nghiên cứu các điều kiện sinh tổng hợp, tinh sạch và bước đầu xác định cấu trúc của hoạt chất ức chế glucosidase từ chủng xạ khuẩn streptomyces sp phân lập ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI MAI VĂN HIÊN NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN SINH TỔNG HỢP, TINH SẠCH VÀ BƢỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA HOẠT CHẤT ỨC CHẾ GLUCOSIDASE TỪ CHỦNG XẠ KHUẨN STREPTOMYCES.SP PHÂN LẬP Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI MAI VĂN HIÊN NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN SINH TỔNG HỢP, TINH SẠCH VÀ BƢỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA HOẠT CHẤT ỨC CHẾ GLUCOSIDASE TỪ CHỦNG XẠ KHUẨN STREPTOMYCES.SP PHÂN LẬP Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8720208 Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Thị Tuyên TS Đào Thị Mai Anh HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Tuyên TS Đào Thị Mai Anh người thầy truyền cảm hứng, định hướng nghiên cứu, tận tình hướng dẫn, đưa góp ý tạo điều kiện thuận lợi kinh phí để thực đề tài Tơi xin cảm ơn tập thể Phịng Cơng nghệ sinh học Enzym, Viện Công nghệ sinh học hướng dẫn, giúp đỡ tận tình cho tơi q trình thực nghiệm chia sẻ kinh nghiệm chuyên môn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo anh chị mơn Hóa sinh thầy mơn, phịng ban, thư viện trường Đại học Dược Hà Nội quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Đồng thời tơi xin cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè ln động viên tiếp thêm sức mạnh cho tơi lúc khó khăn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 31 tháng năm 2020 Học viên Mai Văn Hiên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Bệnh đái tháo đường 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Cơ chế hóa sinh bệnh biến chứng 1.1.3.1 Cơ chế hóa sinh bệnh ĐTĐ typ 1.1.3.2 Cơ chế hóa sinh bệnh ĐTĐ typ 1.1.3.3 Cơ chế hóa sinh biến chứng ĐTĐ 1.1.4 Điều trị ĐTĐ 1.1.4.1 Điều trị ĐTĐ typ 1.1.4.2 Điều trị ĐTĐ typ 1.2 Enzym α-glucosidase 1.2.1 Danh pháp 1.2.2 Vai trò sinh học 1.2.3 Cấu trúc 1.2.4 Cơ chế xúc tác 1.2.5 Chất ức chế α-glucosidase 1.2.5.1 Acarbose 1.2.5.2 Valienamin dẫn chất 1.2.5.3 Iminosugar 1.2.5.4 Hợp chất phenolic 10 1.2.5.5 Peptid 1.3 Xạ khuẩn 1.3.1 Phân loại xạ khuẩn 12 12 12 1.3.2 Sản phẩm chuyển hóa có hoạt tính sinh học từ xạ khuẩn ứng dụng 1.4 Tình hình nghiên cứu hoạt chất ức chế enzym α-glucosidase từ xạ khuẩn chi Streptomyces nước quốc tế 14 15 1.4.1 Trên giới 15 1.4.2 Việt Nam 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 17 17 2.1.1 Ngun liệu 17 2.1.2 Hóa chất 17 2.1.3 Mơi trường 19 2.1.4 Thiết bị thí nghiệm 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase 21 2.2.1.1 Phương pháp định tính chất có hoạt tính ức chế α-glucosidase 21 2.2.1.2 Phương pháp định lượng hoạt tính ức chế α-glucosidase 22 2.2.2 Sàng lọc tuyển chọn chủng có khả sinh hoạt tính ức chế αglucosidase cao 23 2.2.3 Định danh xạ khuẩn 23 2.2.3.1 Phân tích chủng đặc điểm hình thái đặc điểm hóa sinh 23 2.2.3.2 Tách chiết DNA tổng số 24 2.2.3.3 PCR nhân dòng đoạn gen 16S rRNA 24 2.2.3.4 Tách dòng (cloning) 25 2.2.3.5 Tinh plasmid 25 2.2.3.6 Điện di gel agarose 26 2.2.3.7 Đọc trình tự phân tích gen 27 2.2.4 Nghiên cứu điều kiện để sinh tổng hợp hoạt chất ức chế αglucosidase cao 28 2.2.4.1 Khảo sát thời gian nuôi cấy 28 2.2.4.2 Khảo sát nguồn carbon 28 2.2.4.3 Khảo sát nguồn nitơ 28 2.2.4.4 Khảo sát pH môi trường 28 2.2.4.5 Khảo sát nhiệt độ nuôi 28 2.2.4.6 Khảo sát tốc độ lắc 29 2.2.5 Nghiên cứu điều kiện tinh thu hoạt chất tinh khiết 29 2.2.5.1 Phương pháp sắc ký cột sephadex 30 2.2.5.