: nm, Scaling factor:  Phép lấy đạo hàm: Denta lambda: nm, Scaling factor: 100 Với phƣơng pháp đạo hàm giao điểm khơng, bƣớc sóng đƣợc lựa chọn điểm mà phổ đạo hàm dãy dung dịch chuẩn hai chất đồng giao Qua khảo sát, bƣớc sóng đƣợc lựa chọn là:  Đạo hàm bậc 1: Định lƣợng SUL 260,95 nm, TRI 247,70 nm  Đạo hàm bậc 2: Định lƣợng SUL 264,50 nm, TRI 255,75 nm Với phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối, cƣờng độ tín hiệu phổ đạo hàm thu đƣợc phụ thuộc vào nồng độ số chia đƣợc lựa chọn Bƣớc sóng đƣợc lựa chọn điểm 30 mà giá trị tuyệt đối tín hiệu đạo hàm đủ lớn có phụ thuộc tuyến tính với nồng độ Qua khảo sát, bƣớc sóng số chia đƣợc lựa chọn  Định lƣợng SUL tại: 274,70 nm, số chia TRI mg/L  Định lƣợng TRI tại: 246,60 nm, số chia SUL 20 mg/L Tuy nhiên với phƣơng pháp đạo hàm bậc 2, tín hiệu đạo hàm bậc TRI thấp (< 0,1) độ lặp phƣơng pháp không cao (RSD > 2%) nên dễ mắc sai số lớn trình định lƣợng Vì vậy, phƣơng pháp khơng đƣợc ứng dụng định lƣợng thử độ hòa tan chế phẩm nghiên cứu So sánh độ kết định lƣợng thu đƣợc (kiểm định t cặp với độ tin cậy 95%) cho thấy: (i) khơng có khác biệt đáng kể định lƣợng SUL phƣơng pháp quang phổ đạo hàm HPLC nhƣ định lƣợng TRI phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối HPLC; (ii) phƣơng pháp phổ đạo hàm bậc thƣờng cho giá trị hàm lƣợng TRI nhỏ đáng kể so với HPLC Do đó, áp dụng phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối phép thử độ hòa tan Kết định lƣợng cho thấy tất chế phẩm có hàm lƣợng SUL TRI đạt yêu cầu từ 93,0% đến 107,0% so với lƣợng ghi nhãn (theo yêu cầu DĐVN V) phép định lƣợng có độ lặp với RSD < 2% Trong phép thử độ hòa tan theo qui định DĐVN V, tất chế phẩm đạt u cầu: khơng 70% lƣợng SUL TRI so với lƣợng ghi nhãn đƣợc hòa tan 60 phút 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ - Dựa vào kết nghiên cứu đề tài, rút số nhận xét nhƣ sau: Xây dựng đƣợc phép định lƣợng đồng thời SUL TRI hỗn hợp cách trực tiếp khơng qua q trình chiết tách phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối Sự khác biệt độ phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối HPLC (theo qui định DĐVN V) khơng có ý nghĩa thống kê với mức tin cậy 95% Phép định lƣợng phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối có độ lặp tốt (RSD < 2%) Khơng có sai khác đáng kể hàm lƣợng thực tế mẫu chế phẩm nghiên cứu so với hàm lƣợng ghi nhãn Phƣơng pháp quang phổ đạo hàm có yêu cầu kỹ thuật đơn giản, sử dụng dung mơi, hóa chất thơng thƣờng tiết kiệm chi phí nên có khả ứng dụng vào cơng tác kiểm nghiệm thuốc - Trên sở kết đạt đƣợc, chúng tơi có số kiến nghị nhƣ sau: Ứng dụng phƣơng pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối cho phép định lƣợng thử độ hòa tan chế phẩm đƣợc nghiên cứu sở kiểm nghiệm có trang bị máy đo quang UV-Vis đại Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng phƣơng pháp quang phổ đạo hàm vào kiểm nghiệm dạng bào chế đa thành phần (2-3 hoạt chất) có khả hấp thụ UV-Vis 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Trần Tử An (2017), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất y học [2] Bộ Y tế (2018), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất y học [3] Nguyễn Phƣơng Nhung, Vũ Đặng Hoàng (02/2013), “Tổng quan ứng dụng quang phổ đạo hàm định lƣợng thuốc đa thành phần, phần 1”, Tạp chí dược học, số 442 năm 53, tr.2-3 [4] Nguyễn Phƣơng Nhung, Vũ Đặng Hoàng (05/2013),“Tổng quan ứng dụng quang phổ đạo hàm định lƣợng thuốc đa thành phần, phần 2” Tạp chí dược học, số 445 năm 53, tr.2-5 [5] Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2007), Dược lý 2, Nhà xuất y học [6] Nguyễn Tƣờng Vy, Đỗ Thanh Ngọc (2003), “Định lƣợng đồng thời Sulphamethoxazol Trimethoprim viên nén Trasepton phƣơng pháp quang phổ đạo hàm tỷ đối” Tạp chí dược học, tập 12, tr.28-29 Tiếng Anh [7] Abdul Rohman, Diana Silawati, Sudjadi and Sugeng Riyanto (2015), "Simultaneous Determination of Sulfamethoxazole and Trimethoprim Using UV Spectroscopy in Combination with Multivariate Calibration", Journal of Medical Sciences, 15(4), pp.178-184 [8] British Pharmacopoeia Commission (2016), British Pharmacopoeia CD-ROM, Co-trimoxazole tablets monograph [9] C B Ojeda, F S Rojas and J M C Pavon (1995), "Recent development in derivative ultraviolet/visible absorption spectrophotometery", Talanta 42, pp.1195-1214 [10] D Wulansari, F Alatas (2008), "Simultaneous determination of trimetoprim and sulfamethoxazole in tablets by simple simultant equation and inverse