Định danh và khảo sát một số tính chất của chủng Lactobacillus farciminis NM6 phân lập từ nước mắm

Bên cạnh khả năng lên men đường thành sản phẩm chính là axit lactic được ứng dụng trong lên men thực phẩm, hệ vi khuẩn lactic còn có nhiều tính chất có lợi khác cần được khai thác như chức năng probiotic, khả năng chịu muối, khả năng gây hương trong lên men nước mắm... Trong công trình này, bằng phương pháp định danh MADLI-TOF MS, chủng NM6 phân lập từ nước mắm được xác định thuộc loài Lactobacillus farciminis. Chủng này sau đó được khảo sát một số tính chất có lợi. Kết quả khảo sát cho thấy rằng chủng NM6 có khả năng chịu muối NaCl ở các nồng độ 10%, 15%, 20% và 25%. Nghiên cứu về tiềm năng probiotic cho thấy Lb. farciminis NM6 là chủng có nhiều triển vọng. Khả năng chịu axit của chủng NM6 cao; số tế bào sống sót sau khi ủ với dịch pH 2 qua 3 giờ còn khá cao đạt 7,204 log CFU/mL. Chủng này cũng thể hiện khả năng tự kết dính và đồng kết dính với Staphylococcus aureus cao với tỷ lệ phần trăm kết dính đạt 75,02% và 48,36%; khả năng bám dính với dung môi ethyl acetate là 67,45%. Kết quả về khả năng kháng E. coli và Salmonella của chủng vi khuẩn lactic này cho thấy xuất hiện các vòng sáng vô khuẩn với đường kính khác nhau nằm trong khoảng 10–12 mm.

Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa họ c Tự nhiên; ISSN 1859–1388 Tập 127, Số 1C, 2018, Tr 119–129; DOI: 10.26459/hueuni-jns.v127i1C.4911 ĐỊNH DANH VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ TÍNH CHẤT CỦA CHỦNG Lactobacillus farciminis NM6 PHÂN LẬP TỪ NƯỚC MẮM Đỗ Thị Bích Thủy*, Nguyễn Thị Diễm Hương Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế, 102 Phùng Hưng, Huế, Việt Nam Tóm tắt Bên cạnh khả lên men đường thành sản phẩm axit lactic ứng dụng lên men thực phẩm, hệ vi khuẩn lactic cịn có nhiều tính chất có lợi khác cần khai thác chức probiotic, khả chịu muối, khả gây hương lên men nước mắm Trong cơng trình này, phương pháp định danh MADLI-TOF MS, chủng NM6 phân lập từ nước mắm xác định thuộc loài Lactobacillus farciminis Chủng sau khảo sát số tính chất có lợi Kết khảo sát cho thấy chủng NM6 có khả chịu muối NaCl nồng độ 10%, 15%, 20% 25% Nghiên cứu tiềm probiotic cho thấy Lb farciminis NM6 chủng có nhiều triển vọng Khả chịu axit chủng NM6 cao; số tế bào sống sót sau ủ với dịch pH qua cao đạt 7,204 log CFU/mL Chủng thể khả tự kết dính đồng kết dính với Staphylococcus aureus cao với tỷ lệ phần trăm kết dính đạt 75,02% 48,36%; khả bám dính với dung mơi ethyl acetate 67,45% Kết khả kháng E coli Salmonella chủng vi khuẩn lactic cho thấy xuất vịng sáng vơ khuẩn với đường kính khác nằm khoảng 10–12 mm Từ khóa: chịu muối, định danh, nước mắm, probiotic, vi khuẩn lactic Đặt vấn đề Vi khuẩn lactic có vai trị quan trọng đời sống người Vi khuẩn lactic thuộc họ Lactobacteriaceae, thường trực khuẩn ngắn, dài khác cầu khuẩn, không đồng mặt hình thái, mặt sinh lý chúng lại tương đối đồng Tất vi khuẩn gram dương, không sinh bào tử, bất động, catalase âm, oxydase nitratoreductase âm Bên cạnh khả lên men đường thành sản phẩm axit lactic ứng dụng lên men thực phẩm, hệ vi khuẩn lactic cịn có nhiều tính chất có lợi