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 30 2.2.6 Xác định cấu trúc phân tử 30 2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu 30 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Sàng lọc định danh chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp hoạt chất ức chế α-glucosidase cao 32 32 3.1.1 Sàng lọc chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp hoạt chất ức chế α-glucosidase cao 32 3.1.2 Định danh xạ khuẩn HB6 33 3.1.2.1 Nguồn gốc 33 3.1.2.2 Đặc điểm hình thái chủng HB6 33 3.1.2.3 Trình tự gen 16S rRNA chủng HB6 35 3.1.2.4 Kết định danh 37 3.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp hoạt chất ức chế α-glucosidase 40 3.2.1 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 40 3.2.2 Ảnh hưởng nguồn carbon 41 3.2.3 Ảnh hưởng nguồn nitơ 42 3.2.4 Ảnh hưởng pH môi trường 44 3.2.5 Ảnh hưởng nhiệt độ 45 3.2.6 Ảnh hưởng tốc độ lắc 45 3.2.7 Kết sau khảo sát điều kiện 46 3.3 Tinh chế thu hoạt chất tinh khiết 46 3.3.1 Tinh qua cột sắc ký lọc gel Sephadex G-75 46 3.3.2 Kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng (TLC) 48 3.4 Bước đầu xác định cấu trúc hoạt chất Chƣơng BÀN LUẬN 49 51 4.1 Kết sàng lọc định danh chủng xạ khuẩn có hoạt tính ức chế 51 4.2 Kết lựa chọn yếu tố thích hợp cho sinh tổng hợp hoạt chất ức chế enzym α-glucosidase chủng S costaricanus HB6 52 4.2.1 Kết lựa chọn thời gian nuôi cấy 52 4.2.2 Kết lựa chọn nguồn carbon 52 4.2.3 Kết lựa chọn nguồn nitơ 53 4.2.4 Kết lựa chọn pH 53 4.2.5 Kết lựa chọn nhiệt độ 54 4.2.6 Kết lựa chọn tốc độ lắc 54 4.3 Quá trình tinh hoạt chất bước đầu xác định cấu trúc hoạt chất KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 54 56 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ADA American Diabetes Association Hiệp hội đái tháo đường Mỹ AGIs Alpha glucosidase inhibitors Chất ức chế alpha glucosidase DNA Deoxyribonucleic acid dNTPs Deoxynucleoside triphosphates DPP-4 Dipeptidyl peptidase ĐTĐ Đái tháo đường EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat GLP-1 Glucagon like peptide-1 Peptid giống glucagon -1 IDF International Diabetes Federation IR Infrared Spectroscopy ISP International Streptomyces Project PCR Polymerase chain reaction RNA Ribonucleic acid SDS Sodium dodecyl sulfate TBE Tris-Borate-EDTA TLC Thin Layer Chromatography v/p Hiệp hội đáo tháo đường giới Phổ hồng ngoại Phản ứng khuếch đại chuỗi Sắc ký lớp mỏng vòng/phút DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Sản phẩm chuyển hóa có hoạt tính sinh học từ xạ khuẩn ứng dụng 14 Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng nhà sản xuất 17 Bảng 2.2 Thành phần đệm dung dịch 18 Bảng 2.3 Môi trường thành phần 19 Bảng 2.4 Thiết bị sử dụng xuất xứ 19 Bảng 3.1 Hoạt tính ức chế α-glucosidase dịch ni cấy chủng xạ khuẩn 32 Bảng 3.2 Vị trí tọa độ mẫu thu thập 33 Bảng 3.3 So sánh đặc điểm phân loại chủng xạ khuẩn 39 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến hoạt tính ức chế α-glucosidase chủng xạ khuẩn S costaricanus HB6 40 10 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nguồn carbon đến hoạt tính ức chế α-glucosidase chủng xạ khuẩn S costaricanus HB6 41 11 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến hoạt tính ức chế αglucosidase chủng xạ khuẩn S costaricanus HB6 43 12 Bảng 3.7 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính ức chế αglucosidase chủng xạ khuẩn 44 13 Bảng 3.8 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính ức chế αglucosidase chủng xạ khuẩn S costaricanus HB6 45 14 Bảng 3.9 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến hoạt tính ức chế αglucosidase chủng xạ khuẩn 45 15 Bảng 3.10 Kết thử hoạt tính ức chế α-glucosidase hiệu suất chiết 48 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 1.1 Cơ chế tác dụng thuốc điều trị ĐTĐ typ Hình 1.2 Phác đồ điều trị ĐTĐ typ Hình 1.3 Q trình tiêu hóa tinh bột Hình 1.4 Trung tâm hoạt động enzym α-glucosidase