Nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học loài san hô mềm Sinularia erecta : Luận văn ThS

` ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HƢỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI SAN HÔ MỀM SINULARIA ERECTA LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2018 i ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HƢỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI SAN HƠ MỀM SINULARIA ERECTA Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số : 8440112.02 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN HỒI NAM TS TRẦN MẠNH TRÍ Hà Nội – 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan : Luận văn cơng trình nghiên cứu riêng em, thực hướng dẫn TS Nguyễn Hoài Nam TS Trần Mạnh Trí Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cá nhân nhóm tác giả cơng bố cơng trình khác Em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm nghiên cứu HỌC VIÊN CAO HỌC Nguyễn Thị Hƣờng i LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc tới thầy giáo Khoa Hóa Học - Trường Đại học Khoa học tự nhiên, tận tình giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn thầy TS Nguyễn Hoài Nam TS Trần Mạnh Trí tận tình hướng dẫn, hết lòng bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian làm luận văn Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn đến tập thể cán phịng Dược liệu biển, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình giúp đỡ, trực tiếp bảo, hướng dẫn em suốt trình làm luận văn tốt nghiệp Trong thời gian làm việc, em không ngừng tiếp thu thêm nhiều kiến thức chun mơn bổ ích mà cịn học tập tinh thần làm việc, thái độ nghiên cứu khoa học nghiêm túc, hiệu quả, điều cần thiết cho em trình học tập công tác sau Luận văn giúp đỡ mặt kinh phí thực khn khổ nội dung Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam VAST-FEB RAS chuyến thám hiểm Akademik Oparin thứ [VAST.HTQT.NGA.15–04/16–17] Em xin chân thành cảm ơn ! HỌC VIÊN CAO HỌC Nguyễn Thị Hƣờng ii MỤC LỤC MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu san hô mềm 1.1.1 Khái quát chung san hô mềm 1.1.2 Giới thiệu san hô mềm Sinularia 1.1.3 Giới thiệu san hô mềm Sinularia erecta 1.2 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm điển hình thuộc giống Sinularia 1.2.1 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm điển hình thuộc giống Sinularia giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số lồi san hơ mềm điển hình thuộc giống Sinularia Việt Nam 15 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, MỤC TIÊU, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 18 2.2.1 Mục tiêu luận văn 18 2.2.2 Các nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp xử lý mẫu, tạo dịch chiết, phân lập hợp chất 19 2.3.2 Xác định cấu trúc hợp chất sử dụng phổ cộng hưởng từ hạt nhân 21 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu thử nghiệm hoạt tính diệt tế bào ung thư 22 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng viêm 23 3.1 Phân lập hợp chất từ san hô mềm Sinularia erecta 25 3.1.1 Phân lập hợp chất 25 3.1.2 Hằng số vật lý liệu phổ hợp chất phân lập 27 3.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập đƣợc 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc 29 4.1.1 Hợp chất 1: 3β,5α-dihydroxyeudesma-4(15), 11-diene (chất mới) 29 4.1.2 Hợp chất 2: 4(15)-Eudesmene-1β,6α-diol 35 iii 4.1.3 Hợp chất : 6-Hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one 40 4.1.4 Hợp chất 4: 4β,15-Epoxyeudesmane-1β,6α-diol 45 4.1.5 Hợp chất 5: Aromadendrane-4,10-diol 49 4.1.6 Hợp chất 6: Aromadendrane-4,10-diol 54 4.1.7 Hợp chất 7: Aromadendrane-4,10-diol 58 IV.1.8 Hợp chất 8: Alloaromadendrane-4,10-diol 63 4.