cho sức khỏe, chức probiotic, nên hệ vi khuẩn nhiều nhà khoa học nghiên cứu Khả sinh tổng hợp bacteriocin vi khuẩn lactic làm cho chúng ức chế vi khuẩn gây bệnh đường ruột [18] Hệ vi khuẩn lactic cạnh tranh khơng gian với vi khuẩn gây bệnh cách cản chúng bám dính vào thành ruột nên vi khuẩn lactic làm giảm nguy tiêu chảy [10, 17] Khả chịu axit muối mật bò vi khuẩn lactic nhiều cơng trình cơng bố [8, 13] Các * Liên hệ: dothibichthuy@huaf.edu.vn Nhận bài: 3–8–2018; Hoàn thành phản biện: 16–8–2018; Ngày nhận đăng: 27–8–2018 Đỗ Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Diễm Hương Tập 127, Số 1C, 2018 nghiên cứu probiotic vi khuẩn lactic Việt Nam tập trung khảo sát khả bám dính, khả sinh bacteriocin, khả chịu muối mật axit [1, 3] Một số tính chất có lợi khác chủng vi khuẩn lactic khả chịu muối công bố sản phẩm nước mắm, loại mắm Các chủng vi khuẩn có mặt nước mắm loại mắm tác dụng tốt cho sức khỏe, cịn có khả tạo hương q trình chuyển hóa lên men làm tăng chất lượng sản phẩm [4, 19] Với mục đích cung cấp phần thơng tin đa dạng, tính chất hệ vi khuẩn lactic có nước mắm (sản phẩm thủy phân lên men từ cá với nồng độ muối 15–20%); đồng thời làm tiền đề cho nghiên cứu khai thác hệ vi khuẩn để sản xuất chế phẩm vi sinh có khả hoàn thiện chất lượng sản phẩm nước mắm Trong cơng trình này, chúng tơi định danh chủng vi khuẩn lactic từ nước mắm khảo sát số tính chất chủng phân lập khả chịu muối số chức probiotic Vật liệu phương pháp Vật liệu Chủng NM6 phân lập từ nước mắm, sản xuất theo phương pháp lên men truyền Mẫu nước mắm thu nhận xã Phú Thuận, huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế Lấy mẫu phân lập hệ vi khuẩn lactic nước mắm Mẫu nước mắm hịa lỗng nước muối sinh lý vơ trùng, 50 µL dịch hịa lỗng dàn môi trường MRS rắn nồng độ từ 10 –5 đến 10–7, ủ 37 °C 24 48 Cấy ria khuẩn lạc đơn sang đĩa thạch nhiều lần để thu dòng Để xác định sơ chủng phân lập vi khuẩn lactic, tiến hành nhuộm gram thử catalase Những chủng có tế bào gram dương catalase âm tính dự đốn vi khuẩn lactic Định danh phương pháp MALDI-TOF MS [6] Định danh vi khuẩn thực Phịng thí nghiệm vi sinh thuộc Bộ mơn sinh lý, sinh hóa, vi sinh – Khoa Khoa học, Đại học Ghent, Bỉ Chuẩn bị mẫu: Tế bào vi khuẩn lactic bảo quản môi MRS chứa 30% glycerol cấy chuyền sang mơi trường MRS agar ni cấy yếm khí 37 °C thu hệ thứ tư Tế bào hệ thứ tư rửa 300 µL milli–Q water 900 µL cồn tuyệt đối Tế bào thu nhận sau ly tâm dịch huyền phù 13.000 vòng/phút phút tiếp tục tái huyền phù 50 µL formic acid 70% 50 µL acetonitrile Dịch tái huyền phù sau ly tâm 13.000 vịng/phút °C phút để thu dịch dịch chiết protein tế bào dùng cho phân tích MALDI-TOF MS 120 jos.hueuni.edu.vn Tập 127, Số 1C, 2018 Cho µL dịch chiết protein tế bào vào điểm đĩa MALDI (AB Sciex, Netherlands) Sau dịch chiết làm khơ nhiệt độ phịng, tiếp tục cho µL dung dịch gồm α-cyano4-hydroxycinnamic acid (α-CHCA) 0,5% dung dịch có tỷ lệ acetonitrile:nước:trifluoroacetic acid 50:48:2 vào đĩa chờ khô Tất dịch chiết protein tế bào thực phân tích lần Phân tích MALDI-TOF MS Quá trình phân tích protein tế bào thực hệ thống 4800 Plus MALDI TOF/TOFTM Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, USA) dựa