Hình 1.5 Cơ chế xúc tác enzym α-glucosidase Hình 1.6 Cơ chế hoạt động Acarbose Hình 1.7 Cấu trúc Valienamin dẫn chất Hình 1.8 Mơ hình tương tác voglibose với enzym αglucosidase 9 Hình 1.9 Cấu trúc số iminosugar có hoạt tính ức chế αglucosidase 10 10 Hình 1.10 Mơ hình tương tác số iminosugar với enzym αglucosidase 10 11 Hình 1.11 Cấu trúc số hợp chất phenolic từ thực vật 11 12 Hình 1.12 Mơ hình tương tác Kaempferol với enzym αglucosidase 11 13 Hình 2.1 Vector pJET 1.2/blunt 17 14 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 21 15 Hình 2.3 Kết sàng lọc chất có hoạt tính α-glucosidase 22 16 Hình 2.4 Quy trình tinh chế thu hoạt chất tinh khiết 29 17 Hình 3.1 Hoạt tính ức chế α-glucosidase chủng xạ khuẩn 33 18 Hình 3.2 Hình thái khuẩn lạc chủng HB6 sau ngày nuôi cấy môi trường thạch ISP 34 19 Hình 3.3 Cuống sinh bào tử chụp kính quang học độ phân giải 40 34 20 Hình 3.4 Hình ảnh chụp SEM cuống sinh bào tử bào tử 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Thị Tuyên, Vũ Văn Hạnh, Quyền Đình Thi (2011), "Sàng lọc số chủng Actinoplanes sp sinh tổng hợp cao chất acarbose có tính ức chế enzyme alpha glicosidase", Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, số 9, tr.1-5 Đỗ Thị Tuyên, Vũ Thị Thu Hằng, Trịnh Đình Khá, Quyền Đình Thi (2013), "Tách chiết, tinh hoạt chất DNJ (1-Deoxynojirimycin) ức chế anphaClucosidase từ chủng B subtilis VN9 phân lập Việt Nam" Lê Hữu Thọ, Nguyễn Thị Thanh Mai (2017), "Nghiên cứu mối quan hệ hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase cấu trúc hợp chất epoxylignan", Tạp chí phát triển Khoa học Công nghệ, tập 20 (số T5), tr.110-115 Nguyễn Thị Hương, Ph ng Thanh Hương, Đào Thị Mai Anh (2015), "Đánh giá tác dụng ức chế enzym alpha glucosidase in vitro loài Gymnema R Br Việt Nam", Tạp chí Dược học, số 469, tr.50-55 Tiếng Anh Sim, L., Structural and inhibition studies of human intestinal glucosidases 2010 ABDULKHAIR, W.M., W.S ABDEL-ALL, AND R.H BAHY "Genetic improvement of antidiabetic alpha-glucosidase inhibitor producing streptomyces sp", Int J Pharm Pharm Sci, 10 (5), p 77-84 Aoyagi, T., et al (1971), "An enzyme inhibitor, panosialin, produced by streptomyces", The Journal of antibiotics, 24 (12), p 860-869 Arcamone, F., et al (2000), "Adriamycin, 14‐Hydroxydaunomycin, a new antitumor antibiotic from S peucetius var caesius", Biotechnology and bioengineering, 67 (6), p 704-713 Asano, N., et al (2000), "Polyhydroxylated pyrrolidine and piperidine alkaloids from Adenophora triphylla var japonica (Campanulaceae)", Phytochemistry, 53 (3), p 379-382 10 Association, A.D (2020), "15 Diabetes Care in the Hospital: Standards of Medical Care in Diabetes—2020", Diabetes Care, 43 (Supplement 1), p S193S202 11 Balagurunathan, R., M Radhakrishnan, and S Somasundaram (2010), "LGlutaminase producing actinomycetes from marine sediments–selective isolation, semi quantitative assay and characterization of potential strain", Aust J Basic Appl Sci, (5), p 698-705 12 Baldacci, E (1968), "Description of Streptomyces padanus sp nov and emendation of Streptomyces xantophaeus", Gion Microbiol., 16 p 9-16 13 Benedict, R., et al (1955), "Further studies in the evaluation of carbohydrate utilization tests as aids in the differentiation of species of Streptomyces", Applied microbiology, (1), p 14 Bewick, M., S Williams, and C Veltkamp (1976), "Growth and ultrastructure of Streptomyces venezuelae during chloramphenicol production", Microbios, 16 (65-66), p 191-199 15 Bischoff, H (1991), "Effect of acarbose on diabetic late complications and risk factors–new animal experimental results", Akt Endokr Stoffw, 12 p 25-32 16 Blomgren, H., L Strender, and F Edsmyr, Bestatin treatment and the peripheral lymphocyte population in cancer patients, in