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập đƣợc 69 KẾT LUẬN 72 PHỤ LỤC 79 Phụ lục phổ 79 Công trình cơng bố 96 iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu H-NMR 13 C-NMR H-1H COSY Tiếng Anh Tiếng Việt Proton Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Spectroscopy proton Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy cacbon 13 Phổ tương tác proton-proton H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy A-549 Lung carcinoma cancer Ung thư phổi CC Column Chromatography Sắc ký cột DEPT Distortionless Enhancement by Phổ DEPT Polarisation Transfer DMSO Dimethyl sulfoxide EC50 Effective concentration of 50% Nồng độ tác dụng hiệu 50% ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Phổ khối ion hóa phun điện tử Spectra Hela Cervical adenocarcinoma cancer Ung thư cổ tử cung HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân qua Connectivity nhiều liên kết High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC chromatography Hight Resolution Electron Spray Phổ khối ion hóa phun điện tử Ionization Mass Spectra phân giải cao Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân qua Coherence liên kết IC50 Inhibitory concentration of 50% Nồng độ ức chế 50% MPLC Medium pressure liquid Sắc ký lỏng trung áp HR-ESI-MS HSQC chromatography v PANC-1 Epithelioid carcinoma cancer Ung thư biểu mô tuyến tụy RAW264.7 Murine macrophage cell line Đại thực bào chuột ROESY Rotating-frame nuclear Overhauser effect correlation spectroscopy TLC Thin Layer Chromatography vi Sắc ký lớp mỏng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các lồi san hơ mềm thuộc chi Sinularia 06 Bảng 4.1 Số liệu phổ NMR hợp chất 31 Bảng 4.2 Số liệu phổ NMR hợp chất 37 Bảng 4.3 Số liệu phổ NMR hợp chất 42 Bảng 4.4 Số liệu phổ NMR hợp chất 47 Bảng 4.5 Số liệu phổ NMR hợp chất 52 Bảng 4.6 Số liệu phổ NMR hợp chất 56 Bảng 4.7 Số liệu phổ NMR hợp chất 61 Bảng 4.8 Số liệu phổ NMR hợp chất 65 Bảng 4.9 Kết thử sàng lọc độc tế bào mẫu 69 Bảng 4.10 Kết thử sàng lọc hoạt tính ức chế sản sinh NO mẫu…… 70 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ phả hệ giống Sinularia 04 Hình 2.1 San hô mềm Sinularia erecta Tixier-Durivault, 1945 18 Hình 3.1 Sơ đồ chiết tách hợp chất từ mẫu Sinularia erecta 24 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn n-Hexan (H) 25 Hình 4.1.1a Phổ HR-ESI-MS hợp chất 28 Hình 4.1.1b Phổ 1H-NMR hợp chất 28 Hình 4.1.1c Phổ 13C-NMR hợp chất 29 Hình 4.1.1d Phổ HSQC hợp chất 30 Hình 4.1.1e Phổ HMBC hợp chất 31 Hình 4.1.1f Phổ NOESY hợp chất 32 Hình 4.1.1g Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 33 Hình 4.1.2a Phổ 1H-NMR hợp chất 34 Hình 4.1.2b Phổ 13C-NMR hợp chất 34 Hình 4.1.2c Phổ HSQC hợp chất 35 Hình 4.1.2d Phổ HMBC hợp chất 36 Hình 4.1.2e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 37 Hình 4.1.3a Phổ 1H-NMR hợp chất 38 Hình 4.1.3b Phổ 13C-NMR hợp chất 38 Hình 4.1.3c Phổ HSQC hợp chất 39 Hình 4.1.3d Phổ HMBC hợp chất 40 Hình 4.1.3e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 41 Hình 4.1.4a Phổ 1H-NMR hợp chất 42 Hình 4.1.4b Phổ 13C-NMR hợp chất 42 Hình 4.1.4c Phổ HSQC hợp chất 43 Hình 4.1.3d Phổ HMBC hợp chất 44 Hình 4.1.4e Các tương tác HMBC cấu trúc hóa học hợp chất 45 Hình 4.1.5a Phổ 1H-NMR hợp chất 46 Hình 4.1.5b Phổ 13C-NMR hợp chất 46 Hình 4.1.5c Phổ HSQC hợp chất 47 Hình 4.1.5d Phổ HMBC hợp chất 48 viii Phổ HSQC hợp chất Phổ HMBC hợp chất 91 1.7 Phụ lục phổ hợp chất Phổ 1H-NMR hợp chất Phổ 13C-NMR hợp chất 92 Phổ HSQC hợp chất Phổ HMBC hợp chất 93 1.8 Phụ lục phổ hợp chất Phổ 1H-NMR hợp chất Phổ 13C-NMR hợp chất 94 Phổ HSQC hợp chất Phổ HMBC hợp chất 95 Cơng trình công bố 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105