Nghiên cứu thành phần hóa học phần trên mặt đất của cây Phong quỳ Sapa (Anemone chapaensis Gagnep.)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC PHẠM GIANG NAM NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CỦA CÂY PHONG QUỲ SA PA (Anemone chapaensis Gagnep.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: PHẠM GIANG NAM NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CỦA CÂY PHONG QUỲ SA PA (Anemone chapaensis Gagnep.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2012.Y Người hướng dẫn: PGS.TS Phương Thiện Thương Ths Hà Thị Thanh Hương Hà Nội – 2017 Lời cảm ơn Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS.Phương Thiện Thương – Trưởng phòng Hóa phân tích – tiêu chuẩn, Viện Dược liệu, Bộ Y tế Ths Hà Thị Thanh Hương – Giảng viên Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn anh chị nghiên cứu viên phòng Hóa phân tích – tiêu chuẩn, Viện Dược liệu giúp đỡ em nhiều trình làm thực nghiệm Viện Em xin gửi lời cảm ơn tới anh Nguyễn Ngọc Hiếu bảo ân cần cho em thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, đặc biệt thầy TS Vũ Đức Lợi có góp ý q báu q trình em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến chị Trịnh Thị Diệp Thanh giúp đỡ đồng hành trình thực luận Em xin gửi lời cảm ơn đến tất quý thầy cô Khoa Y Dược dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 31 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Phạm Giang Nam DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APCI-MS: Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectroscopy CD3OD : methanol-d4 (NMR solvent) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer d : doublet dd : double of doublet ESI-MS : ElectroSpray Ionization Mass Spectroscopy EtOAc : ethyl acetat EtOH : ethanol Hz: Hertz MeOH : methanol m/z : mass to charge ratio mp: melting point m: multiplet NMR : nuclear magnetic resonance PQL: cắn toàn phần PQLH: cắn n-hexan PQLE: cắn ethyl acetat PQLD: cắn ethanol sau chạy qua cột Diaion PQLW: cắn phân đoạn nước sau trình lắc chiết phân đoạn q : quartet s : singlet SKLM: Sắc ký lớp mỏng t : triplet TT: thuốc thử v/v : volume to volume ratio DANH MỤC BẢNG, BIỂU STT Tên bảng Trang Bảng 3.1: Khối lượng cắn phân đoạn dịch chiết Ethanol phần mặt đất Phong quỳ Sa Pa 18 Bảng 3.2: Kết SKLM chất với hệ dung môi 25 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ STT Tên hình vẽ Trang Hình 1.1: Tiêu thực vật loài Anemone chapaensis Gagnep Hình 1.2: Một số saponin phân lập từ lồi Anemone raddeana Regel Hình 1.3: Một số flavonoid phân lập từ chi Anemone Hình 1.4: Một số coumarin phân lập từ chi Anemone Hình 1.5: Một số hợp chất khác phân lập từ chi Anemone Hình 2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn 14 Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ phần mặt đất loài Phong quỳ Sa Pa 17 Hình 3.2: Sắc ký đồ cắn ethyl acetat (hệ III) điều kiện quan sát: UV254, UV365, sau phun thuốc thử ánh sáng trắng 19 Hình 3.3: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 21 10 Hình 3.4: Sắc ký đồ hợp chất 1, cắn ethyl acetat, hợp chất hệ I 22 11 Hình 3.5: Sắc ký đồ hợp chất 1, cắn ethyl acetat, hợp chất hệ II 23 12 Hình 3.6: Sắc ký đồ hợp chất 1, cắn ethyl acetat, hợp chất hệ III 24 13 Hình 3.7: Cấu trúc hóa học phổ NMR hợp chất 26 14 Hình 3.8: Cấu trúc hóa học phổ NMR hợp chất 28 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Thực vật học 1.1.1 Vị trí phân loại chi Anemone 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Anemone 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Anemone 1.2 Thành phần hóa học chi Anemone 1.3 