Cancer Chemo-and Immunopharmacology 1980, Springer p 133-138 17 Brigham, R and R Pittenger (1956), "Streptomyces orientalis, n sp., the source of vancomycin", Antibiotics & chemotherapy (Northfield, Ill.), (11), p 642-647 18 Brzozowski, A.M and G.J Davies (1997), "Structure of the Aspergillus oryzae α-amylase complexed with the inhibitor acarbose at 2.0 Å resolution", Biochemistry, 36 (36), p 10837-10845 19 Cerdeño, A.M., M.J Bibb, and G.L Challis (2001), "Analysis of the prodiginine biosynthesis gene cluster of Streptomyces coelicolor A3 (2): new mechanisms for chain initiation and termination in modular multienzymes", Chemistry & biology, (8), p 817-829 20 Clark, P.F and A.S Clark (1927), "A Bacteriophage Active Against a Virulent Hemolytic Streptococcus", Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 24 (7), p 635-639 21 Chen, A.Y and Y.C Chen (2013), "A review of the dietary flavonoid, kaempferol on human health and cancer chemoprevention", Food chemistry, 138 (4), p 2099-2107 22 Chen, Z., et al (2016), "New α-glucosidase inhibitors from marine algaederived Streptomyces sp OUCMDZ-3434", Scientific reports, , p 20004 23 Cheng, X., et al (2014), "A novel osmolality-shift fermentation strategy for improving acarbose production and concurrently reducing byproduct component C formation by Actinoplanes sp A56", Journal of industrial microbiology & biotechnology, 41 (12), p 1817-1821 24 Chiba, S (1997), "Molecular mechanism in α-glucosidase and glucoamylase", Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 61 (8), p 1233-1239 25 Choi, B.T and C.S Shin (2003), "Reduced Formation of Byproduct Component C in Acarbose Fermentation by Actinoplanessp CKD485–16", Biotechnology progress, 19 (6), p 1677-1682 26 Darken, M.A., et al (1960), "Production of tetracycline by Streptomyces aureofaciens in synthetic media", Applied microbiology, (1), p 46 27 Dastager, S., et al (2006), "Seperation, identification and analysis of pigment (melanin) production in Streptomyces", African journal of biotechnology, (11) 28 de Boer, E.C., et al (2000), "Immunostimulation in the urinary bladder by local application of Nocardia rubra cell-wall skeletons (Rubratin) and bacillus Calmette-Guerin as therapy for superficial bladder cancer: a comparative study", Clinical infectious diseases, 31 (Supplement_3), p S109-S114 29 Dejong, P.J (1972), "L-Asparaginase production by Streptomyces griseus", Appl Environ Microbiol., 23 (6), p 1163-1164 30 Derosa, G and P Maffioli (2012), "α-Glucosidase inhibitors and their use in clinical practice", Archives of medical science: AMS, (5), p 899 31 Derosa, G and P Maffioli (2012), "Efficacy and safety profile evaluation of acarbose alone and in association with other antidiabetic drugs: a systematic review", Clinical therapeutics, 34 (6), p 1221-1236 32 Duong-Ly, K.C and S.B Gabelli, (2014), Gel filtration chromatography (size exclusion chromatography) of proteins, in Methods in enzymology, Elsevier, p 105-114 33 Durruty, P., M Sanzana, and L Sanhueza, Pathogenesis of Type Diabetes Mellitus, in Type Diabetes 2019, IntechOpen 34 Ernawati, T (2018), "In silico evaluation of molecular interactions between known α-glucosidase inhibitors and homologous α-glucosidase enzymes from Saccharomyces cerevisiae, Rattus norvegicus, and GANC-human", Thai Journal of Pharmaceutical Sciences (TJPS), 42 (1) 35 Esnard, J., T.L Potter, and B.M Zuckerman (1995), "Streptomyces costaricanus sp nov., isolated from nematode-suppressive soil", International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 45 (4), p 775-779 36 Ezure, Y., et al (1985), "Moranoline (1-deoxynojirimycin) fermentation and its improvement", Agricultural and biological chemistry, 49 (4), p 1119-1125 