khả tích điện dương protein Kết q trình phân tích khối phổ protein từ 2.000 đến 20.000 Da Phân tích liệu MALDI-TOF MS Các file liệu từ hệ thống 4800 Plus MALDI TOF/TOFTM Analyzer phân tích phần mềm Data Explorer (Applied Biosystem) để chuyển thành file văn Các file văn sau đưa vào hệ thống Bionumerics để phân tích Khảo sát khả chịu muối Khả chịu muối chủng vi khuẩn lactic đánh giá qua giá trị OD600nm sau nuôi chúng môi trường MRS lỏng chứa nồng độ muối tương ứng 10%, 15%, 20%, 25% qua mốc thời gian ngày, ngày, ngày theo phương pháp Kobayashi [9] Phân tích kết dựa so sánh giá trị OD600nm mốc thời gian sau so với mốc thời gian trước để đưa kết luận khả tồn phát triển chủng nồng độ muối khác Khảo sát khả chịu axit Khả chịu axit chủng khảo sát đánh giá qua lượng vi khuẩn sống sót sau ủ pH Số tế bào vi khuẩn sống sót xác định theo phương pháp đếm khuẩn lạc đĩa thạch [11] Khảo sát khả bám dính Khảo sát khả tự kết dính [10] Sinh khối tế bào vi khuẩn thu sau nuôi cấy rửa lần đệm PBS (8 g NaCl; 0,2 g KCl; 1,44 g Na2HPO4; 0,24 g KH2PO4; nước cất đủ lít); pH 7,2 vơ trùng; sau tái huyền phù đệm PBS (OD600nm =1) (OD ban đầu) Để yên huyền phù 37 °C để tạo điều kiện cho vi khuẩn lactic tự kết dính lắng xuống đo OD dịch bề mặt Khả tự kết dính phần trăm độ giảm OD 600nm dịch bề mặt mẫu để yên so với ban đầu 121 Đỗ Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Diễm Hương Tập 127, Số 1C, 2018 Khảo sát khả đồng kết dính với Staphylococcus aureus [20] Sau rửa lần đệm PBS, sinh khối tế bào chủng NM6 Staphylococcus aureus tái huyền phù đến OD600nm = Đồng thời trộn lẫn hai huyền phù với với thể tích Tiến hành đo OD600nm dung dịch bề mặt sau để yên huyền phù chủng hỗn hợp huyền phù hai chủng 37 °C Khả đồng kết dính tính theo cơng thức: Tỷ lệ đồng kết dính (%) = 𝐴𝑋 +𝐴𝑌 − 𝐴(𝑋+𝑌) 𝐴𝑋 +𝐴𝑌 × 100 AX OD600nm sau vi khuẩn lactic; AY OD600nm sau Staphylococcus aureus; AX+Y OD600nm sau vi khuẩn lactic Staphylococcus aureus Khảo sát khả kết dính với dung mơi [10] Rửa sinh khối tế bào chủng NM6 dung dịch KNO3 0,1 M, pH 6,2 tái huyền phù vào dung dịch đến OD600nm = Cho mL dung môi ethyl acetate vào ống nghiệm chứa mL huyền phù tế bào, trộn mẫu máy vortex phút, sau để n 20 phút nhiệt độ phịng, tách pha nước đo độ hấp thụ quang Khả kết dính với dung mơi đánh giá phần trăm độ giảm OD600nm pha nước thu ống nghiệm có dung mơi sau 20 phút để yên so với ban đầu (OD600nm = 1) Khảo sát khả kháng khuẩn Sử dụng phương pháp khuếch tán giếng thạch để khảo sát khả kháng khuẩn vi khuẩn lactic theo mô tả Mishra Prasad [15] Theo đó, dịch thu cách ly tâm (14.000 vòng/phút, 10 phút °C) canh trường nuôi cấy 37 °C 24 giờ, cho vào giếng thạch tạo môi trường MRS agar chứa chủng kiểm định (E coli, Salmonella) Đĩa thạch sau ủ 37 °C 48 Sau thời gian ủ, ghi nhận tạo thành vịng vơ khuẩn xuất xung quanh giếng thạch Xử lý số liệu Sử dụng phần mềm SPSS 18.0 Excel 2007 để xử lý số liệu Kết thảo luận 3.1 Phân lập chủng NM6 Kết phân lập chủng vi khuẩn lactic NM6 từ nước mắm Chủng vi khuẩn có hình thái khuẩn lạc nhỏ, dạng hình trịn, màu trắng quan sát hình thái tế bào cho thấy tế bào có hình que, gram (+) (hình 1) Có kết âm tính với khả sinh catalase 122 jos.hueuni.edu.vn Tập 127, Số 1C, 2018 Hình Hình thái khuẩn lạc hình thái tế bào chủng vi khuẩn NM6 phân lập Hình Phổ MALTDI-TOF MS chủng vi khuẩn lactic NM6 3.2 Định danh chủng vi khuẩn lactic Chủng NM6 định danh phương pháp MALDI-TOF MS (Hình 2) Kết tra cứu ngân hàng phổ thông qua phần mềm BioNumerics 5.1 dựa vào tương đồng khối phổ để định danh đến cấp độ lồi Kết phân tích khối phổ cho thấy chủng vi khuẩn lactic NM6 sau định danh phương pháp MALDI-TOF MS có đỉnh khối phổ tương đồng với khối phổ chủng Lactobacillus farciminis với độ tương đồng đạt đến 99% Vì xác định chủng NM6 thuộc loài L farciminis Kết định danh cho thấy sản phẩm nước mắm sản xuất theo phương pháp lên men truyền thống Huế tồn chủng vi khuẩn lactic, L farciminis NM6 Với mục đích khai thác hệ vi khuẩn lactic có nước mắm để nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh ứng dụng hoàn thiện sản phẩm này, khả chịu muối số tính chất có tiềm probiotic (khả chịu axit, khả kết dính, khả kháng khuẩn ) chủng L farciminis NM6 tiếp tục nghiên cứu 3.3 Khả chịu muối chủng L farciminis NM6 nồng độ khác Khả chịu muối chủng L farciminis NM6 nồng độ 10–25% qua mốc thời gian ngày, ngày, ngày, ngày trình bày Bảng 123 Đỗ Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Diễm Hương Tập 127, Số 1C, 2018 Bảng Ảnh hưởng nồng độ muối đến khả phát triển chủng L farciminis NM6 qua mốc thời gian STT Nồng độ (%) 10 15 20 25 OD600nm ngày 0,965aA 0,939aA 0,824abA 0,817abA ngày 0,789aB 0,478bC 0,244cC 0,157dC ngày 0,544abD 0,602aB 0,145cD 0,132cdD ngày 0,612aC 0,310bcD 0,348bB 0,241dB Ghi chú: Số liệu xử lý Ducan’s theo dòng (chữ in hoa) thể sai khác theo thời gian nồng độ muối, theo cột (chữ in thường) thể sai khác nồng độ mốc thời gian Các chữ khác thể sai khác ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Qua Bảng nhận thấy chủng L farciminis NM6 có khả thích nghi phát triển nồng độ muối 10–25% Trong đó, chủng L farciminis NM6 có khả thích nghi phát triển mạnh nồng độ muối 10% với giá trị OD đạt 0,612 ngày Ở mơi trường có nồng độ muối 25%, chủng vi khuẩn lactic thể khả thích nghi phát triển kém; sau ngày nuôi cấy, giá trị OD đạt 0,241 Ở mốc ngày, khơng có sai khác giá trị OD nồng độ Tuy nhiên, sau ngày, ngày ngày ni cấy có sai khác rõ rệt giá trị OD chủng vi khuẩn lactic nồng độ khác Sau ngày nuôi cấy giá trị OD giảm rõ rệt so với ngày Nguyên nhân chủng chưa thích nghi với môi trường nuôi cấy, đến ngày ngày chủng bắt đầu thích nghi phát triển giá trị OD tăng mốc thời gian So sánh giá trị OD mốc thời gian ngày ngày thấy ngày thứ giá trị OD cao cao mốc thời gian khảo sát; đến ngày thứ giá trị OD bắt đầu giảm dần Đối với khả chịu muối, nồng độ muối cao khả sống sót tế bào vi khuẩn lactic giảm Điều hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu Udomsil đồng tác giả cơng bố Tetragelococcus halophilus có khả chịu muối nồng độ 25%; tác giả tiến hành khảo sát khả chịu muối Tetragenococcus halophilus nồng độ 25% mẫu nước mắm cho thấy chúng sống sót nước mắm sau bảy tháng [19] Juste cs công bố Tetregenococcus halophilus có khả phát triển nồng độ muối 25% 28,5% pH [7] Chủng L farciminis NM6 có khả chịu muối đến nồng độ 25%, nồng độ 10% điều kiện thích hợp phát triển tốt chủng vi khuẩn lactic Như vậy, khả chịu muối chủng L farciminis NM6 cao Chính vậy, chủng L farciminis NM6 phân lập từ nước mắm có tiềm ứng dụng lớn việc sản xuất sản phẩm lên men với nồng độ muối cao nước mắm sản phẩm mắm cá 3.4 Khả chịu axit Khả chịu axit chủng L farciminis NM6 khảo sát cách xác định số tế bào sống qua mốc thời gian liên tục từ đến mơi trường pH (Hình 3) Kết sau giờ, ủ pH lượng tế bào sống tương ứng 7,246 logCFU/mL; 7,220 logCFU/mL 7,204 logCFU/mL Qua kết thấy chủng L farciminis NM6 có khả chịu axit cao 124 jos.hueuni.edu.vn Tập 127, Số 1C, 2018 Hình Khả sống sót chủng L farciminis NM6 khảo sát điều kiện pH Kết nghiên cứu khả chịu axit phù hợp với nghiên cứu Maragkoudakis cs khảo sát khả chịu axit số chủng Lactobacillus cho thấy chủng có khả chịu axit mạnh Lb paracasei subsp paracasei ACA-DC 130, Lb plantarum ACA-DC 146, Lb rhamnosus ACA-DC 112, với mức giảm log CFU/mL từ 8,6 xuống 6,8; 5,7 7,1 sau ủ pH 2; ra, số chủng nghiên cứu nhóm tác giả khơng có khả sống sót pH sau [13] Kết nghiên cứu Kim cs cho thấy xử lý dịch dày pH = 2,5, có 3/7 chủng vi khuẩn có khả chịu mơi trường axit Tỉ lệ sống chủng giảm từ khoảng 8,519–8,477 (logCFU/mL) xuống 6,431–7,380 (logCFU/mL) sau 30 phút xử lý tiếp tục giảm 5,568–5,699 (logCFU/mL) sau [8] Chủng L farciminis NM6 phân lập từ nước mắm có khả chịu axit tốt đáp ứng tiêu chí chịu axit chủng probiotic 3.5 Khả bám dính Chúng tơi tiến hành khảo sát khả bám dính chủng L farciminis NM6 cách khảo sát khả tự kết dính, khả đồng kết dính với Staphylococcus aureus khả bám dính vào dung môi ethyl acetate Kết Bảng cho thấy khả bám dính chủng L farciminis NM6 điều kiện khác hoàn toàn khác Trong đó, khả tự kết dính chủng L farciminis NM6 cao với tỷ lệ phần trăm kết dính đạt 75,02% Chủng thể khả đồng kết dính với Staphylococcus aureus với tỷ lệ thấp với giá trị đạt 48,36%, khả bám dính với dung mơi ethyl acetate 67,45% Bảng Khả bám dính chủng L farciminis NM6 Tiêu chí đánh giá Khả bám dính (%) Khả tự kết dính 75,02 Khả đồng kết dính với Staphylococcus aureus 48,36 Khả bám dính với dung mơi ethyl acetate 67,45 125 Đỗ Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Diễm Hương Tập 127, Số 1C, 2018 Khả tự kết dính giúp cho vi khuẩn lactic kết dính lại với để hình thành quần thể lớn, giúp tăng cường sức sống phát triển chủng theo kiểu mối quan hệ hỗ trợ lồi Khả tự kết dính cịn liên quan đến khả bám dính đường ruột làm tăng khả lưu lại đường tiêu hóa chủng vi sinh vật Maria nghiên cứu khả tự kết dính Lactobacillus Bifidobacterium nhận thấy có biến động lớn khả tự kết dính chủng; năm chủng khảo sát thí nghiệm có kết tự kết dính 5,5%, 15%, 23%, 75% 77% nhiệt độ phòng [14] Một kết nghiên cứu khác chúng tơi đưa tỷ lệ kết dính chủng Lactobacillus fermentum DC1 sau 24,49% [2] Qua nhận thấy khả tự kết dính chủng L farciminis NM6 phân lập từ nước mắm cao so với kết công bố nhà khoa học Khả đồng kết dính vi khuẩn lactic với vi sinh vật gây bệnh làm tăng khả ức chế phát triển vi khuẩn gây bệnh, góp phần cân hệ vi sinh đường ruột Collado cs khảo