Công dụng tác dụng 10 1.3.1 Công dụng dân gian 10 1.3.2 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu chi Anemone 10 1.4 Vấn đề cần giải 11 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 12 2.1.1 Nguyên liệu 12 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Phương pháp chiết xuất cao toàn phần phân đoạn 13 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 16 3.1 Kết chiết xuất cao toàn phần phân đoạn 16 3.1.1 Lấy mẫu xác định hàm ẩm 16 3.1.2 Chiết xuất 16 3.2 Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất phân đoạn ethyl acetat từ dịch chiết phần mặt đất Phong quỳ Sa Pa 18 3.2.1 Định tính cắn ethyl acetat sắc kí lớp mỏng 18 3.2.2 Phân lập số hợp chất từ cắn ethyl acetat 19 3.2.3 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập 21 3.2.4 Xác định hợp chất phân lập 25 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 29 4.1 Về chiết xuất cao toàn phần phân đoạn từ phần mặt đất Phong quỳ Sa Pa 29 4.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 29 KẾT LUẬN 32 KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới gió mùa, với độ ẩm cao, lượng mưa lớn, thảm thực vật phát triển vơ phong phú với 12000 lồi thực vật 4000 lồi có khả sử dụng làm thuốc Với hệ thực vật đa dạng vậy, chúng cung cấp nguồn thực phẩm dồi mà cho nguồn thuốc chữa bệnh quý giá Xu hướng sâu nghiên cứu tìm kiếm hoạt chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao từ loài thực vật làm dược phẩm chữa bệnh ngày thu hút quan tâm nhà khoa học ưu điểm chúng độc tính thấp, dễ hấp thu chuyển hóa thể Chi Phong quỳ, họ Mao lương (Ranunculaceae), từ lâu người dân dùng rễ để điều trị viêm họng, sưng amydal, viêm gan, viêm túi mật, đau dày, lỵ, thiên đầu thống, bế kinh, đái máu, rắn cắn, đau răng, phong thấp đau nhức, đòn ngã giải độc ô đầu [1] Cây Phong quỳ Sa Pa, tên khoa học Anemone chapaensis Gagnep, Gagnepain miêu tả lần năm 1929 [7], nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng lồi thực vật Nhằm tạo sở khoa học cho việc khai thác, nghiên cứu nâng cao giá trị sử dụng loài dược liệu này, luận văn thực với đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất Phong quỳ Sapa (Anemone chapaensis Gagnep.)” với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập hợp chất tinh khiết từ phần mặt đất loài Phong quỳ Sa Pa Xác định cấu trúc hợp chất phân lập PQLE9-MeOD-C13CPD&DEPT DEPT90 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 CH&CH3 CH2 210 200 C13CPD 210 200 PQLE9-MeOD-C13CPD&DEPT DEPT90 150 145 140 135 130 125 120 115 ppm 145 140 135 130 125 120 115 ppm 145 140 135 130 125 120 115 ppm DEPT135 CH&CH3 CH2 150 C13CPD 150 PHỤ LỤC II DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT Print of window 80: MS Spectrum Data File : C:\CHEM32\1\DATA\16-12-05\MS_PQLE5.D Sample Name : MS_PQLE5 ===================================================================== Acq Operator : SYSTEM Sample Operator : SYSTEM Acq Instrument : LCMS SQ Location : Vial 84 Injection Date : 12/5/2016 4:31:45 PM Inj : Inj Volume : 10.000 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\MS.M Last changed : 12/5/2016 4:30:10 PM by SYSTEM (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\ISO 17025\CURCUMIN.M Last changed : 12/5/2016 4:34:54 PM by SYSTEM (modified after loading) Method Info : Phan tich mau (loop injection) MS Spectrum MM-ES, Pos, Scan, Frag: 70 247.2 *MSD1 SPC, time=0.085 of C:\CHEM32\1\DATA\16-12-05\MS_PQLE5.D Max: 1850 318.2 274.1 100 274.3 80 318.5 288.2 254.0 207.1 60 346.3 340.1 326.8 330.3 318.9 316.1 302.2 305.2 295.3 279.2 288.8 275.3 268.2 269.0 262.3 252.9 