37 Frommer, W., et al (1977), "Amino sugar derivatives", German patent DE 2347782 (US patent 4,062,950) 38 Ganesan, S., et al (2011), "Isolation and screening of α-glucosidase enzyme inhibitor producing marine actinobacteria", Afr J Microbiol Res, (21), p 3437-3245 39 George, P (2008), "Encyclopedia of Genetics, Genomics, Proteomics and Informatics" 40 Gonzalez, A., et al (1978), "Studies on the mode of action of hygromycin B, an inhibitor of translocation in eukaryotes", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Nucleic Acids and Protein Synthesis, 521 (2), p 459-469 41 Hata, T., F Koga, and H Kanamori (1953), "Studies on leucomycin II Bacteriological properties of Streptomyces kitasatoensis", The Journal of antibiotics, (3), p 109 42 Hiroyuki, F., Y Tomohide, and O Kazunori (2001), "Efficacy and safety of Touchi extract, an α-glucosidase inhibitor derived from fermented soybeans, in non-insulin-dependent diabetic mellitus", biochemistry, 12 (6), p 351-356 43 The Journal of nutritional Hong, L., M Xun, and W Wutong (2007), "Anti‐diabetic effect of an α‐glucan from fruit body of maitake (Grifola frondosa) on KK‐Ay mice", Journal of pharmacy and pharmacology, 59 (4), p 575-582 44 Ibrahim, M.A., et al (2018), "Structural properties of bioactive peptides with α‐glucosidase inhibitory activity", Chemical biology & drug design, 91 (2), p 370-379 45 Ilonen, J., J Lempainen, and R Veijola (2019), "The heterogeneous pathogenesis of type diabetes mellitus", Nature Reviews Endocrinology, 15 (11), p 635-650 46 Inouye, S., et al (1968), "Structure and synthesis of nojirimycin", Tetrahedron, 24 (5), p 2125-2144 47 Isono, K., et al (1965), "Studies on polyoxins, antifungal antibiotics: Part I Isolation and characterization of polyoxins A and B", Agricultural and Biological Chemistry, 29 (9), p 848-854 48 Jing, L., et al (2016), "Purification, structural features and inhibition activity on α-glucosidase of a novel polysaccharide from Lachnum YM406", Process Biochemistry, 51 (10), p 1706-1713 49 Jo, S., E Ka, and H Lee (2009), "Comparison of antioxidant potential and rat intestinal α-glucosidases inhibitory activities of quercetin, rutin, and isoquercetin" 50 KAMEDA, Y., et al (1980), "Valienamine as an α-glucosidase inhibitor", The Journal of antibiotics, 33 (12), p 1575-1576 51 KAMEDA, Y., et al (1984), "Vaholamine, a new α-glucosidase inhibiting aminocyclitol produced by streptomyces hygroscopicus", The Journal of antibiotics, 37 (11), p 1301-1307 52 Kang, M.-G., S.-H Yi, and J.-S Lee (2013), "Production and characterization of a new α-glucosidase inhibitory peptide from Aspergillus oryzae N159-1", Mycobiology, 41 (3), p 149-154 53 Kieser, T., et al (2000), Practical streptomyces genetics: John Innes Foundation Norwich, 54 Komaki, H., et al (1999), "Brasilicardin A, a new terpenoid antibiotic from pathogenic Nocardia brasiliensis: fermentation, isolation and biological activity", The Journal of antibiotics, 52 (1), p 13-19 55 Kumar, S., et al (2011), "α-glucosidase inhibitors from plants: A natural approach to treat diabetes", Pharmacognosy reviews, (9), p 19 56 Kumar, S.P (2011), "Molecular Descriptor Enhancement of a Common Structure Towards the Development of [alpha]-Glucosidase and [alpha]Amylase Inhibitors for Post-Prandial Hyperglycemia (PPHG)", Asian Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, (3) 57 Lee, D.