sát khả đồng kết dính chủng vi khuẩn lactic cho thấy sau giờ, tỷ lệ đồng kết dính khoảng 6% đến 27% [5] Kos cs nghiên cứu khả đồng kết dính Lb acidophilus M92 (chủng sử dụng sản xuất chế phẩm probiotic) với Enterococcus faecium L3, Escherichia coli 3014, Salmonella công bố kết từ 15,11% đến 19,46% [10] Các kết cho thấy khả đồng kết dính với vi khuẩn gây bệnh chủng L farciminis NM6 (48,36%) cao nên làm điều kiện sử dụng probiotic Khả bám dính dung mơi xem phương pháp gián tiếp để nghiên cứu chọn lọc dịng tế bào có khả bám dính đường ruột cao Khả bám dính vào ethyl acetate (dung mơi có tính base) phản ánh tính phân cực tính acid bề mặt tế bào vi khuẩn lactic Theo Maria [14], khả bám dính ethyl acetate số chủng L johnsonii, L plantarum, L paracasei, L casei nằm khoảng ÷ 79,2% Các kết công bố cho thấy chủng L farciminis NM6 có khả bám dính dung mơi ethyl actate cao (67,45%) Điều cho thấy tiềm probiotic chủng lớn 3.6 Khả kháng khuẩn Kết kiểm tra tính kháng khuẩn chủng L farciminis NM6 thể hoạt tính phương pháp khuếch tán đĩa thạch cho thấy xuất vòng sáng vơ khuẩn với đường kính khác (Bảng 3) Bảng Khả kháng E coli Salmonella chủng L farciminis NM6 STT 126 Chủng thị Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) E coli 12 ± 1,25 Salmonella 12 ± 2,16 jos.hueuni.edu.vn Tập 127, Số 1C, 2018 Qua Bảng thấy chủng L farciminis NM6 có khả kháng khuẩn với hai chủng thị E coli Salmonalla Trong đường kính vòng kháng với E coli 12 ± 1,25 mm, Salmonella có vịng kháng 12 ± 2,16 mm Kết nghiên cứu khả kháng khuẩn phù hợp với nghiên cứu nhiều tác giả Wakil cs khảo sát khả kháng E coli Salmonella chủng thuộc Lactobacillus cho thấy L brevis kháng E coli với đường kính vịng kháng khuẩn 10 ± 0,1 mm, kháng Salmonella spp ± 0,1 mm, L plantarum kháng Salmonella với kích thước vòng kháng khuẩn 10 ± 0,1 mm [21] Nwafor khảo sát khả kháng E coli Salmonella typhi loài vi khuẩn lactic L acidophilus, L lactic, L bugaricus, L casei, Leuconotoc sp, S thermophiles, S cremoris, S pyogenes Đường kính vịng kháng khuẩn kháng E coli dao động từ ± 0,05 mm đến ± 0,25 mm, đường kính vịng kháng khuẩn kháng Salmonella typhi dao động từ ± 0,2 mm đến 10 ± 0,02 mm [16] Qua kết nghiên cứu thấy chủng L farciminis NM6 có khả kháng khuẩn tốt với hai chủng E coli Salmonella Kết luận Từ mẫu nước mắm phân lập chủng vi khuẩn lactic NM6 Theo kết định danh phương pháp MADLI-TOF MS, chủng thuộc loài Lactobacillus farciminis Chủng L farciminis NM6 có khả chịu muối NaCl đến nồng độ 25% Trong đó, nồng độ muối NaCl 10% điều kiện thích hợp để chủng sinh trưởng phát triển tốt Khả tự kết dính đồng kết dính với Staphylococcus aureus chủng L farciminis NM6 cao với tỷ lệ phần trăm kết dính đạt 75,02% 48,36%; khả bám dính với dung mơi ethyl acetate 67,45% Chủng có số tế bào sau ủ với dịch pH qua cao đạt 7,204 log CFU/mL L farciminis NM6 có khả ức chế phát triển Salmonella E coli Tài liệu tham khảo Nguyễn Thị Hoài Hà, Phạm Văn Ty, Nguyễn Thị Kim Quy (2002), Nghiên cứu khả sinh tổng hợp bacterioxin lồi Lactobacillus plantarum L24, Tạp chí Di truyền học ứng dụng, Chuyên san Công nghệ sinh học, Hà Nội, 47–52 Đỗ Thị Bích Thủy, Nguyễn Thị Diễm