least square 33 spectrophotometric methods", in Proceeding of thhe International Seminar on Chemistry, Jatinangor [11] E Dinc, Y Kadioglu, F Demirkaya, D Baleanu (2011), "Continous wavelet transforms for simultaneous spectral determiation of trimethoprim and sulphamethoxazole in tablets", Journal of the Iranian Chemical Society, 8(1), pp.90-99 [12] F Alatas, D Wulansari (2008), "The development and validation spectrophotometric method for simultaneous determination sulfamethoxazole and trimetoprim in tablet by continuous wavelet transform", in Proceeding of The international Seminar on Chemistry 2008, Jatinangor [13] G Granero, C Garnero, M Longhi (2002), "Second derivative spectrophotometric determination of trimethoprime and sulfamethoxazole in the presence of hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HP-β-CD)", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 29, pp.51-59 [14] Harmita, Mansur U, Sartika J (2012), "Optimation and Validation of Analytical Method of Cotrimoxazole in Tablet and Plasma In vitro by High Performance Liquid Chromatography.," Journal of Bioanalysis and Biomedicine, 4(2), pp.026029 [15] J H Medina, M Maximiliano, H Marcela , Adriana M Domínguez-R, R S Juan Carlos (2013), "Simultaneous determination of trimethoprim and sulfamethoxazole in immediate-release oral dosage forms by first-order derivative spectroscopy: application to dissolution studies", International Journal Pharmacy and Pharmaceutical Science, 5(4), pp.505-510 [16] Khaleda H Al-Saidi and Marwa S Yonis (2015), "Simultaneous Determination of Sulphamethoxazole and Trimethoprim in Binary Mixtures and in Tablet Using Derivative Spectrophotometry", Journal of Al-Nahrain University, 18(1), pp.4654 [17] R Hajian, R Haghighi And N Shams (2010), "Combination of ratio derivative 34 spectrophotometry with simultaneous standard additions method for determination of sulfamethoxazole and trimethoprim", Asian Journal of Chemistry, 22(8), pp.6569-6579 [18] Rao J S et al (2014), "Rapid UPLC Method for Simultaneous Estimation of Sulfamethoxazole and Trimethoprim in Pharmaceutical Dosage Forms", Indo American Journal of Pharm Research, 4(1), pp.896-904 [19] S Hismiogullari, E Yarsan (2009), "Spectrophotometric determination and stability studies of sulfamethoxazole and trimethoprim in oral suspension by classical least square calibration method", Hacettepe University Journal of the Faculty of Pharmacy, 29(2), pp.95-104 [20] The United States Pharmacopeia (2018), USP41-NF36 vol 2, pp.3877-3878 [21] "https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/5329," [Online] [22] "https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/5578," [Online] 35 PHỤ LỤC PHỔ HẤP THỤ Phổ hấp thụ dãy dụng dịch chuẩn sulfamethoxazol (20; 24; 28; 32; 36; 40; 44; 48 mg/L) Sulfamethoxazol 2.5 1.5 0.5 340 335 330 325 320 315 310 305 300 295 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 Phổ hấp thụ dãy dụng dịch chuẩn trimethoprim (4; 4,4; 4,8; 5,6; 6,4; 7,2; 8,0; 8,8; 9,6 mg/L) Trimethoprim 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 36 340 335 330 325 320 315 310 305 300 295 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 37 340 335 330 325 320 315 310 305 300 295 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 340 335 330 325 320 315 310 305 300 295 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 340 335 330 325 320 315 310 305 300 295 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 Phổ hấp thụ chế phẩm Trimeseptol 3.5 2.5 1.5 0.5 Biseptol 3.5 2.5 1.5 0.5 Cotrimstada 3.5 2.5 1.5 0.5 38 315 320 325 330 335 340 320 325 330 335 340 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 310 315 0.5 310 305 1.5 300 305 2.5 300 295 3.5 290 295 Nang Sulfareptol 290 285 280 275 270 265 260 255 250 245 240 235 230 225 220 215 210 205 200 Bột Supertrim 3.5 2.5 1.5 0.5 39 ... phương pháp để định lượng thử độ hòa tan chế phẩm nghiên cứu - Định lƣợng đồng thời SULvà TRI mẫu thử phƣơng pháp phổ đạo hàm phổ đạo hàm tỷ đối - So sánh kết phƣơng pháp quang phổ đạo hàm với phƣơng... thuật đạo hàm phổ tử ngoại (sử dụng dung mơi, hóa chất thơng dụng, không qua chiết tách riêng thành phần), đề tài: ? ?Định lượng thử độ hòa tan chế phẩm có chứa Trimethoprim, Sulfamethoxazol quang phổ. .. HÀ NỘI LÃ THỊ PHƢƠNG THẢO MÃ SINH VIÊN: 1501456 ĐỊNH LƢỢNG VÀ THỬ ĐỘ HỊA TAN CỦA CHẾ PHẨM CĨ CHỨA TRIMETHOPRIM, SULFAMETHOXAZOL BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: