Nghiên cứu các điều kiện tách chiết hoạt chất ức chế α glucosidase từ chủng aspergillus niger

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI HỒNG SƠN NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT HOẠT CHẤT ỨC CHẾ -GLUCOSIDASE TỪ CHỦNG ASPERGILLUS NIGER KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI HỒNG SƠN NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT HOẠT CHẤT ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE TỪ CHỦNG ASPERGILLUS NIGER KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2016.Y Người hướng dẫn: TS ĐỖ THỊ TUYÊN ThS ĐỖ THỊ QUỲNH HÀ NỘI - 2021 LỜI CẢM ƠN Trước tiên em xin cảm ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Tuyên, Trưởng phòng Công nghệ sinh học Enzyme, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người thầy truyền cảm hứng, tận tình hướng dẫn, đưa góp ý tạo điều kiện thuận lợi kinh phí để thực đề tài khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tới ThS Đỗ Thị Quỳnh, Bộ môn Y Dược học sở, Trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội đưa lời khuyên quý báu, kinh nghiệm nghiên cứu giúp đỡ em tận tình thời gian làm khóa luận Tiếp đến em xin cảm ơn tập thể anh chị, cán Phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme, Viện Công nghệ sinh học hướng dẫn, giúp đỡ tận tình cho em trình thực nghiệm vừa qua, chia sẻ kinh nghiệm đáng quý, có ứng dụng thực tế cao thí nghiệm Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô chủ nhiệm thầy cô môn Y Dược học sở, Trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội suốt khoảng thời gian năm vừa cung cấp cho thân em nhiều kiến thức kinh nghiệm quý báu, quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em trình học tập Đồng thời em xin cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè ln động viên tiếp thêm sức mạnh cho lúc khó khăn Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2021 Sinh viên Bùi Hồng Sơn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt ADA AGIs DC DNJ ĐTĐ HPLC IC50 IDF LC/MS OD405 TLC UV DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hoạt chất ức chế α-glucosidase từ vi sinh vật 15 Bảng 2.1 Thiết bị thí nghiệm 22 Bảng 2.2 Các hóa chất sử dụng 23 Bảng 2.3 Thành phần loại đệm dung dịch 24 Bảng 2.4 Tính chất đặc trưng đầu dị hấp thụ UV đầu dò khối phổ .31 Bảng 3.1 Quá trình tách chiết hoạt chất ức chế α-glucosidase dung mơi 33 Bảng 3.2 Tóm tắt q trình tinh thu nhận hoạt chất ức chế α-glucosidase từ chủng A niger VTCC 031 37 Bảng 3.3 Kết thử hoạt tính nồng độ khác dịch chiết n-butanol 40 Bảng 3.4 Kết thử hoạt tính nồng độ khác mẫu tinh cuối 42 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế tác dụng thuốc điều trị ĐTĐ tuýp Hình 1.2 Lược đồ lựa chọn thuốc phương pháp điều trị ĐTĐ tuýp Hình 1.3 Cấu trúc không gian 3D enzyme α-glucosidase GH13 10 Hình 1.4 Cấu trúc khơng gian 3D enzyme α-glucosidase GH31 11 Hình 1.5 Cơ chế hoạt động chất ức chế enzyme α-glucosidase ruột non 12 Hình 1.6 Cấu trúc acarbose, miglitol, voglibose DNJ 13 Hình 1.7 Cấu trúc dẫn xuất monosaccharide 14 Hình 1.8 Đặc điểm hình thái bào tử sau nuôi cấy ngày chủng A niger VTCC 031 đĩa thạch 18 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình nghiên cứu 25 Hình 2.2 Các bước tiến hành tinh hoạt chất ức chế α-glucosidase từ chủng A niger VTCC 031 27 Hình 