Hương (2012), Xác định khảo sát số tính chất có lợi chủng Lactobacillus fermentum DC1 phân lập từ sản phẩm dưa cải Huế, Tạp chí khoa học, Đại học Huế , 71(2), 175 –185 Nguyễn Vũ Tường Vy, Nguyễn Văn Thanh, Trần Thu Hoa (2007), Khảo sát khả chịu đựng acid, muối mật kháng sinh số vi sinh vật nguyên liệu sản xuất probiotic dùng đường uống, Tạp chí Dược học, 378, 255–263 Chaiyanani S., Maugel T., Huq A., Robbi F T and Colwell R R (1999), Polyphasic Taxonomy of a Novel Halobacillus, Halobacillus thailandensis sp nov isolated from Fish Sauce, Systematic and Applied Microbiology, 22, 360–365 127 Đỗ Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Diễm Hương Tập 127, Số 1C, 2018 Collado M C., Meriluoto J., Salminen S (2007), Development of new probiotics by strain combinations: Is it possible to improve the adhesion to Intestinal Mucus?, Journal of Dairy Science, 90, 2710–2716 Doan N T L., Hoorde V K., Cnockaert M., De Brandt E., Aerts M., Le T B and Vandamme P (2012), Validation of MALDI-TOF MS for rapid classification and identification of lactic acid bacteria, with a focus on isolates from traditional fermented foods in Northern Vietnam, Letters in Applied Microbiology, 55, 265–273 Juste A., Lievens B., Frans I., Marsh T L., Klinge berg M., Michiels C W., Willems K A (2008), Geretic and physiological diversity of Tetragnococcus halophilus strains isolated from sugar anh salt rich environment, Microbilogy, 154, 2600–2610 Kim P I., Jung M Y., Chang Y H., Kim S., Kim S J., Park Y H (2007), Probiotic properties of Lactobacillus and Bifidobacterium strains isolated from porcine gastrointestinal tract, Applied Microbiology Biotechnology, 74, 1103–1111 Kobayashi, Kajiwara, Wahyuni M., Hamada-Sato N., Imada C., Watanabe E (2004), Effect of culture conditions on lactic acid production of Tetragenococcus species, Journal Appl Microbiol, 96(6), 1215–21 10 Kos B., Suskovic M J., Vukovic S., Simpraga M., Frece1 J (2003), Adhesion and aggregation ability of probiotic strain Lactobacillus acidophilus M92, Journal of Applied Microbiology, 94, 981–987 11 Lee J., Yun H.S., Cho K.W., Oh S., Kim S.H., Chun T., Kim B., Whang K.Y (2011), “Evaluation of probiotic characteristic so fnewly isolated Lactobacillus spp,:Immunemodulation and longevity”, International Journal of Food Microbiology 148, 80–86 12 Lee Y K., Salminen S (2009), Handbook of probiotics and prebiotics, 2nd edition, John Wiley & Sons Inc, Canada 13 Maragkoudakis P A., Zoumpopouloua G., Miarisa C., Kalantzopoulosa G., Potb B., Tsakalidou E (2006), Probiotic potential of Lactobacillus strains isolated from dairy products, International Dairy Journal, 16, 189–199 14 Maria V P., (2006), Molecular and physiological studies on the functionality of probiotic lactobacilli, Doctor thesis on Biochemistry, Karlsruhe University, Argentina 15 Mishra V., Prasad D N (2005), Application of in vitro methods for selection of Lactobacillus casei strains as potential probiotics, International Journal Food Microbiol, 103, 109–115 16 Nwafor O E (2014, Isolation and identification of lactic acid bacterial (LAB) from yoghurt and antibacterial activity