-S (2000), "Dibutyl phthalate, an α-glucosidase inhibitor from Streptomyces melanosporofaciens", Journal of bioscience and bioengineering, 89 (3), p 271-273 58 Li, C., et al (2005), "Acarbose rearrangement mechanism implied by the kinetic and structural analysis of human pancreatic α-amylase in complex with analogues and their elongated counterparts", Biochemistry, 44 (9), p 33473357 59 Linke, H.A., W MECHLINSKI, and C.P SCHAFFNER (1974), "Production of amphotericin B-14C by Streptomyces nodosus fermentation, and preparation of the amphotericin B-14C-methyl-ester", The Journal of antibiotics, 27 (3), p 155-160 60 Maeda, J.L.K., et al (1957), "Production and isolation of a new antibiotic: kanamycin", The Journal of antibiotics 61 Mandel, M and A Higa (1970), "Calcium-dependent bacteriophage DNA infection", Journal of molecular biology, 53 (1), p 159-162 62 Manulis, S., et al (1994), "Biosynthesis of indole-3-acetic acid via the indole3-acetamide pathway in Streptomyces spp", Microbiology, 140 (5), p 10451050 63 Margalith, P and G Beretta (1960), "Rifomycin XI taxonomic study on streptomyces mediterranei nov sp", Mycopathologia et mycologia applicata, 13 (4), p 321-330 64 Mason, D and C Lewis (1964), "Biological activity of the lincomycin-related antibiotics", Antimicrobial agents and chemotherapy, 10 p 7-12 65 Matsuura, H., et al (2002), "α-glucosidase inhibitor from the seeds of balsam pear (Momordica charantia) and the fruit bodies of Grifola frondosa", Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 66 (7), p 1576-1578 66 McCue, P., Y.-I Kwon, and K Shetty (2005), "Anti-diabetic and anti- hypertensive potential of sprouted and solid-state bioprocessed soybean", Asia pacific Journal of clinical nutrition, 14 (2), p 145 67 McDougall, G.J., et al (2005), "Different polyphenolic components of soft fruits inhibit α-amylase and α-glucosidase", Journal of agricultural and food chemistry, 53 (7), p 2760-2766 68 Mojica, L., D.A Luna‐Vital, and E González de Mejía (2017), "Characterization of peptides from common bean protein isolates and their potential to inhibit markers of type‐2 diabetes, hypertension and oxidative stress", Journal of the Science of Food and Agriculture, 97 (8), p 2401-2410 69 Murao, S and S Miyata (1980), "Isolation and characterization of a new trehalase inhibitor, S-GI", Agricultural and biological chemistry, 44 (1), p 219-221 70 Nemoto, A., et al (2002), "Asterobactin, a new siderophore group antibiotic from Nocardia asteroides", The Journal of antibiotics, 55 (6), p 593-597 71 Nichols, B.L., et al (2003), "The maltase-glucoamylase gene: common ancestry to sucrase-isomaltase with complementary starch digestion activities", Proceedings of the National Academy of Sciences, 100 (3), p 1432-1437 72 Nguyenab, H and S Kima (2011), "Three compounds with potent αglucosidase inhibitory activity purified from sea cucumber Stichopus japonicas", Summer Program in Sensory Evaluation, 2011 p 112-122 73 Õmura, S and A Crump (2004), "The life and times of ivermectin—a success story", Nature Reviews Microbiology, (12), p 984-989 74 Omura, S., et al (1979), "Herbimycin, a new antibiotic produced by a strain of Streptomyces", The Journal of antibiotics, 32 (4), p 255-261 75 Onose, S., et al (2013), "Production of the α-glycosidase inhibitor 1deoxynojirimycin from Bacillus species", Food chemistry, 138 (1), p 516-523 76 Organization, W.H (2019), "Classification of diabetes mellitus" 77 Otto-Buczkowska, E and N Jainta (2018), "Pharmacological treatment in diabetes mellitus type 1–insulin and what else?", International journal of endocrinology and metabolism, 16 (1) 78 Pacheco da Rosa, J., et al (2013), "Streptomyces lunalinharesii strain 235 shows the potential to inhibit bacteria involved in biocorrosion processes", BioMed research international, 2013 79 Peng, X., et al (2016), "Inhibitory kinetics and mechanism of kaempferol on αglucosidase", Food chemistry, 190 p 207-215 80 Pridham, T., C Hesseltine, and R Benedict (1958), "A guide for the classification of streptomycetes according to selected groups Placement of strains in morphological sections", Applied microbiology, (1), p 52 81 Proenỗa, C., et al (2017), "-Glucosidase inhibition by flavonoids: an in vitro and in silico structure–activity relationship study", Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry, 32 (1), p 1216-1228 82 Phan, M.A.T., et al (2013), "Evaluation of α-glucosidase inhibition potential of some flavonoids from Epimedium brevicornum", LWT-Food Science and Technology, 53 (2), p 492-498 83 Randhir, R., Y.