3.1 Thu hoạch bình nuôi cấy chủng A niger 32 Hình 3.2 Khả tách chất mẫu dịch chiết sử dụng hệ dung môi khác 34 Hình 3.3 Sắc ký lớp mỏng kiểm tra độ tinh phân đoạn qua cột silica gel lần thứ 35 Hình 3.4 Sắc ký lớp mỏng kiểm tra độ tinh phân đoạn từ 17 đến 21 sau qua cột silica gel lần thứ 36 Hình 3.5 Sắc ký lớp mỏng kiểm tra độ tinh phân đoạn qua cột silica gel lần thứ hai 37 Hình 3.6 Kiểm tra độ tinh trình TLC 38 Hình 3.7 Kiểm tra độ tinh HPLC LC/MS 39 Hình 3.8 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase dịch chiết nbutanol 41 Hình 3.9 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase acarbose tinh khiết (Sigma) 41 Hình 3.10 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase mẫu tinh cuối 42 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh đái tháo đường 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh biến chứng 1.1.4 Các nguyên tắc điều trị bệnh đái tháo đường 1.2 Enzyme α-glucosidase 1.2.1 Giới thiệu chung -glucosidase 1.2.2 Cấu trúc -glucosidase 10 1.2.3 Cơ chế hoạt động enzyme thể 11 1.3 Chất ức chế α-glucosidase 12 1.3.1 Giới thiệu chế hoạt động chất ức chế enzyme α-glucosidase 12 1.3.2 Phân loại chất ức chế enzyme α-glucosidase 14 1.3.3 Nguồn gốc chất ức chế enzyme α-glucosidase 15 1.4 Giới thiệu chủng nấm sợi Aspergillus niger 18 1.5 Tình hình nghiên cứu hoạt chất ức chế enzyme α-glucosidase từ chủng Aspergillus nước quốc tế 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.3 Thiết bị phịng thí nghiệm hóa chất 22 2.4 Môi trường nuôi cấy 24 2.5 Quy trình tiến hành nghiên cứu 24 2.6 Phương pháp nghiên cứu 25 2.6.1 Xác định hoạt tính chất ức chế α-glucosidase 25 2.6.2 Tách chiết, tinh hoạt chất ức chế enzyme α-glucosidase từ dịch nuôi cấy 26 2.6.3 Xác định giá trị IC50 30 2.6.4 Kiểm tra độ tinh sắc ký lỏng hiệu cao sắc ký lỏng khối phổ 30 2.6.5 Phương pháp xử lý số liệu 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 32 3.1 Kết tinh hoạt chất ức chế enzyme α-glucosidase từ chủng A niger VTCC 031 32 3.1.1 Kết trình tách chiết hoạt chất ức chế α-glucosidase với dung môi 32 3.1.2 Nghiên cứu chọn lựa hệ dung môi pha động chạy sắc ký cột .34 3.1.3 Kết tinh cột sắc ký silica gel 60 35 3.2 Xác định IC50 dịch chiết n-butanol mẫu tinh cuối .40 KẾT LUẬN 44 ĐỀ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, bệnh đái tháo đường coi vấn đề sức khỏe toàn cầu Theo báo cáo Liên đoàn Đái tháo đường quốc tế (IDF), số lượng bệnh nhân đái tháo đường tồn giới dự kiến gần 700 triệu người vào năm 2045 Tại Việt Nam, theo ước tính Bộ Y tế, người tuổi từ 20 - 79, bệnh đái tháo đường tăng khoảng 78,5% giai đoạn 2017 - 2045 (từ 3,53 triệu bệnh nhân năm 2017 tăng lên 6,3 triệu người mắc đái tháo đường vào năm 2045) Không thế, ảnh hưởng nghiêm trọng đại dịch toàn cầu COVID-19, trình điều trị cho bệnh nhân đái tháo đường trở nên khó khăn Các nghiên cứu gần cho thấy bệnh nhân đái tháo đường kiểm sốt đường huyết mắc COVID-19 có tỷ lệ tử vong cao khoảng lần thời gian nằm viện lâu so với bệnh nhân không bị đái tháo đường [14, 64] Một nhóm thuốc sử dụng để điều trị đái tháo đường nhóm chất ức chế αglucosidase, sử dụng phổ biến lâm sàng điển hình như: acarbose, voglibose, miglitol Nhóm thuốc thường sử dụng phối hợp với thuốc đầu tay khác metformine, nhóm đồng vận thụ thể GLP-1 ,… cho kết điều trị tốt nhiên chúng ghi nhận tác dụng không mong muốn như: đau đầu, ngủ, buồn nôn, đầy tiêu chảy [15] Vì việc tìm kiếm hợp chất an tồn thuận tiện cho việc sản xuất nhiều nhà nghiên cứu quan tâm Hiện nay, nguồn nguyên liệu phong phú nguồn từ chủng vi sinh vật chúng có quần thể vơ rộng lớn, phát triển mạnh không gây ô nhiễm môi trường xung quanh Đặc biệt chủng nấm Aspergillus với nhiều nghiên cứu gần cho thấy ứng dụng chúng việc tổng hợp hoạt chất thứ cấp hoạt tính sinh học dùng để điều trị bệnh [16, 31, 39] Chính vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu với đề tài: “Nghiên cứu điều kiện tách chiết hoạt chất ức chế α-glucosidase từ chủng Aspergillus niger” với mục tiêu sau: - Mô tả kết tách chiết, tinh hoạt chất chất ức chế α-glucosidase từ chủng Aspergillus niger; - Xác định độ tinh giá trị IC50 dịch chiết sản phẩm cuối tinh chứa hoạt chất ức chế enzyme α-glucosidase từ chủng Aspergillus niger CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh đái tháo đường 1.1.1 Khái niệm Đái tháo đường (ĐTĐ) hội chứng rối loạn chuyển hóa mãn tính, phức tạp đặc trưng tăng glucose máu tụy không sản xuất đủ insulin thể sử dụng insulin không hiệu hai [43] Bệnh lý gây tổn thương lâu dài nhiều hệ quan như: tổn thương võng mạc, tim, thận, não hệ thống mạch máu với bệnh điển bệnh thận tiểu đường, bệnh võng mạc đái tháo đường, suy gan, tổn thương hệ thần kinh bệnh nhân không phát hiện, điều trị tuân thủ điều trị nghiêm ngặt [15] 1.1.2 Phân loại Theo Hiệp hội Đái tháo đường Hoa Kỳ (ADA) năm 2021, ĐTĐ có loại sau: ĐTĐ tuýp 1, ĐTĐ tuýp 2, ĐTĐ thai kỳ, ĐTĐ nguyên nhân khác [11] Đái tháo đường tuýp ĐTĐ tuýp 1, trước gọi ĐTĐ tuổi vị thành niên, gây trình tự miễn làm tổn thương tế bào beta (β) đảo tụy dẫn đến tình trạng giảm sản xuất tuyệt đối insulin Về mặt dịch tễ học, chiếm 5-10% số người mắc ĐTĐ Đái tháo đường tuýp ĐTĐ tuýp 2, hay cịn gọi ĐTĐ khơng phụ thuộc insulin, ĐTĐ người lớn, chiếm khoảng 90-95% số người mắc ĐTĐ Bệnh gây tảng thể giảm tiết insulin tương đối tế bào β tuyến tụy hình thành kháng insulin tế bào Hầu bệnh nhân không cần điều trị liệu pháp insulin đời Đái tháo đường nguyên nhân khác ĐTĐ nguyên nhân khác, hay gọi đái tháo đường thứ cấp, gồm: hội chứng đái tháo đường đơn gen (gồm đái tháo đường khởi phát trẻ nhỏ đái tháo đường sơ sinh), bệnh tụy ngoại tiết, bệnh nội tiết, cảm ứng thuốc, đái tháo đường qua trung gian miễn dịch đái tháo đường hội chứng di truyền Đái tháo đường thai ky ĐTĐ thai kỳ - loại rối loạn chuyển hóa phổ biến phụ nữ mang thai định nghĩa tượng rối loạn dung nạp glucose, phát vào giai ức chế (%) Hoạt tính Hình 3.8 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase dịch chiết n-butanol Hoạt tính ức chế (%) 100 80 y = 0.6537x + 29.629 R² = 0.9848 60 40 20 0 20 40 60 80 100 120 Nồng độ (µg/ml) Hình 3.9 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase acarbose tinh khiết (Sigma) 3.2.2 IC50 sản phẩm tinh cuối Các phân đoạn có hoạt tính ức chế α-glucosidase sau qua cột silica gel lần gộp lại cất cô quay thu cặn Từ cắn khô sau cất cô quay sản phẩm tinh cuối cùng, tiến hành pha thành mẫu S1 đến S5 với nồng độ tương ứng 500, 1000, 1500, 2000, 2500 µg/ml methanol Các mẫu xác 41 định hoạt tính ức chế α-glucosidase Kết xác định hoạt tính ức chế αglucosidase thể Bảng 3.3 Bảng 3.4 Hoạt tính ức chế α-glucosidase nồng độ khác mẫu tinh cuối STT Từ kết trên, tiến hành dựng đường chuẩn thể cho hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mẫu tinh cuối (Hình 3.10) xác định giá trị IC50 = 7649 g/ml so IC50 acarbose tinh khiết (Sigma) 31,16 g/ml (Hình 3.9) 18 y = 0.0066x - 0.485 16 Hoạt tính ức chế (%) R² = 0.9715 14 12 10 500 1000 1500 2000 2500 3000 Nồng độ (µg/ml) Hình 3.10 Xây dựng đường chuẩn hoạt tính ức chế α-glucosidase mẫu tinh cuối Mẫu tinh cuối hoạt chất ức chế α-glucosidase từ dịch ni cấy chủng A niger VTCC 031 có giá trị IC50 7649 g/ml, cao lớn so với đối chứng dương acarbose tinh khiết Điều cho thấy, khả ức chế α-glucosidase 42 mẫu tinh chưa cao, dịch ni cấy ban đầu tiềm hoạt tính ban đầu đặt đến 85,19% Điều mơ hình tinh có hiệu suất chưa cao, khả tách chiết hoạt chất ức chế α-glucosidase thấp, bị thất q trình tinh Bên cạnh đó, mẫu cịn chứa vài chất tạp điều ảnh hưởng đến giá trị IC50 Kết phù hợp với số nghiên cứu giới Các chất ức chế αglucosidase khác tinh từ chủng khác có giá trị IC 50 khác giá trị IC50 phụ thuộc vào độ mẫu chứa hoạt chất ức chế Các mẫu có độ tinh hoạt chất ức chế α-glucosidase cao giá trị IC 50 nhỏ Thật vậy, hoạt chất ức chế α-glucosidase cao chiết ethyl acetate từ chủng Streptomyces sp IPBCC.b.15.1539 có giá trị IC 50 đạt 0,047 μg/mL [34], hoạt chất ức chế AGIs từ chủng Streptomyces sp S2A đạt giá trị IC 50 21,17 g/mL [36] Kang cộng (2013) báo cáo giá trị IC 50 peptide tinh từ chủng A oryzae N159-1 đạt 3,1 mg/mL [36] Dewi cộng (2016) phân lập rubrofusarin, hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ môi trường nuôi cấy chủng Aspergillus aculeatus, chất tiềm điều trị ĐTĐ thể qua hoạt tính ức chế α-glucosidase động vật có vú với IC50 đạt 92,70 µg/mL [16] Ngồi cịn có chất thể vượt trội acarbose, nghiên cứu xác định cấu trúc hoạt chất ức chế αglucosidase từ chủng nấm mốc Aspergillus flavus QQSG-3, có chất đạt hoạt tính sinh học ức chế α-glucosidase với IC50 tương ứng 4,5 – 3,1– 1,5 – 2.3 µM IC 50 acarbose 840,2 µM [59] 43 KẾT LUẬN Từ kết quả, số liệu thu được, đưa kết luận sau: Chủng A niger VTCC 031 có khả sinh tổng hợp chất có hoạt tính ức chế α-glucosidase cao đạt 85,19% đo dịch lên men Đã lựa chọn hệ dung môi pha động lên cột tốt n-butanol : acid acetic : ethyl acetate : H2O với tỉ lệ 3:1:1:1 Bước đầu xây dựng quy trình tinh với bước chính: chiết với dung mơi n-butanol sau chiết với hệ dung mơi chloroform: methanol tỉ lệ 1:1 (v/v); dịch chiết tinh qua cột silica gel 60 Sản phẩm tinh sơ có hệ số Rf = 0,52 sắc ký lớp mỏng, hoạt tính ức chế α-glucosidase đạt 45,75% với hiệu suất thu hồi 0,116% Qua TLC, độ mẫu tinh cuối tăng lên đáng kể so với dịch lên men ban đầu nhiên chút chất tạp kiểm tra HPLC LC/MS Xác định giá trị IC50 dịch chiết n-butanol mẫu sơ tương ứng 98,74 mg/ml 7,648 mg/ml so với hoạt chất acarbose (Sigma) 31,16 µg/ml 44 ĐỀ XUẤT Nghiên cứu lựa chọn hệ dung môi pha động tối ưu để chạy cột sắc ký silica gel nhằm thu hoạt chất tinh khiết Xác định cấu trúc hoạt chất ức chế α-glucosidase tạo tiền đề cho bào chế tạo sản phẩm cho trình thử nghiệm tiền lâm sàng, với mục tiêu nghiên cứu thuốc điều trị bệnh đái tháo đường 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Châu Mỹ Chi (2021), "Nghiên cứu biến chứng mắt bệnh nhân đái tháo đường Bệnh viện Đa khoa Trung tâm Tiền Giang", Vietnam Journal of Diabetes and Endocrinology, 43, 11-19 2.Đinh Thị Minh Hảo and Trần Thị Anh Thư (2020), "Bệnh thận đái tháo đường: vấn đề cần quan tâm", Vietnam Journal of Diabetes and Endocrinology, (38), 12-17 Đỗ Quý Hải (2006), Giáo trình công nghệ sinh học enzyme, Đại học Khoa học - Đại học Huế, Việt Nam 4.Đỗ Thị Tuyên, Vũ Văn Hạnh, Vũ Thị Thu Hằng, Đinh Kha Trình, and Đinh Thị Quyên (2013), Tách chiết, tinh hoạt chất DNJ (1-Deoxynojirimycin) ức chế αglucosidase từ chủng B subtilis VN9 phân lập Việt Nam., Hội nghị Khoa học Công nghệ sinh học toàn quốc 2013, Hà Nội Hội Nội tiết - Đái tháo đường Việt Nam (2020), "Hướng dẫn chẩn đoán điều trị Đái tháo đường Hội nội tiết - Đái tháo đường Việt Nam" Mai Văn Hiên (2020), Nghiên cứu điều kiện sinh tổng hợp, tinh bước đầu xác định cấu trúc hoạt chất ức chế alpha glucosidase từ chủng xạ khuẩn Streptomyces sp phân lập Việt Nam, Khóa luận tốt nghiệp Đại học Dược Hà Nội, Việt Nam Phạm Minh Hồng (2020), Sàng lọc nghiên cứu điều kiện để nâng cao khả sinh tổng hợp hoạt chất ức chế α-glucosidase từ chủng A niger Graduation thesis of Vietnam National University, Việt Nam Phạm Thị Trân Châu and Phan Tuấn Nghĩa (2009), Enzym ứng dụng, Education Publisher, Vietnam Phan Tuấn Nghĩa (2012), Giáo trình Hóa sinh học thực nghiệm, Nhà xuất giáo dục Việt Nam, Việt Nam Tài liệu tiếng anh 10 Ali R B., Atangwho I J., Kuar N., Ahmad M., Mahmud R., and Asmawi M Z (2013), "In vitro and in vivo effects of standardized extract and fractions of Phaleria macrocarpa fruits pericarp on lead carbohydrate digesting enzymes", BMC Complement Altern Med, 13, 39 11 American Diabetes A (2021), "2 Classification and Diagnosis of Diabetes: Standards of Medical Care in Diabetes-2021", Diabetes Care, 44(Suppl 1), S15-S33 12 Bellamy L., Casas J.-P., Hingorani A D., and Williams D (2009), "Type diabetes mellitus after gestational diabetes: a systematic review and meta-analysis", The Lancet, 373(9677), 1773-1779 13 Bian X., Fan X., Ke C., Luan Y., Zhao G., and Zeng A (2013), "Synthesis and alpha-glucosidase inhibitory activity evaluation of N-substituted aminomethylbeta-d-glucopyranosides", Bioorg Med Chem, 21(17), 5442-5450 14 Bloomgarden Z T (2020), "Diabetes and COVID‐19", Journal of Diabetes, 12(4), 347-348 15 Dabhi A S., Bhatt N R., and Shah M J (2013), "Voglibose: an alpha glucosidase inhibitor", J Clin Diagn Res, 7(12), 3023-3027 16 Dewi R T., Suparman A., Mulyani H., and Lotulung P D N (2016), "Identification of a New Compound as α-Glucosidase Inhibitor from Aspergillus aculeatus", ANNALES BOGORIENSES, 20(1), 19-23 46 17 Dewi R T., Tachibana S., and Darmawan A (2014), "Effect on αglucosidase inhibition and antioxidant activities of butyrolactone derivatives from Aspergillus terreus MC751", Medicinal Chemistry Research, 23(1), 454-460 18 Frisvad J C., Moller L L H., Larsen T O., Kumar R., and Arnau J (2018), "Safety of the fungal workhorses of industrial biotechnology: update on the mycotoxin and secondary metabolite potential of Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, and Trichoderma reesei", Appl Microbiol Biotechnol, 102(22), 9481-9515 19 G M F and D A M (1987), "Production of enzymes by fermentation", In: Rehm HJ, Reed G (eds) Biotechnology, vol 7a VCH, Weinheim, , 65-102 20 Group H S C R (2002), "The Hyperglycemia and Adverse