245.8 249.1 237.1 232.0 224.2 205.2 20 209.1 186.0 225.1 40 175 LCMS SQ 12/5/2016 4:35:41 PM SYSTEM 200 225 250 275 300 325 m/z Page of Print of window 80: MS Spectrum Data File : C:\CHEM32\1\DATA\16-12-05\MS_PQLE5.D Sample Name : MS_PQLE5 ===================================================================== Acq Operator : SYSTEM Sample Operator : SYSTEM Acq Instrument : LCMS SQ Location : Vial 84 Injection Date : 12/5/2016 4:31:45 PM Inj : Inj Volume : 10.000 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\MS.M Last changed : 12/5/2016 4:30:10 PM by SYSTEM (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\ISO 17025\CURCUMIN.M Last changed : 12/5/2016 4:34:54 PM by SYSTEM (modified after loading) Method Info : Phan tich mau (loop injection) MS Spectrum MM-ES, Neg, Scan, Frag: 70 259.1 *MSD2 SPC, time=0.093 of C:\CHEM32\1\DATA\16-12-05\MS_PQLE5.D 100 Max: 14183 80 260.2 257.0 20 283.2 260.8 40 280.9 261.1 60 220 LCMS SQ 12/5/2016 4:37:02 PM SYSTEM 240 260 280 300 320 340 m/z Page of 2.517 2.483 2.248 2.200 2.167 2.061 1.935 1.269 1.256 1.062 1.039 1.031 3.330 4.351 4.339 4.329 4.844 5.948 5.897 5.855 5.846 5.824 5.815 5.806 5.775 PQLE5-MeOD-1H Current Data Parameters NAME 9P_PQLE5 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20160908 Time 15.43 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT MeOD NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 79.36 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 301.5 K D1 1.00000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.1999993 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 3.78 6.19 1.18 3.16 1.09 1.05 1.00 2.05 ppm 5.8 5.7 5.6 5.5 5.4 5.3 5.2 5.1 5.0 4.9 4.351 4.339 4.329 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 1.05 5.9 2.05 6.0 1.00 6.1 4.844 5.948 5.897 5.855 5.846 5.824 5.815 5.806 5.775 PQLE5-MeOD-1H 4.2 ppm 2.8 2.7 2.6 2.5 1.09 2.517 2.483 2.4 2.3 2.248 2.2 2.200 2.167 2.1 2.061 2.0 3.16 1.935 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 3.78 1.269 1.256 1.2 1.1 6.19 1.0 1.062 1.039 1.031 PQLE5-MeOD-1H 1.18 0.9 ppm 68.73 68.63 50.75 49.51 49.34 49.17 49.00 48.83 48.66 48.49 42.41 24.49 23.83 23.46 19.55 79.95 136.94 130.12 129.98 127.12 167.41 201.20 PQLE5-MeOD-C13CPD Current Data Parameters NAME 9P_PQLE5 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20160908 Time 15.57 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT MeOD NS 256 DS SWH 29761.904 Hz FIDRES 0.454131 Hz AQ 1.1010048 sec RG 198.57 DW 16.800 usec DE 6.50 usec TE 302.2 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7879670 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2020008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.34375000 W PLW13 0.22000000 W F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7753900 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 200 195 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 127.12 130.12 129.98 136.94 167.41 201.20 PQLE5-MeOD-C13CPD ppm 80 79.95 75 70 68.73 68.63 60 55 50 45 42.41 40 35 30 25 24.49 23.83 23.46 ppm 19.55 PQLE5-MeOD-C13CPD 65 50.75 49.51 49.34 49.17 49.00 48.83 48.66 48.49 PQLE5-MeOD-C13CPD&DEPT DEPT90 200 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 DEPT135 CH&CH3 CH2 200 C13CPD 200 PQLE5-MeOD-C13CPD&DEPT DEPT90 135 130 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 125 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 125 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 125 DEPT135 CH&CH3 CH2 135 130 C13CPD 135 130 PHỤ LỤC III KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC LOÀI THỰC VẬT