-T Lin, and K Shetty (2004), "Stimulation of phenolics, antioxidant and antimicrobial activities in dark germinated mung bean sprouts in response to peptide and phytochemical elicitors", Process Biochemistry, 39 (5), p 637-646 84 Ren, F., et al (2017), "Enhanced acarbose production by Streptomyces M37 using a two-stage fermentation strategy", PloS one, 12 (2) 85 Ren, L., et al (2011), "Structural insight into substrate specificity of human intestinal maltase-glucoamylase", Protein & cell, (10), p 827-836 86 Sambrook, J and D Russell (2001), "Molecular cloning: A laboratory manual Mol", Cloning A Lab Man 87 Sanger, F and A.R Coulson (1975), "A rapid method for determining sequences in DNA by primed synthesis with DNA polymerase", Journal of molecular biology, 94 (3), p 441-448 88 Schmidt, D (1977), "alpha-Glucosidase oligosaccharides of microbial origin" inhibitors New complex 89 Song, Y., et al (2005), "Associations of dietary flavonoids with risk of type diabetes, and markers of insulin resistance and systemic inflammation in women: a prospective study and cross-sectional analysis", Journal of the American College of Nutrition, 24 (5), p 376-384 90 Standl, E., et al (2001), "Improved glycaemic control with miglitol in inadequately-controlled type diabetics", Diabetes research and clinical practice, 51 (3), p 205-213 91 Struyk, A., et al (1958), "Pimaricin, a new antifungal antibiotic", Pimaricin, a new antifungal antibiotic 92 Tsuda, T (2008), "Regulation of adipocyte function by anthocyanins; possibility of preventing the metabolic syndrome", Journal of agricultural and food chemistry, 56 (3), p 642-646 93 Trinh, B.T., D Staerk, and A.K Jäger (2016), "Screening for potential αglucosidase and α-amylase inhibitory constituents from selected Vietnamese plants used to treat type diabetes", Journal of ethnopharmacology, 186 p 189-195 94 Uyeda, M., et al (2001), "Pentalenolactone I and hygromycin A, immunosuppressants produced by Streptomyces filipinensis and Streptomyces hygroscopicus", Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 65 (5), p 12521254 95 Van de Laar, F.A., et al (2005), "Alpha‐glucosidase inhibitors for type diabetes mellitus", Cochrane database of systematic reviews, (2) 96 Vino, S and K Lokesh (2008), "Borrelidin: a promising anticancer agent from Streptomyces species", Adv Biotech, p 22-26 97 Waksman, S.A and H.B Woodruff (1940), "Bacteriostatic and Bactericidal Substances Produced by a Soil Actinomyces", Proceedings of the society for Experimental Biology and Medicine, 45 (2), p 609-614 98 Wang, Y.-J., et al (2011), "Optimization of media composition and culture conditions for acarbose production by Actinoplanes utahensis ZJB-08196", World Journal of Microbiology and Biotechnology, 27 (12), p 2759-2766 99 Wei, J., et al (2017), "α-Glucosidase inhibitors and phytotoxins from Streptomyces xanthophaeus", Natural product research, 31 (17), p 2062-2066 100 Weinstein, M.J., et al (1963), "Gentamicin, a new antibiotic complex from Micromonospora", Journal of medicinal chemistry, (4), p 463-464 101 Williams, S.T., M Mordarski, and M Goodfellow (1984), The Biology of the Actinomycetes: Academic Press, 102 Woese, C.R and G.E Fox (1977), "Phylogenetic structure of the prokaryotic