Pregnancy Outcome (HAPO) Study", Int J Gynaecol Obstet, 78(1), 69-77 21 Group H S C R., Metzger B E., Lowe L P., Dyer A R., Trimble E R., Chaovarindr U., Coustan D R., Hadden D R., McCance D R., Hod M., McIntyre H D., Oats J J., Persson B., Rogers M S., and Sacks D A (2008), "Hyperglycemia and adverse pregnancy outcomes", N Engl J Med, 358(19), 1991-2002 22 Gupta R., Gigras P., Mohapatra H., Goswami V K., and Chauhan B (2003), "Microbial α-amylases: a biotechnological perspective", Process Biochemistry, 38(11), 1599-1616 23 Helman A and Melton D A (2021), "A Stem Cell Approach to Cure Type Diabetes", Cold Spring Harb Perspect Biol, 13(1) 24 Hemker M., Stratmann A., Goeke K., Schroder W., Lenz J., Piepersberg W., and Pape H (2001), "Identification, cloning, expression, and characterization of the extracellular acarbose-modifying glycosyltransferase, AcbD, from Actinoplanes sp strain SE50", J Bacteriol, 183(15), 4484-4492 25 Henrissat B (1991), "A classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities", Biochem J, 280 ( Pt 2), 309-316 26 Henrissat B and Bairoch A (1993), "New families in the classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities", Biochem J, 293 ( Pt 3), 781-788 27 Ilonen J., Lempainen J., and Veijola R (2019), "The heterogeneous pathogenesis of type diabetes mellitus", Nat Rev Endocrinol, 15(11), 635-650 28 Jo S.-H., Ka E H., Lee H S., Apostolidis E., Jang H D., and Kwon Y I (2009), "Comparison of Antioxidant Potential and Rat intestinal a-Glucosidases inhibitory Activities of Quercetin, Rutin, and Isoquercetin", International Journal of Applied Research in Natural Products, 29 Jones K., Sim L., Mohan S., Kumarasamy J., Liu H., Avery S., Naim H Y., Quezada-Calvillo R., Nichols B L., Pinto B M., and Rose D R (2011), "Mapping the intestinal alpha-glucogenic enzyme specificities of starch digesting maltase-glucoamylase and sucrase-isomaltase", Bioorg Med Chem, 19(13), 39293934 30 Kameda Y., Asano N., Yoshikawa M., Takeuchi M., Yamaguchi T., Matsui K., Horii S., and Fukase H (1984), "Valiolamine, a new alpha-glucosidase inhibiting aminocyclitol produced by Streptomyces hygroscopicus", J Antibiot (Tokyo), 37(11), 1301-1307 31 Kang M G., Yi S H., and Lee J S (2013), "Production and Characterization of a New alpha-Glucosidase Inhibitory Peptide from Aspergillus oryzae N159-1", Mycobiology, 41(3), 149-154 32 Kim N R., Jeong D W., Ko D S., and Shim J H (2017), "Characterization of novel thermophilic alpha-glucosidase from Bifidobacterium longum", Int J Biol Macromol, 99, 594-599 47 33 Lee A., Patrick P., Wishart J., Horowitz M., and Morley J E (2002), "The effects of miglitol on glucagon-like peptide-1 secretion and appetite sensations in obese type diabetics", Diabetes Obes Metab, 4(5), 329-335 34 Lestari Y., Velina Y., and Rahminiwati M (2015), "Metabolites activity of endophytic Streptomyces sp IPBCC b 15.1539 from Tinospora crispa l miers: αglucosidase inhibitor and anti-hyperglycemic in mice", International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science, 7, 235-239 35 Li C., Zhou J., Du G., Chen J., Takahashi S., and Liu S (2020), "Developing Aspergillus niger as a cell factory for food enzyme production", Biotechnol Adv, 44, 107630 36 Ling L., Han X., Li X., Zhang X., Wang H., Zhang L., Cao