against some clinical isolates, International Journal of Food Nutrition and Safety, 5(1), 31–38 17 Rahman M., Kim W S., Kumura H., Shimazaki K (2008), Autoaggregation and surface hydrophobicity of Bifidobacteria, World Journal of Microbiology Biotechnology, 24, 1593–1598 18 Rhys J J., Hassan M H., Monique Z., Gale B., John R T (2008), Isolation of lactic axit bacteria with inhibitory activity against pathogens and spoilage organisms associated with fresh meat, Food Microbiology, 25, 228–234 19 Udomsil N., Rodtong S., Tanasupawat S., Yongsawatdigul J (2010), Proteinase producing halophilic lactic acid bacteria isolated from fish sauce fermentation and their ability to produce volatile compounds, International Journal of Food Microbiology, 141, 186–194 20 Vlková E., Rada V., Smehilová M., Killer J (2008), Auto-aggregation and co-aggregation ability in bifidobacteria and clostridia, Folia Microbiol (Praha), 53(3), 263–269 21 Wakil S M., Osamwonyi U O (2012), Isolation and screening of antimicro-bial producing lactic acid bacteria from fermenting millet gruel, International Research Journal of Microbiology, 3(2), 072 –079 128 jos.hueuni.edu.vn Tập 127, Số 1C, 2018 IDENTIFICATION AND SOME BENEFIT PROPERTIES OF Lactobacillus farciminis NM6 ISOLATED FROM FISH SAUCE Do Thi Bich Thuy*, Nguyen Thị Diem Huong Hue University of Agriculture and Forestry, 102 Phung Hung St., Hue, Vietnam Abstract Lactic acid bacteria (LAB) have not only the capacity of transferring sugar to lactic acid but also benefit characteristics such as probiotic properties, halophilic ability, flavour creation in fish sauce fermentation In this work, a LAB strain was isolated from fish sauce and identified using MADLI-TOF MS This strain was closest to Latobacillus farciminis and named as Lb farciminis NM6 Several benefit characteristics of this strain were also investigated Lb farciminis NM6 could grow in the medium containing NaCl with concentrations ranging from 10% to 25% The potential probiotic function showed that this strain was promising Lb farciminis NM6 resisted low pH: the survival cells of this strain remained relatively high after hours of incubation at pH at 7.204 log CFU/mL The autoaggregation ability was 75.02%, and the coaggregation with Staphylococcus aureus was 48.36% The ability of adhesion to ethyl acetate was 67.45% The clear zone with a diameter of 10–12 mm appeared in the inhibition test against Escherichia coli and Salmonella Keywords: identification, fish sauce, halophilic, lactic acid bacteria, probiotic 129 ... có khả hồn thiện chất lượng sản phẩm nước mắm Trong cơng trình này, chúng tơi định danh chủng vi khuẩn lactic từ nước mắm khảo sát số tính chất chủng phân lập khả chịu muối số chức probiotic... chủng E coli Salmonella Kết luận Từ mẫu nước mắm phân lập chủng vi khuẩn lactic NM6 Theo kết định danh phương pháp MADLI-TOF MS, chủng thuộc loài Lactobacillus farciminis Chủng L farciminis NM6. .. L farciminis NM6 phân lập từ nước mắm có tiềm ứng dụng lớn việc sản xuất sản phẩm lên men với nồng độ muối cao nước mắm sản phẩm mắm cá 3.4 Khả chịu axit Khả chịu axit chủng L farciminis NM6 khảo