domain: the primary kingdoms", Proceedings of the National Academy of Sciences, 74 (11), p 5088-5090 103 Yagi, M (1976), "The structure of moranoline, a piperidine alkaloid from Morus species", Nippon Nogei Kagaku Kaishi, 50 p 571-572 104 Yan, J., et al (2014), "α-Glucosidase inhibition by luteolin: Kinetics, interaction and molecular docking", International journal of biological macromolecules, 64 p 213-223 105 Yao, Y., et al (2011), "A determination of potential α-glucosidase inhibitors from azuki beans (Vigna angularis)", International journal of molecular sciences, 12 (10), p 6445-6451 106 Zhang, Y., et al (2016), "Molecular mechanisms of novel peptides from silkworm pupae that inhibit α-glucosidase", Peptides, 76 p 45-50 107 Zhu, Y.-P., et al (2010), "Purification and identification of 1-deoxynojirimycin (DNJ) in okara fermented by Bacillus subtilis B2 from Chinese traditional food (Meitaoza)", Journal of agricultural and food chemistry, 58 (7), p 4097-4103 108 Mojica, L and E.G de Mejía (2016), "Optimization of enzymatic production of anti-diabetic peptides from black bean (Phaseolus vulgaris L.) proteins, their characterization and biological potential", Food & function, (2), p 713-727 Trang web 109 https://www.brenda-enzymes.org/enzyme.php?ecno=3.2.1.20 ngày truy cập 10/11/2019 PHỤ LỤC 01 Kết sàng lọc chủng xạ khuẩn có hoạt tính ức chế α-glucosidase cao STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Chủng xạ khuẩn H 25 H 08 H 23 H 07 H 22 S 15 H 04 H 33 H 21 H 02 H 24 St 24 H 14 S5 St 18 H 20 S 36 S 64 H 30 S 67 HNL 3.4 H 05 H 15 H 32 HNR 9.1 S 62 H 06 H 29 Strep 50 S 43 H 28 S 52 S 30 S 17 TQR 12.4 TQR 4.1 TQC 5.2 Strep 23 Ức chế α-glucosidase (%) -25,53 -24,37 -24,21 -23,14 -22,08 -21,73 -21,00 -19,19 -17,46 -15,31 -15,00 -14,73 -14,00 -13,84 -13,84 -13,69 -13,69 -13,69 -13,47 -12,50 -12,03 -11,69 -11,69 -11,51 -10,99 -10,42 -10,38 -9,64 -9,63 -9,23 -8,66 -8,04 -7,74 -6,85 -6,03 -6,00 -6,00 -5,48 SD 7 4 4 4 2 5 3 3 3 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 HNR 7.7 H 42 H 26 H 40 H 50 H 12 Strep 11 TQC 4.2 HBCC 4.2 S 54 St TQR 10.1 H 48 HNC 5.1 H 39 Strep 37 Strep S 48 H 41 HBCC 14.6 H 19 S 76 S 76 S 40 H 11 H 38 H 34 HBC 3.2 HNL 3.1 H 01 St 20 H 49 H 10 HNL 5.1 Strep 39 H 31 H 47 H 09 St H 37 HBC 2.1 H 18 St 81 St -4,99 -4,85 -4,82 -4,82 -4,82 -4,61 -4,41 -4,01 -4,01 -3,42 -3,42 -3,00 -2,89 -2,02 -1,93 -1,18 -0,30 3,42 3,84 4,01 4,38 4,46 4,61 4,61 4,77 4,79 4,82 4,99 6,00 6,60 6,70 6,72 6,92 6,98 7,30 7,70 7,70 7,98 8,04 8,66 8,97 9,30 10,12 10,27 2 2 2 0 0 2 0 2 2 2 3 4 3 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 TQR 5.3 St 27 H 27 HBL 2.1 H 36 TQC 1.8 H 43 HNC 1.1 H 35 H 46 H 17 H 44 Strep 70 Strep 21 H 16 HNR 3.6 H 45 Strep 74 HNR 10.2 strep 13 H 03 HNC 7.1 H 13 Strep 12.2 S 25 HNC 2.1 TQR 8.15 HB 10,99 11,46 12,46 12,98 13,45 13,99 15,38 17,94 18,26 19,22 19,36 21,15 21,20 21,47 21,75 21,95 23,08 23,18 23,98 24,42 24,90 25,97 26,35 27,49 28,13 30,04 31,97 68,98 3 3 4 5 3 PHỤ LỤC 02 Kết giải trình tự gen 16S rRNA chủng xạ khuẩn HB6 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI MAI VĂN HIÊN NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN SINH TỔNG HỢP, TINH SẠCH VÀ BƢỚC ĐẦU XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA HOẠT CHẤT ỨC CHẾ ? ?GLUCOSIDASE TỪ CHỦNG XẠ KHUẨN... Màu khuẩn ty khí sinh Xám nâu ISP2, ISP3, ISP4 ISP5 Xám nâu ISP2, ISP3, ISP4 ISP5 Xám nâu ISP2, ISP3, ISP4 ISP5 Màu khuẩn ty chất Vàng nâu ISP2, ISP3, ISP4 ISP5 Vàng nâu ISP2, ISP3, ISP4 ISP5 Vàng... - Nghiên cứu điều kiện nâng cao khả sinh tổng hợp hoạt chất ức chế ? ?glucosidase Tinh bước đầu xác định cấu trúc hoạt chất ức chế ? ?glucosidase Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Bệnh đái tháo đƣờng 1.1.1 Định