P., Wu Y., Wang X., and Zhao J (2020), "A Streptomyces sp NEAU-HV9: Isolation, identification, and potential as a biocontrol agent against Ralstonia solanacearum of tomato plants", Microorganisms, 8(3), 351 37 Liu Z and Ma S (2017), "Recent Advances in Synthetic alphaGlucosidase Inhibitors", ChemMedChem, 12(11), 819-829 38 Martinov T and Fife B T (2020), "Type diabetes pathogenesis and the role of inhibitory receptors in islet tolerance", Ann N Y Acad Sci, 1461(1), 73-103 39 Munasaroh S., Tamat S R., and Dewi R T (2018), "Isolation and Identification of α-Glucosidase Inhibitor From Aspergillus Terreus F38", Indonesian Journal of Pharmacy, 29(2) 40 Nguyen T C., Le T H., Mai V H., Hoang T Y., Nguyen T T., Dao T M A., Nguyen M C., and Do T T (2021), "Optimization and Purification of αglucosidase inhibitor from Bacillus subtilis YT20 isolated in vietnam", Vietnam Journal of Science and Technology, 59(2), 179-188 41 Okuyama M., Saburi W., Mori H., and Kimura A (2016), "alphaGlucosidases and alpha-1,4-glucan lyases: structures, functions, and physiological actions", Cell Mol Life Sci, 73(14), 2727-2751 42 Onose S., Ikeda R., Nakagawa K., Kimura T., Yamagishi K., Higuchi O., and Miyazawa T (2013), "Production of the alpha-glycosidase inhibitor 1deoxynojirimycin from Bacillus species", Food Chem, 138(1), 516-523 43 Organization W H (2019), "Classification of diabetes mellitus", [cited 2021 11 May]; Available from: https://www.who.int/westernpacific/healthtopics/diabetes 44 Qiu P., Liu Z., Chen Y., Cai R., Chen G., and She Z (2019), "Secondary Metabolites with alpha-Glucosidase Inhibitory Activity from the Mangrove Fungus Mycosphaerella sp SYSU-DZG01", Mar Drugs, 17(8) 45 Ren L., Qin X., Cao X., Wang L., Bai F., Bai G., and Shen Y (2011), "Structural insight into substrate specificity of human intestinal maltaseglucoamylase", Protein Cell, 2(10), 827-836 46 Rose D R., Chaudet M M., and Jones K (2018), "Structural Studies of the Intestinal alpha-Glucosidases, Maltase-glucoamylase and Sucrase-isomaltase", J Pediatr Gastroenterol Nutr, 66 Suppl 3, S11-S13 47 Santiago M and Strobel S (2013), "Thin layer chromatography", Methods Enzymol, 533, 303-324 48 Sanzana M and Sanhueza L (2019), "Pathogenesis of Type Diabetes Mellitus", Type Diabetes - From Pathophysiology to Modern Management 49 Schuster E., Dunn-Coleman N., Frisvad J C., and Van Dijck P W (2002), "On the safety of Aspergillus niger a review", Appl Microbiol Biotechnol, 59(4-5), 426-435 48 50 Sikorskaya K., Zarzecka I., Ejikeme U., and Russell J (2021), "The use of metformin as an add-on therapy to insulin in the treatment of poorly controlled type diabetes mellitus in adolescents", Metabol Open, 9, 100080 51 Sim L., Willemsma C., Mohan S., Naim H Y., Pinto B M., and Rose D R (2010), "Structural basis for substrate selectivity in human maltase-glucoamylase and sucrase-isomaltase N-terminal domains", J Biol Chem, 285(23), 17763-17770 52 Singh B and Kaur A (2016), "Antidiabetic potential of a peptide isolated from an endophytic Aspergillus awamori", J Appl Microbiol, 120(2), 301-311 53 Sullivan S D., Umans J G., and Ratner R (2012), "Gestational diabetes: implications for cardiovascular health", Curr Diab Rep, 12(1), 43-52 54 Tabussum A., Riaz N., Saleem M., Ashraf M., Ahmad M., Alam U., Jabeen B., Malik A., and Jabbar A (2013), "α-Glucosidase inhibitory constituents from Chrozophora plicata", Phytochemistry Letters, 6(4), 614-619 55 Takei I., Miyamoto K., Funae O., Ohashi N., Meguro S., Tokui M., and Saruta T (2001), "Secretion of GIP in responders to acarbose in obese Type 2(NIDDM) patients", Journal of Diabetes and its Complications, 15(5), 245-249 56 Thrasher J (2017), "Pharmacologic Management of Type Diabetes Mellitus: Available Therapies", Am J Cardiol, 120(1S), S4-S16 57 Truscheit E., Hillebrand I., Junge B., Müller L., Puls W., and Schmidt D Microbial α-Glucosidase Inhibitors: Chemistry, Biochemistry, and Therapeutic Potential in Drug Concentration Monitoring Microbial Alpha-Glucosidase Inhibitors Plasminogen Activators 1988 Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg 58 van der Maarel M J E C., van der Veen B., Uitdehaag J C M., Leemhuis H., and Dijkhuizen L (2002), "Properties and applications of starchconverting enzymes of the α-amylase family", Journal of Biotechnology, 94(2), 137-155 59 Wu Y., Chen Y., Huang X., Pan Y., Liu Z., Yan T., Cao W., and She Z (2018), "alpha-Glucosidase Inhibitors: Diphenyl Ethers and Phenolic Bisabolane Sesquiterpenoids from the Mangrove Endophytic Fungus Aspergillus flavus QQSG-3", Mar Drugs, 16(9) 60 Yagi M., Kouno T., Aoyagi Y., and Murai H (1976), "The Structure of Moranoline, a Piperidine Alkaloid from Morus Species", Journal of the agricultural chemical society of Japan, 50(11), 571-572 61 Yang J B., Tian J Y., Dai Z., Ye F., Ma S C., and Wang A G (2017), "aGlucosidase inhibitors extracted from the roots of Polygonum multiflorum Thunb", Fitoterapia, 117, 65-70 62 Yin Z., Zhang W., Feng F., Zhang Y., and Kang W (2014), "α-Glucosidase inhibitors isolated from medicinal plants", Food Science and Human Wellness, 3(34), 136-174 63 Yip V L and Withers S G (2004), "Nature's many mechanisms for the degradation of oligosaccharides", Org Biomol Chem, 2(19), 2707-2713 64 Zhou F., Yu T., Du R., Fan G., Liu Y., Liu Z., Xiang J., Wang Y., Song B., and Gu X (2020), "Clinical course and risk factors for mortality of adult inpatients with COVID-19 in Wuhan, China: a retrospective cohort study", The Lancet, 395(10229), 1054-1062 65 Zhu Y and Zhang C (2016), "Prevalence of Gestational Diabetes and Risk of Progression to Type Diabetes: a Global Perspective", Curr Diab Rep, 16(1), 66 Zhu Y P., Yamaki K., Yoshihashi T., Ohnishi Kameyama M., Li X T., Cheng Y Q., Mori Y., and Li L T (2010), "Purification and identification of 1- 49 deoxynojirimycin (DNJ) in okara fermented by Bacillus subtilis B2 from Chinese traditional food (Meitaoza)", J Agric Food Chem, 58(7), 4097-4103 50 ... hợp hoạt chất thứ cấp hoạt tính sinh học dùng để điều trị bệnh [16, 31, 39] Chính vậy, tiến hành nghiên cứu với đề tài: ? ?Nghiên cứu điều kiện tách chiết hoạt chất ức chế α- glucosidase từ chủng Aspergillus. .. quan [7] Từ 13 chủng A niger có hoạt tính ức chế ? ?glucosidase, nghiên cứu sàng lọc chủng A niger VTCC 031 có khả sinh tổng hợp chất có hoạt tính ức chế α- glucosidase cao đạt 39,49% Nghiên cứu thành... nghiên cứu điều kiện phù hợp cho trình tách chiết, tinh hoạt chất ức chế enzyme α- glucosidase từ chủng Aspergillus niger - chủng nấm mốc với nhiều tiềm Việt Nam 1.4 Giới thiệu chủng nấm sợi Aspergillus